小鼠全脑缺血模型海马区Bcl-2和Bax的表达

背景：由C57black／6小鼠制成的全脑缺血模型在实验性脑缺血的研究中使用在明显增加，目前需要对这种模型的神经元损伤死亡在分子生物学方面的改变进行全面深入的研究，此项研究正是观察两种与缺血神经元死亡密切相关基因的表达水平。目的：在小鼠全脑缺血模型上观察缺血后海马区Bcl-2和Bax的表达，在蛋白分子表达水平对该模型进行研究，为这种模型在今后脑缺血研究中的应用提供实验依据。设计：以实验动物为研究对象，随机对照前瞻性研究。单位：一所大学生理学和病理解剖学教研室。对象：实验于2002-11／2003-05在首都医科大学生理系完成。选择C57black／6小鼠12只，随机分为假手术组和对照组，每组6只。干预：双侧颈总动脉夹闭15min诱发全脑缺血模型，24h后取脑组织。全脑缺血后应用免疫组织化学染色，观察海马Bcl-2和Bax的表达水平。主要观察指标：海马Bcl-2和Bax的表达水平。结果：缺血组海马CA1区Bax阳性反应神经元数目为(57．3&;#177;2．9个)个，假手术组Bax阳性细胞数目为(17．2&;#177;1．3)个，两组比较，差异有显著性意义(t=30．91，P&;lt;0．05)。缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性反应神经元数目为(43．9&;#177;1．1)个，假手术组Bcl．2阳性细胞数目为(28．6&;#177;1．7)个，两组比较，差异有显著性意义(t=18．51，P&;lt;0．05)。阳性着色区灰度值测定结果显示：缺血组海马CA1区Bax阳性细胞染色灰度值为90．45&;#177;5．23，假手术组Bax阳性细胞染色灰度值为：168．39&;#177;4．55，两组比较，差异有显著性意义(t=27．54，P&;lt;0．05)；缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性细胞染色灰度值为113．10&;#177;4．20，假手术组Bcl-2阳性细胞染色灰度值为157．25&;#177;7．68，两组比较，差异有显著性意义(t=12．35，P&;lt;0．05)。结论：小鼠全脑缺血模型在缺血24h后，Bcl-2和Bax表达发生改变，Bax表达增加在CA1区，Bcl-2表达增加在CA3区和齿状回。     

亚低温对缺血再灌注大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax表达动态变化的影响

目的:研究脑缺血再灌注后全身亚低温的脑保护作用及其对Bcl-2和Bax表达的动态影响,探讨亚低温脑保护作用的机制。方法:实验于2002-01/12在江苏省麻醉医学研究所(省级重点实验室)完成。实验动物选择126只SD雄性大鼠随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组。采用Pulsinelli四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,即刻全身亚低温4h,分别在再灌注后4,8,24,48,72,96h,7d,7个时间点取脑标本,进行Bcl-2和Bax免疫组织化学及苏木精-伊红染色。结果:与常温组相比,全身亚低温组海马CA1区死亡细胞数明显减少[常温比亚低温24h:(195±18)比(214±20)个/mm,P<0.05;48h:(185±17)比(215±21)个/mm,P<0.01;72h:(130±20)比(200±17)个/mm,P<0.01)];Bcl-2蛋白免疫反应强度峰值增高,持续时间延长[灰度值:常温比低温:24h(40±8比57±8,P<0.01);48h(42±6比55±8,P<0.01);72h(38±4比41±6,P<0.01)]。Bax蛋白免疫反应强度峰值减低,持续时间缩短[灰度值:常温比低温24h(32±4比24±5,P<0.05);48h(30±7比24±6,P<0.05);72h(26±4比22±5,P<0.05)]。结论:全身亚低温对缺血性锥体细胞损害有较好的保护作用。可增强具有抗凋亡的Bcl-2蛋白的表达,延长其表达持续时间,而减弱具有促凋亡的Bax表达,同时缩短其表达持续时间,此可     

