CD4在急性髓系白血病细胞上的表达及意义

目的:探讨细胞表面分化抗原CD4在急性髓系白血病细胞(AML)上的表达及意义。方法:收集325例AML患者的骨髓或外周血标本,采用CD45/SSC双参数散点图方法进行三色流式细胞术细胞表面分化抗原分析。结果:CD4在AML-M5患者中表达率为100%(31/31),在AML-M4患者中表达率为65.62%(21/32);明显高于AML-M1(5.88%,1/17)、AML-M2(11.67%,23/197)、AML-M3(2.08%,1/48)(P<0.05)。结论:CD4是诊断AML-M5最敏感而非特异的指标,有助于急性髓细胞白血病各亚型的区分。     

CD117在白血病细胞上的表达分析

目的　探讨细胞表面分化抗原CD117在各型白血病细胞上的表达规律及其意义。方法　采用CD4 5/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术细胞表面分化抗原分析。结果　急性髓系白血病 (AML)患者CD117表达率为 6 8%,慢性粒细胞白血病急变期 (CML BC)患者CD117表达率为 80 %,而在急性淋巴细胞白血病中表达率极低 ,仅为 2 %。在慢性淋巴细胞白血病、CML慢性期中阴性。在AML中CD117主要表达在M0 /M1( 72 %)、M2 ( 88%)、M4 ( 5 0 %)、M5a( 75 %)、M6( 10 0 %) ,但在M3 和M5b中表达率较低 (分别为 39%和 2 9%) ,在M3 中CD117的表达率高于CD34 及HLA DR。CD117与CD14 在AML中的表达呈负相关。结论　CD117有助于淋巴系与髓系白血病的鉴别 ,并有助于白血病克隆与正常细胞的区分。     

白血病干细胞相关抗原在急性白血病细胞中的表达

目的 探讨白血病干细胞(leukemia stem cell,LSC)相关抗原在不同亚型急性白血病细胞中的表达规律.方法 采用流式细胞术检测LSC相关抗原CD96,CD90,CD123,CD71等在50例不同亚型急性白血病细胞中的表达,包括急性粒细胞白血病未分化型(M1)、急性粒细胞白血病部分分化型(M2)、急性早幼粒细胞白血病(Ms)、急性粒-单核细胞白血病(M4)和急性B淋巴细胞白血病.结果 CD96在M.的表达率(90.00％)明显高于M2(18.18％)和急性B淋巴细胞白血病(20.00％)(P＜0.05);各亚型急性白血病均表达CD123,但差异无统计学意义(P＞0.05) ;CD71在急性髓细胞白血病各亚型中(M1、M2、M3和M4)阳性表达率分别为80.00％、72.73％、90.00％和100.00％,明显高于急性B淋巴细胞白血病(P＜0.05);CD90在急性B淋巴细胞白血病中阳性表达率为13.33％,高于急性髓细胞白血病(P＞0.05).结论 CD71与CD96的表达有亚型特异性,CD96可能具有指示系列分化和细胞分化程度的作用,CD71可用于区分急性淋巴细胞白血病和急性髓细胞白血病.     

c-fos原癌基因在人类急性白血病中的表达

c-fos原癌基因定位于14q21-23,其表达与造血细胞向单核-巨噬细胞系分化密切相关。以往的研究提示c-fos基因表达与调节细胞分化有关,且可能在白血病特别是急性粒单细胞白血病和急性单核细胞白血病发病中起某种作用。因此,我们应用斑点印迹(dot-blot)杂交技术检测了28例急性白血病患者骨髓或血细胞中c-fos基因的表达,并结合临床探讨其临床意义。     

