天然来源萘醌类化合物抗肿瘤活性研究进展

天然来源萘醌类化合物是一类具有明显生物活性的物质,多具有抗肿瘤作用。通过查阅近期国内外文献,综述了天然来源萘醌类抗肿瘤化合物的自然界来源、化合物结构、抗肿瘤作用及其机制,以期为进一步研究与开发提供有价值的参考。     

红树林内生真菌抗细菌和抗真菌活性的初步研究

目的分离和筛选具有抗细菌和抗真菌活性的红树林内生真菌。方法从红树林植物桐花树、海漆、秋茄、木榄、白骨壤、银叶树中分离到60株内生真菌,对其代谢产物进行抗菌检测,通过滤纸片法来检测内生真菌代谢产物抗细菌和抗真菌活性。结果共有35株内生真菌具有抗细菌活性,占待侧菌株总数的58.3%,其中以不产孢类、青霉属、曲霉属、镰孢属为主,分别占活性菌株总数的51.4%、8.6%、8.6%、8.6%;共有49株内生真菌具有抗真菌活性,占待侧菌株总数的81.7%,其中以不产孢类和盘长孢属为主,分别占活性菌株总数的44.9%、17.1%。结论红树林内生真菌是抗菌活性物质的一个潜在的、丰富的资源库,值得进一步研究和开发。     

太子参内生真菌体外抗肿瘤、抗氧化活性研究

目的 探讨太子参内生真菌代谢产物的体外抗肿瘤、抗氧化活性. 方法 采用组织块法对太子参内生真菌进行分离,用MTT法检测抗肿瘤活性;DPPH法检测抗氧化活性. 结果 从太子参中共分离出18株内生真菌,其中有6株菌株对肿瘤细胞具有显著的抑制作用(IC50＜200 μg/mL),3株具有较好的抗氧化活性(IC50＜ 100 ...     

白屈菜内生真菌合成纳米银的活性及抗肿瘤活性分析

目的:利用白屈菜分离获得的烟曲霉发酵产物合成纳米银,为纳米材料生物合成领域研究提供新的参考依据。方法:紫外全波长分光光度计确定纳米银特征谱,进一步考察了所制备纳米银对人卵巢癌细胞A2780的生存率的影响。结果:得到球形或近球形的纳米银,粒度范围为1~25 nm,紫外光谱的最大吸收波长为422 nm,所得纳米银粒子对人卵巢癌细胞A2780具有较好的抑制效果。结论:利用白屈菜内生真菌烟曲霉可实现对纳米银的可控合成,并具有一定的肿瘤细胞抑制效果。     

Hannoa klaineana植物的苦木内酯类化合物的抗肿瘤活性

由苦木科植物Hannoa klaineana的根皮中分离得到5种苦木内酯类化合物(quasi-noids),其中仅15-desacetylundulatone对P388小鼠淋巴性白血病细胞及结肠38腺癌显示出抗癌活性。Undulatone与15-O-β-glucopyranosy1-21-hydroxy-glaucarubolone毒性较大,而6α-tigloyxy-glau-carubol和21-hydroxyglaucartlbolone没有活性。本文对构效关系进行了研究。     

仙鹤草内生真菌代谢物抗肿瘤成分的研究

目的 从仙鹤草的根茎以及叶中分离内生真菌,并进行初步鉴定及活性筛选.方法 选择Hela,HepG2,Skov3,S-180细胞为指示细胞进行MTT法实验.结果 从仙鹤草的根,茎以及叶中分离共出47株内生真菌,其中20株内生真菌对一种或多种肿瘤细胞有抑制作用,其中根、茎叶,抗肿瘤活性菌株比例分别为40.0%,44.7%及42.1%,其中抗肿瘤活性菌株主要分布于青霉属,曲霉属等10个属中.结论 首次从仙鹤草中分离和鉴定出47株内生真菌,仙鹤草内生真菌中广泛分布着活性菌株.     