高压氧对脑缺血再灌注海马神经元Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 观察高压氧(HB0)作用下脑缺血再灌注海马CA，区神经元Bcl-2和Bax蛋白表达的变化情况，进一步研讨高压氧治疗脑缺血再灌注损伤、减轻神经元凋亡从而发挥保护作用的机制。方法 沙土鼠20只，采用随机数字法将实验动物分为正常对照组、缺血组、0．15MPaHBO治疗组、0．25MPaHBO治疗组，0．25MPa压力空气(hyperbaric air，HBA)对照组，每组4只动物。采用“双侧颈总动脉阻断法”前脑缺血模型，缺血20min后再灌注3d，并用0．15MPa和0．25MPa压力的高压氧治疗(60min／d，连续3d)后，应用免疫组化LSAB方法，观察高压氧对海马CA1区神经元凋亡相关基因Bcl-2和Bax的蛋白表达的影响。结果 沙土鼠脑缺血再灌注3d组海马CA1区大量神经元表达Bax蛋白，并且神经元发生凋亡，未见神经元表达Bcl-2蛋白；高压氧治疗组则大量神经元表达Bcl-2蛋白。并且0．25MPa高压氧治疗组比0．15MPa高压氧治疗组变化更显，而各组表达Bax蛋白的神经元数目无明显变化。但高压氧治疗组Bax蛋白阳性的神经元形态正常。结论 HBO暴露可诱导大量神经元表达Bcl-2蛋白，对Bax蛋白表达则无明显作用，使Bcl-2和Bax蛋白表达的比值增高，从而起到保护神经元的作用，这可视为HBO治疗脑缺血性损伤减少神经元凋亡的机制之一。     

亚低温对缺血再灌注大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax表达动态变化的影响

目的：研究脑缺血再灌注后全身亚低温的脑保护作用及其对Bcl-2和Bax表达的动态影响，探讨亚低温脑保护作用的机制。方法：实验于2002-01／12在江苏省麻醉医学研究所(省级重点实验室)完成。实验动物选择126只SD雄性大鼠随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组。采用Pulsinelli四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型，即刻全身亚低温4h，分别在再灌注后4，8，24，48，72，96h，7d，7个时间点取脑标本，进行Bcl-2和Bax免疫组织化学及苏木精-伊红染色。结果：与常温组相比，全身亚低温组海马CA1区死亡细胞数明显减少[常温比亚低温24h：(195&;#177;18)比(214&;#177;20)个／mm，P&;lt;0．05；48h：(185&;#177;17)比(215&;#177;21)个／min．P&;lt;0．01；72h：(130&;#177;20)比(200&;#177;17)个／mm，P&;lt;0．01)]；Bcl-2蛋白免疫反应强度峰值增高，持续时间延长[灰度值：常温比低温：24h(40&;#177;8比57&;#177;8，P&;lt;0．01)；48h(42&;#177;6比55&;#177;8，P&;lt;0．01)；72h(38&;#177;4比41&;#177;6，P&;lt;0．01)]。Bax蛋白免疫反应强度峰值减低，持续时间缩短[灰度值：常温比低温24h(32&;#177;4比24&;#177;5．P&;lt;0．05)；48h(30&;#177;7比24&;#177;6，P&;lt;0．05)；72h(26&;#177;4比22&;#177;5，P&;lt;0．05)]。结论：全身亚低温对缺血性锥体细胞损害有较好的保护作用。可增强具有抗凋亡的Bcl-2蛋白的表达，延长其表达持续时间，而减弱具有促凋亡的Bax表达，同时缩短其表达持续时间，此可能是亚低温对缺血性脑组织损害产生保护作用的分子机制之一。     

全脑缺血再灌注大鼠不同时相海马CA1区Bcl-2、Bcl-xL及Bax蛋白的表达

目的：通过系统观察大鼠全脑缺血－再灌注后不同时相海马CA1区神经元Bcl-2、Bcl-xL及Bax蛋白表达的改变,探讨该区神经元短暂脑缺血后产生选择性敏感的机制。方法：通过四血管闭塞法建立大鼠全脑缺血－再灌注模型,利用免疫组织化学方法观察再灌注后1、3、5日海马CA1区神经元Bcl-2、Bcl-xL及Bax蛋白表达的情况;并同时与海马CA1区神经元的病理形态学改变进行对比。结果：全脑缺血－再灌注后1日,海马CA1区Bcl-2和Bcl-xL蛋白呈阴性表达,Bax蛋白呈弱阳性表达;海马CA1区神经元未见明显形态学改变。全脑缺血－再灌注后3日,海马CA1区Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达仍为阴性,而Bax蛋白则呈明显阳性表达;海马CA1区可见部分神经元死亡;全脑缺血－再灌注后5日,海马CA1区Bcl-2、Bcl-xL及Bax蛋白则呈阴性表达;海马CA1区神经元大部分死亡。结论：全脑缺血－再灌注后海马CA1区神经元Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达的抑制可能是其对短暂脑缺血产生选择性敏感的机制之一。     

