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牛体外受精扩张囊胚的玻璃化超低温冷冻保存及移植技术的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
本试验对牛的扩张囊胚的冷冻保存技术进行了探讨。在25℃温度下,利用EFS40的玻璃化溶液,将扩张囊胚直接移入此液中平衡后,投入液氨中一步法冷冻保存。或胚胎移入EFS40之前,在10%EG溶液中预先处理,二步法冷冻保存。其解冻后获得了较高的发育率(分别为59%VS63%)。冷冻保存的胚胎移植后的妊娠率及产仔率分别高于对照组(80%VS55%;55%VS23%)。 相似文献
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在家畜胚胎发育中,扩张囊胚是一个非常重要的阶段。其中在牛羊方面第一例成功的胚胎冷冻即是在这个阶段完成的。同时人们已发现在猪囊胚扩张后、胚胎的抗冻力也上升。近年来.通过体外成熟、受精和发育的方法来生产牛的扩张囊胚。然而牛胚胎不论是用各种玻璃化冷冻法还是传统的冷冻方法.效果一直不佳。在超低温冷冻保存的小鼠囊胚的发育率比8细胞胚胎直到桑椹胚阶段的胚胎都低。本研究的目的是利用乙二醇为主的玻璃化溶液探索小鼠扩张囊胚冷冻所需的最适条件。1材料和方法1,1扩张囊胚的收集将6~12周龄的雌性ICR小鼠饲养在明暗… 相似文献
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家兔扩张囊胚玻璃化冷冻保存技术的研究 总被引:16,自引:0,他引:16
本试验对家兔扩张囊胚的玻璃化冷冻保存技术进行了探讨。首先在20℃室温下,将扩张囊胚直接移入EFS40溶液中短时间平衡后,直接投入液氮中冷冻保存(一步法);或胚胎在10%~20%EG(或EFS20)溶液中经预先处理后,再移入EFS40中冷冻保存(二步法),解冻后的胚胎发育率达到95%~100%。当室温提高到25℃时,一步法和二步法冷冻的胚胎均得到了较高的发育率(89%~90%)。利用20℃条件下一步法即2分钟平衡后冷冻的胚胎移植后,妊娠受体的产仔率为29.2%(7/24),同对照组产仔率32.4%(11/34)相比无显著性差异(P>0.05)。 相似文献
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研究不同冷冻液配方对鸡囊胚细胞的玻璃化冷冻保存效果。对新鲜种蛋囊胚细胞分离提纯后,在DMEM中添加不同的冷冻保护剂DMSO(二甲基亚砜)、EG(乙二醇)、蔗糖,分别组成6种玻璃化冷冻保护液,进行超低温冷冻保存。复苏后通过苔盼蓝染色测定活细胞存活率。结果:玻璃化冷冻保存中,囊胚细胞在玻璃化冷冻液配方2(10%EG+10%DMSO+0.5mol/L蔗糖+20%FBS+DMEM)条件下复苏后存活率最高(71.32%),与玻璃化冷冻液配方1和3条件下复苏后存活率之间差异显著(P〈0.05),且与玻璃化冷冻液配方4、5、6条件下复苏后存活率之间差异均极显著(P〈0.01),可以作为鸡囊胚细胞的玻璃化冷冻液。 相似文献
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小鼠扩张囊胚低渗液处理试验 总被引:1,自引:0,他引:1
为研究解冻后的胚胎膨胀对其发育率的影响,本试验用20~50%的低渗PBS溶液(即0.20×、0.25×、0.30×及0.50×),分别将小鼠扩张囊胚在低渗液中处理30分钟后培养,结果新鲜胚在0.50×和0.30×中处理后的发育率分别为100%和91%,0.20×处理组的发育率降低到53%。解冻后的胚胎直接用低渗液处理,0.50×组只有85%继续发育,低于0.25×组完全不能发育。而解冻后经培养恢复到扩张囊胚后再做低渗处理,0.30×组仍有96%继续发育。 相似文献
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用 EFS4 0溶液对绵羊体内外受精的早期囊胚进行了玻璃化冷冻保存的研究。经卵母细胞体外成熟、体外受精和体外培养获得的早期囊胚 ,分别作如下处理 :( A) 1 0 %EG中预处理 5min后 ,在 EFS4 0平衡 3 0 s(两步法 ) ;( B) EFS4 0中平衡 1 min(一步法 ) ;( C) EFS4 0中平衡 2 min(一步法 )。然后投入液氮中冷冻保存 ,解冻胚胎的继续发育率分别为 80 %、78%和 50 %,A、B2组的结果与对照组 ( 88%)无显著性差异 ( P >0 .0 5)。经超数排卵获得的体内受精早期囊胚用两步法冷冻保存 ,解冻后胚胎发育继续率为 89%,与对照组( 93 %)也无显著性差异 ( P >0 .0 5) 相似文献
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1 玻璃化冷冻的基本原理 所谓的玻璃化冷冻就是在完全的玻璃化状态下冷冻保存细胞、组织或器官.为了在一定冷冻速度下形成玻璃化,需要使用高浓度的可渗透性低温保护剂. 玻璃化冷冻法是根据物理学原理,将高浓度的低温保护剂(约7 mol/L)在超低温环境下凝固,形成无规则的玻璃化固体,这种固态物质能保持液态时的正常分子与离子分布,因而在细胞内发生玻璃化起到保护作用.这种方法不仅大大简化了冷冻过程,而且减少了由于细胞冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤.此外,这种方法采用迅速通过临界温度区,从而减轻了一些动物胚胎冷冻中常见的冻伤现象. 相似文献