槲寄生内生真菌发酵液抗肿瘤作用机制研究

目的观察槲寄生内生真菌抗肿瘤活性菌株发酵液的抗肿瘤作用机制。方法利用实时细胞分析系统（RT-CES）对该菌株发酵液作用于细胞群落的整体生物学功能进行实时检测,构建发酵液作用效果的＂细胞指纹图谱＂,推断发酵液可能的抗肿瘤作用机制;透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测该菌株发酵液诱导的肿瘤细胞凋亡作用。结果槲寄生内生真菌发酵液具有诱导肿瘤细胞凋亡效应。结论发酵液的抗肿瘤作用机制可能通过抑制微管解聚使肿瘤细胞有丝分裂终止,促进肿瘤细胞凋亡,或通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制其生长,从而导致细胞死亡。     

1,4二羰基类化合物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的：：寻找新型靶向抗肿瘤小分子。方法：通过高通量筛选得到先导物,合成其衍生物,采用MTT法对衍生物的体外抗肿瘤活性进行测试,并通过细胞周期实验、体外抗 HCT116细胞(p53-/-)活性实验以及免疫共沉淀实验探索其可能的抗肿瘤作用机制。结果：化合物9对 HCT116细胞抑制活性达到9.382μM、化合物1对MCF7细胞抑制活性达到3.636μM、化合物7与化合物10对 HepG2细胞的抑制活性分别为6.677μM和8.746μM,均优于阳性药 Nutlin-3a 与5-Fuorouracil。并推测出衍生物抗肿瘤作用机制为 p 53-MDM2相互作用。结论：1,4二羰基化合物具有良好的体外抗肿瘤活性,其作用机制为p 53-MDM2相互作用。     

化合物T44的抗肿瘤活性研究

目的评估化合物1-[4’-（（3R,5R）-金刚烷基）苯基）]正丁胺盐酸盐（T44）的体外抗肿瘤活性,并初步探索可能的分子机制,为这种化合物的综合应用提供实验依据。方法四甲基偶氮唑蓝比色法检测T44对细胞的体外生长抑制作用;细胞形态观察法研究T44对细胞形态的影响;流式细胞仪法检测T44作用下肿瘤细胞周期和凋亡率的变化;蛋白印迹法检测T44对不同周期蛋白表达的影响;细胞划痕实验检测T44对肿瘤细胞迁移能力的影响。结果T44对检测的11株肿瘤细胞的增殖均有抑制效果,对正常细胞人胚肺成纤维细胞也具有一定的增殖抑制作用,半数抑制浓度值为（16．58±3．49）μmol／L,高于受测的大部分肿瘤细胞;T44能导致肿瘤细胞凋亡和周期阻滞;T44能影响周期蛋白的表达并能降低HCT116细胞的迁移能力。结论T44主要通过促进细胞凋亡来发挥抗肿瘤作用。     

槲寄生内生真菌发酵液的抗肿瘤作用机理研究

目的：对槲寄生内生真菌抗肿瘤活性菌株发酵液的抗肿瘤机理进行初步研究,为进一步开发利用槲寄生内生真菌资源提供实验和理论依据。方法：利用实时细胞分析系统(RT-CES系统)对该菌株发酵液作用于细胞群落的整体生物学功能进行实时检测,构建发酵液作用效果的“细胞指纹图谱”,推断发酵液可能的抗肿瘤作用机理;进一步采用透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测该菌株发酵液诱导的肿瘤细胞凋亡作用。结论：通过本研究,我们推断发酵液的抗肿瘤作用机理是：通过抑制微管解聚使肿瘤细胞有丝分裂终止促进肿瘤细胞凋亡,最后导致肿瘤细胞死亡;通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制其生长,从而导致细胞死亡。     