多参数流式细胞术观察CD36在白血病细胞上的表达及其意义

本研究旨在探讨CD36在白血病细胞的表达及其在白血病诊断和鉴别诊断中的意义。采用CD45／SSC参数设门多色流式细胞术分析133例白血病细胞CD36及其它白血病相关抗原的表达情况。结果表明：133例白血病中有29例患者（21．8％）的白血病细胞表达CD36，62例急性髓系白血病（AML）中26例患者（41．9％）白血病细胞表达CD36，54例淋系白血病未见CD36阳性的病例。M4、M5和M6中CD36的阳性率（8／10、12／12、3／3）明显高于M1（0／9）、M2（3／12）、M3（0／16），具有统计学差异（P值均〈0．001）；CD36在M5b组的阳性细胞百分数（中位数89．6％）明显高于M5。组（中位数32．7％）（P=0．001）。在急性髓系白血病中，CD36的表达与CD117呈负相关（r=-0．751，P=0．005），与HLA．DR、CD34不相关；在M4和M5b组中CD36与CD14的表达呈正相关（r=0．870，P=0．011）；在单核细胞相关性白血病（MLIL）中CD36阳性率为92．6％（25／27），CD14的阳性率为48．1％（13／27），前者明显高于后者（P=0．001），在M5。中CD14未表达，在M5b中CD14表达为100％（5／5）；CD117在M5a的阳性率明显高于M5b（P=0．010）；CD34在M5的阳性率较低（33．3％，4／12）。结论：结合CD36与其它淋系及髓系抗原有助于淋巴系白血病、髓系白血病及其单核细胞相关性白血病的诊断与鉴别，其在单核细胞相关性白血病阳性率为92．6％（25／27），高于CD14（41．8％，13／27）。     

白血病人外周血白细胞c-myc原癌基因表达及其意义

应用DNA和RNA斑点杂交技术,对30例白血病患者外用血白细胞中c-myc原癌基因的扩增水平及其中17例的表达水平进行分析,结果发现:①在30例白血病仅发现c-myc原癌基因有限程度的扩增(最高2～4倍),仅1例达到4倍的扩增。②在各类型白血病中不同的病例,c-myc表达水平差异很大,一般急性白血病表达程度相对较高,而慢性白血病表达程度较低。③对17例同时检测了c-myc扩增水平及表达水平的研究发现,扩增的程度、水平与表达无相关性。④各型白血病中c-myc表达量与外周血白血病细胞(原 早或原 幼)百分比可能有一定关系。     

CD56在急性髓系白血病细胞上的表达及微小残留病分析

目的探讨CD56在非M3急性髓系白血病（AML）中的表达及在微小残留病（MRD）检测的意义。方法应用流式细胞术分析145例非AML-M3 AML患者免疫表型,以CD56、CD19、CD117、CD34、CD33为标志,CD45设门MRD分析。结果 145例AML患者中CD56阳性37例,占25.52%,CD19阳性17例,占11.72%,分布在M1、M2、M4、M5。CD56或/和CD19阳性的AML患者共49例,其中CD56和CD19同时阳性5例,均为M2亚型。P170蛋白阳性36例,占24.83%,其表达率与CD56呈显著正相关（P〈0.01）。48例AML患者在诱导治疗结束和维持治疗第14、32、56周作MRD检测。单纯CD56＋组MRD阳性率93.55%,复发率77.41%,与单纯CD19＋组（MRD阳性率25.00%,复发率0）比较,差异有统计学意义（P均〈0.01）。CD56＋CD19＋组MRD阳性率100.00%,复发率80.00%,与单纯CD56＋组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,与单纯CD19＋组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 CD56、CD19在非M3 AML有较高的表达率。用CD45设门以CD56、CD19、CD34、CD117、CD33为组合的MRD方案能有效检测MRD。     

CDll7在白血病细胞上的表达分析

目的 探讨细胞表面分化抗原CD117在各型白血病细胞上的表达规律及其意义。方法 采用CD45／SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术细胞表面分化抗原分析。结果急性髓系白血病(AML)患CD117表达率为68％，慢性粒细胞白血病急变期(CML-BC)患CD117表达率为80％，而在急性淋巴细胞白血病中表达率极低，仅为2％。在慢性淋巴细胞白血病、CML慢性期中阴性。在AML中CD117主要表达在M0／M1(72％)、M2(88％)、M4(50％)、M5b(75％)、M6(100％)，但在M3和M5b中表达率较低(分别为39％和29％)，在从中CD1l7的表达率高于CD54及HLA—DR。CD117与CD14在AML中的表达呈负相关。结论 CD117有助于淋巴系与髓系白血病的鉴别，并有助于白血病克隆与正常细胞的区分。     

