miR-134靶向EGFR对非小细胞肺癌增殖的影响

目的 探讨微小RNA-134（miR-134）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测miR 134在NSCLC细胞株（A549、H252）和正常胚肺细胞株WI38中的表达情况;将A549和H252细胞分为3组,分别为空白对照组（不转染）、miR-NC组（转染不相关siRNA）和miR-134组（转染miR-134 mimics）。分别于转染后24、48、72、96h收集细胞,采用MTS法检测细胞的增殖情况;转染后96h用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-134与表皮生长因子受体（EGFR）3’UTR的结合情况,QPCR检测过表达miR-134的A549和H252细胞中EGFR的表达情况。结果 与WI38 细胞相比,miR-134在A549细胞中的表达下调85.91％,在H252细胞中下调78.13％（P＜0.05）。MTS检测显示,miR-134能显著降低A549和H252细胞的增殖能力,并呈时间依赖性。流式细胞仪检测显示,与空白对照组比较,miR-134组A549细胞的凋亡比例提高226.31％,H252细胞提高47.85％（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示miR 134能与EGFR3’UTR结合,显著降低荧光值（P＜0.05）。QPCR检测显示,与空白对照组比较,转染miR-134 mimics 后,EGFR在A549细胞中的相对表达量下调57.0％,在H252中下调35.0％,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 miR-134在NSCLC中低表达,能通过靶向EGFR抑制NSCLC细胞增殖,并诱导凋亡。     

miR-138靶向调控SIRT1表达及其对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-138（miRNA-138）在膀胱癌细胞中的表达情况,并研究其对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的靶基因。方法 采用实时定量PCR（QPCR）法检测膀胱癌细胞T24和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-138的表达水平。将T24细胞分为3组：未转染组、miR-138对照组（转染阴性对照片段）和miR-138转染组（转染miR-138 mimics）。采用MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Western blotting检测细胞中沉默信息调节因子1（SIRT1）蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-138与SIRT1间的靶向关系。结果 膀胱癌T24细胞中miR-138的表达量为0.57±0.19,低于SV-HUC-1细胞的1.00±0.26（P＜0.05）。miR-138转染组的miR-138表达量为2.59±0.67,高于未转染组的1.00±0.36和miR-138对照组的1.08±0.49（P＜0.05）。miR-138转染组T24细胞的增殖率显著低于未转染组和miR-138对照组（P＜0.05）。 转染48 h后,miR-138转染组的细胞凋亡率为（29.8±1.9）％,高于未转染组的（5.8±1.2）％和miR-138对照组的（7.7±0.9）％（P＜0.05）。miR-138转染组SIRT1的相对表达量为0.59±0.22,低于未转染组的1.00±0.35和miR-138对照组的1.20±0.42（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验证明SIRT1是miR-138的直接作用靶点。结论 miR-138在膀胱癌细胞中低表达,可能通过靶向SIRT1调控膀胱癌细胞的增殖和凋亡。     

微小RNA-373靶向调控LATS2的表达及其对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-373（miR-373）靶向调控大肿瘤抑制因子2（LATS2）的表达及其对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测HepG2细胞及正常肝细胞LO2中miR-373的表达水平,采用Lipofectamine脂质体法将miR-373抑制剂及阴性对照转染至HepG2细胞并分为抑制剂组和对照组,采用QPCR法检测两组的miR-373水平以评价转染效果,MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞的增殖及凋亡情况,Western blotting检测各组凋亡相关基因（Bax和caspase-3）及LATS2的表达情况,采用双荧光素酶报告实验验证miR-373与LATS2间的靶标关系。结果 与LO2细胞相比,HepG2细胞中miR-373的表达水平升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;转染后抑制剂组的miR-373水平低于对照组（P＜0.05）,提示抑制HepG2细胞miR 373表达成功;与对照组比较,抑制组的细胞增殖率降低,凋亡率及Bax、caspase-3和LATS2蛋白水平均升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;双荧光素酶报告基因实验表明miR-373可显著抑制野生型LATS2-3’UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性,而对突变型LATS2-3’UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-373可靶向调控LATS2的表达,且抑制miR-373表达可抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,为肝癌的靶向治疗提供一定参考。     

