TNF—α对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖及ERK1／2活性的影响

目的 探讨TNF-α对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖及对ASMCs上ERK1/2 mRNA、p-ERK1/2表达水平的影响.方法 通过对哮喘模型大鼠ASMCs培养,分别以0.2μ/L、1.0μg/L、20μg/L TNF-α干预ASMCs 生长.采用流式细胞仪、MTT法检测ASMCs增殖情况,观察不同浓度TNF-α对ASMCs增殖的影响.RT-PCR检测ASMCs上ERK1/2 mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测磷酸化ERK1/2蛋白的表达及定位.结果哮喘组ASMCsS期比例、A值、ERK1/2 mRNA、p-ERK1/2蛋白的表达量分别为(34.45±2.08)%、(0.550±0.010)、(0.995±0.118)、(130.77±4.16),与对照组(11.17±0.96)%、(0.292±0.008)、(0.576±0.098)、(163.82±1.38)比较均显著增高(均P<0.01).各TNF-α干预组ASMCs的S期比例、A值、ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2蛋白表达量与哮喘组比较均显著降低(均P<0.01),0.2μg/L和1.0 μg/L TNF-α组p-ERK1/2蛋白表达量高于对照组(P<0.01),20μg/L TNF-α组p-ERK1/2蛋白表达量与对照组比较无差异(P>0.05).结论 与正常鼠相比,慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖明显,处于S期的细胞比例明显增高.经TNF-α干预后,慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞处于S期的细胞比例减少,增殖减弱,TNF-α可能抑制慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖.TNF-α可下调慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞上ERK1/2 mRNA及p-ERK1/2表达,TNF-α可能通过抑制ERK信号转导通道的活性对气道平滑肌细胞的增殖进行调控.     

p-ERK1／2及ERK2mRNA在哮喘大鼠气道中的表达变化

目的探讨细胞外信号调节激酶在哮喘大鼠气道中表达变化及其对气道平滑肌细胞增殖的影响。观察细胞外信号调节激酶是否参与了哮喘气道重构这一病理过程。方法18只6周龄雄性wistar大鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松干预组各6只。以腹腔注射10％卵蛋白和1％卵蛋白雾化吸入复制慢性哮喘模型。干预组在每次激发前给予地塞米松干预。用免疫组化与原位杂交法检测p-ERK1／2及ERK2mRNA在不同大鼠肺组织的表达程度，采用图像分析系统进行图象分析。结果（1）哮喘模型组气道壁面积和平滑肌厚度较对照组和干预组显著增加（P〈0．05）。（2）哮喘组p-ERK1／2及ERK2mRNA在大鼠肺组织的表达程度较对照组和干预组显著增加（P〈0．05）。（3）直线相关性分析显示，哮喘组气道壁面积和平滑肌厚度与大鼠肺组织中p-ERK1／2表达水平呈正相关（分别为r=0．858，r=0．848，P均〈0．05），哮喘组气道壁面积和平滑肌厚度与大鼠肺组织中ERK2mRNA表达水平呈正相关，（分别为r=0．918，r=0．860，P均〈0．05）。结论哮喘大鼠肺组织p-ERK1／2及ERK2mRNA表达上调，并与气道重构密切相关，该结果提示细胞外信号调节激酶可能参与了气道重构中平滑肌的增殖过程。     

细胞外信号调节蛋白激酶对哮喘大鼠气道平滑肌细胞周期的影响

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通道调控支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖中的细胞周期机制。方法30只Wistar大鼠随机分为正常组和哮喘组,哮喘组采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型。取两组大鼠叶支气管ASMC进行原代培养,采用ERK激动剂表皮生长因子(EGF)和抑制剂PD98059干预哮喘组ASMC。用免疫组织化学法检测ASMC细胞周期蛋白CyclinD1和CDK2的表达;Western免疫印迹检测ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白的表达,计算ERK活化率。结果哮喘组大鼠ASMC中CyclinD1、CDK2的表达和ERK活化率[76.15±4.88、92.30±7.95和(82.37±5.78)%]均较正常组[54.17±6.11、61.04±4.09和(49.91±3.26)%]显著升高(P均0.05)。经EGF处理后上述指标进一步升高[119.28±8.14、134.77±9.26和(91.57±5.32)%,P均0.05],经PD98059处理后显著降低[58.78±4.60、69.15±5.83和(54.01±4.12)%,P均0.05]。结论哮喘大鼠ASMC增殖活性增强。ERK1/2可通过诱导ASMC中CyclinD1和CDK2蛋白高表达,使细胞从G1期向S期发展,促进细胞增殖。     

