N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成及表达的调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的调节作用。方法：建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;采用~3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成。采用Western印迹法检测心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果：PDGF对心脏成纤维细胞胶原蛋白合成的促进作用与浓度相关,并以10 ng/ml时最强。AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞胶原合成有抑制作用,并且在10~(-9)mol/L时作用最强。结论：AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用,可能与其抗心脏纤维化的作用相关。     

AcSDKP对大鼠心成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性和MMP-1表达的影响

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对10%血清和血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠心成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性和MMP-1表达的调节作用。方法明胶酶谱法检测心成纤维细胞MMP-2、MMP-9的活性。Western blot法检测心成纤维细胞MMP-1的表达。结果10%血清和PDGF使心成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性增强,也促进MMP-1的表达;AcSDKP能够进一步增加由10%血清和PDGF诱导的心成纤维细胞MMP-2、MMP-9的活性,并促进MMP-1的表达。结论AcSDKP上调了由PDGF介导的心成纤维细胞MMPs活性或表达,这可能与AcSDKP抗心肌纤维化的作用相关。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠肺成纤维细胞c-Jun氨基末端激酶通路活化的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路活化的调节作用.方法:培养新生大鼠肺成纤维细胞.激光扫描共聚焦显微镜观察phospho-JNK在细胞内定位与分布.免疫印迹法检测JNK/phospho-JNK蛋白的表达.结果:激光扫描共聚焦显微镜显示,与对照组比较,TGF-β1刺激后,胞质中phospho-JNK荧光强度变弱,而核浆比值明显增加.经AcSDKP干预作用后,胞质中phospho-JNK的荧光强度较TGF-β1刺激组增强,核浆比值明显减小.免疫印迹法显示,与对照组比较,TGF-β1刺激组phospho-JNK表达明显增加;而AcSDKP干预作用后,phospho-JNK蛋白表达较TGF-β1刺激组明显减少.结论: AcSDKP能阻断TGF-β1介导的肺成纤维细胞JNK通路的活化作用.     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β1介导的心成纤维细胞MMP-1/TIMP-1表达的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β_1(TGF-β_1)介导的大鼠心成纤维细胞MMP-1/TIMP-1的调节作用。方法:差速贴壁法分离与获取新生大鼠心成纤维细胞。分别采用免疫细胞化学法和Western印迹法检测心成纤维细胞MMP-1、TIMP-1蛋白表达。结果:TGF-β_1可使心成纤维细胞MMP-1蛋白表达水平下降,而促进TIMP-1蛋白表达,MMP-1/TIMP-1比值下降。AcSDKP可以抑制TGF-β_1对心成纤维细胞MMP-1表达的下调作用,使MMP-1蛋白表达增加,而对TGF-β_1介导的TIMP-1蛋白表达无明显影响,MMP-1/ TIMP-1比值增加。结论:AcSDKP可以通过上调TGF-β_1介导的心成纤维细胞MMP-1蛋白表达并增加MMP-1/ TIMP-1比值,以加速细胞外基质降解,这可能与AcSDKP抗心纤维化的作用有关。     