miR-147对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:比较胶质瘤患者胶质瘤组织和瘤旁组织中miR-147表达水平的差异性,进一步分析miR-147与胶质瘤细胞生物学活性的相关性。方法:通过实时荧光定量PCR检测65例胶质瘤患者瘤组织和瘤旁组织中miR-147的表达水平;采用Lipofectamine 2000转染法转染胶质瘤细胞,分为miR-147 mimics组和NC组,检测两组转染效率;进一步通过CCK-8实验、流式细胞实验和Transwell实验比较两组细胞生物活性。结果:胶质瘤组织中miR-147表达水平显著低于瘤旁组织;与NC组比较,miR-147 mimics组细胞不论是增殖能力还是侵袭能力都明显降低,但是,miR-147 mimics组的细胞凋亡率升高。结论:胶质瘤组织中存在miR-147低表达的现象。miR-147在胶质瘤细胞中表达升高能够抑制细胞的增殖能力、降低其侵袭能力,并促使更多的细胞发生晚期凋亡。miR-147可能在胶质瘤中扮演着抑癌基因的重要角色。     

miR-144-3p靶向zeb1调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖和凋亡

目的:探讨miR-144-3p是否通过靶向E盒锌指结合蛋白1（zeb1）调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖和凋亡。方法:qRT-PCR检测miR-144-3p在卵巢癌细胞和正常人卵巢上皮细胞中的表达差异。在卵巢癌细胞SKOV3中转染miR-144-3p mimics,MTT法测定细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中cyclinD1、p27、C-caspase-3蛋白表达。生物信息学软件预测miR-144-3p的靶基因可能为zeb1,荧光素酶报告系统鉴定其靶向关系。在卵巢癌细胞SKOV3中共转染miR-144-3p mimics、pcDNA3.1-zeb1,利用上述方法测定细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:miR-144-3p在卵巢癌细胞中的表达水平低于正常人卵巢上皮细胞。转染miR-144-3p mimics后的卵巢癌细胞SKOV3增殖能力下降,细胞周期被阻滞在G1期,细胞凋亡增多,细胞中cyclinD1蛋白表达减少,p27、C-caspase-3蛋白表达增加。miR-144-3p靶向调控zeb1表达。pcDNA3.1-zeb1可以逆转miR-144-3p mimics对卵巢癌细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论:miR-144-3p靶向zeb1抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖并诱导细胞凋亡。     

miR-586靶向TLR7调控食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖

目的:探讨miRNA调控食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖的潜在机制。方法:纳入2019年06月至2020年06月在我院接受治疗的食管癌患者6例,采集其食管癌组织和癌旁组织后抽取总RNA进行miRNA高通量测序。在食管癌细胞CaES-17中过表达食管癌组织和癌旁组织中的差异miRNA,检测食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖情况。通过TargentScan7.2在线分析和荧光素酶报告实验分析miRNA的靶标mRNA。结果:6例患者的食管癌组织和癌旁组织通过高通量测序发现hsa-miR-30d-5p、hsa-miR-6818-5p、hsa-miR-525-5p、hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-212-5p、hsa-miR-586、hsa-miR-1286、hsa-miR-365b-3p、hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-4317在食管癌组织和癌旁组织中的表达差异在8倍以上,并且食管癌组织均高于癌旁组织。干扰上述miRNA后,发现干扰miR-586能够抑制食管癌细胞CaES-17的增殖水平和迁移水平,提高凋亡水平。过表达miR-586后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平下降,增殖水平和迁移水平上升。TargentScan7.2在线分析和荧光素酶报告实验发现miR-586靶向TLR7的3' 端非编码区。敲低TLR7后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平下降,增殖水平和迁移水平上升。过表达TLR7后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平上升,增殖水平和迁移水平下降。但是,同时干扰miR-586和敲低TLR7后,相比于对照食管癌细胞,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平和增殖水平无显著差异。结论:miR-586通过靶向TLR7的3' 端非编码区,降解了TLR7的mRNA,抑制了TLR7的蛋白翻译,最终抑制了食管癌细胞CaES-17的凋亡、促进了食管癌细胞CaES-17的增殖。     