CD56在急性髓系白血病细胞上的表达及微小残留病分析

目的探讨CD56在非M3急性髓系白血病(AML)中的表达及在微小残留病(MRD)检测的意义。方法应用流式细胞术分析145例非AML-M3 AML患者免疫表型,以CD56、CD19、CD117、CD34、CD33为标志,CD45设门MRD分析。结果 145例AML患者中CD56阳性37例,占25.52%,CD19阳性17例,占11.72%,分布在M1、M2、M4、M5。CD56或/和CD19阳性的AML患者共49例,其中CD56和CD19同时阳性5例,均为M2亚型。P170蛋白阳性36例,占24.83%,其表达率与CD56呈显著正相关(P<0.01)。48例AML患者在诱导治疗结束和维持治疗第14、32、56周作MRD检测。单纯CD56+组MRD阳性率93.55%,复发率77.41%,与单纯CD19+组(MRD阳性率25.00%,复发率0)比较,差异有统计学意义(P均<0.01)。CD56+CD19+组MRD阳性率100.00%,复发率80.00%,与单纯CD56+组比较,差异无统计学意义(P>0.05),与单纯CD19+组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CD56、CD19在非M3 AML有较高的...     

5-杂氮脱氧胞苷去甲基化作用对白血病细胞株HL-60中SHP-1和C-kit基因表达的影响

本研究旨在探讨SHP-1及C-kit基因在急性白血病HL-60细胞中的表达情况及5-杂氮脱氧胞苷（5-azaCdR）去甲基化作用对SHP-1及C-kit表达的影响。用RT-PCR方法检测药物处理组HL-60细胞与对照组SHP-1、C-kit基因的mRNA的表达水平。用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测HL-60细胞中SHP-1、C-kit基因的甲基化状态改变。结果表明,在原本不表达SHP-1 mRNA的HL-60细胞中,经过5-aza-CdR的去甲基化作用后,SHP-1可以重新表达,而使原来高表达的C-kit mRNA水平下降。当0.5、1、2μmol/L 5-aza-CdR分别作用于白血病细胞株时,去甲基化作用增强,SHP-1 mRNA的表达水平呈上升趋势,C-kit mRNA的表达水平呈下降趋势,两两比较表明差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：HL-60细胞株中SHP-1 mRNA表达缺如,经去甲基化作用后表达恢复,说明SHP-1基因高度甲基化与白血病发生有关;白血病形成中可能存在C-kit mRNA表达的异常增高。5-aza-CdR对SHP-1与C-kit的表达水平的影响呈剂量依赖性,浓度越高,SHP-1平均表达水平越高,C-kit mRNA表达水平越低,在特定的一个浓度下,呈现时间依赖性。SHP-1 mRNA与C-kit mRNA表达呈负相关,提示白血病细胞中SHP-1表达的降低或缺如消弱了对C-kit信号通路的负调控而在白血病形成中发挥作用。     

成人急性白血病免疫学分型的研究

目的　探讨成人急性白血病（AL）抗原表达规律。方法　通过流式细胞术检测140例成人急性白血病患者免疫分型情况。结果　（1）104例急性髓系白血病（AML）患者主要表达CD13、CD33、HLA—DR、CD34和CD117抗原。26．9％的AML患者伴有淋系抗原的表达；（2）30例急性淋巴细胞白血病（ALL）患者主要表达HLA—DR、CD10、CD19、CD34和CD7。40％的ALL患者伴有髓系抗原的表达。结论 本方法能直接准确的反映成人急性白血病的的免疫学分型，有利于成人急性白血病的诊断，治疗及预后判断。     

三氧化二砷去甲基化作用对白血病细胞株HL-60中SHP-1和c-kit基因表达的影响

本研究旨在探讨SHP-1及C-kit基因在急性白血病细胞中的表达水平及三氧化二砷（As2O3）去甲基化作用对SHP-1及C-kit表达的影响。用RT-PCR方法检测药物处理的HL-60细胞组与对照组SHP-1、C-kit基因的mRNA的表达水平。用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测HL-60细胞中SHP-1基因的甲基化状态的变化。结果表明,在原本不表达SHP-1 mRNA的HL-60细胞中,经过As2O3的去甲基化作用后,SHP-1得到表达,而使原来高表达的C-kit mRNA的表达水平随之下降。当1.0μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L As2O3分别作用于白血病细胞株时,去甲基化作用增强,SHP-1 mRNA的表达水平呈上升趋势,C-kit mRNA的表达水平呈下降趋势,经两两比较,二者间有统计学意义（P〈0.05）。结论：HL-60细胞株中SHP-1 mRNA表达缺如,经去甲基化作用后表达恢复,说明SHP-1基因高度甲基化与白血病发生有关;在白血病形成中可能存在C-kit mRNA表达的异常增高。As2O3对SHP-1与C-kit的表达水平的影响呈剂量依赖性,浓度越高,SHP-1平均表达水平越高,C-kit mRNA表达水平越低,在特定的浓度下,呈现时间依赖性;SHP-1 mRNA与C-kit mRNA表达呈负相关,提示白血病细胞中SHP-1表达降低或缺如削弱了对C-kit信号通路的负调控而在白血病形成中发挥作用。     