地佐环平对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响

目的:观察N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂MK-801对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响。方法:新生6～9dSD大鼠断头取脑,制备海马脑片,将各孔脑片单纯随机分为3组,分别为正常对照组(HOTC)、单纯缺氧缺糖组(OGD)和预加MK-801再缺氧缺糖组(MK-801+OGD)。海马脑片进行缺氧缺糖培养,最后进行免疫组织化学染色和图像分析处理。结果:各组海马脑片CA1区均有不同程度Bcl-2,Bax蛋白表达。OGD组Bcl-2蛋白的表达(15.7±1.1)弱于HOTC组(18.5±0.9)和MK-801+OGD组(18.0±0.9),差异均有显著性意义(F=6.495,P<0.05);OGD组Bax蛋白的表达(13.1±2.5)强于HOTC组(7.3±1.1)和MK-801组(8.7±1.1),其差异均有显著性意义(F=9.770,P<0.05)。同时,OGD组CA1区出现细胞缺失形成的空洞,其他两组与OGD组相比有所减少。结论:MK-801可增强缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达,并减轻该区锥体细胞损伤程度。     

全脑缺血再灌注小鼠额叶和海马c-fos基因的表达

目的：探讨c-fos基因表达在全脑缺血再灌注后不同时间的变化规律。方法：实验动物全部采用由白求恩医科大学实验动物中心提供的雄性昆明小鼠，6～7周龄，体质量25～28g。①动物分组：第1批：40只小鼠随机分为假手术组5只，脑缺血再灌注组35只，根据再灌注不同时间提取标本，分别为术后1h，1d，3d，7d，2周，4周，6周，每个时间点5只。第2批：40只小鼠用于反转录-聚合酶链反应，分组同上。②模型制备及检测方法：制备全脑缺血再灌注损伤模型，假手术组不阻断颈总动脉亦不放血。采用卒中指数对各组小鼠神经病学症状进行评价。于小鼠双侧颈总动脉阻断再灌注后1h，1d，3d，7d，2周，4周，6周取小鼠额叶皮质、海马区脑组织采用免疫组织化学染色、反转录-聚合酶链反应技术，对c-fos基因表达变化进行检测。结果：80只小鼠均进入结果分析，无脱落。①免疫组化检测c-fos基因表达产物Fos蛋白结果：假手术组Fos蛋白有较弱表达，免疫组化染色假手术组未见Fos蛋白阳性神经元；再灌注1h在额叶皮质与海马区即可见Fos蛋白表达升高，与假手术组差异显著，再灌注1dFos蛋白表达达最高峰，并持续至2周（P〈0．01），以后随时间延长逐渐下降，到6周达假手术组水平。②反转录聚合酶链反应检测c-fos表达结果：假手术组海马区有少量c-fos mRNA表达。再灌注1hc-fos mRNA转录水平显著升高，与假手术组差异有显著性意义（P〈0．01），至5周时仍呈现较高转录水平（P〈0．05），随后下降，至4周时达假手术组水平。结论：全脑缺血再灌注可诱导中枢神经系统c-fos基因的持续表达。     

全脑缺血再灌注小鼠额叶和海马c-fos基因的表达

目的:探讨c-fos基因表达在全脑缺血再灌注后不同时间的变化规律。方法:实验动物全部采用由白求恩医科大学实验动物中心提供的雄性昆明小鼠,6～7周龄,体质量25～28g。①动物分组:第1批:40只小鼠随机分为假手术组5只,脑缺血再灌注组35只,根据再灌注不同时间提取标本,分别为术后1h,1d,3d,7d,2周,4周,6周,每个时间点5只。第2批:40只小鼠用于反转录-聚合酶链反应,分组同上。②模型制备及检测方法:制备全脑缺血再灌注损伤模型,假手术组不阻断颈总动脉亦不放血。采用卒中指数对各组小鼠神经病学症状进行评价。于小鼠双侧颈总动脉阻断再灌注后1h,1d,3d,7d,2周,4周,6周取小鼠额叶皮质、海马区脑组织采用免疫组织化学染色、反转录-聚合酶链反应技术,对c-fos基因表达变化进行检测。结果:80只小鼠均进入结果分析,无脱落。①免疫组化检测c-fos基因表达产物Fos蛋白结果:假手术组Fos蛋白有较弱表达,免疫组化染色假手术组未见Fos蛋白阳性神经元;再灌注1h在额叶皮质与海马区即可见Fos蛋白表达升高,与假手术组差异显著,再灌注1dFos蛋白表达达最高峰,并持续至2周(P<0.01),以后随时间延长逐渐下降,到6周达假手术组水平。②反转录聚合酶链反应检测c-fos表达结果:假手术组海马区有少量c-fosmRNA表达。再灌注1hc-fosmRNA转录水平显著升高,与假手术组差异有显著性意义(P<0.01),至5周时仍呈现较高转录水平(P<0.05),随后下降,至4周时达假手术组水平。结论:全脑缺血再灌注可诱导中枢神经系统c-fos基因的持续表达。     

