不同粪菌悬液处理方式对猪粪菌移植过程中细菌活性及活菌组成的影响

旨在探究不同粪菌液处理方法对其菌群活性及存活菌群物种组成的影响,为猪粪菌移植（FMT）的优化应用提供参考。本研究共设置7个试验组制备粪菌液：静置制备新鲜粪菌液组（FS）、静置制备粪菌液于-80℃冷冻1周组（FFS）、离心制备新鲜粪菌液组（FC）、离心制备粪菌液于-80℃冷冻1周组（FFC）、液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液组（NS）、甘油+液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液组（GNS）和液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液于-80℃冷冻1周组（NFS）,在37℃厌氧培养箱中平板培养48 h后,进行菌落计数。从FS、FFS、FC和FFC 4组中根据菌落形态随机挑取87个单菌落纯化后进行16S rRNA基因全长测序。结果表明,静置和离心两种方法制备新鲜粪菌液时,粪菌活性存在显著差异,离心组显著低于静置组（P<0.05）。但冷冻粪便使用静置和离心两种方法制备的菌悬液,其粪菌活性无显著差异（P>0.05）。无论是静置还是离心方法制备粪菌液,新鲜和冷冻两种不同处理方式下的粪菌活性均无显著差异（P>0.05）,且对活菌的组成也无显著影响。使用静置法制备粪菌液时,FS、NS、GNS和NFS组间粪菌活性无显著差异（P>0.05）。综上表明,静置方法制备粪菌液时,超低温冷冻保存对粪菌活性及其活菌组成均无显著影响,这为大样本、长距离猪粪菌移植技术的应用提供了重要试验参考。     

猪粪中反硝化菌数量与理化指标相关性分析

本试验采集了保育(60±3)d、肥育(170±5)d和妊娠(妊娠70±4)d三个阶段的梅山猪新鲜猪粪各10份,比较三个阶段猪粪的好氧与厌氧反硝化菌数量以及粪样的理化性质。结果表明,保育猪猪粪中好氧反硝化菌和厌氧反硝化菌的数量均显著高于肥育猪猪粪(P0.05),与妊娠母猪猪粪差异不显著(P0.05);猪粪中的凯氏氮、硝酸氮、铵态氮含量、碳氮比和异戊酸含量以保育猪最高,肥育猪次之,妊娠母猪最低(P0.05);粪中的有机质和戊酸含量则以肥育猪猪粪最高,保育猪猪粪次之,妊娠母猪最低(P0.05)。相关性结果显示:猪粪中好氧反硝化菌数量仅与有机质含量呈显著负相关(P0.05),与pH、凯氏氮及碳氮比无相关性(P0.05);厌氧反硝化菌与猪粪中各项理化指标均无相关性(P0.05)。     

液氮速冻对鸽肉品质的影响

为延缓鸽肉在运输、储藏等过程中的腐败变质,试验以鸽肉为试验材料,分别将新鲜和经过液氮速冻的鸽肉置于-18℃冷冻7d,4℃解冻后测定鸽肉的感官品质、理化指标和微生物数量.结果 显示:经过液氮速冻的鸽肉色泽、气味和弹性评分以及亮度、红度均接近新鲜鸽肉,且高于普通冷冻组(P＜0.05);液氮速冻组的菌落总数高于新鲜组(P＜0...     

