TGFβ1正、反义基因转染60Co照射HELF对TGFβ1及I型前胶原mRNA表达调控影响

目的　观察TGFβ1正、反义基因转染6 0 Coγ射线照射的HELF后对其TGFβ1mRNA及Ⅰ型前胶原mRNA表达调控的影响。方法　采用脂质体介导法进行基因稳定转染 ,转染细胞经PCR ,DNAdotblot鉴定和RNAdotblot分析。结果　选择 5Gy照射细胞 ,采用LipofectAMINE将TGFβ1正、反义基因表达载体pMAMneo TGFβ1和pMAMneo AntiTGFβ1转入HELF ,转染细胞经G418抗性筛选出来 ,并且在糖皮质激素地塞米松诱导下培养。提取培养细胞的RNA和染色体DNA ,转染细胞DNA与地高辛标记的neo特异探针杂交阳性 ,且可用neo基因特异的PCR引物扩增出 2 76bp的阳性片段。对提取的RNA用地高辛标记的TGFβ1探针和α1(Ⅰ )寡核苷酸探针经RNAdotblot分析表明 ,转染pMAMneo AntiTGFβ1的细胞其TGFβ1mRNA水平下降 ,而转染pMAMneo TGFβ1的细胞其TGFβ1mRNA水平则升高。对于Ⅰ型前胶原mRNA ,前者表达水平比未转染细胞低 ,后者则略高。 结论　TGFβ1反义基因转染6 0 Coγ射线照射的人胚肺成纤维细胞后可以使细胞中TGFβ1mRNA含量水平减少 ,使Ⅰ型前胶原mRNA表达水平降低     

转化生长因子β1及其受体在正常及损伤性狭窄胆管壁中的表达

目的：探讨转化生长因子β1（TGF-β1)在损伤性胆管狭窄发生中的作用,方法：通过免疫组化检测TGF－β1及其I型受体（TGF－βR1)拓人正常胆管壁中及损伤性狭窄胆管壁中细胞及少量成纤维细胞高表达TGF－β1及TGF－βR1,在损伤性狭窄管壁中,大量炎细胞及少量成纤维细胞高表达TGF－β1,大量炎细胞及大量成纤维细胞高表达TGF－βR1,结果：胆管损伤后,其中的炎细胞及成纤维细胞产生了TGF－β1,TGF－β1可能由TGF－βR1介导通过自分泌及旁分泌机制,使TGF-β1秒断产生,并民纤维细胞表型改变,活化,胶原等基质不民合成堆积,TGF－β1可能在损伤性胆管狭窄发生中起了重要作用。     

TGFβ1正、反义基因转染60Co照射HELF对TGFβ1及I型前胶原mRNA表达调控影响

目的 观察TGFβ1正、反义基因转染^60Coγ射线照射的HELF后对其TGFβ1、mRNA及Ⅰ型前胶原mRNA表达调控的影响。方法 采用脂质体介导法进行基因稳定转染,转染细胞经PCR,DNA dot blot鉴定和RNA dot blot分析。结果 选择5Gy照射细胞,采用Lipofect AMINEuqf TGFβ1正、反义基因表达载体pMAM-TTGFβ1pMAMneo-AntiTGFβ1转入HELF,转染细胞经G418抗性筛选出来,在糖皮质激素地塞米松诱导下培养。提取培养细胞的RNA和染色体DNA,转染细胞DNA与地高辛标记的neo特异探针杂交阳性,且可用neo基因转导的PCR引物扩增出276bp的阳性片段。对提取的RNA地高辛标记的TGFβ1探针和α1（Ⅰ）寡核苷酸探针经RNA dot blot分析表明,转染pMAMneo-AntiTGFβ1的细胞其TGFβ1 mRNA水平下降,而转染pMAMneo-TGFβ1的细胞其TGFβ1 mRNA水平则升高。对于Ⅰ型前胶原mRNA,前者表达水平比未转染细胞低,后者则略高。结论 TGFβ1反义基因转染^60Co γ射线照射的人胚肺成纤维细胞后可以使细胞中TGFβ1 mRNA含量水平减少,使Ⅰ型前胶原mRNA表达水平降低。     

