不同心脏负荷及心室内压变化对大鼠早期心肌原癌基因表达的影响

目的:检测容量(VOL)和压力超负荷(POL)早期大鼠左心室内压变化诱导左心室心肌原癌基因c-fos、c-jun、c-myc、egr-l mRNA表达时间变化和差异.方法:测定假手术大鼠、及心脏超负荷后不同时间点左心室收缩压(LVSP)和内压谷值(LVDP)变化,用狭缝杂交检测各时间点左室心肌c-fos、c-jun、c-myc、egr-l mRNA表达,用密度仪定量分析.结果:与假手术组比较,不同心脏负荷后早期LVSP均下降(P＜0.05),48 h VOL组最低,POL组恢复至对照组水平;负荷后LVDP逐渐增高,POL后6 h,VOL12 h最高(P.＜0.05),后者48 h与假手术组相近(P＞0.05).POL诱导原癌基因表达峰值早于VOL,48 h c-myc、c-jun出现第2次表达增加.VOL后1 h检测到c-fos、c-jun、egr-l、c-myc弱表达,48 h c-fos无表达,c-jun表达减弱,c-myc和egr-l仍有较高表达.结论:VOL、POL后左室内压增加诱导不同的心肌c-fos、c-jun、c-myc、egr-l表达增加的时间顺序,与LVDP增高无关,c-fos、c-jun、c-myc表达与LVSP增高有关,提示左心室主动收缩产生的室内压为诱导原癌基因表达的主要因素;心脏超负荷后心肌原癌基因可持续表达,不同负荷原癌基因表达的时间过程差异可能对发生不同类型心肌肥厚有重要影响.     

ACEI对自发性高血压大鼠颈动脉血管平滑肌p53基因表达的干预作用

目的 探讨血管紧张素酶抑制剂(ACEI)对自发性高血压大鼠颈动脉中p53基因mRNA表达的影响.方法 自发性高血压大鼠(SHR)实验前检测mRNA的表达情况,实验组随机分为蒙诺组(M组)、科素雅组(K组)、硝苯地平组(Ca2 组),分别加用蒙诺2 mg/(kg·d-1),科素亚 10 mg/(kg·d-1),硝苯地平2 mg/(kg·d-1)饲养12周.用逆转录聚合酶链式反应检测基因的表达水平.正常雄性大鼠(WKY)作为对照.结果 SHR颈动脉中,p53基因有明显的高表达,较WKY有显著差异(P＜0.05).治疗12周后,p53基因在M组中表达明显减弱,较K组、Ca2 组有显著差异(P＜0.05).结论 自发性高血压大鼠颈动脉组织中抑癌基因p53可能与其颈动脉血管重构有关,ACEI可能通过对p53等抑癌基因表达的抑制作用逆转血管重构.     

大鼠脑损伤时神经细胞c-fos 、c-jun和c-myc基因表达变化

目的观察大鼠脑损伤后不同时间皮质神经细胞早期快反应基因c-fos 、c-jun和c-myc表达变化.方法应用Northern杂交、原位杂交和免疫组织化学方法检测皮质神经细胞中c-fos、c-jun和c-myc的表达.结果脑损伤后15 min,伤侧皮质神经细胞出现上述3种基因mRNA的表达,随时间的延长,表达逐渐增加,于伤后3 h达高峰并持续至伤后24 h,伤后72 h恢复至对照水平.c-fos和c-jun蛋白表达亦于伤后15 min出现,c-myc蛋白表达于伤后30 min出现,并均于伤后3 h达高峰,持续至伤后6 h,伤后24 h表达消失.结论脑损伤后上述3种基因表达特点与其它脑损害不同,可能与损伤机制和继发性神经细胞损害有关.     

大鼠颈动脉气囊导管损伤早期原癌基因c-Fos、c-Jun的表达研究

目的：采用RT-PCR方法研究动脉损伤早期原癌基因c-fos、c-jun的表达规律。方法：制备大鼠颈动脉气囊导管扩张损伤模型，采用RT-PCR方法检测损伤早期不同时相点动脉壁平滑肌细胞（VSMC）c-fos、c-jun基因的表达丰度，同时用免疫组化方法观测c-fos蛋白的表达。结果：c-jun 在损伤后30min达高峰。术后1h、2h仍能检测到明显的表达，术后5h后不能检出。c-fos在术后30min、1h均可检测到该基因多量的表达，以后随时间的推移表达逐渐下降，5h时不能检出。损伤后45min中膜残留VSMCc-fos蛋白表达阳性，阳性率86%。结论：在动脉损伤后极早期即有c-fos、c-jun的大量表达，TR-PCR检测原癌基因的表达为研究动脉损伤早期VSMC的活化机理提供了一个的敏感方法。     

