转基因作物筛查用阳性质粒分子的构建及应用研究

通过分析全球商业化种植的转基因作物分子特征,选取常用的调控元件启动子CaMV35S、FMV35S和nos,终止子NOS、T-35S、g73′和E93′,标记基因bar、NPTII、hptII、pmi作为筛查靶标序列,通过重组PCR技术将这些元件克隆到双元载体pBI121上,构建成包含11个转基因元件的通用阳性质粒分子pBI121-ELEMENTS。质粒序列信息已提交至GenBank并获得序列号HM047294。该质粒分子对目前国内外批准的5类主要转基因作物（大豆、油菜、玉米、棉花和水稻）理论筛查覆盖率达到91.5%,对我国批准进口的27种转基因作物的理论筛查覆盖率达100%。以pBI121-ELEMENTS为阳性对照,筛查7个转基因品系,结果显示该分子能够有效用于转基因作物定性筛查。     

粉丝类产品中转基因成分的检测

本实验采用改良的简易CTAB法从深加工产品粉丝中获得高纯度和高浓度的DNA.以CaMV358、FMV35S、nos、nptⅡ、pat、bar 6个外源基因作为筛选基因,优化反应条件和反应参数,建立了粉丝类产品中转基因成分的实时荧光PCR检测方法.该方法灵敏、特异,其推广应用对于促进粉丝类产品出口和加强转基因食品监管工作,具有重要意义.     

转基因产品中常见外源基因的克隆与转化

设计带不同酶切位点的引物,分别用PCR扩增植物内源rbcL基因和2种转基因产品中常见的外源基因-CP4-EPSPS基因和BAR基因,并分别与pGEM-TEasyVector连接,克隆到大肠杆菌DH5α中。提取克隆菌落的质粒,并进行酶切鉴定和序列测定。对3个基因的克隆质粒进行相应的双酶切,回收酶切产物,先后转化到受体载体pCAMBW中。最后获得的重组质粒的酶切和PCR鉴定结果表明3个基因已被成功转化到受体载体中。     

环介导等温扩增技术在转基因成分检测中的应用

随着全球转基因作物商业化种植面积持续增长,转基因成分检测作为转基因作物安全管理的重要技术支撑受到越来越多的关注,世界各国与地区不断致力于转基因成分检测技术的开发。环介导等温扩增（loop-mediatedisothermal amplification,LAMP）技术由于简单快速等特点,近年来在转基因检测领域备受青睐。本文对LAMP技术在转基因成分检测中的最新研究与应用及其发展前景加以综述。     

3种动物源性成分阳性质粒构建及检测研究

为准确、快速地进行食品中狐狸、驴、马成分的定量检测,选择适宜高效的聚合酶,本研究利用荧光定量聚合酶链式反应(real-time Fluorescent Quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)的方法构建狐狸、驴、马源性成分检测的3种阳性质粒分子,对3种质粒分子的方法特异性、灵敏度进行验证,并对实时荧光PCR反应体系中脱氧核糖核酸(Deoxyribose Nucleic Acid,DNA)聚合酶效果进行对比分析。研究结果发现,所选择的3种品牌的反应液和脱氧核糖核苷三磷酸(Deoxyribonucleoside Triphosphate,d NTP)均具有很高的灵敏度,检出限略微有差异,均可满足日常检验工作的需要。     

野油菜黄单胞菌产胶基因GumD克隆与重组质粒的构建

目的:建立野油菜黄单胞菌产胶基因GumD的克隆与重组质粒构建的方法。方法:以优化PCR实验条件扩增得到野油菜黄单胞菌产胶基因GumD片断,与抗药性质粒pMD18-T连接,获得重组质粒,并用CaCl2法转化JM109大肠杆菌细胞。结果:DNA测序结果表明,成功克隆产胶基因和构建重组质粒。结论:此方法可用于克隆野油菜黄单胞菌产胶基因和构建产胶基因重组质粒。     

关键介质组分和培养条件对重组巴斯德毕赤酵母表达内切几丁质酶的影响

目的:考察关键介质组分和培养条件对重组巴斯德毕赤酵母工程菌ZJGSU02表达内切几丁质酶的影响.方法:以内切几丁质酶活力为指标,采用单因素试验对影响其活力的关键因素——甲醇浓度、油酸、Tween-80和PTM1以及培养条件pH、pH体浓度和装液量进行初步优化.结果:关键介质组分甲醇、油酸、Tween-80和PTM1的体积分数分别为0.5%、0.05%、0.4%和0.6%,培养条件pH 6.0、菌体比例3∶1和装液量25 mL/100 mL时,重组菌培养72 h所得内切几丁质酶活力最高,即89.3 U/mL,比未优化条件下酶活力高3.26倍.结论:本研究结果可为通过酶法降解废弃几丁质制备高生理活性的几丁寡糖提供技术支持.     

多重PCR 检测转基因水稻的转基因成分

以水稻内源基因SPS、外源抗虫基因Cry1Ab、外源抗虫基因Cry1Ab/Ac、外源抗虫基因Btc、报告基因GUS、NOS终止子和CaMV35S启动子为检测对象,设计7对引物,通过优化PCR扩增体系中不同引物浓度的配比及退火温度,建立水稻转基因成分的七重PCR检测体系。结果表明：建立的七重PCR体系能有效检测出水稻及其他作物(大豆、玉米、棉花籽、菜籽粕)中的转基因成分,检测过程简便、特异性好。     

马铃薯及其制品中转基因成分的多重PCR检测

采用CTAB法提取15个马铃薯及其制品样品中的总DNA,内源PATA基因的PCR扩增结果均为阳性,表明已提取到DNA。应用根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(nos)终止子和大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶Ⅱ(nptⅡ)基因的二重PCR对样品进行转基因成分检测,结果均为阴性。将马铃薯DNA和阳性质粒pBI121混合作为PCR的反应模板,建立了内源PATA基因、花椰菜花叶病毒(Cauliflowermosaicvirus,CaMV)35S启动子、nos终止子和nptⅡ基因之间的多重PCR检测方法。多重PCR方法具有节约试剂、节省时间等特点,在转基因产品检测上的应用值得推广。     

改性环糊精及其应用

该文主要介绍环糊精改性意义,改性环糊精分类,改性方法及主要改性衍生物,并介绍改性环糊精在食品、医药、农业等领域应用前景。     

实时荧光PCR定量检测加工产品中转基因玉米Mon810成分

采用实时荧光PCR技术，建立了定量(性)鉴定检测加工产品中转基因玉米Mon810成分的方法。实验设计的可以扩增玉米自身基因和外源基因边界序列的引物和探针具有品种和品系特异性，特异性地检测出食品、饲料等加工产品中转基因玉米Mon810成分。某些检测样品不仅检出转基因玉米Mon810成分，还同时检出其它转基因玉米品系或其它转基因品种。本研究实验建立的转基因玉米Mon810品系鉴定检测方法，即可以用于加工产品中转基因成分的定量检测(检测低限为0．1％)，也可以用于定性检测，或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法。     

改性淀粉的制备与应用研究进展

综述了各种改性淀粉的概念、制备及研究现状,并对改性淀粉在多个领域的应用研究情况进行了介绍。