川芎嗪对局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的：探讨川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法：SD大鼠18只随机分为3组各6只：A组为假手术组，B组为缺血再灌注组，C组为川芎嗪干预组。采用免疫组化与医学图像分析检测大鼠大脑皮层Bcl-2和Bax蛋白阳性细胞的数目、平均灰度。结果：B组与A组比较损伤侧脑组织Bcl-2、Bax蛋白阳性细胞数目均增多，平均灰度均降低（P〈0．01）；C组与B组比较Bcl-2蛋白阳性细胞数目增多，平均灰度降低，Bax蛋白阳性细胞数目减少，平均灰度升高（P〈0．05）。结论：局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白表达增强；川芎嗪可上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白的表达，这可能是川芎嗪治疗缺血性脑血管病的机制之一。     

黄芪对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的：探计补气益血中药黄芪对肭缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Bcl—2蛋白表达的影响。方法：实验于2004-06/11在第四军医大学西京医院中医科实验室进行。取36只SD大鼠随机分为3组，每纰12只。①模型组：以生理盐水10mL／（kg&;#183;d）灌胃，1次/d，7d后线栓法制备大鼠局灶性脑缺血2h再灌注模型，6只在再灌注6h麻醉状态下处死取脑，免疫组织化学法与医学图像分析结合的方法检测Bcl-2蛋白的表达；剩余6只在再灌注24h麻醉状态下处死取脑，TUNEL法检测大鼠脑组织神经细胞凋亡。②黄芪组：以黄芪煎剂6g/（kg&;#183;d）灌胃7d，其余处理同模型组。⑧假手术组：不阻塞大脑中动脉，其余处理同模型组。结果：36只大鼠全部进入结果分析。①TUNEL阳性神经细胞数目：模型组高于假手术组[（49．9&;#177;9.8），（1．6&;#177;0．6）能见野，t=12．05，P〈0．01]，黄芪组低于模型组[（30．2&;#177;2．1）个／视野，t=4．81，P〈0．01]。②Bcl-2阳性细胞数目：模型组显著高于假手术组[（12．5&;#177;1．2），（1．7&;#177;0．6）个／见野，t=19．71，P〈0．01]，黄芪组显著高于模型组[（16．4&;#177;2．2）个倪野，t=3．17，P〈0．011。⑧Bcl—2蛋白平均灰度：模型组明显低于假手术组（182．8&;#177;13．6，205．9&;#177;115，拉3．18，P〈0．01），黄芪组显著低于模型组（160．8&;#177;10．2，t=3．82，P〈0．01）。结论：黄芪通过上调Bcl—2蛋白的表达可抑制缺血再灌注脑组织神经细胞凋亡，对脑缺血再灌注损伤有明显的神经保护作用。     

星状神经节阻滞对全脑缺血再灌注后家兔海马CA1区Bax及Bcl-2表达的影响

目的:观察星状神经节阻滞对全脑缺血再灌注后家兔海马CA1区凋亡基因bax,bcl-2表达的影响,分析其对脑缺血再灌注损伤的效应及其作用。方法:实验于2004-08/2005-02在郧阳医学院附属太和医院神经疾病研究所进行。①21只雄性日本大耳白兔随机分成实验组、对照组、假手术组,每组7只。②无菌操作下暴露左侧星状神经节及双侧颈内、颈外动脉及椎动脉,在星状神经节旁埋置导管。实验组夹闭上述“六血管”缺血10min后松开动脉夹再恢复灌注24h,缺血前于星状神经节处推注2.5g/L布比卡因0.5mL后再用微量泵以0.5mL/h的速度注药行持续星状神经节阻滞,对照组也进行缺血再灌注,缺血前暴露星状神经节,假手术组仅分离血管和暴露星状神经节而不阻断血流。③各组动物于再灌注后24h行神经功能缺陷评分,随后灌注固定取脑组织,免疫组织化学染色检测海马CA1区Bax和Bcl-2的表达。结果:实验中有2只动物分别死于麻醉意外和神经反射所致的心跳骤停。死亡后随机补充,保证21只动物进入结果分析。①实验组、对照组、假手术组家兔海马CA1区Bax表达阳性细胞数分别为(23.1±1.9)个/视野、(39.7±2.8)个/视野、(13.3±1.7)个/视野,前两者与后者相比差异有显著性意义(P<0.01),而对照组的增加高于实验组,差异有显著性意义(P<0.05)。②实验组家兔海马CA1区Bcl-2表达明显高于假手术组(0.131±0.015),(0.094±0.008),(P<0.05),而对照组增加不明显(0.101±0.013),与假手术组比较差异无显著性意义(P>0.05)。③实验组动物神经功能缺陷评分(22.7±2.8)显著低于对照组(27.3±2.9,P<0.05)。结论:星状神经节阻滞可降低全脑缺血再灌注后家兔神经功能缺陷评分,促进海马CA1区Bcl-2的表达,抑制Bax的表达,提示其可能参与脑保护作用的机制。     