miR-107靶向调控Dicer1促进卵巢癌细胞系侵袭转移

目的 检测microRNA-107 (miR-107)在卵巢癌中的表达水平,探讨其对卵巢癌细胞系侵袭转移的调控作用及分子机制.方法 qRT-PCR法比较卵巢癌组织、正常卵巢组织、卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞中miR-107表达差异,用生物信息学的方法特异预测出miR-107靶基因Dicer1后,通过双荧光素酶报告体系进行验证.上调miR-107表达后,Western blot检测Dicer1的表达变化;划痕实验、Transwell实验观察卵巢癌细胞运动和侵袭能力的改变;qRT-PCR及Confocal观察EMT相关分子E-cadherin、β-Catenin、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin、ICAM-1、MMP-9的表达.结果 miR-107在上皮性卵巢癌组织的表达较正常卵巢组织显著升高(P＜0.05);双荧光素酶报告基因系统验证预测结果正确.上调miR-107后,Western blot结果显示Dicer1蛋白质水平被显著抑制,卵巢癌细胞系SKOV3细胞形态发生间质细胞样转变,间质标志分子β-Catenin、N-cadherin及MMP-9表达上升;体外实验表明卵巢癌细胞的运动和侵袭能力得到明显促进.结论 本研究表明miR-107促进卵巢癌侵袭转移的分子机制是通过下调miRNA加工机器Dicer1,从而介导卵巢癌细胞EMT的发生;抑制miR-107或恢复Dicer1水平可能成为上皮性卵巢癌治疗的有效手段.     

LINC01006靶向miR-331-3p调控多发性骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和转移的机制研究

目的:探讨LINC01006靶向miR-331-3p在多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)进展中的功能。方法:RT-qPCR检测39例MM患者和22例正常对照者骨髓标本来源的浆细胞中LINC01006和miR-331-3p的表达。分别转染si-LINC01006、si-NC、miR-331-3p mimics、miR-NC、si-LINC01006+anti-miR-NC、si-LINC01006+anti-miR-331-3p至MM细胞U266,通过CCK-8、流式细胞术和Transwell法评估U266细胞抑制率、凋亡率和转移数。DIANA Tools网站预测LINC01006与miR-331-3p的相互作用，并通过双荧光素酶报告基因法进一步验证。结果:MM患者骨髓标本来源的浆细胞中LINC01006表达升高，miR-331-3p表达降低。转染si-LINC01006可增加细胞抑制率和凋亡率(P<0.05),减少细胞转移数(P<0.05),并上调miR-331-3p表达(P<0.05)。转染miR-331-3p mimics可增加细胞抑制率和凋...     

微小RNA-199b-3p靶向调控SOX6的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-199b-3p（miR-199b-3p）靶向调控SOX6的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖及凋亡的影响。方法 采用Lipofectamine脂质体法将miR-199b-3p抑制剂及阴性对照（NC）转染至SW620细胞并分为抑制剂组和NC组,同时以未转染的SW620细胞作对照。采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测3组miR-199b-3p的表达以评价转染效果,MTT法和Annexin Ⅴ-FITC／PI流式细胞术检测转染后的增殖活性及凋亡率,QPCR和Western blotting检测各组凋亡相关基因（Bax和caspase-3）及SOX6的mRNA和蛋白水平,构建含有野生型及突变型SOX6-3’UTR的荧光报告基因质粒并采用双荧光素酶报告实验验证miR-199b-3p对SOX6的靶向调控作用。结果 QPCR检测显示,转染48 h后抑制剂组的miR-199b-3p的表达水平为0.526±0.034,低于未转染组的1.009±0.064和NC组的0.960±0.057,差异有统计学意义（P＜0.05）;与其余两组相比,抑制剂组转染24、48、72 h后的SW620细胞的增殖活性均降低（P＜0.05）;抑制剂组的凋亡率为（37.533±1.459）％,高于未转染组的（6.101±0.663）％和NC组的（8.753±1.061）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;抑制剂组SW620细胞的SOX6、Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均高于未转染组和NC组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验表明 miR-199b-3p可显著抑制野生型 SOX6-3’UTR的荧光荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论miR-199b-3p可靶向调控SOX6的表达,且下调miR-199b-3p表达可抑制SW620细胞的增殖并诱导凋亡,为结肠癌的治疗提供潜在的分子治疗靶点。     