AcSDKP与细胞增殖及器官纤维化

N-乙酰基丝氨酰天门冬酰赖氨酰脯氨酸(AcSDKP)是一种生理性造血系统的生长抑制因子。AcSDKP对多器官内的多种类型细胞的增殖、细胞外基质代谢和血管形成等方面有重要的调节作用。它能抑制心脏和肾脏间质成纤维细胞及肾小球系膜细胞的增殖,减少胶原的沉积,对高血压及心肌梗死后心脏和肾脏纤维化有一定的抑制作用。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对P38分裂原活化蛋白酶通路调节在肺成纤维细胞胶原合成中的作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)是否通过阻断转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的P38分裂原活化蛋白酶(MAPK)途径,进而抑制大鼠肺成纤维细胞增殖与Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达.方法:培养新生大鼠肺成纤维细胞,分为对照组、TGF-β1刺激组、TGF-β受体阻滞剂组、P38MAPK特异性抑制剂组、AcSDKP干预组.采用MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法检测磷酸化P38蛋白的定位及表达,免疫印迹法检测TGF-β受体、磷酸化P38MAPK、P38MAPK、c-myc及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:与对照组比较,TGF-β1能够促进细胞增殖,而分别给予LY364947、SB203580和AcSDKP干预后,细胞增殖均受到抑制.与对照组比较,TGF-β1刺激组的TGF-β1受体、磷酸化P38MAPK、c-myc以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达上调,当分别给予LY364947、SB203580和AcSDKP干预后,肺成纤维细胞TGF-β1受体、磷酸化P38 MAPK、c-myc以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达均降低.而各组间比较P38MAPK蛋白表达无明显改变.结论:AcSDKP能够通过阻断TGF-β1介导的P38MAPK信号转导途径,进而抑制肺成纤维细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对人肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞转化的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)是否通过对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路活化的调节,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转化,即上皮-间质转化(EMT),进而发挥其抗(矽)肺纤维化的作用.方法:培养人A549肺泡Ⅱ型上皮细胞株,免疫细胞化学显色检测角蛋白、波形蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;免疫印迹检测E-钙黏蛋白(E-cad)、波形蛋白及Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)、血清反应因子(SRF)、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达;Real-Time PCR检测ROCK、SRF、α-SMA的表达情况.结果:在TGF-β1的诱导下,上皮细胞向肌成纤维细胞的形态改变,伴随着上皮标志物角蛋白、E-cad降低,而间质细胞标志物波形蛋白增高,α-SMA表达并增多.与对照组相比,TGF-β1诱导刺激组ROCK、SRF、α-SMA蛋白和基因表达水平上调,Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达上调.给予ROCK阻滞剂Y-27632、Ac-SDKP干预后,ROCK、SRF、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达显著降低.结论:Ac-SDKP通过阻断TGF-β1介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞的转化及胶原的合成,进而发挥其抗(矽)肺纤维化的作用.     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠矽肺的结缔组织生长因子和ERK1/2表达的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠矽肺纤维化模型肺组织中胶原含量、结缔组织生长因子(CTGF)和细胞外信号调节激酶 1/2(ERK1/2)表达的影响.方法:选用非暴露式气管灌注法复制大鼠矽肺模型,并给予AcSDKP,采用羟脯氨酸测量法定量分析肺组织中总胶原蛋白的含量,免疫组织化学法、免疫印迹法检测肺组织内CTGF、phospho-ERK1/2及ERK1/2蛋白的表达.结果:AcSDKP治疗组胶原含量低于相对应的矽肺模型组.与相应的对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内CTGF、phospho-ERK1/2蛋白表达均增加;与相应矽肺模型组相比,给予AcSDKP后,大鼠肺组织内CTGF、phospho-ERK1/2蛋白表达均明显降低.而各组间比较ERK1/2蛋白表达无明显改变.结论:AcSDKP可能通过阻断ERK1/2途径抑制了CTGF的表达,从而发挥抗矽肺纤维化的作用.     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β1和Smad7表达调节在大鼠硅肺纤维化形成过程中的作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠硅肺纤维化模型肺组织中胶原含量、转化生长因子β1(TGF-131)和Smad 7表达的影响.方法:选用非暴露式气管灌注法制作大鼠硅肺模型,并给予AcSDKP.采用H-E染色进行形态学观察,胶原Van Gison染色观察硅肺结节与间质纤维化的形成及改变,羟脯氨酸法检测肺内总胶原含量,免疫组织化学法、免疫印迹法检测肺组织内TGF-β1、Smad7蛋门的表达.结果:染尘大鼠肺内硅结节形成明显,硅肺模型制作成功.AcSDKP治疗组肺组织胶原含量低于硅肺模型组.与对照组相比,模型组大鼠肺组织内TGF-β1蛋白表达增加,Smad7蛋白表达降低;与模型组相比.给予AcSDKP后,人鼠肺组织内TGF-β1蛋白表达明显降低,Smad7蛋白表达增高.结论:AcSDKP可能通过增加大鼠肺组织中Smad7蛋白的表达米抑制TGF-β1信号转导,从而发挥抗硅肺纤维化的作用.     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对血小板洐生生长因子介导的NIH3T3细胞增殖的抑制调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对血小板洐生生长因子（PDGF）介导的NIH3T3细胞增殖的抑制调节作用。方法：采用MTT法和免疫组化法检测NIH3T3细胞增殖和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：在10^-10～10^-8mol／L浓度范围内。AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞增殖均有抑制作用。并在10^-9mol／L浓度时其抑制作用最佳。PDGF对NIH3T3细胞PCNA的表达具有增强作用．而AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞PCNA的表达有显著抑制作用。结论：AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞增殖有明显抑制作用。     

