肝星状细胞凋亡信号途径及其药物治疗的研究进展

各种致病因素所致慢性肝损伤均可引起肝纤维化,肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的激活是肝纤维化发生发展的中心环节,促进其凋亡被认为是肝纤维化逆转的始动因素。HSC的凋亡机制十分复杂,调控活化HSC凋亡的信号转导途径研究甚少。目前已知的HSC凋亡信号途径主要包括线粒体途径、死亡受体途径和非死亡受体途径。基于这些信号转导途径,研究出选择性诱导HSC凋亡的药物将成为抗肝纤维化治疗的重要手段。该文将对HSC凋亡信号转导通路的最新进展进行综述,并对目前已知的具有促HSC凋亡作用的药物进行总结分类。     

肝复康经JNK信号通路在肝星状细胞凋亡中的调节机制

目的探讨中药肝复康经JNK(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路在肝星状细胞凋亡中的调节机制。方法将SD大鼠随机分为5组:正常对照组(C),模型组(M),肝复康高(HT)、中(MT)、低(LT)剂量治疗组,每组给予相应的处理;HSC-T6细胞株随机分为3组:正常对照组、乙醛组及肝复康治疗组。HE染色法观察肝组织形态结构变化;RT-PCR法测定MKK4、MKK7、JNK1、JNK2、COX-2、Survivin、Caspase-3、α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的基因表达水平;免疫组织化学法和免疫蛋白印记法观察COX-2在肝组织和肝星状细胞中的表达。结果正常组中COX-2几乎不表达。与正常组相比,模型组中COX-2表达显著增加(P<0.05)。与模型组相比,肝复康治疗组各组中COX-2表达均明显降低,其中,中剂量组最明显(P<0.05)。与正常组相比,模型组中MKK4、MKK7、JNK1、JNK2、COX-2、Survivin的基因表达水平均显著上调(P<0.05)。与模型组相比,肝复康治疗组各基因表达水平均明显减弱,中剂量组最明显(P<0.05),其中Caspase-3基因表达呈相反趋势。COX-2和Survivin的表达呈正相关,和Caspase-3的表达呈负相关。检测α-SMA、collagenⅠ与collagenⅢ基因表达,与模型组相比,中剂量治疗组表达水平明显下调(P<0.05)。结论肝复康可通过抑制JNK信号通路的传导诱导肝星状细胞凋亡,发挥抗纤维化作用。     

酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的机制研究进展

肝星状细胞(HSC)活化是各种病因所致肝纤维化过程中的关键环节。在酒精性肝病的发展过程中,乙醇和代谢产物乙醛可改变机体氧化还原状态,活化枯否细胞,释放大量细胞因子,诱导HSC活化、增殖和胶原合成,形成肝纤维化。本文将对酒精性肝纤维化中HSC活化的机制和相关靶点加以综述,为开发抗肝纤维化药物和临床治疗提供新的思路。     

维拉帕米对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的观察维拉帕米对人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度的维拉帕米对HSCs处理48 h,CCK-8试剂盒(cell counting Kit-8)检测细胞增殖抑制率,HE染色观察细胞形态超微结构的变化,流式细胞仪Annexin-V/PI双染法检测HSCs的凋亡率。结果维拉帕米可抑制HSCs的增殖,且有剂量相关性,其IC50值为(150±10)mmol·L-1;HE染色可见维拉帕米组出现不同程度的细胞体积变小、核浓缩深染等凋亡形态改变;Annexin-V/PI双染法检测显示,不同浓度的维拉帕米均可诱导HSCs凋亡,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论维拉帕米可抑制HSCs的增殖,诱导其凋亡。     

MicroRNA-154对大鼠肝星状细胞HSC-T6凋亡的影响

摘 要 目的： 探讨MicroRNA-154（miR-154）对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）凋亡的影响。方法: 用合成的miR-154模拟物（miR-154 mimics）和miR-154抑制物（miR-154 inhibitor）转染HSC-T6,以其阴性对照物（ mimics NC、inhibitor NC ）转染细胞作为阴性对照。采用CCK-8试剂检测miR-154对HSC-T6增殖的影响;采用流式细胞术检测miR-154对HSC-T6细胞周期和凋亡的影响。 结果: miR-154可以显著提高细胞增殖能力,降低细胞凋亡率（P＜0.01）;细胞内过表达miR-154可使G₀/G₁期细胞比例显著下降,S期细胞比例显著升高（P＜0.01）;抑制细胞内miR-154表达可显著提高细胞凋亡率,G₀/G₁期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著下降（P＜0.01）。结论:MicroRNA-154可以促进肝星状细胞的增殖,抑制肝星状细胞的凋亡。     

