2型登革病毒诱导RAW264.7细胞凋亡的机制及凋亡对病毒复制的影响

 目的：探讨2型登革病毒（DENV2）感染能否诱导RAW264.7细胞凋亡,并初步探讨凋亡对病毒复制的影响。方法：用DENV2感染RAW264.7细胞,MTT检测细胞活性,Hoechst 33342染色检测细胞核变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测caspase-3和caspase-8活化片段的变化,比色法检测caspase-9活性变化,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,Z-VAD-FMK抑制细胞凋亡后以TCID50检测感染细胞上清病毒滴度。结果：DENV2感染RAW264.7细胞24 h、36 h及48 h后细胞活性受到抑制,免疫荧光检测有核固缩现象,流式细胞术检测发现病毒感染诱导了细胞凋亡,Western blotting检测发现活化caspase-3和caspase-8的表达增加,caspase-9活性也增加,JC-1染色发现病毒感染诱导RAW264.7细胞线粒体膜电位降低,用Z-VAD-FMK抑制凋亡后感染细胞上清病毒滴度增加。结论：登革病毒感染可以通过内、外源性途径诱导RAW264.7细胞发生凋亡;凋亡发生抑制了病毒的产生。     

Mir－526 b可促进顺铂诱导非小细胞肺癌凋亡

目的：观察microRNA分子miR－526 b对非小细胞肺癌细胞A549的化疗敏感性的影响。方法将miR－526 b基因转染到A549细胞中;通过细胞活性检测测定A549细胞对顺铂（ diamminedichloroplatinum, DDP）的敏感性,通过流式细胞技术以及Western印迹检测细胞凋亡水平。结果筛选获得稳定表达miR－526 b的克隆细胞。细胞活性检测显示miR－526 b可明显提高非小细胞肺癌细胞A549对顺铂的敏感性,流式细胞技术显示DDP处理后miR－526 b稳定转染细胞的凋亡细胞率（10．2％±1．1％）较对照组A549细胞（3．5％±0．3％）以及DDP未处理对照A549细胞（0．4％±0．1％）明显升高。 Western印迹实验表明DDP处理后miR－526 b非小细胞肺癌细胞A549凋亡指标cleavaged caspase－3、 Bax明显升高。结论 MiR－526 b可促进顺铂诱导非小细胞肺癌凋亡。     

天花粉蛋白抑制HeLa细胞生长及诱导细胞凋亡之机制探讨

目的研究天花粉蛋白（TCS）对人宫颈癌HeLa细胞生长抑制作用及其机制,探讨HeLa细胞凋亡发生的分子机制.方法采用CCK-8的方法,检测TCS对HeLa细胞的抑制作用;流式细胞仪检测TCS对细胞周期的影响;电子显微镜和Annexin法观察TCS对HeLa细胞诱导凋亡的作用;应用Western blotting观察HeLa细胞caspase-3酶原的变化;用caspases活性检测试剂盒,检测caspase-3,8,9的活性.结果1.TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用;2.TCS可以将HeLa细胞阻滞于S期;3.TCS诱导HeLa细胞发生凋亡,HeLa细胞出现典型的凋亡特征--染色质浓缩和凋亡小体,且凋亡率具有时间依赖性;4.caspase-3酶原表达的降低呈现时间和浓度依赖性,而caspase-3活性随时间依赖性的增高,提示在TCS诱导HeLa细胞凋亡的过程中caspase-3被激活;5.caspase-8,9的活性增高,有时间依赖性,且具有时间顺序.100 mg/L TCS处理24h后,caspase-8早于caspase-3被激活,提示活化的caspase-8可能对caspase-3起到激活作用.结论TCS对HeLa细胞的抑制作用是通过将HeLa细胞阻滞于S期和诱导细胞凋亡来实现的.caspase-3的激活是介导TCS诱导HeLa细胞发生凋亡的通路,同时,活化的caspase-8,9可能参与了caspase-3的激活和凋亡的诱导.     

