氧化苯胂对大鼠心室肌细胞L型Ca2+电流的影响

目的 :探讨氧化苯胂 （PAO） ,一种膜可通透的酪氨酸磷酸酶抑制剂 ,对大鼠心室肌细胞 L型 Ca2 +电流 （ICa,L）的影响。方法 :采用全细胞膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞 ICa,L。结果 :1PAO对基础 ICa,L及β-肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素 （Iso）激发的 ICa,L有抑制作用 ;2 PAO对腺苷酸环化酶激动剂 forskolin激发的 ICa,L亦有抑制作用 ;3电极内液加入 1.5 mm ol/ L矾酸钠不能消除 PAO的作用 ;4PAO对 ICa,L的抑制作用可被二硫代苏糖醇反转。结论 :PAO抑制 ICa,L的作用与 c AMP- PKA-磷酸化途径和酪氨酸磷酸酶无关 ,可能与其使 L 型 Ca2 +通道蛋白上巯基氧化有关。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠单个心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响。方法通过全心灌流酶解法分离大鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳技术,记录干预前及20 ng/L,200 ng/L AngⅡ干预后心室肌细胞的ICa-L及对失活曲线的影响。结果①AngⅡ可激活ICa-L,20 ng/L及200 ng/L AngⅡ能使心肌细胞ICa-L电流-电压关系曲线明显下移,峰电流密度增加(-7.05±1.35 pA/pF,-9.74±1.52 pA/pF vs-5.49±0.82 pA/pF,n=10,P均<0.05),但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。②AngⅡ能使ICa-L失活曲线明显右移。结论AngⅡ对ICa-L具有激活作用。这可能是其对心血管作用的重要机制之一。     

U69 593对家兔心室肌细胞L型Ca2+电流的影响

目的 :研究 U695 93对家兔心室肌细胞 L 型 Ca2 +电流 （ ICa· L）的影响。方法 :采用全细胞膜片钳技术记录家兔心室肌细胞 IC a· L。结果 :在 -2 0～ +4 0 m V测试电压范围内 ,10 0 nmol/ L U695 93显著增加 IC a· L,以 +10 m V为最大激活电压 ,其峰值 ICa· L由加药前 -7.1± 0 .4p A/ p F增至 -8.3± 0 .5 p A/ p F （ P<0 .0 1,n=8）。 10 0 nmol/ LU 695 93不影响 IC a· L电压依赖性激活与失活特性。结论 :U695 93可增加家兔心室肌细胞 ICa· L。     

卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的研究卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流(ICa,L)的影响,探讨卡维地洛在离子通道水平的药理机制。方法用急性酶解法获得大鼠单个心室肌细胞,用标准全细胞膜片钳技术记录ICa,L,观察不同浓度卡维地洛对ICa,L的影响。结果①卡维地洛呈浓度依赖性抑制ICa,L,1μmol/L卡维地洛能使心肌细胞ICa,L电流-电压关系曲线明显上移,峰电流密度减少(7.80±0.65pA/pFvs4.89±0.52pA/pF,n=10,P<0.05),但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。②卡维地洛能使ICa,L失活曲线明显左移,但对ICa,L激活和复活曲线无明显影响。③0.1μmol/L卡维地洛对钙电流无明显影响,但可以明显阻断异丙肾上腺素增加钙电流效应。同时,卡维地洛对钙电流的抑制效应不能被哌唑嗪和普奈洛尔阻断。结论卡维地洛呈浓度依赖性地抑制心室肌细胞L型钙通道。     

17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞动作电位及L型钙通道电流的影响

探讨雌激素对心血管保护作用的机制,采用标准玻璃微电极技术及全细胞膜片钳技术观察17β-雌二醇（ES）对豚鼠心室乳头肌细胞动作电价的影响及其对分离的豚鼠心室肌细胞的L型钙通道电流的作用。结果：30μmol／LES灌流心肌30min可明显缩短动作电位时程;复极20％动作电位时程及复极50％动作电位时程分别由146±22ms,213±21ms缩短至87±6ms,107±11ms（P均＜0．01）。1,10,20,30μmol／LES是浓度依赖性抑制L型钙通道电流（P均＜0．01）,抑制率分别为8％,18％,33％,43％。结论：ES是一种内源性的钙离子通道拮抗剂,这可能是其心血管保护作用的重要机制之一．     

