发育期大鼠癫痫持续状态后海马内HIF-1α表达对Notch信号通路的影响

目的:探究发育期大鼠癫痫持续状态(SE)后海马内低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达对Notch信号通路的影响。方法:出生后21 d SD大鼠168只按随机数字表法分为对照组(NS,n=56)、模型组(SE,n=56)和干预组(2ME2,n=56)。其中SE组腹腔注射10 mg/ml戊四氮(PTZ,80 mg/kg)溶液制作癫痫持续状态模型,NS组腹腔注射等剂量生理盐水,2ME2组在癫痫持续状态模型建立后立即腹腔注射2-甲氧基雌二醇(2ME2,15 mg/kg)溶液。分别于造模成功后1、4、6、8、12 h和24 h处死大鼠取出海马组织,应用Western Blot方法检测HIF-1α、Notch-1蛋白含量;另外将各组造模成功后6 h的大鼠进行灌注并取脑,应用免疫组化染色法检测海马齿状回(DG)区HIF-1α和Notch-1的阳性细胞数。结果:HIF-1α、Notch-1蛋白在NS组均平稳表达;在SE组存在明显的表达时程和表达高峰,1 h时表达即开始增多,8 h达高峰,然后逐渐减少,且各个时间点的表达均明显高于NS组,差异有统计学意义(P0.05);HIF-1α被特异性抑制剂2ME2干预后,HIF-1α、Notch-1的表达均较SE组明显减少,差异有统计学意义(P0.05),其中6 h时达最低值。在此时间点,SE组HIF-1α、Notch-1的阳性细胞数均明显高于NS组和2ME2组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:发育期大鼠癫痫持续状态后HIF-1α可能部分参与了Notch信号通路的激活与调控。     

ZBP-89通过HIF-1α/Notch1通路对肝癌干细胞干性的调控作用

目的 探究ZBP-89(Zinc-binding protein-89)通过HIF-1α/Notch1通路对肝癌干细胞干性的调控作用.方法 构建ZBP-89过表达慢病毒载体(Len-ZBP-89)并进行慢病毒包装,微球体培养法富集肝癌干细胞,流式细胞术检测细胞中EpCAM、CD133的表达,CoCl2(HIF-1α激活剂)处理肝癌干细胞,RT-PCR检测细胞中ZBP-89、HIF-1α和Notch1mRNA表达,Western blot检测细胞中ZBP-89、HIF-1α、Notch1、CD44、CD133和EpCAM蛋白表达,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,光学显微镜观察特征性肿瘤球体的形成.结果 Len-ZBP-89慢病毒包装成功,病毒滴度为1.32×109 TU/mL;肝癌细胞PLC/PRF/5中ZBP-89 mRNA和蛋白表达水平下调,HIF-1α和Notch1 mRNA和蛋白表达水平上调;PLC/PRF/5细胞成功富集肝癌干细胞PLC/PRF/5.C,PLC/PRF/5.C中EpCAM、CD133的表达水平均上调;Len-ZBP-89可下调PLC/PRF/5.C细胞中HIF-1α、Notch1、CD133、CD44和EpCAM的蛋白表达,下调细胞迁移、侵袭能力和特征性肿瘤球体克隆数量;CoCl2(HIF-1α激活剂)可上调PLC/PRF/5.C细胞中HIF-1α、Notch1、CD133、CD44和EpCAM的蛋白表达,上调细胞迁移、侵袭能力和特征性肿瘤球体克隆数量(P＜0.05);CoCl2处理可逆转Len-ZBP-89对PLC/PRF/5.C干性的抑制作用.结论 过表达ZBP-89通过抑制HIF-1α/Notch1通路抑制肝癌干细胞干性.     