β-榄香烯通过抑制HIF-1α表达促进人肺癌细胞凋亡

目的探讨β-榄香烯是否通过抑制肺癌细胞中HIF-1α的高表达促进肺癌细胞的凋亡及相关机制。方法常规培养人肺癌A549细胞,实验分为对照组、乏氧组、β-榄香烯组、不同浓度β-榄香烯/乏氧处理组;通过转染含有HIF-1α基因的质粒过表达HIF-1α基因。应用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪、TUNEL检测细胞凋亡。并采用免疫荧光检测HIF-1α蛋白的活化、Westen blot方法检测Bax、caspase-3及Bclx L蛋白表达及转染效率。结果β-榄香烯能够抑制肺癌A549细胞的增殖力,呈时间和浓度依赖性,能够诱导乏氧状态下的肺癌A549细胞凋亡。β-榄香烯可通过上调A549细胞的Bax、caspase-3蛋白表达,降低Bcl-xL表达来诱导乏氧状态下肺癌A549的凋亡。此外,β-榄香烯可有效降低乏氧状态下HIF-1α蛋白的高表达。通过转染过表达HIF-1α基因,大大降低了β-榄香烯的诱导凋亡作用。结论β-榄香烯可以上调乏氧状态下A549细胞凋亡,可能与抑制HIF-1α的高表达相关。     

泰素帝对肺腺癌细胞A549凋亡及Survivin表达和Caspase-3活性的影响

目的探讨泰素帝对肺腺癌细胞A549凋亡,生存素(Survivin)表达和Caspase-3活性的影响。方法体外细胞培养,待细胞生长处于对数期时,加入不同浓度泰素帝,MTY比色法检测细胞活性。参考MTT结果,选取100ng/ml泰素帝处理A549细胞。透射电镜,流式细胞术检测细胞凋亡的发生;RT-PCR检测Survivin mRNA的表达;Western印迹法检测Survivin蛋白质的表达;Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性。结果泰素帝可抑制A549细胞生长,诱导细胞凋亡,呈时间依赖性降低Survivin的表达,增强Caspase-3酶活性。结论 100ng／ml泰素帝可诱导A549细胞凋亡,Survivin表达降低和Caspase-3活性增强可能是其诱导肺腺癌细胞凋亡的分子途径之一。     

盐霉素增强吉非替尼诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的作用

 目的：探讨盐霉素联合吉非替尼诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的协同作用。方法：采用MTT的方法检测盐霉素对A549细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测盐霉素对A549细胞凋亡和线粒体膜电位的影响;比色法检测caspase-3、-8和-9活性;Western bloting 分析细胞色素C、Bcl-2、p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白水平。结果：盐霉素与吉非替尼单用均出现不同程度的细胞增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用;而盐霉素与吉非替尼联合作用,能更显著地抑制细胞增殖,且凋亡细胞显著增加（P<0.05）。盐霉素单独作用A549细胞,线粒体膜电位显著下降,细胞内活性氧和Ca2+在短期内显著升高,胞浆细胞色素C含量以及caspase-3、-8和-9活性均显著增加,与对照组比较差异均有统计学意义;吉非替尼单用则主要表现为对p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白表达的抑制作用,而对胞浆细胞色素C含量以及caspase-3、-8和-9活性影响较少。Western blotting检测发现,联合用药组的Bcl- 2、p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白表达量明显减少,但是对EGFR、Akt和ERK总蛋白水平无显著影响。结论：盐霉素与吉非替尼联用具有较好的协同作用,可能通过Bcl-2途径及线粒体凋亡途径诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,提高A549细胞对吉非替尼的敏感性。     

罂粟碱通过HMGB1/NLRP3炎症小体影响非小细胞肺癌A549和H460细胞生物学行为的作用机制

目的 探讨罂粟碱对非小细胞肺癌A549和H460细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响,并初步探讨其分子机制.方法 利用罂粟碱处理非小细胞肺癌A549和H460细胞,CCK-8细胞增殖检测试剂盒和平板克隆实验分析罂粟碱对A549和H460细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测罂粟碱对A549和H460细胞凋亡的影响,Transwell小室实验检测罂粟碱对A549和H460细胞迁移能力的影响;Western blot分析罂粟碱对A549和H460细胞HMGB1、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达的影响.结果 与对照组相比,经罂粟碱处理后,A549和H460细胞增殖和迁移能力显著下降,凋亡率明显上升,HMGB1、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达水平均显著降低.结论 罂粟碱下调HMGB1蛋白表达,影响炎症小体活性,抑制A549和H460细胞增殖和迁移,并诱导凋亡.     

