修饰的Ac/Ds转座子元件在油菜中的遗传转化与鉴定

玉米Ac/Ds转座子系统已被成功应用于多种异源植物进行基因的分离与克隆.本研究利用农杆菌介导法将含有Ac元件的质粒pUbiAc及含有Ds元件的质粒pDsBar1300分别转化甘蓝型油菜中双6号的子叶柄与下胚轴,分别获得了Ac和Ds的转化植株.PCR检测发现,在10株Ac转化植株中有1株为阳性苗,阳性率为10%;在28株Ds转化植株中有21株阳性苗,阳性率为75%.该结果为下一步构建油菜突变体群体及开展油菜功能基因组学研究将开辟一个新的途径.     

新疆乌苏天山山地南坡草原革蜱中立克次体感染调查及遗传进化分析

了解新疆乌苏地区草原革蜱中立克次体的感染情况.采集新疆乌苏天山山地南坡的草原革蜱,通过PCR对蜱中斑点热群立克次体、贝氏柯克斯体、埃立克体、伯氏疏螺旋体、查菲埃立克体、无形体、嗜吞噬细胞无形体、牛巴贝斯虫、巴贝西原虫、利什曼原虫、恙虫立克次氏体等11种病原体进行DNA分子检测,对检出的阳性样本进行测序,并与GenBank (NCBI)中的相应基因序列进行比对分析.106只草原革蜱中斑点热群立克次体、贝氏柯克斯体、埃立克体检测结果为阳性,阳性率分别为57.23%(99/173)、37.50%(30/80)和37.74%(20/53),其余8种病原体检测结果均为阴性;对斑点热群立克次体进行序列分析,建立分子系统进化树,结果显示Guertu-Dn1801 OmpA与吉林两株M198 (MF511260.1)和M30 (MF511254.1)同源性最高,一致性均为96.90%,属劳氏立克次体;Guertu-Dn1803OmpA与俄罗斯Gorno-Altaisk-2014-H-2株(KT006594.1)和苏联246株(U43807.1)同源性最高,一致性均为94.40%,属西伯利亚立克次体;而Guertu-Dn1801 gltA和Guertu-Dn1809 gltA分别与黑龙江3LB01 (KM245567.1)和内蒙古MD0202 (KP742992.1)序列一致性均为100%,属劳氏立克次体.乌苏地区可能存在斑点热群立克次体、贝氏柯克斯体、埃立克体3种病原体的流行,且斑点热群立克次体感染率较高,应加强对当地蜱类和蜱传疾病的监测和防控.     

绝经后女性血清性激素结合蛋白水平与骨质疏松症的相关性研究

为探讨性激素结合蛋白(Sex Hormone Binding Globulin, SHBG)与骨质疏松症(Osteoporosis,OP)患病风险之间的关系,用电化学发光法检测了237名绝经后女性血清SHBG和睾酮水平,并采用双能X线骨密度(BoneMineralDensity,BMD)测定仪测量了腰椎L2-4和股骨颈(Femoral Neck, FN)的BMD.结果发现SHBG与L2-4和FN的BMD均呈负相关(r=-0.356和-0.303, P0.01),校正体重指数(Body Mass Index, BMI)和年龄后仍呈负相关(P0.05). SHBG水平独立解释了2.0%的L2-4 BMD的变异和1.3%的FN BMD的变异.高SHBG组受试者OP患病率显著高于中SHBG组(OR=3.22,P=0.001)和低SHBG组(OR=4.22,P0.001),校正BMI和游离睾酮后差异仍显著(OR=2.32,P=0.040和OR=3.23,P=0.018).因此,高SHBG水平是中国绝经后女性人群OP的独立风险因素,监测外周血SHBG水平可能有助于预测绝经后女性骨质丢失与OP的严重程度.     