姜黄素对胃癌细胞P300、P53、c-myc及乙酰化组蛋白H3和H4表达的影响

目的了解姜黄素对胃癌细胞P300、P53、c-myc以及乙酰化组蛋白H3和H4表达的影响,探讨其抗胃癌的分子机制.方法用不同浓度的姜黄素作用人胃腺癌细胞系SGC-7901,作用24、48 h后,Rt- PCR法检测P300、P53、c-myc mRNA的表达;蛋白免疫印迹法检测乙酰化组蛋白H3、H4、P300、P53、c-myc蛋白的表达.结果在胃癌细胞SGC-7901中P300和c-myc 的表达随姜黄素浓度的改变而改变,在20 μmol/L 24 h时抑制作用较为明显,且两者具有相关性(r=0.976),而野生型p53则没有明显变化;姜黄素对乙酰化的组蛋白H3、H4都有抑制作用.也以20 μmol/L 24 h的作用最强.结论姜黄素能抑制P300表达,进而抑制组蛋白H3和H4的乙酰化以及原癌基因c-myc的表达,但不影响抑癌基因P53的表达.提示姜黄素抑制组蛋白乙酰化酶P300可能是其抗癌的分子机制之一.     

珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应及机制研究

目的通过体外实验,观察珠子参诱导人肝癌细胞凋亡效应并初探其分子机制.方法体外细胞培养采用人肝癌细胞株SMMC-7721,分为对照(BL)组、珠子参(PJ)组、二甲基亚砜(DMSO)组及5-FU组,采用光镜及电镜观察肝癌细胞形态和超微结构的改变;流式细胞仪检测肝癌细胞周期和凋亡率;RT-PCR法检测癌基因c-myc、c-fos和抑癌基因p53、p21表达的变化.结果光镜下观察到珠子参组肿瘤细胞脱壁,有细胞出芽现象等凋亡形态改变;电镜下观察到珠子参组肿瘤细胞出现凋亡小体;珠子参组可见G0-G1期细胞聚积,阻止了细胞向S期的转换,从而干扰了SMMC-7721细胞在细胞周期中的进程,并引起细胞凋亡,DNA组方图上出现典型的凋亡峰(Apo峰),凋亡率达38.34%;RT-PCR半定量分析珠子参能降低癌基因c-myc表达(P＜0.05)和cfos表达(P＞0.05),增高抑癌基因p53、p21表达(P＜0.05).结论珠子参能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,部分作用机制可能与阻滞细胞停留在G0-G1,降低癌基因c-myc和c-fos表达,增高抑癌基因p53和p21表达有关.     

EGFR、HER2、c-jun、c-fos、P~(21)、P~(16)、P~(53)在非小细胞肺癌中的表达及临床病理特征

目的探讨EGFR、HER2、c-jun、c-fos、P21、P16、P53在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床病理特征。方法采用荧光原位杂交技术(FISH)和免疫组织化学法(SP)检测64例非小细胞肺癌组织中EGFR、HER2、c-jun、c-fos、P21、P16、P53的表达。结果 (1)64例NSCLC中,EGFR和HER2阳性扩增率分别为39.0%和29.7%,在不同病理分级、不同临床TNM分期及有无淋巴结转移间无显著差异(P>0.05)。HER2基因在腺癌的扩增率明显高于鳞癌(P<0.05)。(2)c-jun、c-fos、P21、P16、P53蛋白在不同临床TNM分期有明显差异(P<0.05),在不同病理类型及分级间无明显差异(P>0.05),P53的表达水平在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P<0.05)。(3)EGFR与HER2、c-jun、c-fos、P21的表达水平在NSCLC中呈正相关。结论联合检测EGFR、HER2、c-jun、c-fos、P21、P16、P53,有助于为NSCLC的早期诊断及个体化治疗提供新思路和新方法。NSCLC中,HER2、c-jun、c-fos、P21在EGFR介导的信号传导通路中发挥了正性调节的作用。     

去甲肾上腺素诱导左心室c—fos、c—myc基因表达

目的从器官水平上探讨去甲肾上腺素(NE)诱导大鼠心肌原癌基因表达及受体机制.方法以10-6M NE对大鼠离体心脏灌流1h,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,测定不同实验条件下左心室c-fos和c-myc表达水平.结果10 6M NE灌流心脏后c-fos和c-myc表达均显著增强;用5×10-6M的哌唑嗪预先灌流可完全阻断NE诱导的c-fos和c-myc表达增强的效应,而以10-6M的心得安预先灌流则无此作用.结论NE经α1-受体介导,可诱导心肌c-fos和c-myc表达增强.     

丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠半暗带区神经细胞凋亡与即早基因表达的影响

目的：探讨丹龙醒脑方对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质半暗带（ischemic penumbya, IP）区神经细胞凋亡与即早基因c-fos、c-jun、c-myc表达的关系。方法将48只雄性SD大鼠随机均分为假手术组,脑缺血再灌注（模型）组,尼莫地平组及丹龙醒脑方小、中、大剂量组（丹小组、丹中组、丹大组）。后五组用线栓法制备大脑中动脉栓塞再灌注（MCAO/R）模型,再灌注24 h进行神经功能缺损评分后,取缺血侧大脑皮质,采用原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡的神经细胞,免疫组化法分别检测c-fos、c-jun、c-myc蛋白。结果与假手术组比较,其余各组的神经功能缺损评分、神经细胞凋亡指数（AI）及c-fos、c-jun、c-myc蛋白的积分光密度（IOD）值均升高,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,尼莫地平组和丹龙醒脑方各剂量组的神经功能缺损评分、神经细胞AI及c-fos、c-jun、c-myc蛋白的IOD值均减小,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;尼莫地平组、丹龙醒脑方各剂量组组间比较,各指标差异均无统计学意义（P>0.05）。结论丹龙醒脑方能显著降低脑缺血后神经功能缺损和减少神经细胞凋亡,其机制可能与下调即早基因c-fos、c-jun和c-myc的表达有关。     

香烟烟雾对大鼠癌基因和抑癌基因表达、氧化-抗氧化系统及一氧化氮水平的动态影响

目的从基因表达水平、氧化-抗氧化系统以及一氧化氮水平变化等多角度探讨香烟烟雾对大鼠机体的影响.方法采用香烟烟雾刺激Wistar大鼠,选取2,4,12,24,48周等时点进行样本取材,其中肺支气管粘膜上皮c-fos、ras、c-myc、p53基因所表达的蛋白采用免疫组化染色法检测,并分别采用TBA比色法、邻苯三酚一氯化硝基四氮唑蓝法、Griess比色法,对红细胞、血浆、血清、肺泡灌洗液(BALF),肺组织匀浆等样本中丙二醛(MDA)、脂质过氧化物(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮(NO)水平等指标进行检测.结果肺支气管粘膜上皮c-fos基因表达水平增高(P＜0.05),而ras、c-myc、p53基因所表达的蛋白阳性率较低;MDA、LPO、NO水平有持续升高的趋势,而SOD活性下降(P＜0.05).结论长期香烟烟雾刺激大鼠,可导致氧化-抗氧化系统与NO水平调节失衡,以及肺部癌基因、抑癌基因表达的调控异常.     

DDPH对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用氚－胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）参入、电镜、原位杂交及Northern blot杂交方法，观察了 1－ （2，6－二甲基苯氧基）－2－（3，4－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（DDPH）对自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响。结果发现：DDPH在降低SHR血压 的同时，能减少VSMC的线粒体、粗面内质网及3H－TdR参入量（P＜0．01），并能逆转c－fos、c－myc、c－sis 原癌基因mRNA表达增强（P＜0．05或＜0．01）以及P53抑癌基因mRNA表达减弱（P＜0．05）。表明： DDPH能抑制SHR的VSMC增殖，与癌基因调控的分子生物学机制有关。     

Proto-oncogenes expression in the process of asthma airway remodeling

Objective: To observe the expression of proto-oncogenes in the process of airway remodeling in asthma. Methods: Guinea pig was used as an asthma model challenged by ovoglobulin. Dot-blot, Northern-blot molecular hybridization and immunohistochemistry techniques were used to detect the expression of c-fos, c-myc, c-jun and c-sis. Results: Expression of c-fos and c-myc mRNA could not be detected or detected at very low level in the control group. There were greatly increased expression of c-fos and c-myc mRNA after guinea pigs were challenged by ovoglobulin. Thirty minutes after the challenge, the expression of c-fos and c-myc mRNA reached to the peak and returned to normal level 4 h after the challenge. Immunohistochemistry studies showed that Fos, Myc, Jun and Sis expressed at low level in control group and increased after ovoglobulin stimulation. Immunohistochemically positive cells laid in the plasma of airway epithelium, in cell nucleus of bronchial epithelium and in the inflammatory cells. Pathologic     

