六堡茶发酵前后多酚氧化酶的分离及酶学性质

为探索六堡茶发酵过程中多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的来源及其酶学活性,采用不同pH值缓冲液、保护剂和液料比对发酵前后六堡茶PPO进行提取,通过(NH4)2SO4沉淀、透析和Sephadex?G-100凝胶过滤层析纯化PPO.结果表明:从六堡茶中分离纯化得到2个PPO同工酶,分子质量分别为5...     

莲子多酚氧化酶的分离与纯化

由多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)导致的酶促褐变严重影响莲子的外观。本研究旨在探讨莲子PPO的提取纯化方法,为研究其蛋白结构、进一步探究莲子褐变机理提供理论依据。以酶活力和酶比活力为指标,对比了提取PPO的四种方法,发现匀浆吸附后丙酮沉淀法提取莲子PPO可获得较高的酶比活力,达289.04 U/mg;采用单因素实验对该提取方法进行优化,得最佳提取参数为:料液比1∶5、提取时间2 h、p H=7、含2%PVPP和0.8%Triton X-100提取溶液,优化后PPO粗酶液酶比活力为294.40 U/mg;采用DEAE Sepharose Fast FLow阴离子交换层析、Sephadex G-75凝胶柱层析对粗酶液进行纯化,得到分子量大约为58 ku莲子PPO,酶比活力为7926.68 U/mg,纯化倍数为26.92,回收率为38.48%。     

鲜切莲藕组织中多酚氧化酶的分离纯化

酶促褐变是影响鲜切莲藕加工贮藏的主要问题,多酚氧化酶(PPO)是引起酶促褐变的重要酶类.用磷酸缓冲液提取鲜切莲藕组织中的多酚氧化酶,并通过硫酸铵沉淀, DEAE-Sepharose 离子交换柱层析以及Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水柱层析进行纯化.该酶被纯化了95.66倍,产率为2.4%.经SDS-PAGE电泳确定为单一条带.同时研究表明,鲜切莲藕组织中PPO相对分子质量在65 900～66 100之间.     

甘蔗多酚氧化酶的提取与应用试验

研究甘蔗多酚氧化酶(PPO)的提取及应用条件.实验得出甘蔗PPO提取的最佳工艺条件:甘蔗冷藏温度4℃,磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液的pH6.2,聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)的添加浓度2%,提取液与物料液比例为1.0.甘蔗原汁经抽提、离心、分级盐析、透析后制得部分纯化的PP0酶液,纯化倍数为2.51,酶活力回收率为34.9%;以儿茶酚为底物,甘蔗PPO的最大吸收波长为410nm.通过提前预灰并提高预灰pH值至大于7.5,可有效减缓蔗汁的酶促褐变,从生产源头上减少色素的形成.     

银杏外种皮多酚氧化酶的研究

采用不同条件抽提银杏外种皮多酚氧化酶(简称PPO),比较抽提条件对PPO活性的影响;利用乙醇分级法对PPO进行初步分离纯化,比活力从49.8u/mg提高到292u/mg;研究pH、温度、金属离子对乙醇分级提纯后的PPO的影响,发现其最适温度为30℃,最适pH=7.6,Mg2+对酶有明显的激活作用。而Na+、K+、Fe2+则对酶有抑制作用。     

丝瓜多酚氧化酶的分离纯化及酶学性质

从丝瓜中分离纯化出多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）,并对其部分酶学性质进行研究。采用硫酸铵分级盐析、透析、DEAE-Cellulose DE-52离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析分离纯化丝瓜PPO。纯化所得酶的比活力为957.9 U/mg,纯化倍数为28.3,酶活力回收率为18.5%;十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）检测结果显示该酶蛋白呈单一条带,为单亚基蛋白,其分子质量约为67.8 kD,且无同工酶;该酶最适pH6.0,最适温度30 ℃,以左旋多巴（L-dopa）为底物,其米氏常数（Km）为1.32 mmol/L,最大反应速率（Vmax）为0.22 OD475 nm/min。     

荔枝果肉多酚氧化酶提取与初步纯化

酶促褐变是影响荔枝果肉加工和贮藏的重要问题,多酚氧化酶(PPO)是引起酶促褐变的重要酶类.用磷酸缓冲液匀浆提取荔枝果肉中的多酚氧化酶,提取液最佳离子浓度为0.1mol/L、最适pH为7.5、最佳提取时间为2h,最适料液比为1:3.并通过硫酸铵沉淀和Phenyl Sepharowe CL-4B(苯基琼脂糖CL-4B)疏水柱层析进行初步纯化,该酶被纯化了9.4倍,得率为48%.     

