乙型肝炎病毒感染者外周血CD4＋T细胞CD25-CD127-表达的检测及临床意义

目的 检测乙型肝炎病毒（ HBV）感染者外周血CD4＋T细胞表面CD25 - CD127 -的表达情况及临床意义.方法 用流式细胞术比较分析53例慢性乙肝患者、53例HBV携带者和26例正常对照人群CD4＋T细胞表面CD25 - CD127 -的表达情况,并对20例用干扰素治疗的HBV-DNA阳性慢性乙肝患者随访.结果 ①与正常对照组比较,慢性乙肝患者、HBV携带者CD4＋ CD25 -CD127 -T细胞均显著升高,两者比较有统计学差异（Q =4.559,P＜0.05;Q=6.230,P＜0.05）;②HBV- DNA阳性患者（n=77） CD4＋ CD25 - CD127 -T细胞显著低于HBV- DNA阴性患者（n=29）,两者比较有统计学意义（t =2.290,P=0.024）;③与治疗前比,慢性乙肝患者干扰素治疗12周后CD4＋CD25- CD127 -T细胞显著降低,两者比较差异有统计学意义（t =2.469,P=0.024）.结论 乙型肝炎病毒感染者外周血CD4＋ CD25 - CD127 -T细胞与病毒的感染和清除相关,外源性干扰素可降低CD4＋ CD25 - CD127 -T细胞.     

乙型肝炎病毒感染者外周血CD4+T细胞CD25、CD127不同亚群表达的检测及临床意义

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血CD4+T细胞表面CD25、CD127不同亚群的表达情况及临床意义。方法 用荧光抗体CD127-FITC、CD4-PECY5、CD25-PE标记T细胞。用流式细胞仪分别测定53例慢性乙型肝炎患者和53例HBV携带者CD4+T细胞表面CD25、CD127不同亚群的表达情况。对20例HBV-DNA阳性乙型肝炎病毒感染者干扰素治疗进行随访。结果与健康对照组[7.26％(6.15％,8.50％)]比较,慢性乙型肝炎患者[11.23％(9.10％,14.86％)]、HBV携带者[13.34％( 10.73％,18.90％)]CD25-CD 127-均显著升高,差异均有统计学意义(Q=4.559,P＜0.05;Q=6.230,尸＜0.05)。慢性乙型肝炎患者CD25hiCD127low/-[8.78％ (7.62％,10.44％)]显著高于健康对照[6.76％(5.73％,8.23％)]和HBV携带者[6.99％(5.77％,9.34％)],差异均有统计学意义(Q=3.497,P＜0.05;Q=3.103,P＜0.05)。HBV-DNA阳性组CD25-CD127-显著低于阴性组,两者差异有统计学意义[(12.92±5.20)％比(15.78±6.91)％,t=2.290,P=0.024],而CD25+/-CD127+显著高于阴性组,两者差异有统计学意义[(79.27±5.20)％比(76.02±7.04)％,t=2.194,P=0.030]。与治疗前比较,干扰素治疗12周CD25hiCD127low/-显著升高[(9.29±2.51)％比(11.08±2.38)％,t=2.820,P=0.011],而CD4+CD25-CD127-显著降低,两者差异有统计学意义[(13.86±5.72)％比( 10.86±3.60)％,t=2.469,P=0.024]。结论 HBV感染者外周血CD4+T细胞中CD25-CD127-亚群的表达与病毒的感染和清除有关;CD25hiCD 127low/-亚群的表达升高与发病有关。外源性干扰素可升高CD25hiCD127low/-的表达,降低CD25-CD127-的表达,从而抑制免疫反应。     

