转基因小鼠血清中HBV DNA存在规律的研究

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）是一种严重危害人类健康的ＤＮＡ病毒，但由于其很强的宿主特异性，缺乏理想的实验动物模型及体外培养系统，从而限制了对ＨＢＶ生物学及其致病机理的研究。８０年代初，转基因动物技术的出现，为研究ＨＢＶ提供了一条新的途径。１９９５年上海市肿...     

启东鸭肝癌中人HBV变异体DNA的PCR扩增

自在启东鸭肝癌中证实存在人ＨＢＶ样ＤＮＡ后［１，２］，进一步的实验证明人ＨＢＶ样ＤＮＡ在启东鸭肝癌中带有普遍性和特征性［３］。本实验在上述工作的基础上取４号、８号、９号三个鸭肝癌样品，对ＨＢＶ中９７２－１２７２片段进行ＰＣＲ扩增，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析证实有阳性条带，对４号样品ＰＣＲ产物部分核苷酸顺序分析，观察到与ａｄｗ、ａｄｗ２、ａｄｒ、ａｙｗ和ａｙｒ分别有８１．３％、８２．１％、７７．６％、８０．０％和７９．４％的同源性。进一步证明启东鸭肝癌中确实存在人ＨＢＶ变异体ＤＮＡ。     

HBV—DNA基因型与肝癌的预测性相关研究

HBV-DNA 基因型与肝癌发生的预测性相关研究为山东医科大学承担的山东省科委研究课题。本课题从分子水平上首次系统地对乙肝、肝癌患者的血清、淋巴细胞、肝癌/肝组织内 HBV-DNA 存在状态分布、定位及其复制活性等特点进行了系统分析研究,现报道如下:     

启东地区鸭群及鸭肝癌中人HBV变异体DNA存在的频率

以前曾报道从启东鸭肝癌中证实存在人HBV样DNA,并进行了分子克隆。经过全部DNA序列分析,证明它与鸭HBV(DHBV)无关,与人adw_2HBV有高度同源(98.6％),并在PreSr及C基因分别缺失1个和两个核苷酸,从而说明它是人HBV的突变体。本文报告了从新收集的上海地区32份、南京21份及启东19份鸭肝以及11例启东鸭肝癌标本,对DHBV及HBV DNA的存在状态作了分析。结果表明DHBVDNA在上述鸭肝或肝癌中普遍存在,阳性率在半数以上。但人的HBV DNA则完全不存在于上海和南京地区的鸭肝中。然而,在启东的19份鸭肝中,有3份人HBV DNA阳性。值得注意的是,在11例启东鸭肝癌样品中全部存在人HBV DNA序列。这结果提示,启东鸭肝癌中人HBV DNA的存在并非属偶然,而是带有普遍性和特征性。它进一步提示启东鸭肝癌病发与人的HBV DNA存在的病因学上的相关性。     

重症肝炎,慢性乙型肝炎和肝细胞癌患者血清中HBeAg和HBV DNA的检测及分析

重症肝炎、慢性乙型肝炎和肝细胞癌患者血清中ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ的检测及分析张惠忠１唐漾波关键词肝细胞癌慢性乙型肝炎重症肝炎ＨＢｅＡｇＨＢＶＤＮＡ中图号Ｒ７３５．７以往认为，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染的患者血清中存在ＨＢｅＡｇ是病毒活跃复制的指标，...     

基因枪介导的neu基因DNA疫苗抗肿瘤作用的实验研究

目的 探讨DNA疫苗pWRG-neu的皮内免疫,对高表达neu基因的小鼠移植瘤生长和转移的抑制作用。方法 向小鼠黑色素瘤B16F10细胞系转染pcDNA-neu,用有限稀释法筛选一株高表达neu基因的细胞株B16F10-neu。在基因枪介导下,向C57BL／6小鼠导入DNA疫苗pWRG-neu,通过观察免疫动物的生存期,评价DNA疫苗的抗肿瘤作用。分离免疫动物脾细胞,经自体淋巴细胞混合培养实验,分析DNA疫苗体内免疫后机体的CTL应答。结果 筛选到一株高表达neu基因的B16F10-neu细胞株,转基因过程和外源基因的表达没有改变细胞系的增殖特性。用基因枪轰击,进行DNA疫苗pWRG-neu皮内免疫,对小鼠黑色素瘤B16F10-neu进行预防、治疗和抗转移的实验研究,结果表明,DNA疫苗的免疫能够明显推迟移植瘤的生长,延长小鼠生存期,获得明显的抗肿瘤效果。DNA疫苗免疫后可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性。结论 基因枪介导的DNA疫苗pWRG-neu经皮内免疫,能够有效的诱导机体的细胞免疫应答,预防和治疗小鼠移植瘤的发生,并有一定的预防肿瘤肺转移的作用。     

乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因重组杆状病毒的构建及鉴定

目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，构建乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原基因的重组杆状病毒。方法 构建含有HBV S基因的表达截体pFBDHTa—S，转化DH10Bac感受态菌。利用其含有的细菌Tn7转座系统，将该基因重组至杆状病毒穿梭质粒bacmicl中，转染昆虫细胞Sf9，获得含有HBV S基因的重组杆状病毒。结果 构建了的含HBV S基因的重组杆状病毒，感染昆虫细胞后，PCR检测可以扩增出相应大小的片段。结论 利用杆状病毒表达系统，成功地构建了含HBV S基因的重组杆状病毒，为进一步的研究奠定了基础。     

口服VEGFR2 DNA疫苗抗小鼠Lewis肺癌血管生成的实验研究

背景与目的血管内皮生长因子(VEGF)及其主要受体血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)在肿瘤新生血管和肿瘤基质形成过程中起着重要作用。本研究的目的是观察口服VEGFR2 DNA疫苗抗C57BL/6小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤生长的作用,并探讨其可能的作用机制。方法将重组DNA疫苗对小鼠进行免疫,通过观察小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤大小,记录各组小鼠离体肿瘤湿重,检测移植瘤微血管密度(MVD)及血液CD3 、CD8 T细胞水平,评价重组疫苗的抑瘤作用。结果疫苗组、空质粒组、生理盐水组的MVD分别为1.75±1.07、6.89±2.52、7.57±3.75,肿瘤湿重分别为(2.05±1.32)、(4.83±1.47)、(5.12±1.02)g,疫苗组与其它两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。接种肿瘤后,疫苗组CD3 T细胞仍维持较高水平,其它两组明显下降(P<0.05);疫苗组CD8 T细胞水平较其它两组明显升高(P<0.05)。结论口服VEGFR2DNA疫苗对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤的生长具有较强的抑制作用。该疫苗可能是通过杀伤肿瘤内皮细胞、抑制血管生成而起到抗肿瘤生长的作用。     

DNA疫苗诱导的小鼠抗肿瘤特异性细胞免疫和体液免疫

目的:检测以双表达质粒pIRES为载体构建的带有全序列癌胚抗原(CEA)基因和IL-2基因的核苷酸疫苗对机体特异性抗肿瘤免疫反应的激活效果。方法:利用分子生物学技术,将CEA基因片段和IL-2基因片段连接于真核双表达质粒pIRES中,用肌内注射方法接种核酸疫苗;检测疫苗在小鼠肌肉组织中的表达情况及其对小鼠脾细胞CEA特异性细胞免疫和体液免疫反应的激活效果。结果:小鼠经肌内注射质粒后,免疫组化证实该核酸疫苗可在体内有效表达CEA分子;免疫检测显示注射后小鼠血清中出现抗CEA抗体,脾细胞IL-4分泌增强,特异性淋巴细胞增值反应明显并伴有自然杀伤细胞NK活性显著增高。结论:实验所构建的核酸疫苗pIRES-CEA,pIRES-IL-2,pIRES-IL-2等可在小鼠体内高效表达并表现出良好的免疫原性。     

应用点免疫结合法同时测定HBsAg和AFP方法的评估

目的　评价点免疫结合法（ｄｏｔｉｍ ｍ ｕｎｏｂｉｎｄｉｎｇａｓｓａｙ,ＤＩＢＡ）试剂盒在临床诊断及肝病、肝癌高危人群的应用价值。方法　采用双盲法,实地与其它检测试剂盒检测的结果比较。结果　与ＥＩＡ 试剂盒检测的临床１８５份血清ＨＢｓＡｇ 和ＡＦＰ结果比较,ＤＩＢＡ 的敏感度和特异性为１００％ ,符合率为９９．４６％ 。与ＥＩＡ检测９５８ 份肝癌高危人群的血清的结果比较,ＤＩＢＡ检测ＨＢｓＡｇ 的敏感度、特异度和符合率分别为９９．１０％ 、８８．６％ 和９８．２３％ ;如以ＡＦＰ浓度≥２０ μｇ／Ｌ为判断阳性的临界值,ＤＩＢＡ检测ＡＦＰ的灵敏度、特异度和符合率分别为９８．４３％ 、９４．３４％和９９．６７％ 。结论　ＤＩＢＡ试剂盒具有特异、敏感、简单、快速、经济等特点,检测结果可长期保存,一次操作可获两项结果,在临床和人群疾病普查中将有广泛的推广应用价值。     