银杏内酯B对大鼠海马CA1区神经元自发放电的影响(英文)

为了研究银杏内酯B(Ginkgolide B,BN52021)对静息状态下的海马脑片神经元活动的影响。本研究应用细胞外记录单位放电技术观察了银杏内酯B对海马神经元电活动的影响,并分析了相关机制。结果显示:(1)在43个CA1区神经元放电单位给予银杏内酯B(0.1,1,10μmol/L)2min,有42个放电单位(97.67%)放电频率明显降低,且呈剂量依赖性;(2)预先用0.2mmol/L的L-glutamate(L-Glu)灌流海马脑片,10个放电单位放电频率明显增加,表现为癫痫样放电,在此基础上灌流银杏内酯B(1μmol/L)2min,其癫痫样放电全部被抑制;(3)预先用L型钙通道开放剂BayK8644灌流8个海马脑片神经元,8个单位(100%)放电全部增加,在此基础上灌流银杏内酯B(1μmol/L)2min,7个放电单位(87.5%)放电频率明显减低;(4)在8个CA1区神经元,银杏内酯B(1μmol/L)对单位放电的抑制效应可被1mmol/L广泛钾通道阻断剂(tetraethylammonium,TEA)完全阻断。上述结果提示,银杏内酯B可抑制海马CA1区神经元的自发放电,这种作用可能与银杏内酯B抑制L型钙通道有关,而且可能与延迟整流型钾通道(delayed rectifier potassium channel,KDR)有关。银杏内酯B通过降低神经元的活动而发挥对中枢神经元的保护作用。     

电针预处理大鼠百会穴对脑缺血保护作用及HIF-1α相关机制的研究

目的:旨在证实电针预处理百会穴对脑缺血损伤的保护作用及HIF-1α的相关机制。方法:将雄性SD大鼠80只随机分为5组(n=16):假手术组(Sham),对照组(CON),电针预处理组(EA),HIF-1α抑制剂组(2ME2)和电针预处理+HIF-1α抑制剂组(EA+2ME2)。CON组、2ME2组、EA组及EA+2ME2组动物均建立大脑中动脉阻闭模型(MCAO),Sham组动物仅接受同前手术操作;EA组及EA+2ME2组大鼠接受连续5 d电针刺激后24 h建立MCAO模型;2ME2组及EA+2ME2组动物分别于MCAO模型制备前30 min腹腔注射16 mg/kg的2ME2。缺血再灌注后24 h,各组随机抽取8只动物处死,行TUNEL染色检测神经元凋亡,Western Blot检测缺血半暗带中Bcl2/Bax的表达;缺血再灌注后72 h,各组另8只动物接受神经功能学评分后行磁共振成像(MRI)检查,随后处死行TTC染色检测脑梗死容积。结果:EA组脑梗死容积百分比显著低于CON组(P0.05);与CON组比较,EA组神经功能评分显著改善(P0.05),而2ME2可以显著降低EA+2ME2组神经功能评分(P0.05)。与CON组比较,EA组神经功能评分显著改善(P0.05),而2ME2可以显著降低EA+2ME2组神经功能评分(P0.05)。而CON组及EA+2ME2组中TUNEL阳性细胞显著多于EA组(P0.05)。与EA组比较,CON组及EA+2ME2组中Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.05),而CON组中Bax蛋白表达显著增加(P0.05)。结论:电针预处理百会穴对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制可能是HIF-1α抑制缺血后神经凋亡、上调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达、下调促凋亡蛋白Bax表达,达到脑缺血保护的作用。     

雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病模型大鼠海马IL-1α表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马白细胞介素-1α(IL-1α)表达的影响。方法:30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组及用药组,模型组及用药组大鼠双侧海马各一次注射Aβ1-40,对照组大鼠双侧海马注射等量生理盐水,模型制作成功后,用药组大鼠每日腹腔注射雷公藤内酯醇0.4mg/kg,共15d。采用免疫组织化学和RT-PCR方法检测IL-1α蛋白和mRNA在大鼠海马的表达。结果:免疫组织化学染色显示,模型组大鼠海马IL-1α阳性细胞数和平均光密度明显高于对照组(P0.01),用药组大鼠海马IL-1α阳性细胞数和平均光密度较模型组明显减少(P0.05或0.01)。RT-PCR结果显示,模型组大鼠海马IL-1αmRNA水平明显高于对照组(P0.01),用药组大鼠海马IL-1αmRNA水平较模型组明显下降(P0.01)。结论:雷公藤内酯醇可抑制AD模型大鼠海马IL-1α的表达。     

