阿伐他汀对自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨阿伐他汀(atorvastatin)对培养的自发性高血压大鼠 (spontaneous hypertensive rats,SHR)和正常血压Wistar大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts , CFs)增殖和胶原合成的影响.方法采用胰酶消化法培养CFs,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,流式细胞分析仪(FCM)技术检测细胞周期,ELISA法检测Ⅰ型胶原合成.结果 (1)10-7 mol/L、10-6 mol/L、10-5 mol/L 和10-4 mol/L阿伐他汀作用后MTT比色法A比值SHR组分别为0.30±0.01、0.26±0.01、0.24±0.01 和0.22±0.01,与对照组(0.33±0.01)比较差异非常显著(P均<0.01);Wistar大鼠组分别为0.28±0.01、0.26±0.01、0.23±0.01 和 0.21±0.01,与对照组 (0.30±0.01)相比差异非常显著(P均<0.01).(2) 10-6 mol/L 阿伐他汀作用48 h,SHR和Wistar大鼠CFs的G0/G1期细胞百分率均较对照组显著增高(P均<0.01),S期细胞百分率、G2/M期细胞百分率和增殖指数(proliferation index, PI)则较对照组显著降低(P均<0.01).(3)随着阿伐他汀浓度的增高,CFs的Ⅰ型胶原分泌呈明显的递减趋势.10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L 和10-4 mol/L阿伐他汀作用后Ⅰ型胶原,SHR分别为0.71±0.01、0.70±0.01、0.63±0.01 和0.58±0.02,均显著低于对照组0.88±0.02(P均<0.01);Wistar大鼠分别为0.53±0.01、0.51±0.01、0.47±0.02 和0.40±0.02,与对照组 (0.68±0.01) 相比差异非常显著(P均<0.01).SHR组与Wistar大鼠组相比较,CFs受抑制的效应更强.结论阿伐他汀呈浓度依赖性抑制SHR的CFs增殖和胶原合成,高血压时CFs对阿伐他汀更为敏感,这对逆转高血压心室重塑有一定的价值.     

盐酸吡格列酮对SHR心脏成纤维细胞增殖的影响及其与一氧化氮的关系

目的研究胰岛素增敏剂盐酸吡格列酮(PIO)对培养的自发性高血压大鼠(SHR)和试验大鼠(Wistar)心脏成纤维细胞(CFs)增殖的影响及其与一氧化氮(NO)的关系.方法采用胶原酶消化法培养SHR和Wistar的CFs,四氮唑蓝比色法(MTT)测定CFs的增殖状况,硝酸还原酶法测定CFs培养上清NO浓度.结果 (1)1×10-7、1×10-6、5×10 -6、1×10 -5 mol/L的PIO作用24 h,SHR和Wistar的吸收值(A490值)分别为SHR 0.19±0.01、0.18±0.01、0.16±0.01、0.16±0.02;Wistar 0.21±0.01、0.19±0.01、0.18±0.01、0.17±0.01,与各自对照组(SHR 0.22±0.01,Wistar 0.21±0.02)相比,差异非常显著(P<0.01).(2)5×10 -6 mol/L的PIO作用12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h后,SHR的A490值与同一时间点相比,差异非常显著(P<0.001);Wistar的A490值与同一时间点的对照组相比,差异非常显著(P<0.001).(3)5×10 -6 mol/L的PIO干预48小时后,SHR和Wistar的CFs培养上清NO浓度分别为111.2±12.4 μmol/L、221.7±35.3 μmol/L,与各自对照组(76.8±2.4 μmol/L、112.1±8.9 μmol/L)相比,差异非常显著(P<0.001).结论 PIO能够抑制SHR的CFs增殖,其效应可能是通过上调NO的表达来实现的.     