miR-647通过靶基因NLRC5调控子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨miR-647对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:实验设置miR-NC组、miR-647组、anti-miR-NC组、anti-miR-647组、si-NC组、si-NLRC5组、miR-647+pcDNA组、miR-647+pcDNA-NLRC5组。实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-647和核苷酸寡聚化域样受体亚家族C5（nucleotide oligomerization domain-like receptor subfamily C5,NLRC5）mRNA表达水平;蛋白质印迹（Western blot）法检测NLRC5、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（p21）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达;四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶报告实验检测miR-647和NLRC5的靶向关系。结果:子宫内膜癌组织中miR-647低表达,NLRC5高表达（P＜0.05）;过表达miR-647或抑制NLRC5表达,细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,CyclinD1、Bcl-2表达水平显著降低,p21、Bax表达水平显著升高（P＜0.05）。miR-647靶向调控NLRC5,NLRC5过表达逆转了miR-647过表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的作用。结论:过表达miR-647可能通过靶向下调NLRC5的表达抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

miR-204对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨miR-204在人乳腺癌组织及MCF-7细胞中的表达水平及其对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 提取癌症和肿瘤基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库中浸润性乳腺癌的miR-204相关数据进行汇总,转染miR-204过表达病毒,筛选稳定转染细胞株并通过RT-qPCR检测转染率,MTT法检测过表达miR-204后乳腺癌MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 结果 miR-204在浸润性乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织明显下调（P＜0.001）,且与淋巴结转移和远处转移相关（P＜0.05）。过表达miR-204能够抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力（P＜0.05）;miR-204上调后,细胞凋亡率达到（34.7±1.9）%,细胞凋亡能力明显增强（P＜0.001）。结论 miR-204可抑制乳腺癌细胞增殖并介导细胞凋亡。     

吗啡联合顺铂对卵巢癌细胞Skov3增殖、凋亡及侵袭转移的影响

目的 探讨吗啡（Mor）联合顺铂（DDP）对人卵巢癌Skov3细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响。方法 采用MTT法观察不同浓度Mor（10、20、50、100、200 μmol／L）和DDP（1、2、5、10、20 mg／L）作用于Skov3细胞24、48、72、96 h后的增殖抑制率,筛选适合的浓度进行后续功能学研究。取对数生长期Skov3细胞分为4组：Mor（200 μmol／L）组、DDP（20 mg/L）组、Mor+DDP（200 μmol／L Mor+20 mg/L DDP）组和未加药对照组,分别采用流式细胞仪和实时定量PCR检测各组处理48 h的细胞凋亡率及凋亡相关基因（Bax、Bcl-2和caspase-3）的mRNA水平,采用Transwell试验和Western blotting检测各组处理48 h后穿膜细胞数和侵袭相关蛋白（MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2）水平。结果 随Mor（10～200 μmol／L）和DDP（1～20 mg／L）浓度增加,Skov3细胞的增殖能力受抑制,且抑制效应呈浓度和时间依赖方式;Mor+DDP组处理24、48、72、96 h后的增殖抑制率高于Mor组、DDP组和对照组（P＜0.05）。与对照组相比,Mor、DDP和Mor+DDP组的细胞凋亡率、caspase-3活化率、Bax mRNA、caspase-3 mRNA、TIMP-1和TIMP-2水平均升高,Bcl-2 mRNA、穿膜细胞数、MMP-2和MMP-9水平均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;Mor+DDP组的上述指标水平均优于Mor组和DDP组（P＜0.05）。结论 Mor和DDP对Skov3细胞均有细胞毒性,能抑制增殖及侵袭转移并诱导凋亡,且Mor联合DDP应用的抑制作用增强。     

