冷冻保存对绵羊精子乳酸脱氢酶活性的影响

为了研究冷冻保存对绵羊精液乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响,提高绵羊精液的品质,试验采用酶动力学分光光度法对冷冻保存前后绵羊精液、精清和精子中LDH的活性分别进行研究。结果表明:冷冻保存后绵羊精液LDH活性[(18.40±7.85)U/m L]和精子LDH活性[(5.91±2.16)U/m L]与冷冻前[(24.89±8.21)U/m L、(10.80±4.95)U/m L]相比均极显著降低(P0.01),而精浆中LDH活性则极显著升高(P0.01),冷冻保存对绵羊精液及精子中LDH的活性造成严重损伤。冷冻前后精子活率与LDH活性均呈极显著正相关(P0.01),LDH的活性可以在一定程度上预测精子活率,可以作为绵羊精液品质评价的新指标。     

冷冻保存对绵羊精子谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响

为了研究冷冻保存对绵羊精子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响,提高绵羊冷冻精液的品质,试验采用5,5-二硫二硝基苯甲酸(DTNB)比色法对冷冻保存前后绵羊精液、精子和精清中GSH-Px活性进行研究。结果表明:冷冻保存后绵羊精液GSH-Px活性[(6.25±2.80)U/mL]与冷冻前[(9.48±2.37)U/mL]相比极显著降低(P0.01),冷冻保存后绵羊精子GSH-Px活性[(4.84±1.92)U/mL]与冷冻前[(7.58±2.67)U/mL)]相比显著降低(P0.05),说明冷冻保存对绵羊精液和精子GSH-Px活性造成了严重损伤。冷冻前后精子活率与精子中的GSH-Px活性均呈极显著正相关(P0.01),GSH-Px活性与精子活率关系密切,可作为绵羊精液品质评价的新指标。     

冻融过程对绵羊精子超氧化物歧化酶活性影响的研究

为了研究冷冻保存对绵羊精子超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,提高绵羊冷冻精液的品质,试验采用改良的邻苯三酚自氧化法对冷冻保存前后小尾寒羊精液、精子和精清中SOD的活性进行研究。结果表明:冷冻保存小尾寒羊精液SOD活性[(1 432.24±45.04)U/mL]和精子SOD活性[(511.58±35.06)U/mL]与冷冻前[(1 550.57±60.17)U/mL、(937.42±21.24)U/mL]相比均极显著降低(P<0.01),精清SOD活性[(903.51±9.35)U/mL]与冷冻前[(531.26±7.02)U/mL]相比极显著升高(P<0.01)。说明冷冻保存对绵羊精子和精液中SOD活性造成了显著损伤。     

绵羊冻融精子透明质酸酶活性变化的研究

为了检测冷冻对绵羊精子顶体透明质酸酶活性的影响,试验采用改良后的明胶膜片法对冷冻保存前后小尾寒羊精子顶体透明质酸酶活性变化进行研究。结果表明:冷冻保存后精子顶体透明质酸酶阳性反应率[(43.00±2.45)%]和平均成环直径[(32.86±0.32)μm]与冷冻前精子顶体透明质酸酶阳性反应率[(67.00±4.79)%]和平均成环直径[(55.05±0.47)μm]相比极显著降低和减少(P0.01),且冷冻前后精子活率与透明质酸酶活性均呈极显著正相关(P0.01),表明冷冻保存对绵羊精子顶体透明质酸酶活性造成显著损伤。说明透明质酸酶的活性可以在一定程度上预测精子活率和受精能力,可作为绵羊精液品质评价的新指标。     

绵羊冻融精子过氧化氢酶活性变化的研究

为了研究冷冻保存对绵羊精液过氧化氢酶(CAT)活性的影响,从而提高绵羊冷冻精液的品质,试验采用CAT比色法对冷冻保存前后绵羊精子和精清中CAT活性进行了研究。结果表明:与冷冻前相比,冷冻保存后绵羊精子中CAT活性极显著降低(P0.01);精清中CAT活性极显著升高(P0.01)。说明冷冻保存对绵羊精子和精清中CAT的活性造成了很大影响;冷冻后精子活率与精子CAT活性呈显著正相关(r=0.887,P0.05),冷冻前精子活率与精子CAT活性呈极显著正相关(r=0.987,P0.01)。说明绵羊精子中CAT的活性与精子活率密切相关,可作为绵羊精液品质评价的参考指标。     