视黄酸对人外周血淋巴细胞CD25分子表达影响的研究

本实验采用分子杂交及流式细胞分析技术研究了视黄酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）对人外周血淋巴细胞ＣＤ２５分子表达和细胞功能的影响，结果显示，大剂量（２．５×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）ＲＡ处理ＰＨＡ活化４８ｈ淋巴细胞，其ＣＤ２５ｍＲＮＡ含量、ＣＤ２５阳性细胞百分率和膜表面ＣＤ２５分子数量均显著降低，淋巴细胞大部分受阻于Ｇ０／Ｇ１期，Ｇ２＋Ｍ期细胞仅占７．６％。而适量（２．５×１０－６～２．５×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）ＲＡ作用后ＣＤ２５分子表达和Ｇ２＋Ｍ期细胞明显增加。该研究提示ＲＡ对ＣＤ２５分子表达和淋巴细胞功能的影响有一定的剂量依赖性。     

HIV/AIDS患者疾病进程与CD4+CD25hi调节性T细胞之间相关性研究

目的 通过分析不同阶段HIV感染者外周血CD4+CD25hi调节性T细胞(CD4+CD25hiregulatory T cells,Treg cells)与外周血免疫状态和病毒载量的相关性,探讨Treg细胞对HIV/AIDS发病进程的影响.方法 采集116例HIV感染者和21例正常人对照外周血,用4色流式细胞术进行CD4+和CD8+T细胞绝对数计数;用3色流式细胞术进行Treg细胞测定;用荧光定量PCR法进行HIVRNA载晕测定.实验数据用回归统计学方法和T检验方法进行分析.结果 HIV感染者外周血Treg细胞频率在HIV感染初期显著下降,之后随着疾病的进程逐渐升高.在CD4+T细胞大于300/μl的患者低于正常对照组,在CD4+T细胞小于100/μl的患者高于正常对照组,差异具有统计学意义.Treg细胞频率与CD4+T淋巴细胞绝对数和CD4+/CD8+之间均呈负相关.其相关系数r和P值各为r=-0.564,P＜0.001和r=-0.377,P＜0.001;Treg细胞频率与血浆HIV病毒载量呈正相关,其相关系数r=0.514.P＜0.001.结论 CD4+CD25hi Treg细胞可能是参与艾滋病免疫发病机理的重要细胞,在HIV感染发病进程的不同阶段具有不同的意义,其确切机制有待进行进一步研究.     

异种角膜基质异位移植对大鼠外周血T细胞亚群的影响

目的: 比较3种异种角膜基质的免疫原性。方法: 将SD大鼠36只随机分为4组,每组9只。1组为对照组,2-4组为实验组。分别获取新鲜猪、兔、鸡角膜基质,等量湿重25 mg异位植入大鼠背部皮下,术后观察伤口愈合情况,并于术后7 d、14 d、28 d获取大鼠外周血,免疫荧光标记及流式细胞仪分析比较3种异种角膜基质对大鼠CD4⁺、CD8⁺、CD25⁺、CD71⁺表型的动态影响。结果: 各组植入处皮肤无红肿、无渗出及其它改变,伤口愈合良好;各组与对照组比较:猪角膜基质组各时相表达的CD4⁺、CD8⁺、CD25⁺、CD71⁺T细胞比例无显著差异(P＞0.05);兔角膜基质组术后7 d,CD4⁺T细胞升高(P＜0.05),鸡角膜基质组术后7 d,CD4⁺、CD4⁺CD71⁺升高(P＜0.01)。结论: 3种异种角膜基质对大鼠细胞免疫原性比较:鸡>兔>猪,猪角膜基质的免疫原性最低。     

肺结核患者血清SIL-2R和外周血T淋巴细胞亚群的相关性探讨

目的：探讨了血清可溶性白细胞介素-2受体（SIL-2R）和T淋巴细胞亚群在肺结核病感染中的作用。方法：应用酶联免疫双抗体夹心（ELISA）法和单克隆抗体法对40例肺结核病患者进行了血清SIL-2R和外周血T淋巴细胞亚群的测定,并与30名正常健康人作比较。结果：肺结核病患者血清SIL-2R水平非常显著地高于正常组（P〈0.01）,至恢复期虽然血清SIL-2R水平有所下降,但与正常人比较仍有显著性差异（P〈0.05）,SIL-2R水平与外周血T淋巴细胞亚群中CD4/CD8细胞比值呈负相关。结论：检测肺结核病患者血清SIL-2R和T淋巴细胞亚群水平可以作为患者病情变化、预后判断的重要检测指标。     