银杏内酯B对大鼠心肌细胞间通讯的影响

利用激光扫描共聚焦显微镜的高功率激光对标记CFDA荧光探针的正常大鼠体外培养心肌细胞进行照射。通过荧光漂白后荧光重新分布技术观察大鼠心肌细胞缝隙连接的细胞通讯功能及银杏内酯B对细胞通讯的影响。结果发现体外培养的正常大鼠心肌细胞间存在着缝隙连接,具有细胞间通讯的功能。银杏内酯B对正常大鼠心肌细胞缝隙连接介导的细胞间通讯具有抑制作用。     

HIF-1α、ALDH1 和Hedgehog 信号通路协同促进三阴性乳腺癌中癌症干细胞活化的相关性研究

目的:探讨HIF-1α、ALDH1 和Hedgehog 信号通路在三阴性乳腺癌中癌症干细胞活化的相关性及其临床意义。方法:采用免疫磁珠法从三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231 细胞中分选出ALDH1+乳腺癌干细胞和ALDH1-乳腺癌细胞,采用qRT-PCR 方法比较HIF-1α和Hedgehog 信号传导通路主要分子SHH、PTCH1、SMO、GLI1 在这两种细胞中的表达差异;采用免疫组化方法了解HIF-1α和ALDH1 在三阴性乳腺癌组织中的表达以及与干细胞信号传导通路Hedgehog 的相互关系。结果:HIF-1αmRNA、SMO mRNA 和GLI1 mRNA 在ALDH1+乳腺癌干细胞中的表达均明显高于ALDH1-乳腺癌细胞,差异具有显著统计学意义(P 均<0.05)。在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织中HIF-1α的阳性表达率分别为90.0% 和70.0%,ALDH1 的阳性表达率分别为93.3%和66.7%,差异均具有显著统计学意义(P 均<0.05)。在三阴性乳腺癌组织中HIF-1α和ALDH1 的表达呈正相关(r =0.53,P<0.01)。HIF-1α的表达与三阴性乳腺癌的淋巴结转移和TNM 分期有关(P 均<0 .05),ALDH1 的表达与组织学分级和TNM 分期有关(P 均<0.05)。HIF-1α与Hedgehog 信号通路分子SHH(r = 0.584,P<0.01)、SMO(r=0.467,P<0.01)和GLI1(r =0.439,P<0.05)的表达呈正相关,ALDH1 与SHH(r =0.426,P<0.05)和GLI1(r =0.394,P<0.05)的表达呈正相关。结论:HIF-1α和Hedgehog 信号通路在ALDH1+ 乳腺癌干细胞中活化,HIF-1α、ALDH1 与Hedgehog信号传导通路可能相互协同激活癌症干细胞从而促进三阴性乳腺癌的恶性进展。     

SIRT1/HIF-1α信号通路介导IL-38改善胶原诱导性关节炎大鼠Th17/Treg失衡

目的 探讨IL-38对胶原诱导性关节炎大鼠Th17/Treg失衡的调节作用,明确SIRT1/HIF-1α信号通路在其中的作用.方法 SPF级SD大鼠40只,随机分为正常对照组(CON组)、CIA模型组(CIA组)、CIA+IL-38(5ng/g)组(IL-38组)和CIA+IL-38(5ng/g)+SIRT1 抑制剂(...     