小型猪微粒植皮的研究

本实验利用琥珀酸脱氢酶法定量研究了液氮冷冻贮存法对15头小型猪皮肤活力的影响,并从临床和组织学的角度比较了自体微粒皮(自体组)、自体微粒皮—新鲜同种异体皮(新鲜组)和自体微粒皮—冷冻同种异体皮(液氮组)三种植皮方法的效果。 皮肤在液氮中贮存5天后活力为新鲜皮肤的82.46％(P<0.05);贮存180天后活力为新鲜皮肤的44.7％,与贮存21天后的活力(52.03％)无显著差异(P>0.05)。自体组、新鲜组和液氮组创口愈合时间分别为31.08±2.72、37±11.5和25.12±5.66天,与对照组(52±7.02天)差异均极显著(P<0.01);液氮组与自体组差异显著(P<0.05),与新鲜组比较差异极显著(P<0.01);新鲜组与自体组无显著差异(P>0.05)。 液氮组异体皮的排斥反应较新鲜组出现晚且反应较轻;新鲜组血中淋巴细胞和嗜酸性白细胞的增加、组织中淋巴细胞的浸润与排斥反应相平行,液氮组淋巴细胞和嗜酸性白细胞的变化不明显。     

四磺酸盐培养基预增菌可缩短沙门菌复苏时间

美国科宝公司的工作人员在2种初级增菌培养基中定量接种沙门菌样本后,确定复苏家禽环境基质中沙门菌最有效和快速的方法。样品随机接种2种培养基,即缓冲蛋白胨水(BPW)+酵母提取物与含碘的四磺酸盐煌绿增菌液(TT)。将冷冻沙门菌培养菌解冻后,连续10倍稀释,取100μL稀释液接种到增菌液中,分别在42℃和37℃条件下孵育24h后,接种到改良半固体RV培养基(MSRV)中42℃二次孵育。经过次级增     

粪菌液来源及添加量对断奶仔猪生长性能与下痢率的影响

为研究粪菌液来源及添加量对断奶仔猪生长性能与下痢率的影响,试验选用360头杜×长×大断奶健康仔猪,随机分为12组,每组3个重复,每个重复10头仔猪,其中1~3组为对照组,饲喂基础饲粮;4~12组为试验组,在饲喂基础饲粮的基础上,分别灌喂由健康怀孕母猪、哺乳母猪、断奶仔猪粪便制成的粪菌液。每种粪菌液添加量设10、30、50 mL 3个梯度。从断奶第1天起,每天上、下午各灌喂1次,连续灌喂4 d,4 d后仅喂基础饲料。结果表明:不同来源的粪菌液对仔猪的生长性能与下痢率均无显著影响(P0.05),粪菌来源与添加量对仔猪的生长性能与下痢率的影响均无显著交互作用(P0.05);随着粪菌添加量的增加,对各组仔猪的生长性能和下痢率作用效果显著增加(P0.05)。在本试验条件下,健康怀孕母猪、哺乳母猪和断奶仔猪均可作为粪菌供体,最适粪菌液添加量为50 mL。     

嗜线虫真菌Duddingtonia flagrans保存方法的研究

目的探讨嗜线虫真菌Duddingtonia flagrans长期保存以及复苏后生物学活性测定技术。方法分别将菌株置4℃、-25℃和液氮保存,定期进行菌落生长速度、厚垣孢子生成时间以及捕杀绵羊粪便中感染性幼虫活性测定。结果4℃保存15个月、-25℃保存30个月以及液氮保存5年对该菌生长和捕杀感染性幼虫能力无明显影响。结论嗜线虫真菌D.flagrans具有较高的生物学稳定性。     

白藜芦醇对松辽黑猪精液冷冻的影响

试验旨在评价白藜芦醇(resveratrol,Res)对松辽黑猪公猪精液冷冻的影响。试验分为5组,分别为对照组(不添加Res)和Res处理组(在冷冻基础液中分别加入25μM、50μM、100μM、200μM浓度的Res)。采用手握法采集松辽黑猪精液,用5种冷冻基础液稀释,在25℃平衡1 h,17℃平衡2 h,4℃平衡3 h后灌装于0.5 mL细管中,在液氮上方3 cm处熏蒸10 min,保存在液氮罐中30 d后进行检测。样本解冻后分别检测精子活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、质膜完整性、过氧化氢酶(CAT)活性、顶体完整性、线粒体活性、活性氧簇(ROS)水平、DNA完整性、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)水平。结果显示:与对照组相比,冷冻基础液中添加50μM Res可以显著提高冻融后精子的活力、SOD活性、质膜完整性、CAT活性、线粒体活性、GSH-Px活性、顶体完整性(P0.05);可以显著降低精子ROS水平和MDA水平(P0.05);添加Res对DNA完整性未表现出具有显著影响(P0.05)。结论:猪精液冷冻前添加Res可改善冻融后精子质量,添加量50μM效果最佳,但Res是否可以改善公猪冷冻精液的体外受精及人工授精能力,有待于进一步的研究。     