丹酚酸B对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流和L型钙电流的阻滞作用

目的研究从丹参中分离提取的药物单体——丹酚酸B对大鼠心肌细胞上的瞬时外向钾电流(Ito)、内向整流钾电流(IK1)和L型钙电流(ICa,L)的电生理学作用。方法用酶解法分离大鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录Ito、IK1和ICa,L。每个细胞采用加药前后自身对照,用含100μmol/L丹酚酸B的细胞外液灌流心室肌细胞,记录加药前、后的电流,所有数据均在细胞破膜后20min内完成。结果 100μmol/L的丹酚酸B对Ito和ICa,L具有抑制作用,使Ito和ICa,L最大激活峰值电流密度下降,电流密度-电压曲线下移;且丹酚酸B主要抑制Ito的快速电流成分Itof,而对Ito的缓慢电流成分Itos无明显作用。在60mV测试电压下,Itof的最大激活峰值电流密度从23.51±3.29pA/pF降为16.85±2.36pA/pF,抑制率为28.31%±10.6%(n=8,P0.05)。在-10mV测试电压下,100μmol/L丹酚酸B作用后ICa,L的最大激活峰值电流密度从-8.66±-2.40pA/pF降为-5.91±-2.14pA/pF,抑制率为31.84%±10.23%(n=11,P0.05)。丹酚酸B使Ito通道失活后的恢复减慢,但不改变ICa,L的通道动力学。丹酚酸B对IK1无显著作用。结论丹酚酸B对Ito和ICa,L具有阻滞作用,而对IK1无显著作用。     

硝苯地平对心室肌细胞L型钙通道状态依赖性阻滞的研究

目的探讨选择性L型钙通道阻滞剂硝苯地平对L型钙流[ICa(L)]浓度、状态依赖性阻滞作用的影响。方法采用膜片钳全细胞记录技术对豚鼠单个心室肌细胞,给予35℃的各种含药物细胞外液快速灌流,记录ICa(L)。结果①保持电位-80mV,硝苯地平抑制ICa(L)的IC50为0.3μmol·L-1;保持电位为-40mV时,IC50为0.05μmol·L-1,呈浓度依赖性阻滞。硝苯地平0.3μmol·L-1作用于电压依赖的ICa(L)失活曲线,使其左移17mV,至更负的膜电位,显示硝苯地平相对选择与失活态钙通道结合。②在10s的静息间隔药物作用时间后的第1个实验刺激,硝苯地平3μmol·L-1或30μmol·L-1加速ICa(L)的失活,提示硝苯地平对ICa(L)可能存在激活态阻滞。结论在生理条件下,硝苯地平对ICa(L)的阻滞呈浓度、状态依赖性。相对选择与失活态钙通道结合,且可能存在激活态阻滞。     

人参皂苷Rb1对大鼠心室肌细胞L型钙电流和瞬时外向钾电流的调控作用

目的 研究参松养心胶囊的药物单体-人参皂苷Rb1对大鼠心室肌细胞L型钙电流(Ica,L)和瞬时外向钾电流(Ito)的调控作用.方法 Langendroff灌流装置、胶原酶和蛋白酶混合急性分离大鼠心室肌细胞,用含40μmol/L的人参皂苷Rb1的细胞外液灌流心室肌细胞,每个细胞采用给药前后自身对照,标准的全细胞膜片钳技术记录Ica,L,Ito,所有数据均在细胞破膜后20min内完成,观察人参皂苷Rb1对Ica,L和Ito通道电流的影响.结果 40 μmol/L的人参皂苷Rb1对Ica,L和Ito均有抑制作用.在-10mV测试电压下,40 μmol/L的人参皂苷Rb1可使Ica,L的最大激活峰值电流密度从(- 11.423±-3.125)pA/pF下降至(-5.786±-2.976)pA/pF,抑制率为49.34％±9.78％(n=7,p＜0.05),电流密度-电压(I-V)曲线上移,但不改变激括电位、峰电位、反转电位以及曲线的形状;在+60mV测试电压下,40μ mol/L的人参皂苷Rb1 可使Itof的最大激活峰值电位从 35.342±3.126pA/pF下降至26.783±4.153pA/pF,抑制率为24.21％±8.35％ (n=8,p ＜0.05),I-V曲线下移.两通道电流经Boltemann方程拟合的稳态激活曲线给药前后无明显影响,但药物可使稳态失活增快以及失活后恢复减慢(n=7,p＜ 0.05),且人参皂苷Rb1主要抑制Ito的快速电流成分Itof(峰电位),对慢电流成分Itos(维持电位)无明显影响.结论 人参皂苷Rb1对Ica,L和Ito通道的电流有显著抑制作用,但不改变Ica,L的通道动力学.     