血清Meprin A联合NT-proBNP对川崎病伴冠状动脉损害预测价值的研究

为了探讨血清Meprin A联合NT-proBNP对川崎病(KD)伴冠状动脉损害(CAL)的预测价值,选取宁波市妇女儿童医院住院KD患儿334例为实验组, 同期匹配的上呼吸道感染患儿201例为对照组, 实验组依据超生心动图结果分为冠状动脉损害组(CAL组n=64例)与无冠状动脉损害组(NCAL组n=270例), 所有KD患儿在急性期与恢复期分别检测血清Meprin A、NT-proBNP等相关实验室指标, 运用Logistic回归方程拟合Meprin A及NT-proBNP的联合诊断模型, 并绘制受试者工作特征曲线(ROC), 用DeLong检验两组之间曲线下面积. 结果发现: KD患儿急性期血清Meprin A、NT-proBNP水平均显著高于缓解期及对照组, 差异有统计学意义(P<0.001); CAL组患儿血清Meprin A、NT-proBNP水平均高于NCAL组(P<0.001); Spearman相关性分析显示KD患儿急性期血清Meprin A与NT-proBNP、CRP、ESR之间呈正相关性; ROC曲线分析当血清Meprin A>7.7ng?mL-1时, 预测KD患儿伴CAL的灵敏度为84.37%, 特异度为67.04%, 曲线下面积为0.809; NT-proBNP>966ng?L-1预测KD患儿伴CAL的灵敏度为84.37%, 特异度为79.63%, 曲线下面积为0.883; 联合检测诊断KD伴CAL的预测值>0.134, 灵敏度及特异度分别为75.00%、92.22%, 曲线下面积为0.874. DeLong检验表明二者联合检测及血清NT-proBNP诊断KD伴CAL的ROC曲线下面积均大于血清Meprin A, 差异有统计学意义, 而联合检测特异度为92.22%. 因此, Meprin A、NT-proBNP可能参与KD的致病过程, 且与KD伴冠状动脉损害密切相关, 可用于KD伴冠状动脉损害的辅助诊断. 二者联合检测的诊断特异度均高于单一检测, 可为其早期诊断提供可靠证据.     

梭子蟹乳化病的间接荧光抗体快速诊断技术

以梭子蟹乳化病的病原菌-溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)为抗原制备兔抗血清,利用异硫氰酸荧光素标记的羊抗兔血清建立了梭子蟹乳化病的间接荧光抗体快速诊断技术,并应用该技术对人工感染梭子蟹、养殖现场梭子蟹及养殖水体进行溶藻弧菌检测.结果表明:该技术检测溶藻弧菌有较高的灵敏度,最低检测量为105cfu·mL-1.人工感染24 h后,就能在梭子蟹鳃和血淋巴中检测到溶藻孤菌.现场检测显示表观有病蟹的阳性检出率为90%,表观健康蟹的阳性检出率为20%,说明间接荧光抗体技术不仅可以用于诊断已感染发病的梭子蟹,而且也可检测出带菌但病症不明显的梭子蟹.     