恶性葡萄胎患者化疗前后血清IL-2、SIL-2R和外周血B细胞和T淋巴细胞亚群检测的临床意义

目的:探讨了恶性葡萄胎患者化疗前后血清IL-2、SIL-2R和外周血B细胞及T淋巴细胞亚群水平及临床意义.方法:分别应用放射免疫分析、ELISA法和单克隆抗体法对32例恶性葡萄胎患者进行了血清IL-2、SIL-2R和外周血B细胞及T淋巴细胞亚群进行了检测,并与35名正常健康人作比较.结果:恶性葡萄胎患者在化疗前血清SIL-2R和B细胞数均非常显著地高于正常人(P＜0.01),而IL-2、CD3、CD4、CD4/CD8比值则显著地低于正常人组(P＜0.01),经化疗后6个月,与正常人比较仍有显著性差异(P＜0.05).结论:恶性葡萄胎患者是一种自身调节免疫异常的疾病.     

重型乙型肝炎血清可溶性白细胞介素2受体及外周血T淋巴细胞亚群的相关性

对２１例重型乙型肝炎患者白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）及Ｔ淋巴细胞亚群检测发现，急性及亚急性重型、慢性重型肝炎患者的ｓＩＬ－２Ｒ均显著增高，与正常对照比较，Ｐ＜０００１。急性、亚急性重型及慢性重型乙型肝炎患者的ＣＤ＋４明显降低，ＣＤ＋８则显著升高，与对照组比较，Ｐ均＜００１。检测证实ｓＩＬ－２Ｒ增高与活化的ＣＤ＋８具有相关性，表明活化的ＣＤ＋８细胞主要是细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ），其在急性和亚急性重型肝炎发病中可能起重要作用。ＣＤ＋４、ＣＤ＋８细胞在急性和慢性重型乙肝中表达的不同，提示二者发病机制不同。     

小鼠CD4+T细胞活化后IL-10受体I表达的研究

目的:检测抗小鼠CD4+T淋巴细胞活化后表面白细胞介素10受体I(IL-10R1)表达变化,为进一步研究白细胞介素10(IL-10)相关免疫疾病的发病机制及进展提供有力支持.方法:取C57BL/6小鼠脾细胞,溶血后采用尼龙毛去除B淋巴细胞后,流式细胞仪无菌分选CD4+T淋巴细胞,利用anti-CD3和anti-CD28多克隆抗体刺激分选后细胞,分别在第0、12、24、48和72小时流式细胞术检测IL-10R1表达情况.结果:0小时时小鼠CD4+T淋巴细胞不表达IL-10R1,随着刺激时间的延长IL-10R1表达增加,24小时时达到最高,随后表达水平开始下降,72小时时表达情况与0小时基本相同.结论:CD4+T淋巴细胞活化后IL-10R1表达短暂,以24小时时表达最高.     

正常成人外周血Th1/Th2细胞亚群体外活化的研究

目的:探讨CD4⁺T细胞在体外活化的条件下向Th1或Th2极化的规律。方法:用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人抗凝外周血单个核细胞(PBMC)和血浆,将PBMC置于含或不含有自身血浆环境中,并在植物血凝素(PHA,20mg/L)的刺激下进行培养,培养24、48、72h后收获细胞,分别用双色免疫荧光标记,以流式细胞术对CD4⁺T细胞表达表面分子CCR3、CCR5进行分析。结果:CD4⁺T细胞受自身血浆和PHA刺激后向Th1/Th2两个方向极化,24、48、72h后极化率分别达到(13.28±1.59)%/(12.70±1.65)%、(17.19±1.03)%/(17.50±1.30)%、(19.49±2.87)%/(18.58±1.49)%;而只有PHA刺激的极化率很低,两组有显著性差异(P＜0.01);Th1∶Th2之比约等于1。结论:正常成人外周血CD4⁺T细胞可以在体外自身血浆和PHA的条件下明显极化,而且Th1/Th2细胞处于等值的平衡状态。     