星状神经节阻滞对全脑缺血再灌注后家兔海马CA1区Bax及Bcl-2表达的影响

目的：观察星状神经节阻滞对全脑缺血再灌注后家兔海马CA1区凋亡基因bax，bcl-2表达的影响，分析其对脑缺血再灌注损伤的效应及其作用。 方法：实验于2004-08／2005-02在郧阳医学院附属太和医院神经疾病研究所进行。（1）21只雄性日本大耳白兔随机分成实验组、对照组、假手术组，每组7只。（2）无菌操作下暴露左侧星状神经节及双侧颈内、颈外动脉及椎动脉，在星状神经节旁埋置导管。实验组夹闭上述“六血管”缺血10min后松开动脉夹再恢复灌注24h，缺血前于星状神经节处推注2．5g／L布比卡因0．5mL后再用微量泵以0．5mL／h的速度注药行持续星状神经节阻滞，对照组也进行缺血再灌注，缺血前暴露星状神经节，假手术组仅分离血管和暴露星状神经节而不阻断血流。（3）各组动物于再灌注后24h行神经功能缺陷评分，随后灌注固定取脑组织，免疫组织化学染色检测海马CA1区Bax和Bcl-2的表达。 结果：实验中有2只动物分别死于麻醉意外和神经反射所致的心跳骤停。死亡后随机补充，保证21只动物进人结果分析。（1）实验组、对照组、假手术组家兔海马CA1区Bax表达阳性细胞数分别为（23．1&;#177;1．9）个／视野、（39．7&;#177;2．8）个／视野、（13.3&;#177;1．7）个／视野，前两者与后者相比差异有显著性意义（P〈0．01），而对照组的增加高于实验组，差异有显著性意义（P〈0．05）。（2）实验组家兔海马CA1区Bcl-2表达明显高于假手术组（0．131&;#177;0．015），（0．094&;#177;0．008），（P〈0．05），而对照组增加不明显（0．101&;#177;0．013），与假手术组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。（3）实验组动物神经功能缺陷评分（22．7&;#177;2．8）显著低于对照组（27．3&;#177;2．9，P〈0．05）。 结论：星状神经节阻滞可降低全脑缺血再灌注后家兔神经功能缺陷评分。促进海马CA1区Bcl-2的表达，抑制Bax的表达，提示其可能参与脑保护作用的机制。     

大鼠小肠缺血再灌注后的肾损伤和肾脏Bcl-2，Bax的表达

目的：观察大鼠小肠缺血再灌注后肾结构和功能的变化，以及肾组织中Bel-2,Bax蛋白的表达水平，探讨小肠缺血再灌注后肾损伤的特点。方法：实验于2004—12／2005-03在武汉大学人民医院麻醉科实验室完成。将48只SD大鼠随机分配入假手术组，缺血再灌注0，30，60min，2h，1．4，7d组，每组6只。夹闭大鼠肠系膜上动脉60min后松开建立小肠缺血再灌注模型，假手术组穿线环绕肠系膜上动脉但不结扎。光镜下观察肾组织结构，自动分析仪检测血清尿素及电解质含量，免疫组化方法检测肾组织中Bel-2，Bax蛋白的表达。结果：48只大鼠均进入结果分析。①光镜下观察，可见假手术组肾小球、肾小管结构正常，间质无充血、水肿。再灌注组在30min时即可见肾小球囊轻度扩张，肾小球皱缩，肾小管上皮细胞水肿，管腔变小，偶见管型，肾间质充血。随着时间的推移，可见部分肾小球代偿性增大，间质出现较多炎性细胞浸润，肾小管扩张，部分肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落，较多管型形成。7d时，肾组织结构基本恢复正常。②假手术组的血清尿素为（5．72&;#177;0．51）mmoL／L。血清K^＋为（4．17&;#177;0．19）mmoL／L，再灌注后大鼠血清尿素和K^＋水平逐渐升高，血清尿素在1d时达到峰值（25．28&;#177;1．19）mmol／L（P〈0．01），血清K^＋水平在2h时达到峰值（7．50&;#177;0．24）mmol／L（P〈0．01）。随后两者均下降，7d时血清尿素、K^＋水平均恢复正常[血清尿素为（6．12&;#177;0．26）mmol／L，血清K^＋为（4．32&;#177;0．19）mmol／L]。③Bcl-2，Bax蛋白主要在近曲小管上皮细胞的胞浆和胞膜表达。bcl-2在30min时阳性细胞率为（7．17&;#177;2．14）％，明显高于假手术组[（1．33&;#177;1．21）％]（P〈0．01），在1d时阳性细胞率达到峰值（41．33&;#177;4．55）％（P〈0．01），Bax在0min时阳性细胞率为（2．93&;#177;0．70）％，明显高于假手术组[（1．17&;#177;0．75）％]（P〈0．01），7d时阳性细胞率达到峰值（48．83&;#177;4．17）％（P〈0．01）。结论：小肠缺血再灌注可以造成肾组织结构和功能的损伤，并且使肾组织Bax和Bcl-2蛋白的表达发生改变，使肾组织细胞呈现凋亡的趋势。     