自体静脉移植术后血管平滑肌细胞内c-fos、c-myc和c-jun的表达

目的探讨自体静脉移植术后血管平滑肌细胞(VSMC)早期应答基因的变化。方法利用显微外科技术制作64只大鼠颈动脉自体静脉移植模型,采用免疫组织化学染色方法观察VSMC增殖与c-mycc、-fosc、-jun的变化。结果手术后2 h即可出现c-myc、c-fos、c-jun阳性表达,且c-fosc、-jun于移植后6 h达到高峰,c-myc于手术后1周达到高峰。结论c-mycc、-fosc、-jun表达状态与VSMC的增殖状态密切相关,对VSMC的增殖起到调控作用,尤其是始动阶段。     

大鼠臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩时肌细胞凋亡的研究

目的 研究大鼠臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩与细胞凋亡的关系以及肌细胞凋亡的基因调控机制。方法 应用臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩的大鼠模型,采用流式细胞仪ＰＩ法、ＰＩ和ＡｎｎｅｘｉｎＶ双标记法、原位末端标记、ＤＮＡ凝胶电泳和电镜等多种方法有骼肌萎缩与细胞凋亡的关系。并用免疫组织化学和Ｎｏｒｇｔｈｅｒｍ－Ｂｌｏｔ方法检测凋亡相关基因Ｆａｓ、ＦＡＤＤ、Ｃａｓｐａｓｅ－８、Ｂｃｌ－２、Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ的表达。结     

c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达与垂体腺瘤侵袭性的研究

目的　同时检测c fos、c jun、c myc基因蛋白在垂体腺瘤中表达及特点 ,探讨它们与肿瘤侵袭性的关系。方法　 6 0例垂体腺瘤分为侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤两组 ,采用免疫组化EnVision法检测c fos、c jun、c myc基因蛋白。结果　c fos、c jun在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,c myc在侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率高于非侵袭性垂体腺瘤 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;c fos、c jun、c myc三者同时在侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率高于非侵袭性垂体腺瘤 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论　c myc蛋白在侵袭性垂体腺瘤中高表达 ,可能影响其生长及生物学行为 ,c myc可做为衡量垂体腺瘤侵袭性的一个参考指标。     

人端粒酶逆转录酶及其影响因子在乳腺癌中的表达

目的 为了研究hTERT（人端粒酶逆转录酶）及其影响因子（P^53和c—myc）在乳腺癌中的表达和意义。方法 用免疫组化SP法在52例乳腺癌和16例乳腺良性瘤中检测了hTERT,P^53和c—myc。结果表明hTERT,P^53和c—myc在乳腺癌组的阳性表达率均显著高于乳腺良性瘤组。统计分析表明,乳腺癌中hTERT蛋白表达阳性率与P^53和c—myc的阳性表达密切相关（P〈0．05）。结论 在乳腺癌的发生中,发生了P^53基因突变和c—myc基因的表达增加,激活了hTERT,从而可能导致了乳腺癌的发生。     

三七花总皂苷对内皮素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞c-myc、c-fos表达的影响

目的:观察三七花总皂苷(PNFS)对内皮素(ET-1)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)癌基因c-myc、c-fos表达的影响。方法:采用ET-1诱导HASMC异常增殖,应用RT-PCR方法检测PNFS对c-myc、c-fos mRNA表达的影响。结果:PNFS能明显抑制HASMC原癌基因c-myc mRNA表达(P<0.05),而对c-fos mRNA表达影响不明显。结论:PNFS可影响癌基因c-myc mRNA表达以抑制HASMC异常增殖。     

孕激素对MG-63细胞株孕激素受体和c-fos、c-jun的影响

目的观察18-甲左炔诺孕酮对人成骨肉瘤MG-63细胞株增殖、孕激素受体和c-fos、c-jun表达的影响。方法用不同浓度18-甲左炔诺孕酮干预MG-63细胞株,以不含左炔诺孕酮的MEM培养液作对照,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR测定孕激素受体(PR)、c-fos、c-jun mRNA表达,Western Blot和免疫组化法测定PR、c-fos、c-jun蛋白质的表达。结果与对照组比较,10-10mol/L、10-8mol/L和10-6mol/L左炔诺孕酮分别增加MG-63细胞增殖达7.72%、24.36%和36.54%(P<0.01或P<0.05)。干预24h后,MG-63细胞中PRA、PRB mRNA和蛋白质表达无明显变化(P>0.05)。干预2h后,左炔诺孕酮增加MG-63细胞中c-fos、c-jun mRNA和蛋白质表达(P<0.01或P<0.05),呈剂量依赖性。结论孕激素可能通过增加c-fos、c-jun的表达来促进MG-63细胞增殖。