甘露寡糖对乳酸粪肠球菌和沙门菌细胞凝集的影响研究

探讨甘露寡糖对乳酸粪肠球菌和沙门菌细胞体外凝集的影响。将乳酸粪肠球菌和沙门菌分别在添加1%甘露寡糖和未添加正常的培养液中进行培养,观察细胞形态;在乳酸粪肠球菌和沙门菌脑心浸液肉汤中分别添加0、0.2%、0.5%、0.9%和1.7%的甘露寡糖,在35、37和39℃培养24 h,测定0、3、6、12和24 h时培养液的OD_(600)值。培养基中添加1%的甘露寡糖对乳酸粪肠球菌和沙门菌均产生凝集作用;对于乳酸粪肠球菌,与对照组相比,35℃时,添加量为1.7%的甘露寡糖在3~24 h时对乳酸粪肠球菌的细胞凝集效果显著(P0.05);37℃培养条件下,添加量为0.5%~1.7%的甘露寡糖在培养24 h时对乳酸粪肠球菌的细胞凝集效果显著(P0.05),且凝集效应具有剂量依赖性和时间依赖性,作用时间小于24 h或甘露寡糖添加量小于0.5%不能使乳酸粪肠球菌产生凝集效应;39℃条件下,添加量为0.2%~1.7%的甘露寡糖时,在3~24 h对乳酸粪肠球菌的细胞凝集效果显著(P0.05);对于沙门菌,35℃条件下,添加量为0.9%的甘露寡糖组与对照组相比在6~12 h对沙门菌的凝集效果差异显著(P0.05),添加量为1.7%的甘露寡糖组在12 h时与对照组相比对沙门菌的凝集效果差异显著(P0.05);37℃条件下,添加量为1.7%的甘露寡糖组在3~12 h与对照组相比对沙门菌的凝集效果差异显著(P0.05);39℃条件下,添加量为1.7%的甘露寡糖组与对照组相比在3~9 h对沙门菌的凝集效果差异显著(P0.05),添加量为0.2%~0.9%的甘露寡糖时在12~24 h对乳酸粪肠球菌的细胞凝集效果差异显著(P0.05)。     

散养和圈养撒坝猪粪菌移植对小鼠脂肪沉积和粪便微生物区系的影响

本试验旨在研究散养和圈养撒坝猪粪菌移植（FMT）对昆明小鼠脂肪沉积和粪便微生物区系的影响。试验选取健康散养和圈养撒坝猪作为FMT供体,制备粪菌液;然后选取30只健康雄性昆明小鼠作为FMT受体,随机分为5个组,每组6只。对照（CON）组灌胃生理盐水,试验组分别灌胃散养撒坝猪低剂量FMT菌液（SY-L组）、散养撒坝猪中剂量FMT菌液（SY-M组）、散养撒坝猪高剂量FMT菌液（SY-H组）和圈养撒坝猪中剂量FMT菌液（JY-M组）,连续灌胃14 d。试验期28 d。结果表明：1）与CON组相比,各试验组小鼠平均日增重（ADG）提高、料重比（F/G）降低,其中SY-M组差异显著（P<0.05）;与JY-M组相比,SY-M组ADG显著提高（P<0.05）,F/G显著降低（P<0.05）。2）与CON组相比,各试验组小鼠附睾脂肪指数、腹股沟脂肪指数和总脂肪指数降低,其中SY-M组差异显著（P<0.05）;与JY-M组相比,SY-M组附睾脂肪指数、腹股沟脂肪指数和总脂肪指数分别降低了12.32%、10.61%和11.76%(P>0.05)。3）与CON组相比,各试验组小...     