转化生长因子β1在大鼠肝内的原位表达

为探讨转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）对肝细胞增殖的调节作用，用ＴＧＦβ１单克隆抗体和免疫组织化学方法研究ＴＧＦβ１在大鼠胎肝、正常成年肝、再生肝和癌变肝中的表达。结果表明：正常成年大鼠肝的大部分血管内皮细胞及胆管上皮细胞表达ＴＧＦβ１。大鼠胎肝的少量血窦内皮细胞表达ＴＧＦβ１，出现后表达逐渐增强，至生后３０ｄ的表达水平同成年肝。肝大部分切除１￣２ｄ，血窦内皮细胞ＴＧＦβ１表达增强，于大部切除后１０     

神经生长因子在大鼠心内神经节的表达

目的 观察成年和中老年大鼠心内神经节神经生长因子(NGF)阳性神经元的存在及其变化。方法 免疫组织化学法。结果 成年及巾老年大鼠心内神经节均存在NGF阳性神经元,但中老年大鼠心内神经节NGF阳性神经元明显减少,表达明显降低。结论 心房后壁心内神经节存在NGF阳性神经元,并随年龄增加表达减少,提示NGF表达的减少可能与心脏功能的退化相关。     

实验性铅中毒对大鼠海马神经生长因子基因表达的影响

目的观察实验性铅中毒对大鼠海马神经生长因子(NGF)基因表达的影响,探讨铅致学习记忆损害的分子毒理学机制。方法逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和原位杂交法。结果正常大鼠海马组织可表达NGF mRNA,铅染毒后海马NGF mRNA含量显著下降。海马组织中神经生长因子mRNA表达量与铅染毒时间呈负相关。结论铅可使海马组织神经生长因子基因表达下降。     

大鼠肝癌发生过程中转化生长因子—α在肝组织中的表达

以二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌、用免疫组织化学法检测肝组织中转化生长因子－α的表达变化。结果显示：正常大鼠肝的枯否细胞呈转化生长因子－α阳性表达；至诱癌第８周，除少量枯否细胞仍呈转化生长因子－α阳性外，部分肝细胞亦呈转化生长因子－α阳性，且吾两种反应类型，即部分肝细胞质和胞膜均呈转化生长因子－α阳性。有的肝细胞仅胞膜呈转化生长－α阳性。随着肝癌病变发展，转化生长因子－α阳必肝细胞数渐增多，转化生长因子     

大鼠心脏Ⅰ型胶原的免疫组织化学和原位杂交表达

目的探讨Ⅰ型胶原在正常大鼠心脏的分布和分泌来源。方法利用免疫组织化学和原位杂交技术显示大鼠心肌组织的Ⅰ型胶原表达。结果Ⅰ型胶原分布广泛,包裹大鼠心每一个心肌细胞,根据部位的不同,胶原网络的密疏程度有差异。纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞均表达Ⅰ型胶原。结论Ⅰ型胶原是构成心肌胶原纤维网络的主要成分,其分泌来源具有多源性。     

NGF对新生大鼠隔神经元的神经营养作用

本实验观察了神经生长因子（ＮＧＦ，２．５ｓ）对无血清培养新生大鼠隔神经元生长发育的作用。结果证明，ＮＧＦ能促进新生大鼠隔神经元的存活，增加神经元胞体面积和直径，增加隔培养神经元中ＡＣｈＥ阳性神经元的数目。流式细胞分析显示，ＮＧＦ使神经元平均蛋白含量增加。以上结果表明：ＮＧＦ对新生大鼠隔神经元的生长发育具有促进作用。Ｐ＜０．０１３．ＮＧＦ增加隔培养神经元胞体面积、最长径和最短径图像分析结果可见：在前７ｄ，在神经元胞体面积、最长径和最短径等方面两组之间无明显差别，但在培养１４、２１和３０ｄ时，ＮＧＦ组培养神经元的平均胞体面积、最长径和最短径均大于对照组，经统计学处理有显著意义（表２）。表２对隔培养神经元胞体面积、最长径和最短径的影响（ｘ±ｓ）注：Ｎ＝３０与同时期对照组相比＊Ｐ＜０．０５Ｐ＜０．０１４．ＮＧＦ促进新生大鼠隔细胞的总量白合成用ＦＡＣＳ４４０流式细胞仪测定隔细胞的平均蛋白含量，结果表明：在培养３、７、１４和２１ｄ时，ＮＧＦ组培养细胞的平均蛋白含量均显著高于对照组（表３，Ｆｉｇ．１）。表３ＮＧＦ对隔神经元蛋白合成的影响（ｘ±ｓ）往：Ｎ＝５与同时期对照组相比　＊Ｐ＜０．０５５．ＮＧＦ提高隔神经元的ＡＣｈＥ?     