LTB-hpaA融合基因原核表达产物的鉴定及其免疫保护作用

分别从幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床菌株Y06和大肠杆菌44851株DNA中扩增ltB和hpaA基因,构建ltB-hpaA融合基因及其原核表达系统,鉴定其表达产物的免疫原性、佐剂活性及其对Hp SS1株感染小鼠的保护作用.采用PCR分别从上述菌株DNA中扩增hpaA基因和ltB基因片段,构建ltB-hpaA融合基因,T-A克隆后测定核苷酸序列.采用质粒pQE32和宿主菌E.coli M15构建ltB-hpaA融合基因表达系统,并用不同浓度的IPTG诱导表达.采用western blot和GM1-ELISA鉴定表达产物的抗原性、免疫反应性和佐剂活性.建立HpSS1株感染BALB/c小鼠模型,检测rLTB-HpaA的免疫保护效果.采用ELISA检测125例胃、十二指肠粘膜活检标本尿素酶阳性患者血清中HpaA抗体和41株Hp临床菌株HpaA表达情况.与GenBank登录的相关序列比较,所构建的ltB-hpaA融合基因核苷酸序列同源性分别为94.25%～99.71%和95.38%～99.19%.所构建的表达系统pQE32-ltB-hpaA-M15的目的重组蛋白(rLTB-HpaA)表达量高达细菌总蛋白的1/3左右.rLTB-HpaA能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔能产生特异性抗体.GM1-ELISA结果显示rLTB-HpaA能与牛GM1结合.rH-paA免疫小鼠的保护率仅为66.7%,rLTB-HpaA免疫小鼠的保护率可增至83.3%.81.6%患者血清(102/125)HpaA抗体检测结果阳性,所有菌株均含有HpaA.本文成功地构建了itB-hpaA融合基因高效原核表达系统,所表达的rLTB-HpaA有良好的免疫原性和佐剂活性,并对Hp感染小鼠有较强的免疫保护作用.     

抗迟钝爱德华氏菌卵黄抗体制备及其抑菌、吞噬调理活性分析

迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是常见人畜共患病病原.为获得高效抗E.tarda卵黄抗体(Immunoglobulin of Yolk,IgY),将纯培养的迟钝爱德华氏菌灭活,免疫蛋鸡,由蛋黄纯化IgY,用间接ELISA法检测IgY效价.对制备的IgY进行了抑菌活性检测和动物保护实验:分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(2×10~3 CFU·mL~(-1))孵育,涂平板,菌落计数;分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(2×108 CFU·mL~(-1))等体积混合后注射克氏原螯虾(Procambarus clarkia),记录各组成活率.检测抗E.tarda IgY的吞噬调理活性:分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(103 CFU·mL~(-1))及小鼠血细胞混合后,接种平板培养、计数.结果发现:制备的IgY质量浓度为8.8 mg·mL~(-1),每个鸡蛋可以获得IgY约130 mg,效价为1:10 240;体外相对抑菌率为86.6%;对克氏原螯虾的平均保护率为66.7%;能促进细胞吞噬E.tarda,相对吞噬率为79.8%.     

右手持拍男性乒乓球运动员脊柱形态特征的研究

旨在研究比较右手持拍男性乒乓球运动员与普通男性大学生的脊柱形态差异. 利用DIERS光学三维脊柱分析仪各测量了40名男性大学生的脊柱参数. 研究发现右手持拍男性乒乓球运动员的骨盆倾斜距离、脊柱冠状面偏移距离、躯干倾角、脊柱偏移距离、脊柱矢状面偏移距离以及脊柱矢状面偏移角度与普通男性大学生相关指标表现出显著性差异(P<0.05); 右手持拍男性乒乓球运动员胸曲后凸角和腰曲前凸角均值低于普通男性大学生, 但无显著性差异(P>0.05). 结果表明, 乒乓球运动员的脊柱形态产生一定程度的变化可能与其长时间进行单侧的大强度训练有关.     

浙江省患病凡纳对虾副溶血弧菌的分离、鉴定及毒力基因分析

对浙江省发病凡纳对虾进行了弧菌分离、鉴定, 对分离菌株进行了API-20E生化鉴定, 不耐热毒素基因tlh、致病基因tdh、trh和毒力基因pir的PCR检测, 以及高致病性副溶血弧菌对小鼠致病性研究结果显示, 150个分离菌株中共检出tlh基因菌株61株(40.67%), ap阳性菌株21株(14.00%); 189个固定样品中检出副溶血弧菌阳性样品108个(57.14%), ap阳性样品24个(12.70%); 所有tlh阳性样品中均未检出tdh、trh毒力基因; ap阳性副溶血弧菌灌胃小鼠死亡率为20%, 且其培养上清液有弱溶血效价. 表明副溶血弧菌在浙江省凡纳对虾弧菌感染中占有重要地位, 高致病性副溶血弧菌在副溶血弧菌中占较高比例, ap阳性副溶血弧菌对小鼠具有一定毒力和溶血性.     