一种新型海洋来源的蒽环类化合物D19抗肿瘤活性及机制研究

目的探讨新型海洋源性蒽环类化合物D19的抗肿瘤作用及分子机制。方法采用四甲基二氮唑蓝（MTT）比色法、脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）、免疫印迹法（WesternBlotting）检测D19对人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-435生长的影响及相关信号通路蛋白的变化。结果 D19对MCF-7、MDA-MB-435的半数抑制浓度（IC50）分别为4.01μmol/L和7.32μmol/L;D19具有有效诱导人乳腺癌细胞凋亡的作用;Western Blotting结果显示D19作用后细胞中的凋亡蛋白如caspase9以及下游的效应蛋白PARP都发生裂解。结论从细胞水平和分子水平证明新型海洋源性蒽环类化合物D19具有很强的抗乳腺癌活性,有可能发展成为治疗乳腺癌等其他实体肿瘤的先导化合物。     

新型黑麦酮酸D衍生物D69抗乳腺癌活性研究

目的研究一种来源于海洋微生物次级代谢产物的新型黑麦酮酸D衍生物D69对人乳腺癌的体内外抑制活性,并初步探讨其分子机理。方法通过镜下观察以及MTT比色法检测D69的细胞毒作用,构建人乳腺癌裸鼠移植瘤模型研究D69体内抗肿瘤活性。结果 D69对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435和ZR-75-30的生长具有显著的抑制作用,且呈剂量依赖性增强。其对MDA-MB-435和ZR-75-30细胞半数抑制浓度（IC50）分别为0.031μmol/L和0.036μmol/L,而对人永生化乳腺上皮细胞HMEC的抑制作用较低,IC50为0.686μmol/L。人乳腺癌裸鼠移植瘤模型验证D69能显著抑制在体肿瘤的生长。结论 D69可能是一种潜在的乳腺癌化疗药物的先导化合物。     

靶向STAT3信号通路小分子抑制剂的设计、合成及其生物活性

目的：以嘌呤类STAT3小分子抑制剂S3I-V4-01为先导,设计并合成一系列新型目标化合物,通过初步的体外细胞实验检测其生物活性,以筛选出活性更优的化合物。方法：通过亲核取代反应合成了一系列目标化合物,运用荧光素酶报告基因法检测目标化合物对STAT3信号转导通路的影响,利用MTT实验检测目标化合物对人表皮鳞癌细胞A431和非小细胞肺癌细胞A549增殖的抑制作用。结果：本研究共合成8个终产物（Z2～Z5及H2～H5）,其中,优势化合物H3能有效抑制STAT3磷酸化,阻断STAT3信号转导通路,抑制A431和A549的细胞增殖。结论：化合物H3比S3I-V4-01具有更强的p-STAT3抑制能力和抗肿瘤细胞增殖能力,并且可以在H3结构上进行优化,以进一步提高生物活性。     

小鼠肝癌细胞(H22)源外泌体的体内抗肝癌作用研究

目的在荷瘤动物模型观察小鼠肝癌细胞（H22）来源的外泌体（exosomes）激发宿主抗肝癌免疫应答的效应。方法用自行分离纯化的小鼠肝癌细胞H22源外泌体免疫小鼠,然后给小鼠皮下注射H22肿瘤细胞,观察肿瘤的生长状况。用MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况和细胞毒活性;用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞浸润情况。结果该外泌体使肿瘤出现时间延迟,肿瘤生长缓慢,小鼠生存率提高。促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性,促进CD4^＋和CD^8＋T细胞活化。结论小鼠肝癌细胞（H22）源外泌体能诱导抗肿瘤应答,有效地诱导特异性的杀伤肿瘤细胞活性,有针对亲本细胞的免疫保护作用。     