PDGF-A、PDGFR-α在单纯创伤和照射复合创伤愈合过程中伤口成纤维细胞内的表达与意义

目的 探讨局部照射对创伤愈合过程中伤口成纤维细胞PDGF－APDGFR－α表达的影响及意义。方法 将132只Wisar大鼠分为单纯创伤组（对照组）和照射复合创伤组（照射组），用免疫组织化学，原位RT－PCR和图像分析方法检测两组伤口伤后1－60d各时间点PDGF－A，PDGFR－α蛋白及PDGF－A mRNA的表达规律。结果 局部照射使伤口愈合各阶段滞后，延长。对照组伤口成纤维细胞PDGF－A和PDGFR－α表达有明显的时相性，PDGF－A在伤后2－21d可见表达，5d为表达高峰；照射组在伤后各时间点其表达均减弱，且表达时相延长，伤后28d仍有表达；PDGFR－α在对照组于伤后2－15d在表达，5d时达高峰，照射组PDGFR－α表达减弱，但共表达时相与对照组一致。结论 照射抑制伤口成纤维细胞内源性PDGF－A及PDGFR－α的表达，表明照射使成纤维细胞自分泌PDGF－A功能减弱并对外源性PDGF-A反应性减弱，进而导致伤口愈合延迟。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1在人发育骨与软骨中的表达及意义

观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）和转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）在人发育骨与软骨中的表达和分布,认识这两种生长因子在人发育骨与软骨中的作用,用组织学、免疫组化及原位杂交技术,对临床经过石蜡包埋的人发育骨与软骨组织进行定位、定性检测。结果显示ＴＧＦβ和ｂＦＧＦ在人发育的骨与软骨细胞中共同表达。作者认为ＴＧＦβ和ｂＦＧＦ协同作用可能在人发育骨与软骨中起重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1 在人发育骨与软骨中的表达及意义

观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和转化生长因子β1(TGFβ1)在人发育骨与软骨中的表达和分布,认识这两种生长因子在人发育骨与软骨中的作用,用组织学、免疫组化及原位杂交技术,对临床经过石蜡包埋的人发育骨与软骨组织进行定位、定性检测。结果显示TGFβ1和bFGF在人发育的骨与软骨细胞中共同表达。作者认为TGFβ1和bFGF协同作用可能在人发育骨与软骨中起重要作用。     

白介素-1β对人牙周膜成纤维细胞MMP-13表达影响的研究

目的 探讨白介素-1β（IL-1β）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）中基质金属蛋白酶-13（MMP-13）表达影响的研究.方法 体外分离培养hPDLFs并随机分为对照组和实验组,对照组中加入等量无血清培养液,实验组加入不同浓度IL-1β（0 ng/ml、0.5 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml）作用hPDLFs 24 h.采用RT-PCR检测MMP-13 mRNA的表达情况,并选取最适浓度作用24 h,采用Western blot检测MMP-13蛋白表达的变化情况.结果实验组与对照组比较,MMP-13在IL-1β浓度为10 ng/ml和20 ng/ml时mRNA表达最为明显（P＜0.05）,10 ng/ml组和20 ng/ml组MMP-13 mRNA表达相比较,无明显差异（P＞0.05）.采用10 ng/ml IL-1β作为最适浓度进行刺激,并作用hPDLFs 24 h,与对照组比较,MMP-13蛋白表达显著增加,具有显著差异性（P＜0.05）.结论 在IL-1β调控下,hPDLFs中MMP-13的表达显著增加,并呈明显的浓度依赖性,而MMP-13表达的增加可能是引起正畸治疗过程中牙根吸收的重要机制之一.     

成纤维细胞生长因子对关节软骨细胞转化生长因子β1作用的免疫组织化学观察

目的观察成纤维细胞生长因子对培养兔关节软骨细胞转化生长因子β１的表达。方法培养１月龄新西兰兔关节软骨细胞，在每次换液时加入成纤维细胞生长因子１００ｎｇ／ｍｌ，铺满后收集细胞，作关节软骨细胞转化生长因子β１常规及电镜免疫组织化学观察。结果光镜下实验组细胞明显呈棕色，电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒黏附。结论成纤维细胞生长因子能促进关节软骨细胞转化生长因子β１的表达。     