大鼠小肠缺血再灌注后的肾损伤和肾脏Bcl-2,Bax的表达

目的:观察大鼠小肠缺血再灌注后肾结构和功能的变化,以及肾组织中Bcl-2,Bax蛋白的表达水平,探讨小肠缺血再灌注后肾损伤的特点。方法:实验于2004-12/2005-03在武汉大学人民医院麻醉科实验室完成。将48只SD大鼠随机分配入假手术组,缺血再灌注0,30,60min,2h,1,4,7d组,每组6只。夹闭大鼠肠系膜上动脉60min后松开建立小肠缺血再灌注模型,假手术组穿线环绕肠系膜上动脉但不结扎。光镜下观察肾组织结构,自动分析仪检测血清尿素及电解质含量,免疫组化方法检测肾组织中Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:48只大鼠均进入结果分析。①光镜下观察,可见假手术组肾小球、肾小管结构正常,间质无充血、水肿。再灌注组在30min时即可见肾小球囊轻度扩张,肾小球皱缩,肾小管上皮细胞水肿,管腔变小,偶见管型,肾间质充血。随着时间的推移,可见部分肾小球代偿性增大,间质出现较多炎性细胞浸润,肾小管扩张,部分肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落,较多管型形成。7d时,肾组织结构基本恢复正常。②假手术组的血清尿素为(5.72±0.51)mmol/L,血清K 为(4.17±0.19)mmol/L,再灌注后大鼠血清尿素和K 水平逐渐升高,血清尿素在1d时达到峰值(25.28±1.19)mmol/L(P<0.01),血清K 水平在2h时达到峰值(7.50±0.24)mmol/L(P<0.01),随后两者均下降,7d时血清尿素、K 水平均恢复正常眼血清尿素为(6.12±0.26)mmol/L,血清K 为(4.32±0.19)mmol/L演。③Bcl-2,Bax蛋白主要在近曲小管上皮细胞的胞浆和胞膜表达,bcl-2在30min时阳性细胞率为(7.17±2.14)%,明显高于假手术组眼(1.33±1.21)%演(P<0.01),在1d时阳性细胞率达到峰值(41.33±4.55)%(P<0.01),Bax在0min时阳性细胞率为(2.93±0.70)%,明显高于假手术组眼(1.17±0.75)%演(P<0.01),7d时阳性细胞率达到峰值(48.83±4.17)%(P<0.01)。结论:小肠缺血再灌注可以造成肾组织结构和功能的损伤,并且使肾组织Bax和Bcl-2蛋白的表达发生改变,使肾组织细胞呈现凋亡的趋势。     

胰岛素对心肺复苏大鼠神经元凋亡及Bcl-2,Bax mRNA表达的影响

目的 探讨脑室内注射胰岛素对心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)后大鼠海马CA1区神经元凋亡和对抑凋亡因子Bcl-2,促凋亡因子Bax mRNA表达的影响.方法 实验地点在首都医科大学宣武医院试验动物中心.30只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(对照组,n=6)、心肺复苏组(复苏组,n=12)及CPR后胰岛素干预组(胰岛素组,n=12).经食道超速起搏诱发6min室颤制备大鼠CPR模型;以CPR后大鼠恢复室上性心率、收缩压超过60 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)并持续10 min以上,作为自主循环恢复(ROCS)标准;ROCS 10 min后,胰岛素组大鼠经立体定位仪定位,脑室内注射12.5 μL(1 U)胰岛素,其余2组大鼠注射等量生理盐水.维持生命体征,CPR后24,72 h,应用实时荧光PCR (Realtime-PCR)测定海马CA1区神经元Bcl-2,Bax mRNA的表达量;CPR后7d,应用TUNEL染色检测海马CA1区神经元凋亡;CPR前后监测大鼠静脉血糖变化.计量资料采用均数±标准差(-x±s),组间比较采用单因素方差分析(ANOVA);相关性统计应用Pearson相关分析,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 ①CPR后24,72 h,胰岛素组大鼠Bcl-2 mRNA表达量均高于复苏组(1.45±0.05) vs.(0.79±0.01);(0.95±0.06) vs.(0.35±0.03),差异具有统计学意义(P＜0.01).组内比较发现,胰岛素组、复苏组72 h表达均低于24 h(P＜0.01).而胰岛素组与复苏组Bax mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),胰岛素组、复苏组72 h与24h比较差异无统计学意义(P＞0.05).②CPR后7d,胰岛素组大鼠海马CA1区神经元凋亡计数,复苏组(124.75±17.35)个/mm2明显高于对照组(5.12±3.26)个/mm2和胰岛素组(92.79±7.49)个/mm2,差异具有统计学意义(P＜0.01).③各组大鼠各时间点外周静脉血糖比较无统计学意义(P＞0.05).结论 脑室内注射1U胰岛素,能够促进CPR后大鼠神经元促凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达,抑制神经元凋亡,具有神经保护作用.脑室注射1U胰岛素不降低外周血糖.     