微小RNA-92a靶向PTEN／Akt信号通路对鼻咽癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-92a（miR-92a）通过靶向PTEN／Akt信号通路对鼻咽癌HONE1细胞增殖与凋亡的调控作用。方法 采用Lipofectamine脂质体法向HONE1细胞转染miR-92a抑制剂（miR-92a组）和阴性对照（NC组）,设不行转染的HONE1细胞为对照组。转染成功后用实时荧光定量PCR（QPCR）检测miR-92a在不同细胞组中的表达情况;MTT法检测各组细胞的增殖率;流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率;Western blotting实验检测PTEN／Akt信号通路中PTEN和p-Akt蛋白的表达量。结果 转染48 h miR-92a组与对照组和NC组相比,miR-92a的表达量明显降低（P＜0.05）,而对照组和NC组的差异无统计学意义（P＞0.05）。miR-92a组转染24、48、72、96 h的细胞增殖率分别为（84.51±2.74）％、（77.21±3.55）％、（62.07±3.57）％和（49.25±4.15）％,其中72、96 h的细胞增殖率低于对照组和NC组（P＜0.05）;miR-92a组转染48 h的细胞凋亡率为（46.12±1.79）％,高于对照组的（6.99±0.72）％和NC组的（8.42±0.81）％,差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-92a组转染48 h PTEN和p-Akt蛋白的表达水平分别为0.61±0.12和0.37±0.09,对照组分别为0.41±0.11和0.73±0.14,NC组分别为0.39±0.08和0. 68±0.07,与对照组和NC相比,miR-92a组细胞的PTEN表达升高,p-Akt表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 通过抑制miR-92a的表达来抑制鼻咽癌细胞增殖且促进其凋亡,可能是通过负调控PTEN／Akt信号通路来实现的。     

微小RNA?148a靶向调控S1PR1及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-148a(miR-148a)靶向调控鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1PR1)及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测32例上皮性卵巢癌组织和25例正常卵巢组织及卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢上皮癌细胞(A2780、SKOV3、OVCAR3和HO-8910)的miR-148a水平,Kaplan-Meier plotter在线生存分析miR-148a水平与485例卵巢癌预后的关系;采用脂质体向SKOV3细胞进行转染,根据转染物分为过表达组(转染miR-148a模拟物)、阴性对照(NC)组(转染无关序列)和对照组(未转染),采用QPCR检测miR-148a、S1PR1及凋亡相关因子Bcl-2、Bax和caspase-3的水平,荧光素酶报告基因系统验证两者的靶向关系,活细胞计数(CCK)-8法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术和caspase-3比色分析法检测增殖活力、凋亡率和caspase-3活性。结果QPCR结果显示与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织的miR-148a水平降低(P<0.05);卵巢癌细胞的miR-148a水平均低于IOSE80细胞(P<0.05),尤其是SKOV3细胞的最低。Kaplan-Meier Plotter在线分析显示337例高水平者的中位总生存期为49.43个月,优于148例低水平者的38.53个月(P<0.05)。与对照组和NC组相比,过表达组的miR-148a水平升高,而S1PR1水平降低(P<0.05);S1PR1野生型质粒和miR-148a模拟物共转染细胞的荧光素酶活性较其他共转染组合降低(P<0.05)。与对照组和NC组相比,过表达组的增殖活力和Bcl-2水平降低,而凋亡率和caspase-3活性以及Bax和caspase-3水平均升高(P<0.05)。结论miR-148a在卵巢癌组织和细胞中表达下调且发挥抑癌作用,可能通过靶向S1PR1来抑制SKOV3细胞的增殖并诱导凋亡,在卵巢癌防治中有一定应用前景。     