TGFβ1反义基因及表达荧光素酶的重组腺病毒对放射性肺纤维化体内基因治疗初探

目的　探索TGFβ1反义基因和脂质体混合物以及重组腺病毒转移载体进行放射性肺纤维化体内基因治疗的可行性。方法　通过支气管插管与滴注的方式进行。结果　检测分析表明 ,转基因后 1 5d ,肺组织DNA用neo基因特异引物PCR扩增阳性 ;第 5 5天 ,PCR扩增 6 7% (2 3)阳性。RNAdotblot分析表明 ,转染TGFβ1反义基因的肺组织TGFβ1mRNA含量降低。转染 35d后取动物肺组织测定其羟脯氨酸含量表明 ,尽管转染TGFβ1反义基因的动物其肺组织羟脯氨酸含量比正常对照组高 (P <0 0 1) ,但它比生理盐水治疗对照组动物和转染TGFβ1正义基因的动物其肺内羟脯氨酸含量低 (均为P <0 .0 1)。用含有荧光素酶基因的复制缺陷型腺病毒感染大鼠 ,其肺脏均检测到了有荧光素酶活性蛋白的表达。结论　由聚阳离子脂质体介导的TGFβ1反义基因进行的肺纤维化体内基因治疗是一个简单易行的方法 ,它可以减缓肺纤维化的发生 ;用复制缺陷的重组腺病毒进行肺脏的基因治疗是一种较为理想的方法 ,有望成为治疗肺纤维化的有效的新途径。     

阿托伐他汀对心脏成纤维细胞转化生长因子-βⅠ型受体mRNA表达的影响

心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)占心脏容积的25%和心脏细胞总数的70%,是心肌纤维化的主要效应细胞,也是他汀类调脂药物的主要靶细胞.CFs可合成和分泌转化生长因子-β1(transforming growth factor-betal,TGF-β1),通过与转化生长因子-βⅠ型受体(transforming growth factor-beta receptortypel,TGF-βRⅠ)结合,参与心肌纤维化的过程[1].我们以往的实验发现,阿托伐他汀对2型糖尿病心肌病具有一定防治作用[2],但对CFs TGF-βRⅠ mRNA表达的影响尚不清楚.因此,本实验观察了阿托伐他汀对醛固酮诱导新生大鼠CFs TGF-βRⅠmRNA表达的影响,并探讨其可能的作用机制.     

β4整合素结合蛋白调控成纤维细胞胞外基质生成的实验研究

目的探讨β4整合素结合蛋白（ITGB4BP）对成纤维细胞胞外基质生成的调控作用。方法分别构建、包装能在哺乳动物细胞中促进和抑制ITGB4BP表达的腺病毒表达载体pAdEasy-ITGB4BP-EGFP和慢病毒表达载体Lentivirus-FIV-H1／U6-copGFP-ITGB4BP-RNAi,经筛选鉴定有效后,分别感染人正常皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕（HTS）成纤维细胞,利用ELISA检测细胞培养上清内基质金属蛋白酶（MMP-9）、转化生长因子-β1（TGF-β1）和I型胶原蛋白（collagen I）的表达情况。结果正常皮肤成纤维细胞内IT—GB4BP高表达后,引起MMP-9、TGF-β1和collagen I表达降低;反之HTS成纤维细胞内ITGB4BP表达抑制后,MMP-9、TGF-β1和collagen I表达增高。结论ITGB7BP对MMP-9、TGF-β1和collagen I表达具有重要调节功能。提示ITGB4BP可能具有抗纤维化的重要功能,为下一步深入探讨HTS的形成机制提供了重要依据。     