辛伐他汀逆转左室肥厚的作用与抑癌基因PTEN表达的关系

目的观察辛伐他汀逆转自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚(LVH)的作用及其与抑癌基因-第10号染色体缺失的张力蛋白同源区(PTEN)表达的关系.方法16只雄性8周龄SHR测量体重和收缩压后,随机分为SHR治疗组和SHR对照组,分别给予辛伐他汀和安慰剂灌胃治疗,性别、年龄、数量匹配的Wistar大鼠给予安慰剂治疗作为正常对照组,疗程10周,观察辛伐他汀对大鼠收缩压和左心室重量/体重比值(LVW/BW)的影响,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测辛伐他汀对心肌组织PTEN表达的影响.结果(1)治疗前两组SHR收缩压无显著差异(P＞0.05),均高于Wistar正常对照组大鼠(P＜0.01);给予辛伐他汀后,SHR治疗组收缩压(217.3±8.5)mmHg较SHR对照组(220.8±9.9)mm Hg略有降低,但无统计学意义(P＞0.05),且两组SHR收缩压仍高于Wistar正常对照组大鼠(126.0±5.8)mm Hg,差异非常显著(P＜0.01).(2)SHR对照组大鼠的LVM/BW(4.10±0.13)mg/g明显高于Wistar正常对照组(3.04±0.12)mg/g,并有统计学意义(P＜0.01),而SHR辛伐他汀治疗组的LVM/BW(3.73±0.08)mg/g较SHR对照组明显下降(P＜0.01).(3)SHR对照组大鼠心肌组织PTEN的mRNA表达水平(0.36±0.04)低于Wistar正常对照组(0.87±0.05),差异非常显著(P＜0.01),SHR治疗组大鼠的PTEN mRNA表达水平(0.60±0.05)较SHR对照组显著升高,并有统计学意义(P＜0.01).(4)Wistar正常对照组、SHR对照组和SHR治疗组大鼠心肌组织PTEN蛋白表达水平分别为50.53±2.92、24.65±3.89和40.32±4.04,其中SHR对照组明显低于Wistar正常对照组(P＜0.01),SHR治疗组则较SHR对照组显著升高(P＜0.01).结论辛伐他汀能够逆转SHR的LVH,其机制可能与PTEN表达水平增加有关.     

盐酸吡格列酮对SHR心脏成纤维细胞增殖的影响及其与一氧化氮的关系

目的　研究胰岛素增敏剂盐酸吡格列酮 (PIO)对培养的自发性高血压大鼠 (SHR)和试验大鼠 (Wistar)心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的影响及其与一氧化氮 (NO)的关系。方法　采用胶原酶消化法培养SHR和Wistar的CFs ,四氮唑蓝比色法 (MTT)测定CFs的增殖状况 ,硝酸还原酶法测定CFs培养上清NO浓度。结果　 (1) 1× 10 - 7、1× 10 - 6 、5× 10 - 6 、1× 10 - 5 mol/L的PIO作用 2 4h ,SHR和Wistar的吸收值 (A4 90 值 )分别为SHR 0 .19± 0 .0 1、0 .18± 0 .0 1、0 .16± 0 .0 1、0 .16± 0 .0 2 ;Wistar 0 .2 1± 0 .0 1、0 .19± 0 .0 1、0 .18± 0 .0 1、0 .17± 0 .0 1,与各自对照组 (SHR 0 .2 2± 0 .0 1,Wistar 0 .2 1± 0 .0 2 )相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 1)。 (2 ) 5× 10 - 6 mol/L的PIO作用 12h、2 4h、3 6h、48h、60h、72h后 ,SHR的A490 值与同一时间点相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 0 1) ;Wistar的A4 90 值与同一时间点的对照组相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 0 1)。 (3 ) 5×10 - 6 mol/L的PIO干预 48小时后 ,SHR和Wistar的CFs培养上清NO浓度分别为 111.2± 12 .4μmol/L、2 2 1.7± 3 5.3μmol/L ,与各自对照组 (76.8± 2 .4μmol/L、112 .1± 8.9μmol/L)相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 0 1)。 结论     

钙调神经磷酸酶调控精氨酸升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的作用

目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路对精氨酸升压素(AVP)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的调控作用.方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley大鼠CFs,MTT比色法测定细胞数目,应用流式细胞仪分析细胞周期,CaN活性通过分光光度计测定.结果 (1)CFs的 MTT比色法吸光度A490值随着AVP作用浓度的升高而增加,其中10-7 mol/L AVP和10-6 mol/L AVP组A490值(分别为0.17±0.01和0.18±0.01)与空白对照组(0.11±0.01)比较有显著差异(P<0.01);不同浓度的AVP+CsA组A490值均较相应的AVP组降低,其中10-7mol/L AVP+CsA组和10-6 mol/L AVP+CsA组分别为0.13±0.01和0.15±0.01,与10-7mol/L AVP和10-6 mol/L AVP组比较显著降低,并有统计学意义(P<0.01).(2)10-7mol /L AVP 作用下CFs细胞周期S期百分率为17.86 ±3.18,与空白对照组(12.10±2.38)比较明显升高,并有统计学意义(P<0.01).10-7mol /L AVP +CsA组CFs细胞周期S期百分率(13.76±2.52)与10-7mol /L AVP组比较有显著差异(P<0.05).(3)10-7 mol/L AVP组CFs的CaN活性为0.30±0.06 kU/mg,与对照组(0.14±0.03 kU/mg)比较差异显著(P<0.01).结论 CaN的特异性抑制剂环孢素A(CsA)可抑制AVP诱导的CFs增殖,AVP可升高CFs内CaN活性,表明CaN信号通路在AVP诱导CFs增殖过程中起到了重要的调控作用.     