磷酸特异化流式细胞术检测骨髓白血病细胞磷酸化信号蛋白的实验研究

本研究通过建立磷酸特异化流式细胞术(phospho-specific flow cytometry,phospho-flow)检测白血病细胞信号通路磷酸化蛋白的实验方法,探讨Phospho-flow在白血病研究中的应用价值。取白血病患儿的骨髓,分别采用Phospho-flow单个核细胞法和Phospho-flow直接固定法进行处理。Phospho-flow单个核细胞法为:骨髓经提取单个核细胞并固定破膜处理后,加入磷酸化抗体(P-AKT,P-ERK1/2)孵育,然后用流式细胞仪分析;Phospho-flow骨髓直接固定法为:骨髓经固定/裂解液和90%甲醇破膜细胞处理,然后加入细胞表面CD抗体及P-AKT,P-ERK1/2孵育,然后上流式细胞仪分析处理。结果表明,26例白血病患儿骨髓经phospho-flow单个核细胞法处理,P-AKT和P-ERK1/2阳性率分别为46.2%和30.8%,经phospho-flow骨髓直接固定法处理,P-AKT和P-ERK1/2阳性率分别为50.0%和38.5%。经统计学分析,两种phospho-flow的骨髓处理方法在检测P-AKT和P-ERK1/2的阳性率方面无统计学差异(p>0.05)。结论:本实验室建立的phospho-flow骨髓直接固定法,能有效检测白血病患儿骨髓细胞的磷酸化蛋白,可用于白血病信号通路的实验研究。     

TRAIL受体DR5与Ki67在急性白血病细胞表达的关系及意义

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体DR5和Ki67在急性白血病细胞的表达及两者的相关性。方法分别观察20例急性白血病和10例非恶性血液病患者骨髓单个核细胞(BMMNC)在体外培养72小时后,用流式细胞仪检测BMMNC中DR5的表达,同时采用免疫细胞化学染色测定其Ki67的表达。结果急性白血病细胞表达Ki67的阳性细胞标记指数显著高于对照组,32.3±8.2 vs 15.4±3.9(P<0.05),而表达TRAIL-DR5的水平与与对照组比较差异无统计学意义,12.2±4.3 vs 9.9±2.3(P>0.05);Ki67和TRAIL-DR5呈负相关(r=-0.459,P<0.05)。结论DR5与Ki67在急性白血病细胞的表达关系具有相关性,提示了白血病细胞存在增殖或凋亡异常;同时联合检测DR5和Ki67较单独检测对急性白血病发病机制研究可能更有价值。     

多参数流式细胞术在白血病免疫分型中的应用探讨

目的 探讨多参数流式细胞术(FCM)在白血病免疫分型中的应用.方法 利用CD45/SSC 设门的四色荧光FCM检测339例白血病患者骨髓细胞表面标记.结果 339例白血病中急性髓系白血病(AML)150例,占44.2%,髓系抗原表达率以CD33(86.7%)最高,其余从高到低依次为CD117、CD3、cMPO、CD15.淋巴细胞性白血病183例,占54.0%,其中急性B淋巴细胞白血病(ALL-B)110例、急性T淋巴细胞白血病(ALL-T)27例、慢性淋巴细胞白血病(CLL)46例.ALL-B淋巴系抗原表达率以CD19最高,其余由高到低依次为cCD79a、CD10、CD22、CD20,ALL-T淋巴系抗原表达率以CD7最高,其余由高到低依次为CD2、CD5、CD3.髓系白血病中常见交叉表达淋巴系抗原CD56、CD7、CD9.ALL中常见交叉表达髓系抗原CD13、CD33,CD14的表达与单核细胞白血病相关.结论 应用多参数FCM能对白血病进行分型,对于白血病的诊断治疗和预后判断均有重要价值.     