染料木黄酮对小鼠T细胞体外活化及增殖的影响

目的:研究染料木黄酮(Gen)对T细胞体外活化及增殖的影响,并探讨其机制。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记技术结合流式细胞术,分析PDB＋Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖相关指数。结果:Gen对ConA刺激组T细胞CD69、CD25表达有明显抑制作用(P＜0.05),且呈剂量依赖关系,而对PDB刺激组T细胞CD69及CD25表达的抑制需要较高浓度(＞50μmol/L);Gen无论对ConA或PDB＋Ion刺激组T细胞增殖均有显著抑制作用(P＜0.01),且均呈剂量依赖关系。结论:Gen可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞体外活化及增殖,其作用机制可能是抑制早期活化相关蛋白酪氨酸激酶活性。     

杂色曲霉素诱导体外培养人外周血淋巴细胞凋亡的研究

目的：研究我国肿瘤高发区饮食污染霉菌毒素－杂色曲霉素（ＳＴ）对人免疫机能的可能影响。方法：流式细胞术（ＦＣＭ）、形态学观察及ＤＮＡ电泳。结果：ＳＴ可诱导体外培养的人外周血淋巴细胞发生凋亡,并且在一定时间（２￣４８ｈ）及剂量（０．１２５￣２．０ｍｇ／Ｌ）范围内呈正相关关系。光镜及透射电镜观察均发现了凋亡细胞典型的形态学变化,如核染色质凝集边集,凋亡小体形成等;ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳也出现特征性的ＤＮＡ     

蚕蚀性角膜溃疡患者外周血淋巴细胞免疫表型和T细胞活化的研究

目的：观察蚕蚀性角膜溃疡患者外周血淋巴细胞免疫表到和T细胞活化的变化,进一步探讨本病患者的免疫功能。方法：用流式细胞术检测8例活动性蚕蚀性角膜溃病患者外周血淋巴细胞对项免疫表型变化,用植物凝集素和沸被醉酯作为刺激剂,以HLA－DR,CD69、CD71、CD25的表达为T细胞活化的指标,用流式细胞术分析。结果：蚕蚀性角膜溃疡患者外周血CD4、CD5、CD8、CD10、CD11b、CD15、CD16、CD19、CD23、CD25、CD41、CD69、HLA-DP、HLADR抗原表达阳性淋巴细胞以及HLA－DR、CD69、CD71、CD25在CD3和CD8细胞的表达均明显高于正常对照组。结论：蚕蚀性角膜溃疡患者具有增强的细胞免疫和体液免疫,外周血T细胞及其亚群出现异常活化,反映患者体内存在自身免疫反应而支持该病发病之自身免疫学说。     

槲皮素对小鼠T细胞体外活化的抑制作用

目的:通过分析槲皮素对淋巴细胞早期活化标记物CD69表达的影响,探讨其对T淋巴细胞体外活化抑制作用的机制。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂及槲皮素共同培养,分别于2、6、24h收获细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞仪对T细胞的CD69分子表达情况进行分析并计算抑制率。结果:槲皮素(终浓度10μmol/L)对未受刺激的T细胞CD69表达百分率无明显影响,而经佛波醇酯(PDB)及刀豆蛋白A(ConA)活化同时加入槲皮素的T细胞CD69表达百分率在2h、6h及24h均显著下降(P＜0.01)。槲皮素对PDB的抑制率随作用时间延长而明显下降,对ConA的抑制率平缓而持久。结论:槲皮素对PDB、ConA活化的T淋巴细胞均显示明显的抑制效应,表明该药可能作用于T细胞活化信号传递通路蛋白激酶Cθ或其下游部位,并且,这种抑制效应表现出一定的可逆性。     