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Q-H Hong S-J Tian S-E Zhu J-Z Feng C-L Yan X-M Zhao G-S Liu S-M Zheng 《Reproduction in domestic animals》2007,42(1):34-38
The aim of this study was to investigate the effects of different vitrification solutions [EFS30 or EFS40 contains 30% (v/v) ethylene glycol (EG), 40% (v/v) EG; EDFS30 or EDFS40 contains 15% (v/v) EG and 15% (v/v) dimethyl sulfoxide (DMSO), 20% (v/v) EG and 20% (v/v) DMSO], equilibrium time during vitrification (0.5-2.5 min) and vitrification protocols [one-step straw, two-step straw and open-pulled straw (OPS)] on in vivo development of vitrified Boer goat morulae and blastocysts after embryo transfer. In the one-step straw method, the lambing rates of vitrified embryos in EFS30 (37.5%), EFS40 (40.5%) or EDFS30 (38.2%) group were similar to that of fresh embryos (57.5%) and conventional freezing method (46.7%) when the equilibrium time was 2 min. In the two-step straw method, the highest lambing rate was obtained when embryos were pretreated with 10% EG for 5 min and then exposed to EFS40 for 2 min (51.4%), showing similar lambing rates compared with fresh embryos (56.1%) or the embryos cryopreserved by conventional freezing method (45.2%). In the OPS method, the lambing rate in EFS40, EDFS30 or EDFS40 groups were similar to that (57.1%) of fresh embryos, or to that (46.0%) of embryos cryopreserved by conventional freezing method. The highest lambing rate (51.4%) of the group of OPS was obtained when the embryos were vitrified with EDFS30. In conclusion, either the two-step straw method in which embryos were pretreated in 10% EG for 5 min and then exposed to EFS40 for 2 min, or the OPS method in which embryos were pretreated in 10% EG + 10% DMSO for 30 s and then exposed to EDFS30 for 25 s was a simple and efficient method for the vitrification of Boer goat morulae and blastocysts. 相似文献
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转基因兔胚胎玻璃化冷冻保存的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
在25℃条件下,将兔体外受精精子载体转基因兔桑椹胚置于含有40%乙二醇、18%Ficol、0.3mol蔗糖的mPBS溶液(EFS40)中平衡2分钟,然后直接投入液氮,成功地进行了玻璃化冷冻保存。解冻后桑椹胚发育至囊胚和孵化囊胚的比例分别为65.81%和39.24%,与未经冷冻的鲜胚发育比例(71.05%和43.42%)相比,没有明显的差异。78枚经玻璃化冷冻和解冻的桑椹胚移植给5只受体,其中2只妊娠,共产下8只活仔兔。 相似文献
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哺乳动物卵母细胞和胚胎的超低温冷冻保存技术,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等生物技术不可缺少的部[1].Rall和Fahy于1985年首次报道了用玻璃化方法来冷冻保存小鼠胚胎,这种方法不仅大大简化了冷冻过程,而且减少了由于细胞冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤,提高了冷冻效率[2]. 相似文献