HIF-1α、ALDH1和Hedgehog信号通路协同促进三阴性乳腺癌中癌症干细胞活化的相关性研究北大核心CSCD

目的:探讨HIF-1α、ALDH1和Hedgehog信号通路在三阴性乳腺癌中癌症干细胞活化的相关性及其临床意义。方法:采用免疫磁珠法从三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞中分选出ALDH1+乳腺癌干细胞和ALDH1-乳腺癌细胞,采用qRT-PCR方法比较HIF-1α和Hedgehog信号传导通路主要分子SHH、PTCH1、SMO、GLI1在这两种细胞中的表达差异;采用免疫组化方法了解HIF-1α和ALDH1在三阴性乳腺癌组织中的表达以及与干细胞信号传导通路Hedgehog的相互关系。结果:HIF-1αmRNA、SMO mRNA和GLI1 mRNA在ALDH1+乳腺癌干细胞中的表达均明显高于ALDH1-乳腺癌细胞,差异具有显著统计学意义(P均<0.05)。在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织中HIF-1α的阳性表达率分别为90.0%和70.0%,ALDH1的阳性表达率分别为93.3%和66.7%,差异均具有显著统计学意义(P均<0.05)。在三阴性乳腺癌组织中HIF-1α和ALDH1的表达呈正相关(r=0.53,P<0.01)。HIF-1α的表达与三阴性乳腺癌的淋巴结转移和TNM分期有关(P均<0.05),ALDH1的表达与组织学分级和TNM分期有关(P均<0.05)。HIF-1α与Hedgehog信号通路分子SHH(r=0.584,P<0.01)、SMO(r=0.467,P<0.01)和GLI1(r=0.439,P<0.05)的表达呈正相关,ALDH1与SHH(r=0.426,P<0.05)和GLI1(r=0.394,P<0.05)的表达呈正相关。结论:HIF-1α和Hedgehog信号通路在ALDH1^+乳腺癌干细胞中活化,HIF-1α、ALDH1与Hedgehog信号传导通路可能相互协同激活癌症干细胞从而促进三阴性乳腺癌的恶性进展。     

树鼩海马微灌流谷氨酸和钙所致线粒体应激及银杏内酯B的影响

目的观察树鼩海马微环境中谷氨酸(Glu)及钙(Ca2 )改变对细胞色素C(CytC)释放以及caspase凋亡基因激活的影响,探讨银杏内酯B(GB)干预海马神经元线粒体应激的分子机制。方法使用单泵等速微灌流系统行树鼩海马Glu及Ca2 微灌流,24h后用免疫组化法观察海马神经元CytC蛋白表达;免疫印迹法检测线粒体及胞质的CytC含量;实时荧光定量PCR技术检测海马caspase-3及caspase-9 mRNA的含量。微灌流Glu和Ca2 溶液后6h于舌下静脉注射银杏内酯B5mg/kg,24h后观察上述指标的改变。结果树鼩海马微灌流Glu和Ca2 溶液后24h,线粒体CytC含量显著下降,而胞质部分出现CytC;海马组织caspase-3、caspase-9 mRNA明显升高。GB治疗组线粒体CytC含量增多,胞质中仍有CytC存在,而海马组织caspase-9 mRNA显著降低,但caspase-3 mRNA无差异。结论海马微环境中Glu与Ca2 的大量堆积促进线粒体CytC的释放,可能是激活caspase级联反应而导致线粒体应激、神经元继发损伤的始动环节;GB的神经保护效应可能与其特异性拮抗血小板活化因子(PAF)受体,抑制Ca2 内流,部分阻滞CytC释放入胞质,从而减少caspase-9基因转录有关。     

Notch1信号通路参与自身免疫性疾病发病机制的研究进展

自身免疫性疾病是一类免疫应答紊乱致使免疫系统对自身抗原产生攻击的疾病。一般分为器官特异性自身免疫性疾病和系统性自身免疫性疾病,前者主要引起机体某特定器官的自身免疫反应,而后者则常引起多系统、多器官损害,如RA、SLE、银屑病等自身免疫性疾病。近年来越来越多的研究证明,Notch1信号通路通过调节细胞发育、增殖、分化等在RA、SLE、银屑病、EAE、强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)等自身免疫性疾病中发挥重要作用。文章重点对Notch1信号通路与自身免疫性疾病的研究进展进行综述。     