天然产物去氢骆驼蓬碱糖基偶联物的合成及抗肿瘤活性评价

基于本课题组前期工作基础,在天然产物去氢骆驼蓬碱(harmine)的C⁷位氧上引入环己基甲基,并在N⁹位上通过不同长度的烷基链偶联甲基2-氨基-β-D-葡萄糖苷,设计并合成了8个去氢骆驼蓬碱糖基偶联物(14a～14h)。体外抗肿瘤活性筛选和构效关系研究发现,偶联物的抗肿瘤活性随连接臂中烷基链长度的延长而增加。化合物14h对MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖抑制活性显著优于去氢骆驼蓬碱。与去氢骆驼蓬碱相比,糖基的引入改善了化合物14h的水溶性,并通过Warburg效应提高了化合物14h的肿瘤细胞选择性。机制研究发现化合物14h可诱导MDA-MB-231细胞凋亡和G₀/G₁期细胞阻滞,并能通过干扰细胞上皮-间充质转化进程抑制肿瘤细胞迁移。本研究为基于去氢骆驼蓬碱的抗肿瘤药物的开发提供了新思路。     

红树林底泥放线菌（N2010-37）抗肿瘤化学成分研究（I）

目的 寻找发现红树林底泥放线菌（N2010-37）中抗肿瘤活性成分。方法 放线菌（N2010-37）发酵菌丝体经95%乙醇提取,溶剂分级萃取,应用多种柱色谱分离和谱学分析方法对醋酸乙酯萃取部位化学成分进行分离鉴定。结果 从醋酸乙酯部位分离得到1个新的单环内酯和2个蒽酮类化合物,依次鉴定为 (3S, 4R, 7R, 8R, 9S)-3, 8-二羟基-4, 7, 9-三甲基-2, 6-环壬二酯（1）、1-甲氧基-2-羟基-3-甲基蒽醌（2）、1, 6, 8-三羟基-3-甲基蒽醌（3）。结论 化合物1为新化合物,体外抗肿瘤实验表明,化合物1和3对人类慢性髓性白血病细胞系K562细胞株具有一定的细胞毒活性。     

一株红树林真菌抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的研究

目的 对分离自海南红树林真菌菌株PH1018的胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)活性进行研究.方法 收集纯化菌株PH1018产生的EPS,体外采用细胞病变观察EPS的细胞毒性和抗HSV-2作用.为观察EPS对HSV-2体内感染的治疗效果,小鼠颅内注射0.02 ml滴度为100 LD50/0.1 ml-1的HSV-2,24 h后以不同浓度EPS灌胃,持续7d,14d后计算小鼠存活率和存活时间.菌株分类采用形态学观察和ITS序列分析.结果 EPS可抑制HSV-2病毒活性,病毒感染的细胞病变的半抑制浓度(Inhibited concentration,IC50)为313 μg/ml,SI为11.43.EPS 25 mg·kg-1·d-1灌胃后,小鼠存活率为40.0％,存活时间为(9.82±1.87)d,相比模型组实验动物存活时间和存活率均有提高.菌株初步鉴定为杂色曲霉.结论 从海南红树林分离一株杂色曲霉,其产生的EPS具有抗HSV-2活性,值得进一步研究.     

Biologic characteristics of an immunosuppressive factor derived from a human lung cancer cell line

A 549, a human lung cancer cell line, spontaneously produces a tumor-derived immunosuppressive factor (TDSF) which inhibited PHA-stimulated T lymphocyte proliferation via a noncytotoxic mechanism. The inhibition increased in a dose-dependent pattern. The factor also markedly suppressed production of interleukin (IL-2) by PHA-stimulated lymphocytes and IL 2-dependent proliferation of activated lymphocytes. The fact that TDSF possessed very potent inhibitive action on IL-2 is especially noteworthy if we consider the use of IL-2 as immunotherapeutic agent. The synthesis of the factor was inhibited by mitomycin C, actinomycin D and cycloheximide, indicating that the factor is a genic product of A 549 cells. The factor is chemically a protein with a molecular weight greater than 150 KD and sensitve to extremes of pH, heating to 60 °C and trypsin treatment.     