TGFβ1反义基因及表光荧光素酶的重组腺病毒对放射性肺纤维化体内基因治疗初探

目的：探索TGFβ1反义基因和脂质体混合物以及重组腺病毒转移载体进行放射性肺纤维化体内基因治疗的可行性。方法：通过支气管镜插管与滴注的方式进行。结果：检测分析表明,转基因后1.5d,肺组织DNA用meo基因特异引物PCR扩增阳性;第5．5天,PCR扩增67％（2／3）阳性。RNAdot blot分析表明,转染TGFβ1反义基因的肺组织TGFβ1mRNA含量降低,转染35d后聚动物肺组织测定其羟脯氨酸含量表明,尽管转染TGFβ1反义基因的动物其肺组织羟脯氨酸含量比正常对照高（P＜0．01）,但它比生理盐水治疗对照组动物和转染TGFβ1正义基因的动物其肺内羟脯氨酸含量低（均为P＜0．01）。用含有荧光素酶基因的复制缺陷型腺病毒感染大鼠,春肺脏均检测到了有荧光素酶活 蛋白的表达。结论：由聚阳离子脂质体介导的TGFβ1反义基因进行的肺纤维化体内基因治疗是一个简单易行的方法,它可以减缓肺纤维化的发生,用复制缺陷的重组腺病毒进行肺的基因治疗是一种较为理想的方法,有望成为治疗肺纤维化的有效的途径。     

放射复合伤口及单纯伤口愈合过程中肌成纤维细胞形态和数量变化的比较研究

目的：为研究放射复合伤口难愈合的机制。观察单纯伤口及放射复合伤口愈合过程中肌成纤维细胞数量的动态变化。方法：利用本实验室已建立的放射复合伤口动物模型,采用光镜、电镜、免疫组化等方法,动态观察伤口愈合过程中肌成纤维细胞数量的变化。结果：25Gy （γ射线）局部照射对伤口愈合有明显的损害作用,照射组伤口较对照组伤口延迟6d愈合。与正常对照组相比,照射组肌成纤维细胞出现晚、高峰期数量少。结论：辐射引起伤口愈合过程中肌成纤维细胞数量减少,时相延迟,从而影响伤口收缩,可能是辐射影响伤口愈合的重要机制之一。     

胰腺癌表观扩散系数与纤维化含量、成纤维细胞活化蛋白表达相关性研究

目的：探讨高场磁共振扩散成像表观扩散系数（ADC ）值与纤维化含量、成纤维细胞活化蛋白（FA P ）表达评分的相关性。方法对18例经病理证实的胰腺癌患者进行3．0T MRI平扫及扩散加权成像（DWI）扫描,使用单一层面法选取感兴趣区（ROI）测量癌区ADC值,并对胰腺癌患者的蜡块进行Masson染色及FAP免疫组化染色,采用 Pearson相关分析检验ADC值与纤维化含量、FA P染色评分的相关性。结果胰腺癌区的ADC值与纤维化含量呈负相关（ r＝－0．459）,但无统计学意义（ P＝0．056）,中～高分化组ADC值与纤维化含量呈负相关（ r＝－0．564,P＝0．044）。ADC值与 FA P染色评分呈负相关（ r＝－0．479,P＝0．036）。结论胰腺癌的ADC值与其病理参数间呈负相关,DWI有望对胰腺癌的病理特征实现定量成像,有助于进一步了解其病理特征。     

RNA干扰阻滞胸腺素β4表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化的抑制作用

目的 探讨RNA干扰阻滞胸腺素β1表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)的抑制作用.方法 构建能表达针对胸腺素β1的小干扰RNA(siRNA)的重组腺病毒载体,以及表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照载体,分别感染人肾小管上皮细胞株(HKC),得到胸腺素β1表达受抑制的HKC-siTβ4和胸腺素β4表达未受影响的HKC-siC.根据用TGF-β1处理HKC、HKC-siTβ4和HKC-siC的情况,将培养的细胞分为4组:正常HKC组(C组),TGF-β1处理HKC组(T C组),TGF-β1处理HKC-siTβ1组(T siTβ1组)和TGF-β1处理HKC-sic组(T siC组).48h后,分别采用RT-PCR和Western blotting检测各组胸腺素β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素表达,并分析胸腺素β1和α-SMA表达量的相关性.结果 C组胸腺素β4表达弱阳性,α-SMA表达阴性,E-钙黏素表达强阳性;T C组胸腺素β1和α-SMA表达强阳性,E_钙黏素表达较C组减弱(P＜0.01);T siTβ1组胸腺素β1和α-SMA表达弱阳性,表达量显著低于T C组(P＜0.01),E-钙黏素显著高于T C组(P＜0.01);T siC组胸腺素β1、α-SMA和E-钙黏素表达与T C组相比均无显著差异(P＞0.05).胸腺素β4和α-SMA表达呈显著正相关.结论 RNAi阻滞胸腺素β4表达能有效地抑制TGF-β1诱导EMT,提示胸腺素β4是介导TGF-β1诱导EMT的重要分子.     