金银花蕾提取物及其3-咖啡酰奎宁酸抗乙肝病毒活性

以HepG2. 2. 15细胞为乙肝病毒(HBV)感染的体外实验模型,采用MTT法测定实验组细胞的活力,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定实验组HepG2. 2. 15细胞上清液中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)的含量,采用实时荧光定量PCR法检测HepG2. 2. 15细胞上清液HBV DNA水平,研究金银花蕾乙醇提取物(LA)、乙酸乙酯部位(LE)及活性成分3-咖啡酰奎宁酸体外抗乙肝病毒的作用。研究结果显示:LA、LE及3-咖啡酰奎宁酸对HepG2. 2. 15细胞的生长增殖均无显著抑制作用;LA和LE作用8 d可抑制HBeAg分泌;100μg/mL 3-咖啡酰奎宁酸对HepG2. 2. 15细胞上清液中HBsAg、HBeAg分泌及DNA复制均具有显著的抑制作用。上述结果表明,金银花中的活性成分3-咖啡酰奎宁酸具有显著的抗HBV活性。     

微波热辐射仪信息检测乳腺癌的研究

微波热辐射仪信息检测乳腺癌的研究李也周，阎瑞民（武汉大学计算中心武汉４３００７２）（广州军区武汉总医院武汉４３００７１）李而周，向勋贤（湖北省肿瘤医院武汉４３００７０）（华中理工大学无线电系武汉４３００７４）关键词微波诊断，乳腺癌，热辐射分类号Ｒ７３...     

D38R突变对细菌视紫红质光循环后半程M态和N态的影响

用重叠PCR的方法，定点突变细菌视紫红质（bacteriorhodopsin，BR），克隆到单突变体BRD96N和双突变体BRD38R/D96N的基因，同源转化盐沼盐杆菌（Halobacterium salinarium）L33（BR），表达突变蛋白BRD96N和BRD38R／D96N通过显微视频方法对突变BR的M态光致变色特性进行记录，BRD38R／D96N的M态寿命为5s，约为BRD96N（M态寿命为3s）的1．7倍．对突变体的激光共聚焦拉曼光谱测定发现，在BRD96N中，1170cm^-1下移到1171cm^-1，1258cm^-1上移到1255cm^-1，而BRD38R/D96N中1170cm^-1下移到1173cm^-1；1258cm^-1。上移到1252cm^-1，而且BRD38R/D96N与BRD96N相比，1186cm^-1处的峰明显增强．近紫外区圆二色谱显示，两种突变体近紫外区的正负带虽然没有太大差别，但288nm和290nm处的极峰却差别显著．所有这些研究结果表明，细菌视紫红质Asp38（D38）突变为Arg（R）可以延长其光循环后半程M态和N态的寿命．     

吸收-催化还原法处理模拟二氯甲烷废气实验研究

采用铁粉与金属盐溶液进行置换反应的方法,分别制备了Ni、Cu、Ag 3种金属与铁构成的双金属,并将其用于吸收 液相还原法工艺中,以处理二氯甲烷废气,考察了pH值、双金属比率等因素对金属铁与二氯甲烷之间的还原脱氯反应以及体系净化效率的影响.实验结果显示：在双金属与水组成的体系中,低pH值有利于二氯甲烷的还原脱氯;金属比例在一定范围内（R/Fe<0.05%）,3种双金属体系的还原脱氯能力均随R比例的提高而增强;对于实验所研究的3种双金属体系,Ni/Fe对二氯甲烷的还原脱氯效果最好.     