人外周血CD8+T细胞CD28、CD56及CD57表达水平的老年性改变

目的:通过对健康老年人与青年人外周血CD8⁺T细胞CD28、CD56及CD57表达水平的比较性研究,探讨免疫衰老的细胞学机制。方法:采用三色免疫荧光标记流式细胞术分析青年组(20-35岁)与老年组(60-75岁)外周血CD8⁺CD28⁺、CD8⁺CD56⁺及CD8⁺CD57⁺T细胞水平。结果:老年组外周血CD8⁺CD28⁺T细胞明显低于青年组,阳性百分率分别为34.07±5.29和49.84±7.43(P＜0.05);而老年组CD8⁺CD56⁺T细胞及CD8⁺CD57⁺T细胞均明显高于青年组,前者阳性百分率分别为6.60±2.40和2.10±0.35,后者阳性百分率分别为41.82±6.01和22.89±2.80(P＜0.05)。结论:老年人CD8⁺T细胞CD28、CD56及CD57的表达率均随年龄增长有明显改变;CD28表达下降可能是引起免疫系统功能降低的重要原因,而CD56、CD57表达水平的增加则可能是机体对细胞免疫功能下降的一种代偿性适应。     

T-cell subset analysis of cryopreserved human peripheral blood mononuclear cells

A criticism of current techniques for monitoring changes in T-cell subset numbers over extended periods in individuals with disease states in which such changes might provide insight is the fact that serial samples taken are usually analysed fresh and therefore not in the same assay. To try to overcome this problem we have stored peripheral blood mononuclear cells frozen in liquid nitrogen and thence examined their ability to form sheep red blood cell (E) rosettes and to label with OK monoclonal antibodies. Results obtained show that cell viabilities following freezing and T-cell subset analysis of E-rosette positive cells are no different when fresh or frozen and subsequently thawed peripheral blood mononuclear cells are used.     

人外周血T淋巴细胞表型改变与衰老相关性研究

目的：探讨人T淋巴细胞表型随年龄变化的规律，寻找敏感的免疫衰老生物标志。方法：取年轻组(20—35岁)和年老组(50—75岁)志愿者的新鲜肝素抗凝静脉血，进行三色或四色直接免疫荧光染色，获取有核细胞后以流式细胞仪分析T细胞亚群的表型。结果：2个年龄组的总T细胞(CD3^ )、辅助T细胞(CD4^ )以及细胞毒T细胞(CD8^ )亚群的相对百分率没有明显差别，但年老组T细胞上CD3分子的密度(MFI)明显下降；粘附分子CD44与CD62L在3群T细胞上阳性率的差别均无统计意义；而2组间总T细胞、辅助T细胞以及细胞毒T细胞亚群的CD95阳性率都有显著差别，表现为随年龄增加，CD95表达率上升。结论：在所研究的年龄组间，T细胞及其亚群的相对数量没有显著改变，而CD3表达密度随年龄增加而下调；T细胞的凋亡诱导分子CD95阳性率随年龄增加而上升，提示CD95可能是评价免疫衰老的潜在生物标志。     

类风湿性关节炎患者2H4+T淋巴细胞亚群的流式细胞仪分析

了解类风湿性关节炎患者免疫功能的异常变化，探讨其发病机制。方法，使用间接免疫荧光和直接免疫荧光方法对１１例ＲＡ患者和１２例健康人的外周血Ｔ淋巴细胞进行了研究。结果：ＲＡ患者与对照组比较ＣＤ３＾＋Ｔ细胞和ＣＤ＾＋４Ｔ细胞地明显变化，ＣＤ８＾＋Ｔ细胞明显减少，