V1受体拮抗剂对精氨酸升压素诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响

目的探讨V1受体拮抗剂[d(CH2)5-Tyr2(Me)]AVP对精氨酸升压素(AVP)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响. 方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley (SD)大鼠心脏成纤维细胞(CFs),以3H-TdR掺入法测定CFs的DNA合成功能,MTT比色法测定CFs数目,并应用流式细胞仪进行CFs细胞周期分析. 结果①CFs的3H-TdR掺入率随着AVP干预浓度的增加而增高,其中10-7mol/L AVP和10-6mol/L AVP组每5000个细胞的3H-TdR掺入率分别为(243±61)cpm和(328±68)cpm,均明显高于对照组3H-TdR掺入率(117±32)cpm(P<0.01);②MTT比色法吸光度(A490 nm)值随AVP浓度的增加而增高,其中10-7mol/L AVP、10-6mol/L AVP组的A490 nm值分别为0.24±0.01和0.29±0.02,均较对照组A490 nm值(0.16±0.01)显著增高(P<0.01);③10-7mol/L AVP组CFs细胞周期S期百分率显著高于对照组(30.20±0.88)% vs (26.86±1.06)%( P<0.01);④10-7mol/L AVP+10-7 mol/L [d(CH2)5-Tyr2(Me)]AVP组的每5000个细胞的3H-TdR掺入率、MTT比色法A490 nm值和S期百分率分别为(143±40)cpm、0.17±0.01和(25.02±0.51)%,均显著低于10-7mol/L AVP组(分别P<0.05,P<0.01,P<0.01). 结论 AVP可诱导CFs的DNA合成功能增强和细胞数目增加,其作用可被V1受体拮抗剂[d(CH2)5-Tyr2(Me)] AVP所阻断,表明V1受体可能介导了AVP促CFs增殖效应.     

辛伐他汀逆转左室肥厚的作用与抑癌基因PTEN表达的关系

目的观察辛伐他汀逆转自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚(LVH)的作用及其与抑癌基因第10号染色体缺失的张力蛋白同源区(PTEN)表达的关系。方法16只雄性8周龄SHR测量体重和收缩压后,随机分为SHR治疗组和SHR对照组,分别给予辛伐他汀和安慰剂灌胃治疗,性别、年龄、数量匹配的Wistar大鼠给予安慰剂治疗作为正常对照组,疗程10周,观察辛伐他汀对大鼠收缩压和左心室重量/体重比值(LVW/BW)的影响,采用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)和蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测辛伐他汀对心肌组织PTEN表达的影响。结果(1)治疗前两组SHR收缩压无显著差异(P>0.05),均高于Wistar正常对照组大鼠(P<0.01);给予辛伐他汀后,SHR治疗组收缩压(217.3±8.5)mmHg较SHR对照组(220.8±9.9)mmHg略有降低,但无统计学意义(P>0.05),且两组SHR收缩压仍高于Wistar正常对照组大鼠(126.0±5.8)mmHg,差异非常显著(P<0.01)。(2)SHR对照组大鼠的LVM/BW(4.10±0.13)mg/g明显高于Wistar正常对照组(3.04±0.12)mg/g,并有统计学意义(P<0.01),而SHR辛伐他汀治疗组的LVM/BW(3.73±0.08)mg/g较SHR对照组明显下降(P<0.01)。(3)SHR对照组大鼠心肌组织PTEN的mRNA表达水平(0.36±0.04)低于Wistar正常对照组(0.87±0.05),差异非常显著(P<0.01),SHR治疗组大鼠的PTENmRNA表达水平(0.60±0.05)较SHR对照组显著升高,并有统计学意义(P<0.01)。(4)Wistar正常对照组、SHR对照组和SHR治疗组大鼠心肌组织PTEN蛋白表达水平分别为50.53±2.92、24.65±3.89和40.32±4.04,其中SHR对照组明显低于Wistar正常对照组(P<0.01),SHR治疗组则较SHR对照组显著升高(P<0.01)。结论辛伐他汀能够逆转SHR的LVH,其机制可能与PTEN表达水平增加有关。     