超低温冷冻对绵羊精子肌酸激酶活性的影响

为了研究冷冻保存对绵羊精液肌酸激酶(CK)活性的影响,提高绵羊冷冻精液的品质,试验采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)对冷冻保存前后绵羊精液、精子和精清中CK活性进行研究。结果表明:与冷冻前比较,冷冻保存后绵羊精液、精子CK活性极显著降低(P0.01),而精清中CK活性显著升高(P0.05)。说明冷冻保存对绵羊精子CK活性影响严重。     

冻融过程对绵羊精子琥珀酸脱氢酶活性影响的研究

为了检测冷冻对绵羊精子琥珀酸脱氢酶(SDH)的影响,探索其与精子活率的关系,试验采用试管法对冷冻前后小尾寒羊精子SDH的活性进行研究。结果表明:冷冻后精子活率[(38.80±4.15)%]及精子SDH阳性反应率[(32.80±4.32)%]与冷冻前精子活率[(81.20±2.17)%]和精子SDH阳性反应率[(72.20±4.02)%]相比极显著降低(P0.01),冷冻前后精子活率与精子SDH阳性反应率分别呈显著正相关和极显著正相关(P0.05和P0.01)。说明冷冻保存对绵羊精子SDH活性造成显著损伤;精子活率与SDH阳性反应率之间的显著相关性证实了精子SDH的活性与精子生命活动密切相关,其活性可以在一定程度上预测精子活率和受精能力,并可作为评价绵羊冻融精液品质的新指标。     

冻融过程对绵羊精子GR活性的影响

为了研究冷冻保存对绵羊精子谷胱甘肽还原酶(GR)活性的影响,提高绵羊冷冻精液的品质,试验采用DTNB比色法对冷冻保存前后精液、精子和精清中GR活性进行研究。结果表明:与冷冻前比较,冷冻保存后精液、精子和精清中GR活性均极显著升高(P0.01)。说明超低温冷冻过程会刺激精子的应激反应,导致绵羊精子中GR活性显著提升。     

维生素E提高绵羊颗粒冻精品质的机理研究

以无角多赛特公羊为试验对象,采用2步稀释法,在冷冻精液稀释液中添加维生素E,对维生素E提高绵羊颗粒冻精品质的机理进行初探.试验1证明,试验组的活率(0.435)极显著高于对照组(0.365)(P＜0.01),其精子顶体总异常率(33.72%)极显著低于对照组(44.35%)(P＜0.01),且顶体完整率与冻精活率相关极显著(r＝0.662,P＝0.037).添加维生素E可降低冷冻对精子顶体的损害程度,冷冻精液品质得到显著改善.试验2结果表明添加维生素E后AST、ALP、GGT、CK、LDH与ALT的活性均与对照组无显著差异.但对照组与试验组比较,GOT及CK释放量与解冻精子的活率负相关下降(分别为r＝-0.536,r＝-0.209及r＝-0.419,r＝-0.051),LDH的释放量与解冻精子的活率之间正相关(r＝0.123与r＝0.507).试验3结果证明在绵羊冷冻精液稀释液中添加维生素E可以显著提高精子顶体酶的活力,分别为82.91 mu/ml和99.82 mu/ml(P＜0.05).绵羊冷冻精液精子顶体酶活力与精子活率呈正相关(r=0.490),与精子畸形率呈负相关(r=-0.122),冷冻精子活率随着精子顶体酶活力的提高而提高.     

冷冻保存对绵羊精子顶体蛋白酶活性的影响

为了检测冷冻保存对绵羊精子顶体蛋白酶活性的影响,试验采用改良的明胶膜片法对冷冻保存前后小尾寒羊精子顶体蛋白酶的活性进行研究。结果表明:冷冻保存后精子顶体蛋白酶阳性反应率[(47.00±2.55)%]和平均成环直径[(23.89±0.22)μm]与冷冻前精子顶体蛋白酶阳性反应率[(77.00±2.00)%]和平均成环直径[(37.26±0.47)μm]相比差异极显著(P<0.01)。说明冷冻保存对绵羊精子顶体蛋白酶活性造成显著性损伤。     