PAI-1对气道平滑肌增殖和ERK表达的影响

目的探讨纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）对气道平滑肌增殖的调控作用,以及对细胞外调节蛋白激酶（ERK）表达的影响。方法体外培养小鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）并分为7 组：空白对照组、PAI-15 μg/L组、PAI-1 10 μg/L组、PAI-1 20 μg/L 组、PAI-1 40 μg/L组、PAI-1 80 μg/L 组、PAI-1 100 μg/L组。放入37℃培养箱分别培养12、24 和48 h,采用CCK-8 检测ASMCs的A 值,计算增殖率。以增殖率最高的实验组的浓度和作用时间作为PAI-1 作用最适浓度和最适作用时间,进一步分6 组：A组（空白对照）;B 组（PAI-1 20 μg/L）;C 组（PAI-1 40 μg/L）;D 组（PAI-1 80 μg/L）;E 组（PAI-1 100 μg/L）;F 组（PAI-1 最适浓度+ERK 通道抑制剂PD98059 10 μmol/L）,用CCK-8 检测ASMCs 的增殖,Western blot检测ERK 蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测ERK mRNA 的表达。结果5～100 μg/L PAI-1 作用ASMCs 12、24 和48 h后细胞增殖率结果显示,在相同浓度下,不同时间各组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,以48 h时ASMCs增殖率最高;在相同时间下,不同浓度各组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,80μg/L PAI-1的ASMCs增殖率最高;故选取48 h为最适作用时间,80μg/L为最适浓度进行后续实验。再次分组的实验结果表明,B、C、D、E组的ERK 磷酸化水平和ERK mRNA 的相对表达量与A 组比较,差异有统计学意义P <0.05）,B、C、D、E组增高;B、C、D、E组两两比较结果显示,除B 组与E 组比较,差异无统计学意义（P >0.05）外,其余各组两两 比较,差异有统计学意义（P <0.05）,当PAI-1 浓度波动于20～80 μg/L 时,ERK 磷酸化水平和ERK mRNA相对表达量随浓度升高而增高,>80 μg/L 后则不再增高;加入PD98059 的F 组与D 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,ERK 磷酸化水平和ERK mRNA表达降低。结论外源性PAI-1 可以通过促进ERK 通路的表达,进而促进ASMCs 的增殖。     

香烟提取物对气道平滑肌细胞增殖中ERKs及NF-κB表达的影响

目的探讨香烟提取物（cigarette smoke extract，CSE）对气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells，ASMCs）增殖中细胞外信号调节蛋白激酶（ERKs）及核因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法体外培养Wistar大鼠的气道平滑肌细胞，给予不同浓度的CSE刺激24 h后，MTT法检测细胞增殖情况，采用Western blot方法检测ERKs、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（p-ERK）和NF-κB p65的表达。结果1/32 CSE组、1/16 CSE组及1/8 CSE组的细胞增殖和ERKs、p-ERK、NF-κB p65的表达均逐渐增高，且与对照组相比差异有显著性意义（P〈0.05，n=4）。NF-κB p65的表达水平与p-ERK的表达水平呈明显正相关（r=0.858，P〈0.05，n=4）。结论一定浓度的CSE作用于平滑肌细胞后引起ERKs及ERKs磷酸化的增加，磷酸化激活后的ERKs可能与NF-κB的活化和ASMCs的增殖有关。     