Isolation of a small molecule with anti-MRSA activity from a mangrove symbiont Streptomyces sp. PVRK-1 and its biomedical studies in Zebrafish embryos

Objective

The aim of the present study was to isolate the anti-MRSA (Methicillin Resistant Staphylococcus aureus) molecule from the Mangrove symbiont Streptomyces and its biomedical studies in Zebrafish embryos.

Methods

MRSA was isolated from the pus samples of Colachal hospitals and confirmed by amplification of mecA gene. Anti-MRSA molecule producing strain was identified by 16s rRNA gene sequencing. Anti-MRSA compound production was optimized by Solid State Fermentation (SSF) and the purification of the active molecule was carried out by TLC and RP-HPLC. The inhibitory concentration and LC₅₀ were calculated using Statistical software SPSS. The Biomedical studies including the cardiac assay and organ toxicity assessment were carried out in Zebrafish.

Results

The bioactive anti-MRSA small molecule A₂ was purified by TLC with Rf value of 0.37 with 1.389 retention time at RP-HPLC. The Inhibitory Concentration of the purified molecule A₂ was 30 µg/mL but, the inhibitory concentration of the MRSA in the infected embryo was 32-34 µg/mL for TLC purified molecule A₂ with LC₅₀ mean value was 61.504 µg/mL. Zebrafish toxicity was assessed in 48-60 µg/mL by observing the physiological deformities and the heart beat rates (HBR) of embryos for anti MRSA molecule showed the mean of 41.33-41.67 HBR/15 seconds for 40 µg/mL and control was 42.33-42.67 for 15 seconds which significantly showed that the anti-MRSA molecule A₂ did not affected the HBR.

Conclusions

Anti-MRSA molecule from Streptomyces sp PVRK-1 was isolated and biomedical studies in Zebrafish model assessed that the molecule was non toxic at the minimal inhibitory concentration of MRSA.     

Different Patterns of Cyclin D1/CDK4-E2F-1/4 Pathways in Human Embryo Lung Fibroblasts Treated by Benzo[a]pyrene at Different Doses1

Objective To investigate the roles of the cyclin D1/CDK4 and E2F-1/4 pathways and compare their work patterns in cell cycle changes induced by different doses of B[a]P. Methods Human embryo lung fibroblasts(HELFs)were treated with 2 μmol/L or 100 μmol/L B[a]P which were provided with some characteristics of transformed cells (T-HELFs).Cyclin D1,CDK4 and E2F-1/4 expressions were determined by Westem blotting.Flow cytometry was used to detect the distribution of cell cycle.Results After B[a]P treatment,the proportion of the first gap(G1)phase cells decreased.CDK4 and E2F-4 expression did not change significantly.In 2 μmol/L treated cells,a marked overexpression of cyclin D1 and E2F-1 was observed.However,in T-HELFs overexpression was limited to cyclin D1 only,and no overexpression of E2F-1 was observed.The decreases of G1 phase in response to B[a]P treatment were blocked in antisense cyclin D1 and antisense CDK4 transfected HELFs (A-D1 and A-K4)and T-HELFs(T-A-D1 and T-A-K4).Atier 2 μmol/L B[a]P treatment,overexpression of E2F-1 was attenuated in A-D1,and E2F-4 expression was decreased significantly in A-K4.In T-A-D1 and T-A-K4,E2F-4 expression was increased significantly,compared with T-HELFs.The E2F-1 expression remained unchanged in T-A-D1 and T-A-K4.Conclusions Cyclin D1/CDK4-E2F-1/4 pathways work in different patterns in response to low dose and high dose B[a]P treatment.In HELFs treated with 2 μmol/L B[a]P, cyclin D1 positively regulates the E2F-1 expression while CDK4 negatively regulates the E2F-4 expression;however,in HELFs treated with 100 μmol/L B[a]P,both cyclin D1 and CDK4 negatively regulate the E2F-4 expression.