PTEN编码蛋白对TGF-β1刺激大鼠肾成纤维细胞增殖的抑制作用

目的观察PTEN基因编码蛋白对TGF-β1刺激所致大鼠肾成纤维细胞增殖的影响。方法用重组PTEN腺病毒转染体外培养的大鼠肾成纤维细胞,倒置荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,RT-PCR检测PTEN mRNA表达。转染48h后TGF-β1体外刺激,TGF-β1刺激24h后MTT法检测细胞增殖活力,免疫细胞化学检测PCNA蛋白表达。结果PTEN腺病毒转染后绿色荧光蛋白和PTEN mRNA表达明显增多。PTEN基因编码蛋白明显抑制TGF-β1刺激所致大鼠肾成纤维细胞增殖,并显著减少PCNA的表达。结论PTEN能抑制TGF-β1刺激所致大鼠肾成纤维细胞增殖,可能具有抑制残肾纤维化、延缓残肾毁损的作用。     

腮腺创伤修复中碱性成纤维细胞生长因子的表达及意义

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在腮腺创伤修复中的表达变化。方法：采用宏观、体视学、显微镜图象分析及免疫组织化学方法对大鼠腮腺部分切除术后剩余腺体bFGF的表达变化进行了动态分阶段分析。结果：bFGF在损伤刺激后发生高表达，伤后1d最高，之后逐渐降低，至伤后8w恢复正常。与之相伴随，间质组织在前2W明显增生，以后逐渐减少，腺泡细胞在前2w 大量萎缩凋亡，2w后又再生，8w恢复正常。结论：bFGF是强丝裂原和生血管因子，是参与腮腺创伤修复的重要细胞因子。     

Ras相关区域家族1A和碱性成纤维细胞生长因子在子宫内膜癌中的表达及意义

 目的 探讨Ras相关区域家族1A (ras association domain family 1A,RASSF1A)基因及碱性成纤维细胞生长因子( basicfibroblast growth factor,bFGF)在子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生、增生子宫内膜中各临床病理参数之间的关系.方法 应用免疫组化S-P法及RT-PCR方法检测正常增生期子宫内膜、子宫内膜不典型增生及子宫内膜癌组织中bFGF及RASSF1A基因的表达状况,观察结果并进行统计学处理.结果 (1) 子宫内膜癌中bFGF表达强度与各临床病理参数密切相关,随着组织分化程度降低、肌层浸润加深和手术-病理分期的增高而逐渐增大(P< 0.05);而与淋巴结转移无关( P>0.05).(2) 子宫内膜癌组织中RASSF1A表达水平与各临床病理参数密切相关,随着组织分化程度降低、肌层浸润加深和手术-病理分期的增高,RASSF1A表达逐渐降低(P< 0.05);而与淋巴结转移无关( P>0.05).结论 bFGF是子宫内膜癌组织重要的血管生成因子,其高表达在子宫内膜腺癌的发生、发展过程中起一定作用,RASSF1A的低表达促进了肿瘤的发生,两种因子的检测对子宫内膜腺癌的早期诊断、恶性程度的判定及预测预后有积极意义.     

大鼠5 Gy全身照射对伤口成纤维细胞功能的抑制效应及W11-a12的促愈作用

目的 探讨5Gy全身照射对伤口成纤维细胞（fibroblasts,FBs)功能的抑制效应及W11－a12的促愈作用。方法 采用^60Coγ射线5Gy全身照射大鼠复合背部植入聚乙烯醇海绵的皮肤伤口模型,观察伤后伤口FBs的纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子β1（TGFβ1）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)免疫细胞化学染色反应的变化及W11－a12对其的影响。结果 5Gy全身照射复合皮肤创伤后第3、5天伤口内FN、TGFβ1、bFGF免疫细胞化学染色反应阳性的FBs数量均显著减少,但减少的程度有所不同,由重到轻依次为bFGF、FN、TGFβ1。而W11－a12能显著增加未照射组和照射组伤口中FN、TGFβ1、bFGF免疫细胞化学染色反应阳性FBs数量。结论 全身放射损伤对伤口中FBs的合成与分泌功能具有抑制作用,增强FBs合成和分泌功能是W11－a12促愈作用的一个途径。