ERK活化对哮喘大鼠气道重塑及CyclinD1表达的影响

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)对哮喘大鼠气道重塑及CyclinD1表达的作用。方法原代培养大鼠的平滑肌细胞(ASMCs),给予ERK激动剂表皮生长因子EGF和抑制剂PD98059干预ASMCs生长,依处理方式不同分为5组:(1)正常对照组(2)哮喘对照组;(3)E组:EGF20 ng/mL;(4)P+E组,PD98059 10μmol/L1 h后添加EGF 20 ng/mL;(5)PD组,PD98059 10μmol/L。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖能力,流式细胞术(FCM)测定细胞周期和cyclinD1的蛋白含量,RT-PCR方法检测cyclinD1mRNA表达水平。结果(1)与哮喘对照组比较,E组ASMCs S+G2/M期比例、吸光度A值、cyclinD1蛋白阳性表达率和cyclinD1 mRNA的A值均显著升高,PD组均显著降低(P0.05)。P+E组与哮喘对照在此4项指标上比较无明显差异。(2)哮喘(对照组、E组、PD组和P+E组)组与正常对照组,其S+G2/M期比例、吸光度A值、cyclinD1蛋白和cyclinD1 mRNA的表达均显著增高(P0.05)。结论ERK活性促进哮喘大鼠ASMCs的增殖,增加cyclinD1在哮喘平滑肌细胞中的表达,导致气道重塑的形成,提示ERK可能对CyclinD1的表达具有调节作用。     

PDGF对哮喘大鼠气道平滑肌细胞中ERK通路的影响研究

目的：研究血小板源性生长因子（PDGF）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）中ERK信号通路的调控作用。方法建立哮喘大鼠模型,原代分离培养ASMC,设未干预组（A组）、ERK阻断剂组（B组）、PDGF组（C组）和PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。A组不加干预;B组又分为B1、B2、B3、B4组,分别加入浓度为0.1、1、5、10μmol/L的ERK阻断剂U0126;C组又分为C1、C2、C3、C4组,分别加入浓度为1、10、25、50μg/L的PDGF同二聚体PDGF- BB;D组加入10μmol/L的U0126和50μg/L的PDGF- BB。以RT- PCR法检测各组ERK1和TGF-β1的mRNA表达,免疫组化法检测A、B4、C4和D组中以上蛋白的表达。结果 RT- PCR提示B1、B2、B3、B4组ERK1 mRNA表达均显著低于A组（均P＜0.01）,U0126以浓度依赖的方式抑制PDGF诱导的ASMC中ERK的活化,C1、C2、C3、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（均P＜0.01）,ERK1 mRNA的表达与PDGF- BB存在明显的浓度依赖关系,D组与A组比较无统计学差异（P＞0.05）。免疫组化提示B4组ASMC中ERK1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）;B4组TGF-β1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组,同时C4组显著高于B4组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）。结论 PDGF可剂量依赖性激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,同时伴随TGF-β1信号通路的活化。ERK通路参与了ASMC增殖的细胞内信号转导过程,PDGF可能经ERK环节促进TGF-β1通路活化。     

IL-19对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨IL-19对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的作用。方法通过对大鼠进行雾化卵清蛋白,制备哮喘模型大鼠。提取哮喘大鼠ASMCs进行培养,分别以1μg/L、10μg/L、100μg/L IL-19干预ASMCs生长。采用流式细胞仪、MTT法检测ASMCs增殖情况,观察不同浓度IL-19对ASMCs增殖的影响。结果与正常鼠相比,慢性哮喘大鼠ASMCs增殖明显,处于S期的细胞比例明显增高。经10μg/L、100μg/L IL-19干预后,慢性哮喘大鼠ASMCs处于S期的细胞比例减少,增殖亦减弱。且两组间比较有明显差异。而经1μg/L IL-19干预后,慢性哮喘大鼠ASMCs处于S期的细胞比例及增殖均无明显变化。结论一定浓度的IL-19可能抑制慢性哮喘大鼠ASMCs的增殖。     