HSC凋亡机制研究进展

肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC) 也称贮脂细胞(fat -storing cell)或Ito细胞,是肝脏非实质性细胞, 分布于Disse间隙,附着于肝血窦内皮细胞外表面及肝细胞表面,占肝非实质细胞总数的5 %～10 %,其生理功能不仅参与脂肪存储和维生素A 的代谢,同时也是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的主要来源,因此,在急慢性肝损伤后肝纤维化过程中发挥重要的作用[1].     

川芎嗪衍生物影响肝星状细胞凋亡作用及其机制研究

目的研究川芎嗪衍生物H168对大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cells,HSC)凋亡的影响及其作用机制。方法采用细胞乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒观察药物对LDH活性的影响;MTT实验检测药物对细胞增殖的影响;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染方法检测药物对细胞凋亡率影响;应用Western blot方法观察药物对凋亡相关细胞因子Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响。结果细胞毒性实验发现当H168作用终浓度低于150μmol.L-1时,不具有明显细胞毒作用;MTT实验研究发现药物浓度为10μmol.L-1和25μmol.L-1具有抑制细胞增殖的作用;流式细胞仪检测药物对细胞凋亡率的影响,发现H168具有促进HSC凋亡的作用,且呈量效关系;Western blot结果显示H168通过提高Bax/Bcl-2蛋白的比值和Caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡。结论 H168具有促进HSC-T6凋亡的作用,这种作用的发挥主要是通过提高Bax/Bcl-2蛋白的比值和Caspase-3蛋白的表达实现的。     

维拉帕米对肝星状细胞凋亡和Bcl-2表达的影响

目的:观察维拉帕米对人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)凋亡的影响以及凋亡相关蛋白Bcl-2表达的变化。方法:流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测HSCs细胞的凋亡率,免疫组化SABC法检测Bcl-2表达的变化。结果:AnnexinV/PI双染法检测显示,不同浓度的维拉帕米均可诱导HSCs细胞凋亡,且有剂量相关性,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化检测显示,与对照组比较,维拉帕米组Bcl-2表达减少(P<0.05)。结论:维拉帕米可诱导HSCs凋亡,减弱Bcl-2的表达。     

氯沙坦对肝星状细胞增殖和凋亡的作用

目的：观察氯沙坦对肝星状细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用CCK8试剂盒检测氯沙坦对肝星状细胞增殖的抑制情况；重复实验可计算IC50；采用AnnexinV-FITC/PI双染法经流式细胞仪检测肝星状细胞的凋亡情况。结果：氯沙坦可抑制肝星状细胞的增殖，并呈明显的剂量依赖性，1 000 μmol?L-1时肝细胞的抑制率可达（95.22±3.54）%，IC50值为（326.21±30.27） μmol?L-1；AnnexinV-FITC/PI双染法检测显示，各浓度的氯沙坦均能促进细胞凋亡，与对照组比较有显著性差异（P<0.01）。结论：氯沙坦有抑制肝星状细胞细胞增殖及促进其凋亡的作用。     

半枝莲含药血清对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的影响

目的:探讨半枝莲含药血清对肝星状细胞(HSC-T6)凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的影响。方法:传代培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6与不同剂量半枝莲(高、中、低剂量组)共同孵育48 h后,应用Annexin-V-碘化丙锭染色检测半枝莲对大鼠HSC-T6凋亡的影响;免疫组化检测凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2表达。结果:半枝莲能使大鼠HSC-T6凋亡明显增多,同时可使凋亡抑制分子Bcl-2表达下调,使凋亡分子Bax表达增强(P<0.01)。结论:半枝莲可下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC-T6凋亡。     