雌激素抑制大鼠心室肌细胞L-型钙电流机制的研究

目的 :探讨雌激素抑制大鼠心肌细胞 L -型钙电流 （ICa,L）的可能途径。方法 :通过胶原酶消化得到单个大鼠心室肌细胞 ,膜片钳全细胞电压钳方法记录 ICa,L。结果 :雌激素 （1～ 30μmol/ L ）可剂量依赖性地抑制 ICa,L,雌激素对ICa,L的抑制作用并不能被雌激素受体的阻断剂 Tamoxifen和 ICI 182 780所阻断。细胞外灌流耦联了牛血清白蛋白（BSA）的雌激素 [β- estradiol6 - （o- carboxy- m ethyl） oxime:BSA（EST- BSA） ],不能透过细胞膜 ]也能抑制 ICa,L,但同样浓度的 EST- BSA细胞内灌流对 ICa,L并没有明显的抑制作用。结论 :雌激素可能是通过膜表面上特异的受体介导了其对 L-型钙电流的抑制作用     

右美托咪定对心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的观察右美托咪定(DEX)对大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流(ICa-L)的影响,探讨其对心脏电活动影响的机制。方法取SD大鼠,用酶解法分离获得单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录ICa-L,观察不同浓度的DEX(0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml)以及1μmol/L育亨宾(α2肾上腺素受体拮抗剂)单独使用及与10 ng/ml DEX联合使用对ICa-L的影响。结果 0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml的DEX对峰电流的抑制率分别为8.8%±2.4%、14.6%±3.6%、21.4%±8.4%、25.2%±6.4%和32.1%±6.6%,使I-V曲线上移。小剂量(0.6,1.8,5.4 ng/ml)的DEX对ICa-L激活曲线无明显影响(n=6,P>0.05);大剂量(10和200 ng/ml)的DEX可使ICa-L激活曲线右移。0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml的DEX可使ICa-L失活后恢复时间延长。10 ng/ml的DEX可使ICa-L的峰值抑制约25.2%±6.4%,再向电极外液中加入育亨宾后ICa-L平均增加约15%(n=6,P<0.05)。1μmol/L育亨宾灌流前后ICa-L的峰值无差异(n=6,P>0.05)。结论 DEX对心室肌细胞ICa-L具有浓度依赖性地抑制作用,可能是通过细胞膜上的α2肾上腺素受体介导的。     

伊贝沙坦对兔心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的 研究伊贝沙坦(irbesartan)对正常家兔心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)、内向整流性钾电流(IK1)、快钠流(INa)以及跨膜动作电位的影响。方法 应用膜片钳全细胞记录方法记录各项离子流和跨膜动作电位。结果 (1)伊贝沙坦呈浓度依赖性阻断ICa-L；(2)伊贝沙坦可使ICa-L I—V曲线上移，但不改变其激活电位、峰值电位和反转电位；(3)伊贝沙坦呈使用依赖性阻滞ICa-L；(4)伊贝沙坦对ICa-L激活曲线无明显影响，但ICa-L失活后再激活的恢复时间常数(τ)明显延长；(6)伊贝沙坦对IKl和INa无明显影响；(7)伊贝沙坦(100nM)可使单个心室肌细胞动作电位时限缩短，对静息电位(RP)、动作电位幅度(APA)无影响。结论 伊贝沙坦作用于L-型钙通道的失活态从而阻断ICa-L。     

Rate-dependent prolongation of action potential duration in isolated rat ventricular myocytes

Rate-dependent alterations of action potential duration (APD) in rat ventricular myocytes were investigated. Action potentials of the isolated myocytes were recorded with patch electrodes containing EGTA (11 mM), and showed a marked rate-dependent prolongation in the APD (0.2–5 Hz). This prolongation was significantly inhibited in the presence of 4-aminopyridine (4-AP), a blocker of the transient outward K⁺ current (I_to). Thus, the rate-dependent decrease in I_to may underlie the change in APD. In contrast, the action potentials recorded from rat ventricular papillary muscles with conventional microelectrodes did not show rate-dependent alterations in the APD, i.e., the APD remained practically unaltered at the frequency range of 0.2–5 Hz. These results suggest that the rate-dependent prolongation of APD (due to rate-dependent blockade of I_to) becomes evident when the intracellular Ca²⁺ was chelated by the internal application of EGTA via patch pipette. We speculate that the rate-dependent prolongation of APD (via decreases in I_to) is masked in the ventricular papillary muscles, probably due to rate-dependent decreases in the inward current (e.g., electrogenic Na⁺–Ca²⁺ exchange current) that is regulated by the intracellular calcium.     