气阴双补法对缓解期哮喘大鼠气道重塑及ERK信号分子表达的作用研究

目的：研究气阴双补法中药对缓解期哮喘大鼠气道重塑的影响及细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）信号分子的表达差异。方法：60只体重180～200g健康雄性SD大鼠,随机分成正常组(A)、模型组(B)、中药低剂量组(C)、中药中剂量组(D)、中药高剂量组(E)及地塞米松组 (F),每组8只。用卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘气道重塑大鼠模型,肺组织病理图像分析气道重塑,RT-PCR检测 ERKl／[有的没有斜杠,请全文统一]2mRNA在气道中的表达,免疫印迹检测磷酸化ERK（P- ERK）蛋白在气道平滑肌中的表达。结果：哮喘模型组肺组织切片平滑肌标化面积WAm/Pbm(17.34±0.63[单位])μm2／μm、内管壁标化面积WAi/Pbm(42.35±3.31)μm2／μm显著高于正常组WAm/Pbm(7.63±0.32)μm2／μm、WAi/Pbm(26.73±1.50)μm2／μm（P<0.05）,中药低剂量组WAm/Pbm(13.68±0.52)μm2／μm、WAi/Pbm(37.53±2.57)μm2／μm,中剂量组WAm/Pbm(10.75±0.72)μm2／μm、WAi/Pbm(33.74±1.21)μm2／μm,中药高剂量组WAm/Pbm(9.33±0.92)μm2／μm、WAi/Pbm(30.62±1.34)μm2／μm较模型组显著降低（P<0.05）,但仍高于正常组（P<0.05）;哮喘模型组ERK1mRNA（4.26±0.52[单位（没有单位的）]）、ERK2mRNA（3.54±0.37）、P- ERK（3.288±0.641）表达[单位（没有单位的）]均显著高于正常组ERK1mRNA（1.02±0.11）、ERK2mRNA（0.96±0.13）、P- ERK（0.703±0.338）（P<0.05）;中药低剂量组ERK1mRNA（3.23±0.45）、ERK2mRNA（2.72±0.21）,中剂量组ERK1mRNA（1.65±0.26）、ERK2mRNA（1.36±0.14）、P- ERK（2.172±0.221）,中药高剂量组ERK1mRNA（2.37±0.23）、ERK2mRNA（2.03±0.12）、P- ERK（1.127±0.631）均明显降低（P<0.05）,但仍高于正常组（P<0.05）。结论：气阴双补法中药改善缓解期哮喘大鼠气道重塑,抑制 ERKl／2mRNA及P- ERK蛋白在气道中的表达。     

香烟提取物对气道平滑肌细胞增殖中RKs及NF-κB表达的影响

目的 探讨香烟提取物(cigarette smoke extract,CSE)对气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖中细胞外信号调节蛋白激酶(ERKs)及核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 体外培养Wistar大鼠的气道平滑肌细胞,给予不同浓度的CSE刺激24 h后,MTT法检测细胞增殖情况,采用Western blot方法检测ERKs、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK)和NF-κB p65的表达.结果 1/32 CSE组、1/16 CSE组及1/8 CSE组的细胞增殖和ERKs、 p-ERK、NF-κB p65的表达均逐渐增高,且与对照组相比差异有显著性意义 (P《0.05, n＝4).NF-κB p65的表达水平与p-ERK的表达水平呈明显正相关(r=0.858, P《0.05,n＝4).结论 一定浓度的CSE作用于平滑肌细胞后引起ERKs及ERKs磷酸化的增加,磷酸化激活后的ERKs可能与NF-κB的活化和ASMCs的增殖有关.     

射麻止喘汤对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞增殖的影响

【目的】观察射麻止喘汤对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖的影响。【方法】选用SPF级SD大鼠分为哮喘组和正常对照组,哮喘组采用卵清蛋白(OVA)致敏并激发方法复制哮喘模型,造模成功后分别取各组支气管平滑肌进行细胞培养,倒置显微镜观察形态并经免疫荧光染色鉴定;给予大鼠灌胃高、中、低剂量的射麻止喘汤(剂量分别为64、32、6.4 g.kg-1.d-1)制备含药血清;取2～5代ASMC分别给予射麻止喘汤高、中、低剂量含药血清,蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波醇-12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA,10 nmol/L),PKC抑制剂马来酰亚胺甲磺酸盐(Ro-31-8220,5μmol/L)干预;另设空白组(不给予任何药物血清干预)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组ASMC增殖(D值)。【结果】免疫荧光染色鉴定结果显示所培养的细胞为平滑肌细胞。正常大鼠PMA组ASMC的D值较空白组显著增高(P0.05),Ro-31-8220组、射麻止喘汤各剂量组D值与空白组比较差异均无显著性意义(P0.05)。哮喘模型大鼠PMA组ASMC的D值较空白组显著增加(P0.05),Ro-31-8220组、射麻止喘汤各剂量组D值均较空白组显著降低(P0.05),但射麻止喘汤各剂量组与Ro-31-8220组比较差异无显著性意义(P0.05)。【结论】射麻止喘汤治疗支气管哮喘的作用可能与其能抑制ASMC增殖,影响哮喘的气道重塑过程有关。     