银杏内酯B对帕金森病模型大鼠的保护作用

目的 探究银杏内酯B（ginkgolide B,GB）对帕金森病（Parkinson's disease,PD）模型大鼠的保护作用。 方法 采用脑内定位注射6-OHDA建立大鼠PD模型,随机分为Sham组、模型组、美多芭组（20 mg/kg）和GB低、中、高剂量组（15、30、60 mg/kg）,另将大鼠随机分为Sham组、Model组、GB 60 mg/kg组、LY294002组和（GB 60 mg/kg+LY294002）组,旋转实验检测大鼠行为学,试剂盒检测MDA、SOD、GSH水平,ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平,Western blot检测大鼠黑质和纹状体组织PI3K/Akt信号通路蛋白表达情况。 结果 治疗后,美多芭组和GB中、高剂量组大鼠旋转圈数明显少于模型组（P<0.05）,MDA和IL-6、IL-1β、TNF-α水平明显低于模型组（P<0.05）,SOD、GSH水平、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显高于模型组（P<0.05）;与LY294002组比较,（GB 60 mg/kg+LY294002）组大鼠p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显上调（P<0.05）,MDA和IL-6、IL-1β、TNF-α水平明显降低（P<0.05）,SOD、GSH水平明显升高（P<0.05）。 结论 高剂量GB可改善PD大鼠行为学,增强抗氧化应激能力,减轻炎性损伤,起到一定保护作用,其机制可能与调节PI3K/Akt信号通路有关。     

Xyloketal B通过调控JAK2/STAT3信号通路减轻大鼠癫痫后脑损伤

目的:探讨海洋天然产物xyloketal B(Xyl-B)能否通过调控JAK2/STAT3信号通路保护发育期大鼠癫痫后脑损伤.方法:32只20日龄雄性SD大鼠随机分为4组:对照control组、红藻氨酸(KA)组、KA+Xyl-B(10 mg/kg)组及KA+Xyl-B(20 mg/kg)组,通过腹腔注射KA制作大鼠癫...     

银杏内酯B对CLP诱导脓毒症小鼠的保护作用

目的: 银杏内酯B (GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子受体拮抗剂。本实验通过研究GB对盲肠结扎穿孔(CLP)诱导的脓毒症小鼠的存活、外周血一氧化氮(NO)、活性氧簇(ROS)及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的影响来评价其对脓毒症的免疫调节效果。方法: 采用CLP的标准化程序建立小鼠脓毒症模型,术前30 min对药物组模型小鼠进行GB(10 μg/g)预处理;统计存活率;以Griess法检测小鼠外周血NO 水平;以H₂DCFDA标记结合流式细胞术检测外周血ROS 水平;以流式细胞微球阵列法与ELISA法检测外周血细胞因子水平。结果: CLP手术后24 h,小鼠胸腺和脾脏萎缩明显,外周血炎症介质NO和ROS及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的水平均显著上升,术后5 d内CLP模型小鼠全部死亡,而10 μg/g GB于术前30 min预处理,能缓解胸腺和脾脏萎缩,有效抑制炎症介质与炎性细胞因子风暴,显著提高脓毒症存活率。 结论: GB预处理能显著降低CLP小鼠死亡率,下调外周血炎症介质NO和ROS及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的水平,对脓毒症小鼠有明显的保护作用。     

青藤碱调控CUMS抑郁大鼠突触可塑性及其对Notch和mTOR信号通路的影响

目的:探究青藤碱(Sin)对慢性不可预见性温和应激(CUMS)所致抑郁大鼠症状的影响及可能的机制.方法:120只雄性健康SD大鼠随机分为对照(Ctrl)组、CUMS组、氟西汀(Fluo)组和Sin组(n=30).建立CUMS抑郁大鼠模型,并分别给予Fluo(20 mg·kg-1·d-1)或Sin(30 mg·kg-1·...     

Notch和Wnt信号通路对神经干细胞增殖分化的影响

Notch和Wnt信号通路是调节神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖、分化的重要通路,Notch信号通路的靶基因Hes1、Hes5及HES相关蛋白等分化抑制信号,通过旁侧抑制机制阻止NSCs的分化,并促进其自我更新;通过NICD与CSL DNA结合蛋白的直接结合,形成GFAP的转录激活复合物,上调GFAP的表达,从而促进NSCs向星形胶质细胞的分化。Wnt信号通过Wnt/β-catenin信号通路对细胞周期素D1和D2的转录调节,调控NSCs细胞周期的进程,使其量增殖;然而,过表达的Wnt3a和Wnt7a蛋白能够抑制NSCs的增殖,促进NSCs向神经元方向分化。     