外源性磷酸肌酸对缺血豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的:观察不同浓度外源性磷酸肌酸(exogenous phosphocreatine,PCr)对豚鼠缺血心室肌细胞L型钙通道(ICa.L)电流的影响,探讨其治疗缺血性心力衰竭的电生理学机制。方法:单个心室肌细胞经酶解从豚鼠左心室获得,采用膜片钳全细胞模式记录ICa.L电流,通过灌注模拟缺血液并充以95%N2+5%CO2的混合气体建立缺血模型,将PCr加入模拟缺血液中分别配成5,10,20,30 mmol/L浓度。将细胞分成6组,分别予模拟缺血液,含有5,10,20,30mmol/L浓度PCr的模拟缺血液,台氏液灌流,后者充以95%O2+5%CO2的混合气体。10 min后记录各组的峰电流及电流密度。结果:与台氏液组相比,模拟缺血液组ICa.L峰电流密度降低(80.6±5.2)%(P0.05),含有5,10,20,30 mmol/L浓度PCr的模拟缺血液组ICa.L峰电流密度分别降低(53.8±6.7)%(P0.05);(41.8±8.2)%(P0.05);(38.1±7.4)%(P0.05);(36.6±9.7)%(P0.05)。10,20,30 mmol/L 3种浓度对ICa.L峰电流密度的影响无统计学差别。结论:PCr能明显增加缺血时受抑制的ICa.L峰电流及电流密度,这可能是其治疗缺血性心力衰竭的电生理学机制。PCr在低浓度(0～10 mmol/L)对ICa.L电流及电流密度的影响呈现明显的量效关系,浓度大于10mmol/L量效关系不明显。     

Protection from the effects of metabolic inhibition and reperfusion in contracting isolated ventricular myocytes via protein kinase C activation

The protective effects of the PKC activator Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) were investigated in electrically field stimulated (EFS) rat isolated ventricular myocytes following 7 min of metabolic inhibition induced by cyanide, iodoacetic acid and substrate removal, followed by reperfusion. PMA reduced reperfusion damage and increased functional recovery (response to EFS) following 10 min reperfusion from 20.0 +/- 10.7% of control myocytes to 90.0 +/- 7.2% following 5 min PMA pre-treatment (p<0.001). PMA significantly increased the time from the onset of MI before the myocytes failed to respond to EFS from 135 +/- 19s in control cells to 200 +/- 14s in PMA pre-treated cells (p<0.05). Additionally, there was an increase in the time to rigor with PMA pre-treated cells entering rigor 255 +/- 17s after MI compared to 174 +/-15s in control cell (p<0.05), indicating a delay in ATP depletion. During MI PMA pre-treated cells showed a significantly smaller increase in [Ca(2+)]i compared to control myocytes. Following reperfusion the majority of PMA pre-treated myocytes recovered calcium transients in response to EFS and diastolic Ca(2+) levels not significantly different to those seen prior to metabolic inhibition. Activation of PKC is thought to involve translocation to the particulate fraction. Our results demonstrate the presence of PKC-alpha, beta, gamma, delta, iota, lambda/zeta in rat ventricular myocytes, all of which translocate to the membrane in response to PMA.     

不同旋体氨氯地平对大鼠心室肌细胞L型钙离子流和细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨不同旋体氨氯地平(Aml)对大鼠心室肌细胞L型钙离子流(ICa-L)及细胞内钙离子浓度的影响。方法采用酶消化法分离大鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术分别记录加入0.1,0.5,1,5和10μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后大鼠心室肌细胞ICa-L及通道动力学参数的变化;采用荧光探针Fura-2/AM测定细胞内钙离子浓度,观察加入1,5,10,50和100μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后细胞内钙离子浓度的变化。结果加入不同浓度左旋和混旋Aml后,随着浓度增加,ICa-L及峰值电流呈浓度依赖性阻滞、I-V曲线上移、稳态激活曲线和稳态失活曲线左移、失活后恢复时间延长(P<0.05);细胞内钙离子浓度逐渐降低,左旋和混旋Aml对细胞内钙离子浓度影响的半效抑制浓度分别为8.13和16.19μmol/L(P<0.05),但不同浓度右旋Aml对ICa-L、通道动力学参数和细胞内钙离子浓度均无影响(P>0.05)。结论左旋和混旋Aml对ICa-L有阻滞作用,而右旋Aml对ICa-L无阻滞作用。