人乳头瘤病毒16及18型E6与p53表达的关系

采用 SP免疫组织化学方法 ,比较了 6 8例宫颈癌组织中 HPV- 16、18E6和 p5 3蛋白的表达及其相互关系 .结果表明 ,6 8例宫颈癌中有 6 0例 HPV - 16、18E6蛋白和 17例 p5 3蛋白呈阳性表达 ,阳性率分别为 88.2 %和2 5 .0 % ;在 5 9例 HPV- 16、18E6蛋白过度表达的宫颈癌中有 5 4例 p5 3蛋白为阴性或弱阳性表达 ,二者呈负相关(P <0 .0 1) .p5 3蛋白阳性表达与组织学类型有关 ,其阳性率在宫颈腺癌中为 83.3%和宫颈鳞癌中为 17.2 % ,差异有极显著意义 (P <0 .0 1) .p5 3蛋白阳性表达随着临床分期上升而增高 .     

无机砷影响蛋白核小球藻光合活性的特征研究

采用蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)进行无机砷毒性暴露实验,分析As(Ⅲ)和As(V)对蛋白核小球藻光合活性的影响差异.结果表明:该藻对无机砷具有较强的耐受性,在砷浓度大于37.5mg·L~(-1)暴露条件下,小球藻叶绿素a合成、光系统II(PSII)最大光量子产量(F_v/F_m)、实际光量子产量(Yield)及相关参数与无机砷浓度呈显著负相关,As(Ⅲ)对小球藻光合活性抑制作用显著高于As(V).As(Ⅲ)和As(V)150.0mg·L~(-1)暴露96h对小球藻光系统II影响差异最大,F_v/F_m、Yield、rETR_(max)和线性斜率(α)分别降低了77%,91%,92%,85%和19%,50%,51%,23%.透射电镜进一步表明,小球藻亚细胞结构形态受砷胁迫出现叶绿体片层间空泡化、类囊体基粒片层受挤压、蛋白核缩小及脂质滴.As(Ⅲ)对蛋白核小球藻光系统II(PSII)抑制作用大于As(V),可为深入了解无机砷对淡水微藻光合活性的影响机理提供一定的参考.     

宁波市中小学生视力不良状况调查

为了解宁波市中小学生视力不良的发生率,以2010年浙江省学生体质调研数据为基础,对宁波市3085名中小学生视力进行了调查研究.结果表明:宁波市中小学生视力不良检出率为69.9%,其中男生为69.0%,女生为70.8%;城市学生视力不良检出率为71.2%,乡村学生为68.6%,可见城市学生的视力不良检出率高于乡村学生,并存在统计学意义(P<0.05);但这种城乡差异和2005年学生体质调研中得到的数据相比较,呈现弱化趋势;视力不良的检出率已不再有性别差异;在低年龄段和轻度视力不良程度内,视力不良检出率随年龄的增长突增期提前,中学学段是学生视力不良重灾区,同年龄段视力不良的检出率远超过2005年调查数据.     

牙鲆群体Idh-1基因座位杂合型个体选择性优势

利用淀粉凝胶水平电泳法分析了人工牙鲆种苗群体的异柠檬酸脱氢酶同工酶 (IDH) .对牙鲆材料分析得知 Idh- 1基因座位只存在 A、B两个等位基因 ,而且在 2 3个样品群中 ,有 19个样品群呈现 A、B这两个等位基因所决定的基因型的杂合型个体过剩现象 ,表现出杂合基因型的选择性优势 .设定这 19个呈杂合型过剩样品群的死亡率为零 ,即以杂合型 A/ B的成活率为 10 0 %来计算其纯合型的成活率 ,得到纯合型个体 A/ A和 B/ B的成活率分别为 6 9.2 %和 75 .2 % ;从个体的标准体长上看 ,在表现为杂合型个体过剩的 19个样品群中 ,15个样品群的杂合型个体 (A/ B)大于纯合型个体 (B/ B) .其结果反映了牙鲆人工养殖放流群体的 Idh- 1的基因型与成活率及生长存在相关性 .     