哌唑嗪和去氧肾上腺素对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨α1-肾上腺素受体(α1-AR)拮抗剂哌唑嗪(PZ)和激动剂去氧肾上腺素(PE)对体外活化的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖和凋亡的作用。方法:体外培养HSC-T6;MTT法检测HSC-T6的增殖;ELISA法检测HSC-T6内cAMP含量;流式细胞仪检测HSC-T6凋亡率;免疫细胞化学染色检测核蛋白因子κBp65(NF-κBp65)的表达。结果:在体外培养的活化大鼠肝星状细胞中,α1-AR激动剂PE(10-5、10-7、10-9mol/L)对HSC-T6具有明显的抑制cAMP合成,促进增殖,增强核转录因子κBp65的表达及抑制凋亡的作用,而α1-AR拮抗剂PZ(10-5、10-7、10-9mol/L)具有相反的作用。结论:α1-肾上腺素激动剂PE对体外活化的HSC-T6具有促进增殖和抑制凋亡的作用,而拮抗剂PZ具有抑制增殖和促进凋亡的作用,可能主要通过α1受体调控cAMP合成及NFκ-Bp65的表达起作用。     

肝纤维化时肝星状细胞激活因素研究进展

肝纤维化（liver　fibrosis,LF）是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时,肝脏中胶原蛋白等细胞外基质（ECM）增生与降解失去平衡,导致肝脏内纤维结缔组织异常沉积的病理过程。在过去的几十年中,对肝纤维化的发生机制及其转归的研究一直是医学界研究的重点,目前肝星状细胞已成为研究LF发生机制中最受重视的细胞。     

siRNA沉默β-arrestin2促进肝星状细胞凋亡

目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰β-arrestin2表达对大鼠肝星状细胞株(hepatic stellatecell T6,HSC-T6)凋亡的影响。方法将化学合成的siRNAβ-arrestin2以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照;采用逆转录-聚合酶链反应和Westernblot检测细胞β-arrestin2表达;采用Western blot检测细胞Bcl-2、Bax的表达;采用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染siRNA的HSC-T6细胞β-arrestin2基因及蛋白表达水平明显下调,β-arrestin2 mRNA水平和蛋白表达水平比对照组分别下调了70%±1.76%和68.43%±2.88%(P<0.01);Bcl-2蛋白被抑制了32.58%±3.46%(P<0.01),而Bax表达增加38.00%±3.72%(P<0.01);转染β-arrestin2 siRNA的HSC-T6细胞凋亡率为37.5%,明显高于正常HSC对照组。结论 siRNAβ-arrestin2能高效抑制HSC-T6细胞β-ar-restin2表达明显减少Bcl-2的表达,增加Bax的表达,从而促进HSC-T6凋亡,具有预防及治疗肝纤维化的潜力。     

肝纤维化病程中Kupffer细胞分泌的细胞因子对肝星状细胞活化增殖、凋亡的调控

肝纤维化是对慢性肝损伤的愈合反应,为一个可逆的过程。肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝脏分泌细胞外基质(extra cellular matrixc,ECM)的主要细胞,在肝纤维化的发展机制中占有重要的地位。如何控制HSC的活性并逆转肝纤维化的进程是抗肝纤维化研究的重点之一。在肝纤维化病程中,一系列细胞因子通过旁分泌和自分泌方式作用于邻近的HSC,影响其增殖、趋化、代谢及凋亡。鉴于Kupffers细胞为细胞因子的主要来源,其在肝纤维化病程中对HSC细胞的活化增殖、凋亡发挥着重要的调控作用。HSC、Kupffers细胞及细胞因子与肝纤维化的发生发展关系极为密切,阐明其关系,有助于以HSC为靶点的肝纤维化方面的研究,现就其关系综述如下。     

苏拉明在肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖和凋亡中的作用(英文)

本研究旨在探究苏拉明在肝星状细胞（HSCs）增殖、凋亡中的作用。将HSCs株分别在不同浓度的苏拉明和无苏拉明的培养基中体外培养。应用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术测定细胞周期和增殖指数;TUNEL法检测细胞凋亡率;显微镜下观察细胞形态学变化。结果显示苏拉明干预后,与对照组比较HSCs增殖率均显著减低;苏拉明(1.4×10^-5mol/L)干预72小时,HSCs增殖率降低最明显,且呈时间和剂量依赖性;苏拉明(1.4×10^-5mol/L)干预24小时,G₁期HSCs百分比显著升高,增殖指数显著降低,而HSCs凋亡率无显著变化。苏拉明对HSCs形态无显著影响。我们认为在实验剂量范围内,苏拉明可抑制HSCs增殖,而对HSCs凋亡无影响。     