精液稀释液中添加维生素C和E对陆川猪精液冷冻效果的影响

为了研究维生素C和E作为精液冷冻保护剂对陆川猪细管冷冻精液品质和精浆中抗氧化物酶活性影响的影响,在精液稀释液中分别添加0、300、600以及900μg/m L的维生素C或E,对陆川猪稀释精液进行冷冻-解冻处理后,检测精液冻后的精子活力、运动速率、线粒体活性、顶体和质膜完整性、存活时间等常规参数,采用试剂盒测定精浆中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及谷胱胺肽过氧化物酶(GSHPx)的活性。结果表明:精液稀释液中添加300μg/m L的维生素C可显著提高冻后精子的体外存活时间以及CAT酶活性(P0.05);同浓度的维生素E仅可提高精子的存活时间(P0.05);添加600μg/m L的维生素C或E可以显著提高解冻精子的活力、线粒体活性、质膜和顶体完整性、存活时间以及抗氧化物酶活性(P0.05),同时明显降低精子畸形率(P0.05);当维生素C或E添加量为900μg/m L时,虽可提高线粒体活性、质膜和顶体完整性、CAT酶活等部分指标参数(P0.05),但精子活力与对照组相比没有差异(P0.05)。提示:冷冻稀释液中添加600μg/m L的维生素C或E可以显著提高陆川猪精液冷冻保存效果。     

维生素E对绵羊鲜精及冻精精液品质的影响

日粮中添加维生素E可以提高绵羊鲜精的活率 ,对照组和试验组的活率分别为 0 72± 0 0 7和 0 78± 0 0 6(P <0 0 5 ) ,显著改善鲜精精液品质。采用两步稀释法在绵羊冷冻精液稀释液中添加维生素E ,可以极显著降低冷冻对精子顶体的冷刺激损害程度 ,试验组的活率 ( 0 43 5± 0 0 2 0 )极显著高于对照组 ( 0 3 65± 0 0 2 6) (P <0 0 1) ,精子顶体的总异常率试验组 ( 3 3 72 % )极显著低于对照组 ( 4 4 3 5 % ) (P <0 0 1) ,其中试验组顶体膨胀率和脱落率与对照组分别为 1 2 8%±0 5 8%、2 3 0 8%± 1 45 %与 2 68%± 0 5 9%、2 8 96%± 3 14 %。冷冻精液品质显著改善。     

冷冻保存对绵羊精子DNA链完整性的影响

为了探讨冷冻保存对绵羊精子DNA链完整性的影响,试验采用原位末端标记法(TUNEL)对绵羊新鲜和冻融精子DNA链完整性进行检测。结果表明:绵羊新鲜精液和冻融精液中DNA断裂精子百分率分别为(1.74±0.33)%和(2.08±0.52)%;与新鲜精液相比,解冻后的精液中,DNA断裂精子百分率虽略有增加但无显著差异(P0.05)。提示冷冻保存对绵羊精子DNA链的完整性没有显著影响。     

香菇多糖对牛精液冷冻保存效果的研究

为了研究香菇多糖对牛精液冷冻保存效果的影响,在牛精液冷冻稀释液中添加不同质量浓度(1、5、25、125、625mg/L)的香菇多糖,冻融后检测牛精子活率、动力学参数以及顶体完整率、质膜完整率等。结果表明,25 mg/L组的冷冻保存效果最好,精子活率、质膜完整率、顶体完整率分别达到42.04%、43.57%和63.87%,显著高于对照组(P0.05)。而过高浓度的香菇多糖(125、625mg/L)则显著降低了冻融精子的质量。牛精液冷冻稀释液中添加香菇多糖具有显著的保护作用,其最佳添加浓度为25mg/L。     

中卫山羊细管冻精制作与种质资源保存初步研究

为了中卫山羊种质资源的保护、利用,试验采用细管冷冻技术对宁夏地方品种中卫山羊进行了冻精制作和保存,比较了稀释液、冷冻保护剂类型和浓度、稀释倍数及不同稀释法等对中卫山羊精液冷冻保存品质的影响。结果表明:解冻后的精液品质,3号稀释液精子活率高于1号、2号稀释液,差异极显著(P0.01);相同浓度的甘油和二乙醇,解冻后的精子活率甘油高于二乙醇,差异极显著(P0.01),当甘油浓度为5%时,解冻后精子活率显著(P0.05)高于3%和6%;2倍稀释解冻后精子活率最高,5倍稀释解冻后精子活率最低,但不同稀释倍数解冻后精子活率差异不显著(P0.05)。     