肝癌及癌旁组织中HBsAg表达的研究

应用免疫组织化学技术，检测４０例肝癌（ＨＣＣ）及癌旁组织中ＨＢｓＡｇ表达，阳性率达８２．５％，表明ＨＢＶ感染与ＨＣＣ发生密切相关。ＨＢｓＡｇ在ＨＣＣ中表达较癌旁组织中少而弱，可能系肝细胞癌变后不利于ＨＢｓＡｇ表达及Ｓ基因发生重排或缺失之故。碎点状ＨＢｓＡｇ小包涵体，其可能为ＨＣＣ中ＨＢｓＡｇ的特殊表现形式、小细胞ＬＣＤ中ＨＢｓＡｇ表达显著高于癌旁其他类型病变，支持其更接近癌前病变的观点。ＨＢｓＡｇ染色可作为鉴别ＨＲＶ感染肝病中癌前病变与早期癌及高分化癌的一种辅助手段。     

HBsAg阳性的肝细胞癌患者血清乙肝标志物的分析

目的观察HBsAg阳性的肝细胞癌(HCC)患者的血清乙肝标志物,并探讨不同标志物在评价慢性乙肝患者转归方面的意义.方法应用ELISA法分别检测HBsAg+的300例HCC和1000例慢性乙肝患者的血清HBV的5项标志物.结果HCC组的抗-HBe阳性率明显高于慢性乙肝组,而HBeAg阳性率明显低于慢性乙肝组,经统计学U检验,结果均具有显著性差异(P均＜0.01).结论HBeAg阳性的成年慢性乙肝患者血清HBeAg减弱、消失及向抗HBe的慢性转化在理论上虽有预示病情好转的可能,但实际上往往是肝细胞癌发生的一个前期危险信号.     

多发性骨髓瘤与乙型肝炎病毒感染的临床观察

目的 探讨多发性骨髓瘤（MM）患者乙型肝炎病毒（HBV）的感染状况及乙肝表面抗原（HBsAg）阳性MM患者的临床特点。方法 应用ELISA法测定196例MM患者以及48 697例健康体检者（对照组）的HBV标记物,PCR法测定HBV-DNA拷贝数。结果 196例MM 患者中HBsAg阳性者有5例（2.6％）,与对照组的3.4%比较差异无统计学意义（P>0.05）。5例HBsAg阳性MM患者的HBV血清学标记均为HBsAg、HBeAb、HBcAb三者阳性,其中2例HBV-DNA拷贝数＞1000,给予拉米夫定治疗。5例患者均给予抗MM治疗,未见HBV激活和肝功能异常。结论 HBV感染可能与MM发病无关,抗MM治疗对HBV的病毒激活及肝功能的影响可能不明显,仍有待于进一步研究。     

广州地区肝细胞癌与HCV,HBV感染关系的病例对照研究

在肝细胞癌（ＨＣＣ）中度流行区广州地区，对６４例ＨＣＣ患者抗－ＨＣＶ和ＨＢｓＡｇ状况按性别、年龄配对和１：２数量比设对照组进行了病例对照研究。结果表明：ＨＣＣ组抗－ＨＣＶ和ＨＢｓＡｇ阳性率分别为１８．７５％（１２／６４）和８４．３８％（５４／６４），分别显著高于对照组的２．３４％（３／１２８，Ｐ＜０．００１）和１４．０６％（１８／１２８，Ｐ＜０．００１）。与抗－ＨＣＶ、ＨＢｓＡｇ双阴性组比较，仅抗－ＨＣＶ阳性，仅ＨＢｓＡｇ阳性时发生ＨＣＣ的相对危险度分别为４６．７１和４３．７９，二者双阳性时上升至７０．０７。显示ＨＣＶ、ＨＢＶ均与ＨＣＣ显著相关，两者重叠感染具有协同致癌作用。作者提出预防和控制ＨＢＶ、ＨＣＶ感染对降低ＨＣＣ发病率意义重大。     