辛伐他汀对大鼠心肌细胞肥大及蛋白激酶B表达的影响

目的观察辛伐他汀对血清诱导培养大鼠心肌细胞肥大的影响,探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)途径在辛伐他汀调控心肌细胞肥大中的信号转导作用.方法以培养的新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌细胞为实验模型,应用图像分析系统测定心肌细胞表面积,[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心钠素(ANP)mRNA表达,RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PKB的mRNA和蛋白表达水平.结果(1)15%血清组干预24 h后心肌细胞表面积(1611.16±160.75)μm2显著高于无血清对照组(538.04±118.60)μm2,并有统计学意义(P＜0.01);给予辛伐他汀和血清共同干预后,随着辛伐他汀浓度的增加,心肌细胞表面积呈递减趋势,其中10-5mol/L和10-6mol/L组分别为(799.84±167.70)μm2和(1076.88±199.28)μm2,均显著低于血清组(P＜0.01).(2)在15%血清刺激后,心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率为(2360±106)计数/min·孔,明显高于无血清对照组(1305±92)计数/min·孔,并有统计学意义(P＜0.01);10-5和10-6mol/L辛伐他汀组[3H]-亮氨酸掺入率分别为(1707±101)计数/min·孔和(1962±125)计数/min·孔,均较血清组明显降低(P＜0.01).(3)随着辛伐他汀浓度的增加,心肌细胞ANP的mRNA表达水平逐渐降低,其中10-5和10-6mol/L辛伐他汀组分别为0.29±0.03和0.40±0.03,与单纯血清干预组(0.60±0.03)比较明显降低,差异非常显著(P＜0.01).(4)心肌细胞PKB的mRNA和蛋白表达水平均随辛伐他汀浓度的增加而呈递减趋势,其中10-5、10-6mol/L辛伐他汀组PKB mRNA表达水平为0.28±0.02和0.36±0.03,明显低于血清干预组(0.51±0.03),并有统计学意义(P＜0.01).上述两组PKB蛋白表达水平分别为42.41±2.83和45.68±3.43,也较血清组(60.80±3.49)显著降低(P＜0.01).结论辛伐他汀能够抑制血清诱导的心肌细胞肥大,PKB表达水平下调可能是其分子生物学机制之一.     

吡格列酮对自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞周期的影响

目的研究盐酸吡格列酮对培养的自发性高血压大鼠（SHR）和血压正常大鼠（WKY）心脏成纤维细胞（CFs）细胞周期的影响,并进一步探讨其与NO-NOS系统的关系。方法采用胶原酶消化法培养SHR和WKY的CFs,流式细胞仪（FCM）分析技术检测细胞周期,硝酸还原酶法测定CFs培养上清NO浓度,分光光度法测定CFs培养上清NOS活性。结果0.1、1、5和10μmol/L的吡格列酮作用48h后,SHR、WKY CFs的G0/G1期细胞百分率较对照组显著增高（均P<0.01）,S期细胞百分率、G2/M期细胞百分率和增殖指数则显著低于对照组（P<0.01,P<0.05）,且随着作用浓度的增加,吡格列酮对细胞周期的影响逐渐增强。5μmol/L的吡格列酮干预48 h后,SHR和WKY的CFs培养上清NO浓度分别为（111.2±12.4）μmol/L和（221.7±35.3）μmol/L,与各自对照组（76.8±2.4）μmol/L、（112.1±8.9）μmol/L相比,差异非常显著（P<0.01）;SHR和WKY大鼠CFs培养上清NOS活性分别为（208±18）μkat/L、（257±30）μkat/L,和各自对照组（148±10）μkat/L、（187±8）μkat/L相比,亦有非常显著性差异（P<0.01）。NO浓度和NOS活性呈显著正相关（r=0.964,P<0.01）。结论吡格列酮能够抑制SHR CFs的细胞周期增殖,其效应可能与上调NO-NOS系统活性有关。     

辛伐他汀对血管加压素诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其与小窝蛋白-1表达的关系

目的研究辛伐他汀（simvastatin,Sim）对精氨酸血管加压素（arginine vasopressin,AVP,简称血管加压素）诱导成年大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖的影响及其与小窝蛋白-1（caveolin-1,cav1）的关系。方法离体培养成年大鼠CFs,以四氮唑盐（MTT）比色法检测CFs的增殖,流式细胞分析仪测定其细胞周期,蛋白免疫印迹法检测cav1蛋白的表达。观察cav1在AVP诱导大鼠CFs增殖前后及Sim干预后的变化。结果10-7mol/LAVP干预24 h后,MTT比色法检测CFs的吸光值（A）（0.24±0.03）较对照组（0.15±0.02）显著增高（P<0.01）;给予10-810-5mol/L的Sim和AVP共同干预后,CFs的A值呈递减趋势,分别为0.22±0.03、0.21±0.02、0.19±0.02和0.17±0.02,均较AVP组降低,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。以10-7mol/L的AVP干预24 h后,CFs S期的百分率（19.52±1.07）和增殖指数（48.25±1.27）较对照组（分别为7.02±0.27和18.93±3.03）均显著增高（均P<0.01）;10-710-5mol/L Sim与10-7mol/L AVP联合干预组CFs S期的百分率和增殖指数均较AVP单独干预组降低,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。10-7mol/L的AVP分别与10-810-5mol/L的Sim共同干预后,cav1蛋白的表达呈浓度依赖性地减少。甲羟戊酸（MVA）可逆转Sim对CFs增殖的抑制效应,并拮抗Sim诱导的cav1蛋白表达的降低。结论Sim可抑制AVP诱导的CFs增殖,Sim的干预效应可能受到cav1蛋白表达的调节。