Notch信号通路对烧伤大鼠血清诱导的肺血管内皮细胞细胞间黏附分子-1的影响

目的探讨Notch信号通路对烧伤大鼠血清诱导的肺血管内皮细胞(PMVEC)细胞间黏附分子(ICAM)-1的影响。 方法42只SD大鼠(6～8周龄)中,随机选取30只,按随机数字表法分为假伤组(n＝15)和烧伤组(n＝15),烧伤组大鼠于95 ℃热水浸浴背部18 s造成30%总体表面积Ⅲ度烧伤,假伤组大鼠于37 ℃水浴中浸浴背部18 s模拟致伤。伤后6、12、24、48、72 h,烧伤组随机分别取3只大鼠,腹主动脉采血,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中ICAM-1含量,假伤组大鼠行相同检测。取剩下的12只大鼠(6～8周龄)中的6只,按前述方法造成30%总体表面积Ⅲ度烧伤,伤后24 h制备烧伤大鼠血清;剩下的6只大鼠不作处理,制备健康大鼠血清。切取10只出生3 d的SD大鼠的肺外边缘组织,组织块法培养大鼠PMVEC,倒置相差显微镜下观察原代细胞培养2、6 d后的形态特征,流式细胞术对原代培养7 d的细胞进行细胞鉴定。取处于对数生长期的第4代PMVEC进行实验,将细胞接种于6孔板中,待细胞生长至80%融合时按随机数字表法分为3组(每组设3个复孔)：对照组(培养液中分别加入体积分数10%健康大鼠血清),二甲基亚砜(DMSO)+烧伤血清组、γ-分泌酶抑制剂(GSI)+烧伤血清组(分别加入3 μL/mL DMSO、75 μmol/L GSI,培养24 h后,加入体积分数10%烧伤大鼠血清刺激培养24 h),ELISA法检测PMVEC上清中ICAM-1的含量;流式细胞仪检测各组PMVEC中ICAM-1的含量;采用蛋白质印迹法检测ICAM-1蛋白表达水平,计算相对蛋白表达量;检测PMVEC的细胞黏附能力。数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。 结果(1)烧伤组大鼠伤后6、12、24、48、72 h血清中的ICAM-1含量分别为(19.77±3.03)、(22.09±3.65)、(22.44±4.04)、(25.40±2.51)、(26.37±3.07) pg/mL,显著高于假伤组的[(10.60±1.51)、(11.03±1.95)、(10.87±0.89)、(9.30±0.89)、(10.93±1.22) pg/mL],2组比较差异均有统计学意义(t＝4.699、4.466、3.181、10.490、8.097,P<0.05)。(2)原代细胞培养2 d后可见细胞从组织块边缘移出,生长较慢;培养6 d后可见细胞融合,细胞呈铺路石样生长。对原代培养7 d的细胞进行流式细胞术鉴定,结果显示CD31阳性细胞占98.6%,确定为PMVEC。(3)血清刺激培养24 h后,对照组,DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组细胞上清中ICAM-1含量分别为1.21±0.25、2.16±0.12、3.07 ±0.30,3组比较差异有统计学意义(F＝46.72,P<0.05);与对照组比较,DMSO+烧伤血清组和GSI+烧伤血清组细胞上清中ICAM-1含量均明显增加,差异均有统计学意义(t＝5.977、8.274,P<0.05);GSI+烧伤血清组细胞上清中ICAM-1含量明显高于DMSO+烧伤血清组,2组比较差异有统计学意义(t＝4.847,P<0.05)。(4)血清刺激培养24 h后,对照组,DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组PMVEC中ICAM-1平均荧光强度分别为2 582±143、3 453±204、4 559±414,3组比较差异有统计学意义(F＝37.84,P<0.05);与对照组比较,DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组细胞中ICAM-1含量均明显增加,差异均有统计学意义(t＝6.056、7.817,P<0.05);GSI+烧伤血清组ICAM-1含量明显高于DMSO+烧伤血清组,2组比较差异有统计学意义(t＝4.149,P<0.05)。(5)血清刺激培养24 h后,对照组、DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组的ICAM-1/GAPDH比值分别为0.74±0.08、1.07±0.08、1.38±0.28,3组总体比较差异有统计学意义(F＝30.76,P<0.05); DMSO+烧伤血清组和GSI+烧伤血清组的ICAM-1/GAPDH比值均明显高于对照组,差异均有统计学意义(t＝5.182、6.990,P<0.05);GSI+烧伤血清组ICAM-1/GAPDH比值明显高于DMSO+烧伤血清组,差异有统计学意义(t＝3.770,P<0.05)。(6)PMVEC与人单核细胞系THP-1细胞共培养2 h后,倒置荧光显微镜下观察对照组、DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组细胞黏附的细胞数呈递增趋势,3组的细胞数分别为(152.00±21.07)、(265.33±36.83)、(345.67±30.66)个,3组比较差异有统计学意义(F＝31.09,P<0.05);DMSO+烧伤血清组和GSI+烧伤血清组黏附的细胞数均明显高于对照组,比较差异均有统计学意义(t＝4.626、9.016,P<0.05);GSI+烧伤血清组黏附的细胞数明显高于DMSO+烧伤血清组,差异有统计学意义(t＝2.903,P<0.05)。 结论大鼠烧伤后血清中的ICAM-1含量明显上升,烧伤大鼠血清刺激PMVEC可以导致细胞内ICAM-1含量以及分泌到上清中的ICAM-1含量增加,应用GSI阻断Notch信号通路可以增加ICAM-1的产生及表达,可增加PMVEC对人单核细胞系THP-1细胞的黏附作用。     