神经再生素促大鼠海马神经元生长的研究

目的 研究牛膝提取物神经再生素(NRF)对体外培养的大鼠海马神经元生长的促进作用及其对生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响.方法 以体外原代培养的胎鼠海马神经元为研究模型,通过相差显微镜采用Scion软件测量不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1mg/L)、不同作用时间(6h、12h、24h)对海马神经元神经突起生长的影响;通过实时荧光定量PER观察NRF不同浓度(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)及不同作用时间(6h、12h、24h)对海马神经元GAP-43基因表达的影响;采用免疫荧光细胞化学法和Western blotting,观察不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h后,对海马神经元GAP-43表达的影响.结果 NRF可有效地促进海马神经元的生长,加药后24h作用浓度为1mg/L时,作用最强;实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光细胞化学法和Western blotting的结果提示,NRF能增加体外培养的海马神经元GAP-43的表达,浓度为1.0mg/L时,作用最佳.结论 NRF能促进体外培养的海马神经元神经突起的生长和GAP-43基因的表达,表明NRF对海马神经元具有神经营养作用.     

血小板源生长因子与肝素对动脉平滑肌细胞表型转变的调节作用与胶原蛋白合成的关系

目的：研究、探讨血小板源生长因子和肝素对培养的人主动脉平滑肌细胞表型转变调节作用,及其对平滑肌细胞胶原蛋白合成的影响。方法：~３Ｈ－脯氨酸掺入,电镜观察。~３Ｈ－脯氨酸掺入的比较采用ｔ检验。结果：血小板源生长因子能促进培养的动脉平滑肌细胞向合成表型转变,促进平滑肌细胞胶原蛋白的合成与分泌。肝素能拮抗血小板源生长因子促进平滑肌细胞向合成表型的转变,抑制平滑肌细胞胶原蛋白的合成。结论：血小板源生长因子能通过促进动脉平滑肌细胞向合成表型转变促进了平滑肌细胞胶原蛋白的合成;肝素能通过桔抗血小板源生长因子的作用抑制平滑肌细胞胶原蛋白合成。     

雄激素对大鼠心内神经节神经生长因子表达的影响

目的 观察神经生长因子(NGF)在成年雄性大鼠、雌性大鼠、雌性大鼠睾酮处理组、睾丸切除大鼠、睾丸切除后睾酮替代大鼠心房后壁心内神经节的表达及变化。方法 免疫组织化学染色。结果 各组大鼠心内神经节均存在NGF阳性神经元,但睾丸切除组大鼠心内神经节NGF阳性神经元的数量明显减少,表达明显降低。结论 心内神经节细胞内含NGF;雄激素可能影响心内神经节细胞的NGF表达。     

雌激素对大鼠胚胎成骨细胞增殖及胶原合成的影响

目的 研究雌激素对大鼠胚胎成骨细胞增殖及I型胶原代谢的影响。方法 分离大鼠胚胎头盖骨成骨细胞，分别给予不同浓度雌激素培养；观察细胞增殖情况和ALP活性变化；苦味酸天狼星红及I型胶原免疫组织化学染色，从蛋白质水平观察成骨细胞中I型胶原的变化；地高辛标记的I型胶原基因探针进行原位杂交，从mBNA水平观察I型胶原的变化。结果 雌激素可降低大鼠胚胎成骨细胞增殖水平而使ALP活性以及I型胶原蛋白质和mRNA水平均升高。结论 雌激素可促进成骨细胞分化，而抑制增殖。