二甲基亚砜诱导胚胎干细胞分化伴随凋亡发生

目的：标准化二甲基亚砜（DMSO）诱导胚胎干细胞（ESC）向心肌细胞分化的方法,及DMSO是否同时诱导细胞凋亡。方法：MTT法确定DMSO的应用剂量,不同条件培养基对ESC进行诱导分化,并在形态学、蛋白质及基因水平鉴定ESC源心肌细胞。利用形态学、流式细胞仪等对细胞凋亡进行观测。结果;DMSO的最佳应用浓度为1％,拟胚体经诱导后跳动率为96．7％。该心肌细胞表达多种心肌蛋白,且肌小节结构发育成熟。DMSO的促分化效应可能与心肌转录因子GATA-4的表达有关,1％DMSO可诱导ESC部分产生凋亡,且具有时间和剂量依赖性。结论：1％DMSO不但能够高效诱导ES-D3分化为心肌细胞,且以时间依赖的方式诱导ES-D3细胞部分凋亡。     

Caspase-3基因沉默对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的:通过siRNA抑制caspase-3基因的表达探讨肺炎链球菌对肺泡上皮细胞凋亡的影响及凋亡基因caspase-3对凋亡的调节作用,寻找治疗肺炎链球菌肺炎的新方法。方法:体外培养肺泡上皮细胞A549,用肺炎链球菌R6作用于A549细胞,使用siRNA技术抑制caspase-3表达,RT-PCT法检测caspase-3转录强度,化学荧光测定法检测caspase-3蛋白含量,ELISA法检测细胞上清中IL-6和IL-10浓度,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:肺炎链球菌能诱导A549细胞凋亡、导致caspase-3的表达和IL-6的浓度升高、IL-10的浓度降低;使用siRNA抑制caspase-3表达后,caspase-3的表达降低,A549细胞的凋亡率降低,而IL-6和IL-10的浓度并无明显变化。结论:Caspase-3在肺炎链球菌引起的肺泡上皮细胞的凋亡中占据了重要的地位;运用RNA干扰技术抑制caspase-3的表达能降低肺泡上皮细胞的凋亡率,这可能对肺炎链球菌肺炎的治疗有积极意义。     

pcEgr-hp53稳定转染联合X射线诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及相关凋亡蛋白表达变化

目的：探讨辐射诱导表达载体pcEgr-hp53体外稳定转染人肺腺癌A549细胞后联合X射线照射,诱导细胞凋亡的作用及相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达的变化。方法：以脂质体介导携有外源野生型p53基因的辐射诱导表达载体pcEgr-hp53和pcDNA3.1,体外转染A549细胞,筛选稳定转染的细胞克隆并扩增培养,所表达的A549-hp53和A549-vect分别接受0、0.5、2和5Gy X射线照射,即8个实验组,采用TUNEL法和流式细胞术检测稳定转染联合辐射对细胞凋亡和Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达变化的影响。结果：A549-hp53组加不同剂量照射与0 Gy组比较,其百分数均明显增加（0.5-5Gy,P〈0.05-P〈0.01）,Bcl-2蛋白表达在0.5-5Gy时明显下降,而Bax蛋白明显增加（P〈0.05-P〈0.01）,caspase-3蛋白表达在2-5Gy时明显增加（P〈0.01）;A549-hp53照射组不同剂量照射,与A549-vect相应照射剂量组比较,其百分数在0.5Gy时无明显差异,在2-5 Gy时为（P〈0.01）,Bcl-2蛋白表达明显下降（0.5Gy,P〈0.01;2-5Gy,P〈0.05）,Bax和caspase-3蛋白表达0.5-5Gy时明显增加（P〈0.05-P〈0.01）。结论：体外p53基因转染联合X射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Bax、caspase-3表达上调,具有显著的肿瘤抑制作用。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.