银杏内酯B对新生大鼠缺血性损伤海马MMP-2及MMP-9表达的影响

目的:观察银杏内酯B(GB)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马内基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9的影响,探讨GB的脑保护作用机制。方法:192只新生7天SD大鼠随机分为正常组(N组)、假手术组(S组)、HIBD模型生理盐水组(H组)和银杏内酯B治疗组(G组)。选择模型成功后24 h、4 d、10 d三个时间点,应用免疫组化、RT-PCR法检测各组大鼠海马CA1区MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA的表达变化。结果:HIBD后海马MMP-2蛋白表达明显升高,4 d达高峰,10 d后开始下降;同时MMP-9蛋白表达也明显升高,但表达高峰在HIBD后24 h,4 d后开始下降。mRNA的表达趋势与蛋白表达相一致。N组可见极少量阳性表达细胞,S组中可见少量阳性表达细胞,G组的大鼠海马CA1区MMP-2、MMP-9的表达也明显升高,但是小于H组,G组的MMP-2、MMP-9的表达与H组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:HIBD可引起MMP-2、MMP-9表达异常,并且呈动态变化;GB对脑保护作用机制之一可能与其抑制MMP-2、MMP-9高表达有关。     

银杏内酯B对高胆固醇诱导的PC12细胞胆固醇含量的影响

目的: 基于体外血脑屏障环境下观察银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对高胆固醇诱导PC12细胞胆固醇含量的影响。方法: 利用Transwell共培养脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞建立体外血脑屏障,并与PC12细胞共培养。在Transwell内皮细胞侧添加40 μmol/L胆固醇,并选择不同浓度银杏内酯B分别干预上述模型。观察PC12细胞的形态学变化,通过MTT法筛选银杏内酯B的干预浓度,用HPLC法检测PC12细胞内胆固醇含量的变化。结果: 倒置相差显微镜观察发现PC12细胞大多呈圆形、短梭形或三角形,胞浆伸展,细胞两极有短突起,细胞折光性好,胞核可见。通过MTT确定的银杏内酯B干预剂量分别为低剂量1 μmol/L、中剂量5 μmol/L和高剂量25 μmol/L。HPLC法检测显示模型组PC12细胞内胆固醇含量升高,与对照组相比差异显著 (P<0.01)。银杏内酯B干预上述模型16 h后,25 μmol/L GB降胆固醇的效果最佳,与模型组相比差异显著(P<0.05),25 μmol/L GB与阳性对照药辛伐他汀相比差异无显著(P>0.05)。结论: 中药银杏叶有效单体GB可以降低体外血脑屏障环境下PC12细胞内胆固醇含量。