miR-340对乳腺癌MDA-MB231细胞增殖和凋亡的影响

背景与目的：既往研究表明,微小RNA-340(miR-340)能负性调控多种肿瘤的进展,但其在乳腺癌细胞增殖和凋亡中的研究较少,本研究旨在探讨miR-340对乳腺癌MDA-MB231细胞增殖和凋亡的作用。方法：利用脂质体LipofectamineTM2000将pre-miR-340或anti-miR-340瞬时转染至乳腺癌MDA-MB231细胞,通过RT-PCR检测miR-340 mRNA的水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测cleaved-caspase-3蛋白的表达,MTT比色法检测细胞增殖的抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：Pre-miR-340增加了MDA-MB231细胞中miR-340表达,同时增加cleaved-caspase-3蛋白表达、抑制MDA-MB231细胞增殖并促进其凋亡。而anti-miR-340抑制了MDAMB231细胞中miR-340表达,并且抑制cleaved-caspase-3蛋白表达,促进了MDA-MB231细胞增殖,抑制了MDAMB231细胞的凋亡。结论：miR-340转染后能上调MDA-MB231细胞中cleaved-caspase-3蛋白的表达从而抑制细胞增殖,促进其凋亡。     

格尔德霉素对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:研究格尔德霉素(geldanamycin,GA)对人卵巢癌SKOV3细胞的体外抑制作用,探讨GA抑制SKOV3细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制。方法:MTT法检测GA单独或联合顺铂(cisplatin)对SKOV3细胞的增殖抑制作用;FCM法检测GA作用后SKOV3细胞周期及凋亡率的变化;分别应用免疫细胞化学法(immunocytochemistory,ICC)和FCM法检测GA处理SKOV3细胞48h后细胞内Akt、Raf-1蛋白的表达变化。结果:GA对SKOV3细胞的体外增殖可产生明显的抑制作用(P<0.05),该作用随着GA浓度的增高和作用时间的延长而增强。而且,GA可增强顺铂对SKOV3细胞的增殖抑制作用,在一定浓度范围内随着GA浓度的增高,两药联合应用对SKOV3细胞的增殖抑制作用越强。经0～2000nmol/L GA作用SKOV3细胞48h后,G2/M期细胞逐渐增多,细胞凋亡率也显著升高(P<0.05)。ICC和FCM法检测结果均表明,经0～2000nmol/L GA处理48h后,SKOV3细胞中Akt、Raf-1蛋白的表达水平随着药物浓度增高而逐渐降低(P<0.05)。结论:GA能够对卵巢癌SKOV3细胞产生明显的体外增殖抑制作用,并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调卵巢癌细胞中Akt和Raf-1蛋白表达相关。     

miR-31在结直肠癌患者血清中的表达及对结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响

背景与目的：microRNA与肿瘤关系密切,血清miRNAs可以作为筛选和监测结直肠癌的有效指标。该研究旨在检测结直肠癌患者血清中miR-31的表达水平,并分析miR-31对结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：收集40例结直肠癌患者和35例健康人群作为对照,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR),检测其血清miR-31的表达水平,并分析结直肠癌患者血清miR-31的表达水平与临床病理特征之间的关系。采用脂质体转染将miR-31模拟物(miR-31 mimics)和抑制剂(miR-31 inhibitor)转染到HCT116细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及周期改变。结果：结直肠癌患者血清中miR-31的表达显著高于健康对照组,miR-31表达与结直肠癌分化程度有关。转染miR-31mimics组HCT116细胞生长增快,而转染miR-31抑制剂后细胞增殖能力明显降低(P＜0.01);同时miR-31mimics组细胞凋亡所占比例较miR-31抑制剂组和阴性对照组(miR-control,NC)明显减少,尤其是晚期凋亡细胞减少为著;转染miR-31抑制剂组,G1期细胞较miR-31 mimics组和NC组明显增多。结论：miR-31在结直肠癌患者血清中表达显著上调,miR-31可能通过促进结肠癌细胞增殖、抑制细胞凋亡而参与了结直肠癌的发展进程,有望成为结直肠癌诊断的标志物。