HSV—2（333）对小鼠C型病毒的辅助致癌作用观察

HSV—2(333)是一种DNA病素,C型病毒是一种RNA病素。在接种3C型病毒的小鼠中白血病的发生率是41.02％,当用这两种病毒接种小鼠以后,白血病发生率增加到79.16％,单独用HSV—2(333)接种的小鼠和对照组的小鼠无白血病发生。实验结果表明HSV—2(333)对小鼠无致癌作用,它是一种辅助致癌因子。     

反义核酸对癌基因C-myc和N-ras蛋白表达的影响

目的为了研制新型的抗肝癌药物,观察了反义寡核苷酸对整合乙型肝炎病毒(HBV)的肝癌细胞基因治疗的作用.方法设计合成针对HBVPreS2基因翻译起始位点的反义寡核苷酸(ASON),并设非互补序列作对照,选择2.2.15细胞为细胞模型,ASON以10μmol/L浓度用药,用ELISA法观察了细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg的变化,MTT法检测ASON对细胞的毒性作用,放射免疫方法检测细胞培养上清液中血清铁蛋白浓度.免疫细胞化学染色检测ASON对癌基因C-myc和N-ras蛋白表达的影响.结果ASON能有效地抑制HBV抗原表达,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为66%和91%.而ASON以20μmol/L或40μmol/L浓度用药4天对宿主细胞无毒性作用,ASON以10μmol/L浓度用药后第二天用药组和对照组血清铁蛋白浓度分别为(28.26士0.02)μg/L和(28.14土0.02)μg/L,两者相比差异无显著性(P＞0.05).用药后第3天C-myc和N-ras蛋白表达降低,和对照组相比差异有显著性(P＜0.05).结论该段反义寡核苷酸不仅抑制HBV抗原表达,而且抑制肝癌细胞的恶性表型而对宿主细胞无毒性,有可能成为有前途的抗肝细胞肝癌新药.     

USING 3 PRIMER PAIRS TO DETECT HBV DNA IN LIVERTISSUES FROM HEPATOCELLULAR CARCINOMASWITH PCR TECHNIQUE

ＵＳＩＮＧ３ＰＲＩＭＥＲＰＡＩＲＳＴＯＤＥＴＥＣＴＨＢＶＤＮＡＩＮＬＩＶＥＲＴＩＳＳＵＥＳＦＲＯＭＨＥＰＡＴＯＣＥＬＬＵＬＡＲＣＡＲＣＩＮＯＭＡＳＷＩＴＨＰＣＲ　ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＣｈｅｎＭｉｎｇ陈明；ＬｕＬｉｎｇ吕凌；ＹａｏＪｉｌｕ姚集鲁；Ｐｅｎｇ...     

乙肝病毒对DNA修复基因和肝癌发生的作用

目的　以HBV转基因动物模型研究乙型肝炎病毒 (HBV) ,黄曲霉毒素 (AFB1) ,DNA修复基因和肝细胞肝癌 (HCC)发生的关系。方法　对HBVx基因转基因小鼠以相同的方式和剂量给予黄曲霉毒素 (AFB1)攻击 ,比较肝癌的发生率 ;同时用逆转录———热标记扩增 (RT -HOT -PCR)的方法 ,检查HBVx基因转基因小鼠HBVx整合阳性和阴性以及AFB1攻击后 ,癌组织与癌旁组织的DNA修复基因Brca2和Nthl1的RNA表达水平。结果　 (1)黄曲霉毒素诱导 ,5 2周肝癌发生率HBVx整合阳性小鼠 2 9只 ,14只发生肝癌 (48.3% ) ;HBVx整合阴性小鼠 15只 ,3只发生肝癌 (2 0 .0 % )。两者有显著的差异 (P <0 .0 1)。(2 )HBVx整合阳性小鼠的肝组织DNA修复基因Brca2和Nthl1的RNA表达水平都低于HBVx整合阴性小鼠。经AFB1攻击形成的肝癌和癌旁组织 ,其DNA修复基因Brca2和Nthl1的RNA表达水平也低于HBVx整合阴性小鼠。结论　结果表明HBVx在宿主细胞的整合 ,影响了宿主DNA修复能力 ,从而导致宿主对致癌物质的敏感性增加 ,最终引起肝癌发生率的增加。