杂种宠物犬的精液冷冻效果研究

选取本地常见的杂种宠物犬共计6只进行精液采集和冷冻试验,精液冷冻过程中分别采用一步稀释法和两步稀释法。结果显示,采用一步稀释法的颗粒冻精解冻后活力(0.37±0.01)与0.25m L细管冻精的解冻后活力(0.35±0.01)及0.5 m L细管冻精的解冻后活力(0.32±0.01)的均差异显著(P0.05),而0.25 m L细管冻精的解冻后活力(0.35±0.01)与0.5 m L细管冻精的解冻后活力(0.32±0.01)的差异极显著(P0.01);采用两步稀释法的颗粒冻精的解冻后活力(0.40±0.01)与0.25 m L细管冻精的解冻后活力(0.39±0.01)以及0.5 m L细管冻精的解冻后活力(0.36±0.02)的差异均不显著(P0.05)。结果表明,杂种宠物犬精液冷冻保存时采用一步稀释法颗粒冻精的冷冻效果比0.25 m L细管和0.5 m L细管均好,而两步稀释法对不同冻精剂型的影响不明显。     

芝麻酚对猪精液冷冻保存效果的影响

为了探究芝麻酚对猪精液冷冻保存效果的影响,用手握法采集成年杜洛克公猪精液,预处理后添加不同浓度芝麻酚(0,0.05,0.10,0.15,0.20和0.25g/L)的冷冻稀释液进行稀释,冷冻-解冻后检测猪精子活率、质膜完整性(低渗肿胀试验)、线粒体活性、顶体完整性、DNA完整性以及超氧化歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性等。结果显示:当芝麻酚添加浓度为0.20g/L时,解冻后精子活率、线粒体活性、质膜完整率和顶体完整率为最高,相比较于对照组,分别提高了12.67%、19.07%、18.78%和14.09%(P0.05);MDA含量最低为2.04nmol/mL(P0.05);SOD和GSH-Px酶活最高为73.04U/mL和237.59U/I(P0.05)。当芝麻酚添加浓度为0.25g/L时,DNA完整性最高为72.46%(P0.05)。当芝麻酚添加浓度为0.15g/L时,CAT酶活最高为3.44U/mL(P0.05)。结果表明:与对照组相比较,在猪精液冷冻稀释液中添加适当浓度的芝麻酚能显著提高解冻后猪精子活率、功能完整性和抗氧化能力(P0.05),且当芝麻酚的浓度为0.2g/L时对猪精子冷冻保存效果最好。研究结果表明,芝麻酚作为一种天然抗氧化剂,对猪精子冷冻保存具有良好的效果。     

小尾寒羊精液冷冻技术研究

本试验对11只2～3岁小尾羊种公羊的精液品质、保存稀释液和冻精制作技术进行了研究。结果表明:小尾寒羊种公羊的射精量、精液品质、精液pH值、密度、色泽、活率和畸形率均属正常范围,优于无角道塞特和莎福克绵羊;4种稀释液中,A液低温保存效果优于B、C、D 3种稀释液,差异极显著(P<0.01)。B液作为小尾寒羊冷冻精液稀释效果较理想(P<0.01)。6％甘油作为小尾寒羊冷冻精液保护剂效果较理想。     

猪精液冷冻过程中的脂质过氧化损伤

实验采集长白猪精液,分析猪精液中抗氧化酶活性及冷冻-解冻过程中精子抗氧化酶活性、精子质量与丙二醛(MDA)含量变化的相关性分析,研究猪精液冷冻过程中的脂质过氧化损伤。结果表明:新鲜猪精子和精浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性较高、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性较低,没有检测到过氧化氢酶(CAT);解冻后精子中SOD、GPX活性降低,SOD活性与鲜精相比差异极显著(P<0.01),精子中MDA含量极显著高于鲜精和平衡后精子(P<0.01)。精子中MDA含量与SOD、GPX活性、质膜完整率和顶体完整率呈负相关,但差异不显著(P>0.05),与活力和活率呈极显著负相关(P<0.01)。结果表明,在猪精液冷冻过程中SOD、GPX活性变化从一定程度上影响了猪精子脂质过氧化损伤,又引起精子活力和活率发生变化,继而影响精子的质膜和顶体完整性。     

冷冻保存对姜曲海猪精液酶活性的影响

为了研究猪精液超低温冷冻-解冻后酶活性的变化,试验以姜曲海猪新鲜和冷冻保存精液为研究对象,对其超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)、过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶,透明质酸酶(HYD)、顶体酶(ACE)等功能性酶和酸性磷酸酶(ACP)、ATP、肌酸激酶(CK)等代谢性酶活性进行测定。结果表明:与新鲜精液比较,冷冻-解冻精液除GR活性显著升高(P0. 05)外,其他酶活性均显著降低(P0. 05)。说明超低温冷冻保存破坏了姜曲海猪精子酶系统,导致多数酶活性降低,是影响其冷冻效果的原因之一。