网织血小板在急性白血病中的检测和临床意义

目的 探讨网织血小板(RP)流式细胞仪检测方法及RP检测的临床意义.方法 以体检健康者30例作为对照,动态监测30例急性白血病(AL)患者外周血血小板(PLT)水平、RP百分比(RP%)并计算RP绝对值(RPC).结果 AL患者RP%和RPC低于健康者(P<0.05).经治疗达到临床缓解的AL患者RP%及RPC恢复正常.结论 RP%及RPC能反映骨髓PLT生成情况,且比PLT计数更加灵敏,可作为AL治疗过程中的监控指标.     

93例急性白血病免疫表型分析

目的探讨流式细胞术免疫分型在急性白血病诊断及治疗中的意义。方法采用CD45侧向角光散射(SSC)双参数散点图设门四色流式细胞术,对93例急性白血病患者进行免疫表型分析。结果 69例急性髓性白血病患者主要表达CD13、CD33、人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD117;20.2%的患者伴有淋巴细胞系抗原CD7表达;CD7+与CD7-的完全缓解率(CR)比较差异有统计学意义(P<0.05)。13例急性B淋巴细胞白血病患者主要表达CD19、CD34、HLA-DR、CD20、CD22。31%的患者伴有髓细胞系抗原CD13表达;CD13+与CD13-的CR比较差异无统计学意义(P>0.05)。7例急性T淋巴细胞白血病患者主要表达CD5、CD3、CD7、CD34。结论采用流式细胞术对急性白血病进行免疫分型,对白血病诊断的准确性及分型、选择治疗方案及判断预后具有重要临床意义。     

c-cbl反义RNA抑制K562细胞的增殖

为探讨原癌基因c-cbl对CML细胞增殖的影响,我们用RT-PCR克隆了包括5′端非编码区的人类c-cbl基因部分序列,将之反向插入pcDNA3载体,并转染K562及NB4细胞。经MTT实验、半固体集落培养和流式细胞术观察细胞增殖能力的改变。结果表明,限制性酶切分析及序列测定证明所克隆的基因核苷酸序列正确,MTT实验显示反义载体转染K562细胞生长明显受抑,24、48及72小时增殖抑制率分别为30.07％,42.53％和55.75％(P值均<0.001),FCM-BrdU法测定的细胞倍增时间之比为1∶1.87(P<0.02),细胞集落形成抑制率为33.01％,反义转染基因NB4细胞增殖率无改变。上述结果直接地证明了c-cbl在CML细胞生长中的重要性。     

脑脊液流式细胞学检测技术在急性淋巴细胞白血病儿童并发中枢神经系统白血病中的诊断价值

本研究旨在探讨脑脊液流式细胞学检测(FCM)技术对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)并发中枢神经系统白血病(CNSL)的诊断价值。采用FCM技术、脑脊液常规细胞学(CC)涂片法、脑脊液常规及生化检测法对75例初诊ALL患儿首次脑脊液标本进行检测,并以9例病毒性脑炎患儿初次脑脊液检测结果作为对照。结果表明,75例初诊ALL患儿,中位发病年龄5(1-14)岁,男女比例1.3∶1。根据CCLG-ALL2008疾病危险度分组:标危组38例,中危组22例,高危组15例。首次脑脊液检查结果显示:FCM+CC+5例(6.7%),根据CCLG-2008中枢神经系统(CNS)状态分级:CNS-2 3例,CNS-3 2例;FCM+CC-8例(10.7%),其中CNS-1 7例,CNS-2 1例;FCM-CC-62例(82.7%),其中CNS-1 60例,CNS-2 1例,CNS-3 1例。本研究结果显示,FCM+CC+,FCM+CC-,FCM-CC-3组在CNS-1,-2,-3分布上无显著性差异(P>0.05),考虑可能与样本数量偏小有关。9例病毒性脑炎患儿初次脑脊液CC涂片中均未见肿瘤细胞。结论:脑脊液FCM技术敏感度高,在CNS-2,CNS-3诊断上与脑脊液CC检查具有较高的一致性,并可将CC诊断的CNS-2,-3阳性率提高20%,是脑脊液CC检测方法的重要补充,在儿童ALL并发CNSL的诊断中具有重要的应用价值。