肝星状细胞激活的分子机制及其防治策略

肝星状细胞（HSC）是肝纤维化发生的中心环节和肝内最主要的胶原合成细胞，与肝纤维化的发生发展密切相关。HSC激活主要分为始动阶段和持续阶段。始动阶段即激活早期，包括基因表达及表型的早期变化，使HSC具有对细胞因子和其他局部刺激的反应性，主要和炎症细胞、损伤肝细胞或胆管细胞的旁分泌刺激以及细胞外基质组分的早期变化激活了HSC信号转导途径和启动转录因素有关。持续阶段即通过旁分泌、自分泌刺激及细胞外基质重建，进一步放大HSC的表型变化（如增殖、收缩、纤维形成、基质降解、趋化、白细胞化学吸引、维生素A缺乏和细胞因子释放）．维持其激活状态。     

丹皮酚体外对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨丹皮酚对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和凋亡的影响。方法 HSC加入丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h后,MTT比色法和锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚33.2 mg·L-1分别作用6,12,24,36和48 h,锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚1.66～69.7 mg·L-1作用48 h用细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒检测细胞上清中LDH活性。丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1与HSC作用24 h分别用光学显微镜、Hoechst 33258染色和流式细胞术检测HSC细胞形态、细胞凋亡和凋亡率;丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h用流式细胞术检测细胞周期。结果 MTT实验结果表明,丹皮酚16.6～49.8 mg·L-1对HSC增殖具有明显抑制作用,且具有浓度效应关系(r=0.955,P<0.05),作用48 h时IC50值为105.4 mg·L-1。锥虫蓝染色实验结果表明,丹皮酚对HSC存活率的抑制作用不仅具有浓度效应关系(r=-0.936,P<0.05),浓度为33.2 mg·L-1时还具有时间效应关系(r=-0.965,P<0.05)。丹皮酚16.6～69.7 mg·L-1作用48 h无明显细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示,丹皮酚8.3～49.8 mg·L-1作用24 h能显著促进HSC细胞凋亡(P<0.05),且具有浓度效应关系(r=0.920,P<0.05)。丹皮酚33.2和49.8 mg·L-1作用48 h可调节细胞周期,G0/G1期细胞增加(P<0.01),S期细胞减少(P<0.01),具有浓度依赖性(r=0.980,P<0.05)。结论丹皮酚具有促进HSC凋亡和抑制HSC增殖的作用,可能是其抗肝纤维化作用机制之一。     

miRNA参与肝星状细胞活化及慢性肝病发展的作用机制研究进展

微小RNA（microRNA.miRNA）为内源性短小（18～25个核苷酸组成）单链非编码RNA,通过与靶基因mRNA序列3＇末端非翻译区（3＇-UTR）结合抑制蛋白翻译过程或干扰mRNA降低靶蛋白水平,miRNA异常表达影响多种器官重构中细胞增殖及分化.近期研究表明miRNA这一转录后水平的调控分子参与各种慢性肝病发生发展,肝星状细胞的激活是导致早期肝损伤的关键因素,本文将就miRNA在肝星状细胞激活及慢性肝病发展中的作用作一系统综述.     

肝纤维化研究进展

肝纤维化已有较多进展 ,其发病机理主要有纤维化形成候选基因的研究、肝细胞凋亡与并发症、肝星状细胞 (HSC)的关系研究。在诊断与治疗方面也有值得重视的进展 ,现概述如下。1参与肝纤维化形成候选基因的研究1.1肝纤维化动物模型研究中确定的候选基因 :鉴定与肝纤维化有关的候选基因的实验模型 :(1)体外培养HSC是一种公认的研究与HSC活化有关基因的模型 ;(2)利用啮类动物制备肝纤维化模型研究基因表达 ;(3)转基因 (TG)或基因敲除 (KO)技术 ;(4)基因芯片技术 ,基因芯片的发展为鉴定活化的HSC和肝纤维化时上调的候选基因提供了条件。Ba…     

大鼠肝星状细胞的分离和培养

目的:本文参考Friedman等的不连续密度离心法并作改良,建立了一种经济、简便、可靠的分离大鼠肝星状细胞(HSC)的方法。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶灌流大鼠肝脏,Nycodenz密度梯度离心分离HSC,并进行体外培养,结果:分离培养的HSC经台盼蓝拒染实验活细胞大于98％,细胞得率为3.95×10个/肝脏。结论:该方法简便、实用、稳定、可靠,而且本方法的建立为进一步研究HSC与肝纤维化的关系,尤其是细胞水平及分子生物学水平的研究奠定了基础。