聚乙烯吡咯烷酮对公猪精液冷冻的影响

试验旨在评价聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone,PVP)对公猪精液冷冻的影响。试验分为5组,分别为对照组(不添加PVP)和PVP处理组(在冷冻基础液中分别加入0.25%、0.50%、1.00%、2.00%PVP)。采用手握法采集松辽黑猪精液,用5种冷冻基础液稀释,在25℃平衡1 h,17℃平衡2 h,4℃平衡3 h后灌装于0.5 mL细管中,在液氮上方3 cm处熏蒸10 min,保存在液氮罐中30 d后进行检测。样本解冻后分别检测精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性、DNA完整性、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,GSH-Px)活性、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平。结果显示,与对照组相比,冷冻基础液中添加0.50%PVP显著提高冻融后精子的活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性、CAT活性、SOD活性、GSH-Px活性(P0.05),显著降低精子ROS和MDA水平(P0.05);与对照组相比,添加PVP有利于提高DNA完整性,但差异不显著(P0.05)。因此,猪精液冷冻基础液中添加PVP可改善冻融后精子质量,添加0.50%效果最佳。     

粪菌移植对雏鸡生长性能、血清白痢阳性率和屠宰性能的影响

为探讨粪菌移植对雏鸡的生长性能、血清白痢阳性率和屠宰性能的影响,选择972羽健康、1日龄雏鸡,随机分为6组,每组9个重复,每个重复18羽。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加2%、4%、6%、8%、10%粪菌液的日粮10 d,然后改为投喂基础饲料至35日龄。结果表明:在1～14 d阶段,添加粪菌液对雏鸡的成活率、平均日采食量、平均日增重、料重比影响不显著(P 0.05);在15～35 d和1～35 d阶段,2%粪菌液组鸡的平均成活率最高,分别较对照组提高了6.20%、8.17%(P 0.05);2%粪菌液组鸡的平均日增重均最高,分别较对照组提高了68.74%、29.06%(P 0.05);2%粪菌液组鸡的平均料重比最低,分别较对照组降低了53.70%、36.44%(P 0.05);2%粪菌液组35日龄鸡的血清白痢阳性率最低,较对照组降低了44.14%(P 0.05)。添加2%粪菌液能提高雏鸡屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率,但较对照组差异不显著(P 0.05)。研究表明,粪菌移植能够显著提高雏鸡生长性能,显著降低雏鸡血清白痢阳性率,其中添加2%粪菌液的效果最好。     

冻前预处理对萨福克肉羊精液冷冻效果的影响

通过对萨福克肉羊新鲜精液在离心前进行不同时间的静置,选择不同的离心速度及离心时间进行冷冻前预处理,以解冻后精子活率,复苏率为判断指标,比较了各种不同预处理对萨福克精液冷冻效果的影响。结果表明:离心前在37℃环境下静置60min的冻后效果(活率达0.47和复苏率达到73.8%)优于30min和90min的冻后效果(p0.05);离心过程以1000r/min的速度离心10min较好,冻后活率0.45,复苏率达到74.5%,优于500r/min和1500r/min转速和其他时间(p0.05)。     