小球藻在不同营养状态下对蒽的毒理学响应

比较了蒽对自养条件下的蛋白核小球藻、普通小球藻和原始小球藻及异养条件下原始小球藻的毒性效应. 结果表明,它们对蒽的耐受性大小趋势为:原始小球藻(异养)> 蛋白核小球藻(自养)> 普通小球藻(自养)>原始小球藻(自养),其EC50值(96 h)分别为2.53,1.47,1.27,0.85 m g/L.     

台州市不同功能区环境空气PM_(2.5)的污染特征研究

2015年7月至2016年3月在台州市采集504个PM_(2.5)样品,利用电感耦合等离子体发射光谱仪和原子荧光光度计分析样品中的19种无机元素,利用离子色谱和热光碳分析仪分别分析8种水溶性离子和2种碳组分有机碳(OC)和元素碳(EC)的质量分数,研究不同功能区环境空气PM_(2.5)及其化学组分的污染特征.结果表明,台州市环境空气PM_(2.5)年均质量浓度为(45.3±20.1)μg·m~(-3),季节变化规律为冬季春季秋季夏季,空间变化规律为工业园区商住区自然保护区.19种无机元素占PM_(2.5)总量的9.78%,主要元素为Na、K、Ca、Si、Zn、Al、Mg和Fe.富集因子分析结果表明,台州市无机元素的主要污染源包括道路交通尘、燃煤尘、建筑扬尘以及海盐粒子.采样期间8种水溶性离子总质量浓度为(26.50±5.86)μg·m~(-3),SO_4~(2-)、NO_3~-和NH_4~+占PM_(2.5)总量的(41.96±8.59)%.Cl~-、NO_3~-和NH_4~+离子质量分数为工业园区商住区自然保护区,SO2-4离子质量分数水平在3个功能区相近.OC和EC的年均浓度分别为(10.04±2.08)和(3.27±0.80)μg·m~(-3).商住区和工业园区OC和EC浓度水平相近,略高于自然保护区.SOC/OC值为秋季最高,冬季其次.不同季节SOC/OC值均为工业园区高于商住区和自然保护区.     

新型双功能谷胱甘肽合成酶的真核和原核表达

通过裂解无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)菌体细胞得到基因组DNA。根据GenBank上已发表的无乳链球菌(菌种编号ATCC13813)新型双功能谷胱甘肽合成酶基因(gshF)的核酸序列与2种不同表达载体多克隆位点序列,分别设计引物F₁、R₁和F₂、R₂,再以总DNA为模板,经过特异性PCR扩增出长度约为2 200 bp的目的基因。随后分别对目的基因gshF和2种表达载体进行双酶切、连接等操作,得到表达载体pPIC9K-gshF与pET-gshF。用Sal I线性化表达载体pPIC9K-gshF后电转至毕赤酵母GS115中。经MD平板筛选重组子、菌落PCR鉴定阳性菌株、G418抗性梯度平板筛选多拷贝菌株,最终在4.0 mg·mL^-1 G418抗性平板上筛选出阳性菌株。用甲醇终浓度为2%的BMMY培养基诱导该阳性菌株表达,每隔12 h取样并添加甲醇,96 h后离心收集发酵上清,经SDS-PAGE蛋白电泳显示：在85 kDa处出现1条明显蛋白带,大小与预期GshF蛋白一致。重组菌BL21-pET-gshF用IPTG诱导表达,先在37 ℃下培养90 min,再加入IPTG至1 mmol·L^-1后诱导7 h,离心收集表达产物并对重组菌进行超声破碎处理后,进行SDS-PAGE蛋白电泳,同样在85 kDa处有1条蛋白带。采用Bradford法测定2种表达产物上清的蛋白量,其中重组酵母表达上清中蛋白量为0.46 mg·mL^-1,重组大肠杆菌表达产物破壁后的蛋白量为1.46 mg·mL^-1。测定并比较2种不同表达方式所得酶活,发现GshF在毕赤酵母表达中的比酶活仅为14.15 U·mL^-1,经原核表达后比酶活可达62.15 U·mL^-1。