核因子κB在支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B)在支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用。方法采用卵清蛋白(OVA)致敏OVA激发的方法制备大鼠哮喘模型。将18只Wistar大鼠分为:①哮喘组;②吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组:OVA激发前腹腔注射NFκ-B的特异性抑制剂PDTC(100 mg/kg);③对照组:注射及吸入等量生理盐水。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光技术等方法观察ASMCs增殖;免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NFκ-B活性;Western blot检测NFκ-B的抑制蛋白I-κBα表达。结果①PDTC组ASMCs S期比例、A值、PCNA阳性表达率分别为(11.77±3.37)%、(0.283±0.034)、(27.9±6.7)%,与哮喘组[(22.17±3.64)%、(0.469±0.050)、(77.3±8.4)%]比较均显著降低(均P<0.05),与对照组[(12.08±2.86)%、(0.302±0.059)、(25.3±3.8)%]比较差异均无显著性意义(均P>0.05)。②PDTC组ASMCs NFκ-B活性与哮喘组比较显著降低(P<0.05),与对照组比较差异无显著性意义。结论NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖,抑制NF-κB活性能降低哮喘大鼠ASMCs增殖。     

P27KiP-1蛋白对支气管哮喘大鼠气道平滑肌增生的影响

目的 探讨P27Kip-1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增生及气道重塑的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠30只,随机分成对照组(C)、哮喘4周组(A1)、哮喘6周组(A2)每组10只.用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立大鼠哮喘模型,末次激发后24h内测气道反应性和观察气道壁炎性细胞的浸润情况,图像分析软件测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度;免疫组化法检测增生细胞核抗原(PCNA)及P27Kip-1表达.结果 哮喘4周和6周组P27Kip-1蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05),且6周组低于4周组(P＜0.05);哮喘4周和6周组PCNA表达、支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度和气道反应性均显著高于对照组(P＜0.01),且6周组高于4周组(P＜0.01).结论 P27Kip-1可抑制气道平滑肌细胞增生进而影响气道重构与气道高反应性.     

哮喘大鼠气道平滑肌细胞caveolae的变化及罗红霉素的调控作用

目的观察支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气道平滑肌细胞微囊（caveolae）及微囊蛋白一1（caveolin一1）的表达变化,并探讨罗红霉素对其表达的影响。方法SPF级雄性SD大鼠24只,采用数学表法随机分为对照组（c组）、哮喘组（A组）、罗红霉素组（R组）,每组8只。以卵白蛋白致敏和激发的方法复制大鼠哮喘气道重塑模型,图像分析软件测定气道壁厚度（Wat／Pbm）及气道平滑肌层厚度（Wam／Pbm）;透射电镜观察eaveolae超微结构;Westernblot法测定caveolin—l的表达变化。结果（1）A组大鼠Wat／Pbm、Wam／Pbm大于C组（P〈0．01）;R组大鼠Wat／Pbm、Wam／Pbm小于A组（P〈0．01）,大于C组（P〈0．01）;（2）透射电镜显示c组ASMC胞膜及胞质eaveolae含量丰富、形态多样,A组caveolae含量少、结构单一,R组eaveolae含量明屁减少,但较A组多;（3）Westernblot法显示c组caveolin一1高表达,A组表达明显低于c组（P〈0．01）;R组caveolin-1表达显著高于A组（P〈0．01）,但较c组表达减少;（4）caveolin-1表达与Wam／Pbm呈负相关（r=-0．928,P〈0．01）。结论哮喘大鼠气道平滑肌细胞eaveolae结构明显减少,caveolin-1表达减少,提示caveolae缺乏与哮喘气道重塑有密切关系,罗红霉素可能通过caveolae的影响而抑制哮喘气道重塑。     