川芎嗪对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡反应的影响

目的研究川芎嗪对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的体外动脉粥样硬化(AS)样损伤内皮细胞抗凋亡蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白Bax表达的影响,为川芎嗪临床应用提供新的理论及实验依据。方法 ox-LDL(50 mg/L,12 h)诱导体外培养的人冠状动脉内皮细胞,加入川芎嗪(1和10μmol/L),Western blot检测川芎嗪对Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。结果 ox-LDL可抑制AS样损伤细胞模型Bcl-2蛋白的表达(与正常对照组比较,ox-LDL模型组Bcl-2与β-actin的相对光密度比值显著降低:0.33±0.08 vs.0.58±0.09,P<0.01),增加Bax蛋白的表达(ox-LDL模型组vs.正常对照组:0.67±0.10 vs.0.21±0.05,P<0.01);川芎嗪则可有效逆转上述病理改变[川芎嗪(1和10μmol/L)显著增加Bcl-2蛋白的表达:0.55±0.06,0.61±0.10,P<0.01;显著降低Bax蛋白表达:0.15±0.09,0.18±0.06,P<0.01]。结论川芎嗪靶向内皮细胞,抑制ox-LDL诱导的AS早期内皮细胞的凋亡反应,从而有效干预AS早期泡...     

丙酮酸乙酯对大鼠全脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的观察丙酮酸乙酯对大鼠全脑缺血再灌注损伤海马CA1区细胞凋亡及凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达的影响,为进一步的研究提供依据。方法本实验采用二血管阻断加低血压法制备大鼠全脑缺血再灌注模型。SD大鼠24只,随机被分成3组,每组8只：①假手术组（F组）：只分离股动脉和双侧颈总动脉,不降压,不夹闭双侧颈总动脉;②缺血再灌注组（IR组）：股动脉放血使血压降至基础血压的50％～60％,夹闭双侧颈总动脉10min再放开;⑧丙酮酸乙酯处理组（EP组）：与IR组处理相同。EP组于恢复血流即刻腹腔注射丙酮酸乙酯40mg／kg,其余两组给予等量生理盐水,每隔6h注射一次;再灌注24h后断头取脑,用原位末端转移酶标记（TUNEL）法检测细胞凋亡指数（AI）,免疫组化法检测海马CA1区Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果IR组和EP组AI和Bel—2、Bax蛋白表达水平均明显高于F组,差异有统计学意义（P〈0．05）;与IR组比较,EP组AI显著降低、Bax蛋白表达水平显著下降以及Bcl-2蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论丙酮酸乙酯可抑制大鼠全脑缺血再灌注损伤细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调Bcl-2和下调Bax表达水平有关。     