冷冻方式对新鲜桑椹营养活性成分和硬度的影响

比较了普通冷冻(-20℃)、快速冷冻(-80℃)、急速冷冻(液氮浸渍,-196℃)3种冷冻方式及冷冻前采用氯化钙溶液预处理对新鲜桑椹营养活性成分含量和硬度的影响程度,明确适合桑椹保鲜的冷冻方式。与普通冷冻方式相比,采用快速或急速冷冻方式能有效降低桑椹在解冻过程中的汁液流失率。经不同方式冷冻后桑椹在解冻过程中,含有的花青素、总酚和维生素C均会不同程度损失,其中花青素和维生素C的损失程度在不同冷冻方式处理组间差异不显著。采用5 g/L氯化钙溶液进行预处理能显著减少冷冻桑椹中原果胶的损失,并且快速冷冻或急速冷冻处理组桑椹中的可溶性果胶含量显著高于普通冷冻处理组的桑椹。经扫描电子显微镜观察,快速冷冻和急速冷冻处理组桑椹的组织细胞结构与新鲜桑椹相近,说明冷冻前采用氯化钙溶液预处理能在一定程度上维持桑椹细胞结构的稳定性。研究结果表明,与普通冷冻方式相比,采用快速冷冻和急速冷冻对维持桑椹的硬度与减少汁液流失具有一定作用;冷冻前采用氯化钙溶液预处理能显著降低桑椹中的原果胶损失。生产中对新鲜桑椹的贮藏,适宜采用氯化钙溶液预处理结合快速冷冻或急速冷冻的方式。     

副干酪乳杆菌L9直投式深冷发酵剂制备工艺研究

副干酪乳杆菌L9是一株功能性益生菌菌株。本研究利用液氮深冷技术制备副干酪乳杆菌L9(Lactobacillus paracasei L9)直投式发酵剂,并比较了液氮深冷与冷冻干燥工艺制备的发酵剂,菌株存活率及活性的差异。结果表明,液氮深冷组的菌体存活率可达93.7%±4.2%,显著高于冷冻干燥法组(77.5%±5.3%)(P0.05);液氮深冷组发酵产酸能力与未经冷冻处理的对照组没有显著区别,但显著高于冷冻干燥组;液氮深冷组的β-半乳糖苷酶及LDH活性下降也显著低于冷冻干燥处理组;储藏试验证明,深冷工艺制备的副干酪乳杆菌L9直投式发酵剂可以在3个月储存过程中保持稳定的产酸活性。     

不同冷冻速率对鸡囊胚细胞冷冻效果的影响

为探究不同冷冻速率对鸡囊胚细胞冷冻效果的影响,使用胚胎冷冻仪分步冷冻,比较不同步骤中不同冷冻速率冷冻后,细胞二乙酸荧光素(FDA)染色活率(简称活率)和培养24 h后细胞贴壁率(简称贴壁率)。结果表明:第1步冷冻,-0.7℃/min组活率最高(0.846),但与-0.5℃和~1℃/min组差异不显著(P0.05)。-1℃/min组贴壁率最高(59.1%),且与各组间差异均极显著(P0.01)。第2步冷冻,投入液氮前不同温度,-75℃组活率最高(0.530),但与-35℃、-55℃组差异不显著(P0.05);-35℃组贴壁率最高(36.6%),且与各组间差异极显著(P0.01)。因此,鸡BCs使用胚胎冷冻仪进行分步冷冻,以-1℃/min的速率降温至-7℃保持10 min,继续以同样速率降温至-35℃投入液氮保存,解冻后不仅可以获得较好的活率,而且培养后可以获得较高的贴壁率。     

雌激素对猪粪细菌区系的影响

为了探讨雌激素与肠道微生物之间的相互关系,本试验模拟母猪妊娠后期粪便中雌二醇(Estradiol, E_2)含量为120 ng/mL,进行猪粪菌群体外厌氧培养,37℃培养8 h后,检测细菌区系多样性的变化,并测定培养液中短链脂肪酸(Short chain fatty acids, SCFAs)的含量。结果表明:120 ng/mL E_2组的Ace、Chao、Shannon和Simpson值与对照组间无显著差异(P0.05),但120 ng/mL E_2组变形菌门(Bacteroidetes)相对丰度极显著低于对照组(P0.01);而拟杆菌门(Proteobacteria)相对丰度极显著高于对照组(P0.01)。120 ng/mL E_2组培养液中乙酸、丁酸、异丁酸及总酸的含量极显著低于对照组(P0.01);异戊酸含量极显著高于对照组(P0.01),但两组间丙酸及戊酸含量差异不显著(P0.05)。本研究通过猪粪菌体外培养表明,雌激素可影响粪便细菌区系的结构组成和代谢类型。     