纤维粘连蛋白在哮喘气道平滑肌细胞免疫功能调控中的作用

目的探讨细胞外基质(extracellular matrix,ECM)纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)在哮喘气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC)免疫功能调控机制中的作用,同时建立一种优化培养ASMC的方法。方法利用组织贴块法和消化酶法原代培养大鼠ASMC,并用细胞形态学和免疫组化SABC染色方法鉴定;将正常和哮喘大鼠ASMC种植在涂覆有FN的和空白(无FN涂覆)的玻片上,免疫组化方法检测爬片中粘着斑蛋白的表达;ELISA方法检测各组培养上清中调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(regulated on activated normal T expressed and secreted,RANTES)蛋白水平。结果①原代培养的细胞呈典型的"谷峰状"生长,胞质内特异性的平滑肌肌动蛋白阳性表达,符合平滑肌细胞的形态学特征和生物学特性。②FN作用的哮喘大鼠ASMC粘着斑蛋白的表达明显增加,但未经FN作用的哮喘大鼠ASMC及经(或未经)FN作用的正常大鼠ASMC粘着斑蛋白表达均呈阴性表现。③FN处理组细胞培养上清中的RANTES蛋白水平较未经FN处理组显著增加(P<0.05),哮喘组培养上清中的RANTES蛋白水平较正常组明显增加(P<0.05)。结论 FN可能通过上调哮喘大鼠ASMC粘着斑蛋白的表达、促进RANTES的分泌而参与ASMC的免疫功能调控机制。     

射麻止喘液对哮喘大鼠气道平滑肌细胞作用研究

目的：探讨哮喘大鼠模型建立及其气道平滑肌细胞培养方法,了解其生长特性,通过研究射麻止喘液中药血清对气道平滑肌细胞增殖效应,为研究哮喘病预防及治疗提供理论及实验支持。方法：制作慢性哮喘大鼠模型,用酶联法培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,倒置相差显微镜观察其生长情况,MTT检测生长曲线。结果：以酶联法培养7天可见细胞贴壁,14天左右融合90%左右。传代后细胞＂谷峰＂生长明显。结论：本实验提供了一种常见简单的哮喘模型,培养的细胞为平滑肌细胞,射麻止喘液血清具有抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖作用,低剂量药物血清组相对于中高剂量组抑制作用更强。     

射麻止喘液对哮喘大鼠气道平滑肌细胞作用研究

目的:探讨哮喘大鼠模型建立及其气道平滑肌细胞培养方法,了解其生长特性,通过研究射麻止喘液中药血清对气道平滑肌细胞增殖效应,为研究哮喘病预防及治疗提供理论及实验支持。方法:制作慢性哮喘大鼠模型,用酶联法培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,倒置相差显微镜观察其生长情况,MTT检测生长曲线。结果:以酶联法培养7天可见细胞贴壁,14天左右融合90%左右。传代后细胞"谷峰"生长明显。结论:本实验提供了一种常见简单的哮喘模型,培养的细胞为平滑肌细胞,射麻止喘液血清具有抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖作用,低剂量药物血清组相对于中高剂量组抑制作用更强。     

三子养亲汤对哮喘小鼠支气管平滑肌细胞CysLTR1mRNA表达的影响

目的:观察三子养亲汤对哮喘小鼠支气管平滑肌细胞Cys LTR1mRNA表达的影响。方法:培养小鼠平滑肌细胞至3~5代,进行分组。空白组为正常小鼠平滑肌,试验组分别为三子养亲汤高、中、低剂量组,孟鲁司特钠组,哮喘模型组。哮喘模型组为造模成功的哮喘小鼠支气管平滑肌细胞,各药物组分别取不同药量灌胃下的小鼠支气管平滑肌细胞,药量分别为10.8 g/kg·d、5.4 g/kg·d、2.7 g/kg·d的三子养亲汤中药汤剂,孟鲁司特钠0.004 g/kg·d。以1∶9的比例配置含药血清及培养基,加入细胞培养液,空白组用常规培养基。培养结束后,取上清液,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR法)进行Cys LTR1mRNA的检测,每组均检测7孔。比较各组小鼠支气管平滑肌细胞Cys LTR1mRNA表达。结果:哮喘模型组Cys LTR1mRNA表达明显升高,中药高剂量组Cys LTR1mRNA表达下降显著,与哮喘模型组相比,具有显著的统计学差异(P0.01),中药中剂量组、孟鲁司特组与哮喘模型组相比,具有统计学差异(P0.05),"三子养亲汤"低剂量组与哮喘模型组相比,Cys LTR1mRNA表达下降不显著(P0.05),无统计学差异。结论:Cys LTR1为哮喘的重要炎性通路,抑制Cys LTR1炎性通路是三子养亲汤的作用机制之一。