原花青素对脑缺血后抑凋亡基因蛋白Bcl-2和促凋亡基因蛋白Bax的影响

目的:观察原花青素对局灶性脑缺血大鼠大脑皮质抑凋亡基因蛋白Bcl-2和促凋亡基因蛋白Bax表达的影响,并分析该影响是否存在剂量依赖性。方法:实验于2004-11/2006-01在锦州医学院药理实验室和免疫组化实验室完成。①选用健康成年SD大鼠30只,雌雄各半,体质量200～250g。②按随机抽签法将大鼠分为5组:假手术组,模型组,原花青素低、中、高剂量组,每组6只。除假手术组不插入线栓外,余下各组均以线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉,制成局灶性脑缺血模型。以大鼠即刻出现右侧Horner征为造模成功。原花青素低、中、高剂量组:于术前2周分别按100,200,300mg/kg剂量灌胃原花青素混悬液(原花青素粉剂,由天津尖峰天然产物研究开发有限公司提供,批号:20040719),1次/d,共2周,并于术前1h再灌胃1次。假手术组和模型组:于术前2周灌胃等量生理盐水。③术后24h用免疫组化SABC法染色统计大脑皮质每高倍镜视野Bcl-2和Bax表达阳性细胞数。④多组间计量资料差异比较采用单因素方差分析检验,两组间比较采用LSD检验。结果:大鼠30只均进入结果分析。①大鼠大脑皮质Bcl-2阳性细胞数:原花青素低、中剂量组分别为(34.33±8.16)和(31.44±7.09)个,比模型组[(15.72±5.03)个]分别增加了118%,100%,差异明显(P<0.01);原花青素高剂量组与模型组相近[(16.33±5.48)个,P>0.05];原花青素低、中剂量组间差异不明显(P>0.05)。②大鼠大脑皮质Bax阳性细胞数:原花青素低、中剂量组分别为(11.83±4.57)和(12.56±4.31)个,明显少于模型组[(20.5±4.40)个,P<0.01];原花青素低、中剂量组间差异不明显(P>0.05);原花青素高剂量组与模型组相近(P>0.05)。结论:中、小剂量(100,200mg/kg)原花青素可对局灶缺血性脑损伤起到预防性保护作用,其保护作用发生可能与提高Bcl-2表达、抑止Bax表达有关。     

原花青素对脑缺血后抑凋亡基因蛋白Bcl-2和促凋亡基因蛋白Bax的影响

目的：观察原花青素对局灶性脑缺血大鼠大脑皮质抑凋亡基因蛋白Bcl-2和促凋亡基因蛋白Bax表达的影响，并分析该影响是否存在剂量依赖性。 方法：实验于2004-11／2006-01在锦州医学院药理实验室和免疫组化实验室完成。①选用健康成年SD大鼠30只，雌雄各半，体质量200—250g。②按随机抽签法将大鼠分为5组：假手术组，模型组，原花青素低、中、高剂量组，每组6只。除假手术组不插入线栓外．余下各组均以线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉。制成局灶性脑缺血模型。以大鼠即刻出现右侧Homer征为造模成功。原花青素低、中、高剂量组：于术前2周分别按100，200，300mg／kg剂量灌胃原花青索混悬液（原花青素粉剂，由天津尖峰天然产物研究开发有限公司提供，批号：20040719），1次／d，共2周。并于术前1h再灌胃1次。假手术组和模型组：于术前2周灌胃等量生理盐水。③术后24h用免疫组化SABC法染色统计大脑皮质每高倍镜视野Bcl-2和Bax表达阳性细胞数。④多组间计量资料差异比较采用单因素方差分析检验，两组间比较采用LSD检验。 结果：大鼠30只均进入结果分析。①大鼠大脑皮质Bcl-2阳性细胞数：原花青素低、中剂量组分别为（34．33&;#177;8．16）和（31．44&;#177;7．09）个，比模型组【（15．72&;#177;5．03）个】分别增加了118％，100％，差异明显（P〈0．01）；原花青素高剂量组与模型组相近【（16．33&;#177;5．48）个，P〉0．05h原花青素低、中刺量组间差异不明显（P〉0．05）。②大鼠大脑皮质Bax阳性细胞数：原花青素低、中剂量组分别为（11．83&;#177;4．57）和（12．56&;#177;4．3＇1）个。明显少于模型组【（205&;#177;4．40）个，P〈0．01】；原花青素低、中剂量组间差异不明显（P〉0．05）；原花青素高剂量组与模型组相近（P〉0．05）。 结论：中、小剂量（100,200mg／kg）原花青素可对局灶缺血性脑损伤起到预防性保护作用，其保护作用发生可能与提高Bcl-2表达、抑止Bax表达有关。     

局灶脑缺血预处理缺血耐受与Bcl-xl、Bax表达的研究

目的　探讨缺血预处理对细胞凋亡调控基因Bcl 2、Bax表达的影响及缺血耐受的脑保护机制。方法　将 6 0只wister大鼠随机分预缺血 再缺血组 (PC MCAO) ,假手术 缺血组 (SS MCAO) ,假手术组 (SS SS) ,观察神经功能评分、脑水含量变化及免疫组化方法检测Bcl xl、Bax表达。结果　PC MCAO组神经功能评分、水含量均明显低于SS MCAO组 ,预处理组诱导Bcl xl蛋白及抑制Bax蛋白表达。结论　脑缺血预处理可诱导脑缺血耐受 ,对脑缺血有保护作用 ,凋亡调控基因Bcl xl、Bax蛋白表达变化可能是其机制之一。