玻璃化冷冻预处理方法对牛卵巢颗粒细胞的影响

为了研究不同玻璃化冷冻预处理对牛卵巢颗粒细胞培养的影响,试验采用4种不同的玻璃化冷冻预处理方法(①将冷冻保存管直接投入液氮罐中;②将冷冻保存管先置于4℃冰箱15 min,然后投入液氮罐中;③将冷冻保存管先置于-20℃冰箱10 min,然后投入液氮罐中;④将冷冻保存管先置于4℃冰箱15 min,再置于-20℃冰箱10 min,然后投入液氮罐中)处理牛卵巢颗粒细胞,解冻后检测细胞活力和传代时间。结果表明:解冻后4种方法的细胞活力分别为72%、74%、79%和86%;传代时间分别为76 h、73 h、67 h和62 h;方法④的细胞活力和传代时间与其他组比较差异显著(P<0.05)。说明玻璃化冷冻预处理方法有利于复苏后的牛卵巢颗粒细胞的进一步培养。     

白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响

试验旨在研究白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响。采用假阴道法采集8只云上黑山羊精液,用含不同浓度(0、0.1、1、10和20μmol//L)白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,对照组不添加白藜芦醇。在5℃平衡4 h后,将细管于液氮蒸气中预冻10 min,最后在液氮中保存30 d。37℃水浴解冻后,采用低渗耐受性试验检测质膜完整性和温度耐受性,精子染色质扩散法检测DNA碎片率等指标。结果显示,10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子弯尾率显著高于其他各处理组(P0.05),而其他各冷冻组之间无显著性差异(P0.05);10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子DNA碎片率极显著高于鲜精组(P0.01),极显著低于未添加白藜芦醇冷冻组(P0.01)。温度耐受性试验结果表明,不同浓度白藜芦醇冷冻组精子37℃水浴1 h后的精子弯尾率以10μmol/L冷冻组最高,与其他各冷冻组间差异极显著(P0.01);精子弯尾率随着孵育时间的延长而呈逐步下降的趋势,当孵育4 h时,10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子弯尾率与对照组无显著差异(P0.05)。透射电镜结果表明,10μmol/L白藜芦醇组精子质膜完整率显著高于不添加白藜芦醇对照组(P0.05)。上述结果表明,在冷冻稀释液中添加白藜芦醇可显著改善山羊冻精质膜状态、DNA完整率和温度耐受性,其最佳作用浓度为10μmol/L,但白藜芦醇是否能改善山羊冻精的人工授精效果还有待进一步研究。     

载铜膨润土对不同品种断奶仔猪粪便中微生物菌群的影响

选择(35±2)日龄的断奶"杜大"和"杜斯"两个品种仔猪共48头,每一品种仔猪24头,公母各半,研究载铜膨润土对不同品种断奶仔猪粪便中微生物菌群的影响。结果表明,①杜洛克×大白猪:高铜组与载铜膨润土相比,大肠杆菌菌落数降低了3.45%,差异显著(P0.05);沙门氏菌菌落数降低3.48%,差异显著(P0.05);与纳米组相比,高铜组菌液中pH值比载铜膨润土组增加5.23%,差异显著(P0.05)。②杜洛克×斯格猪:与纳米铜组相比,高铜组大肠杆菌菌落数增加了4.53%,差异显著(P0.05);沙门氏菌菌落数增加5.87%,差异显著(P0.05);粪便中菌液pH值增加3.39%,差异显著(P0.05)。