烟草多酚氧化酶的分离提纯及性质研究

本文用丙酮干粉,硫酸铵分级沉淀,阴离子交换层析,阳离子交换层析和凝胶过滤方法从新鲜的烟叶中分离纯化出了一种多酚氧化酶Ⅰ和多酚氧化酶Ⅱ(根据过DEAE-Sephadex A-50柱后的前后顺序,命名A-5柱先洗脱的活性组分为多酚氧化酶Ⅰ(PPOⅠ),后洗脱的为多酚氧化酶Ⅱ(PPOⅡ)).分离后多酚氧化酶Ⅰ的比活力是原来的71倍,而多酚氧化酶Ⅱ的比活力为原来的100倍.SDS-PAGE电泳显示分离所得的多酚氧化酶为纯品,其分子量分别为42kDa和42.5kDa.最后测量了分离得到的PPO的一些基本性质,结果表明多酚氧化酶Ⅰ在pH=7,t=40℃时具有最大活力,多酚氧化酶Ⅱ在pH=6,t=40℃时具有最大活力.动力学研究表明在pH=6.5,以邻苯二酚为底物的条件下,两种酶Km值分别为6.8mmol/L和1.2mmol/L.     

库尔勒梨多酚氧化酶的酶学特性

以邻苯二酚为底物,采用分光光度法对库尔勒梨多酚氧化酶(PPO)的酶学特性进行研究。结果表明：库尔勒梨PPO 的最适pH 值为5.7,最适温度为42℃;短时间高温能显著抑制PPO 酶活力;PPO 催化的酶促褐变反应符合米氏动力学方程,该酶促反应的最大速率为169.49U/min,Km 值为0.152mol/L;与柠檬酸、NaCl 和EDTA-2Na相比,抗坏血酸对库尔勒梨PPO 的抑制效果较好。     

小麦多酚氧化酶的分离纯化及酶学性质研究

为了减少多酚氧化酶(PPO)对产品所带来的负面影响,对从苏北红麦中提取的PPO粗提物进行分离纯化。经硫酸铵沉淀、DEAE阴离子交换层析和Superdex 200凝胶过滤层析,最终得到电泳纯化后只有一条条带的PPO,并对该纯化后的PPO进行酶学性质研究。试验结果为:纯化后PPO总酶活回收率为7.03%,纯化倍数22.35,比酶活为373.44 U/mg,电泳分析表明其相对分子质量约为30 000。测得其最适反应p H为6.5,最适反应温度为37℃;金属离子影响的研究表明,K~+、Na~+对其活性基本无影响,Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)略有激活作用,Zn~(2+)、Cu2+激活作用较强;小麦PPO对邻苯二酚的K_m值为6.90 mmol/L,对焦性没食子酸(三酚类)、邻苯二酚(二酚类)底物亲和性较强,对单酚类(苯酚、愈创木酚)、二酚类(对苯二酚、间苯二酚)底物亲和性很低。     

茶叶多酚氧化酶三相分离纯化及酶学性质研究

为研究一种快速高效的茶叶多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)制备方法,本试验采用三相分离法(three phase partitioning,TPP)获取茶叶PPO,并研究其酶学特性.结果表明,通过两次三相分离纯化后可获得酶比活力210.46 U/mg、纯化15.76倍、回收率8.04％的茶叶PP...     

六堡茶渥堆过程中可培养微生物的分离与鉴定

采用传统微生物分离和分子鉴定技术对六堡茶渥堆过程的样品中微生物多样性进行研究。从不同渥堆阶段的样品中分离出细菌13个属、27个种,放线菌7个属、8个种,真菌11个属、23个种,其中黑曲霉、塔宾曲霉、Blastobotrys adeninivorans和芽孢杆菌属在整个渥堆过程中都检出。本研究所有分离鉴定得到的细菌22种、放线菌7种和真菌9种均为六堡茶中首次发现与报道。本研究有利于了解六堡茶渥堆工艺的微生物作用,并对六堡茶的纯种发酵和微生物安全性分析提供理论依据。     

雪梨果肉多酚氧化酶的活性研究与纯化

以雪梨果实为试材,通过以邻苯二酚为底物测定氧化产物的方法,测定温度、pH值、抑制剂、不同成熟期及不同部位对PPO活性的影响。结果表明:最适pH值为6.4;最适温度为25℃;不同成熟期PPO的活性不同;1mol/L的亚硫酸钠为较好的抑制剂;果肉内部PPO活性最高,果肉中部的PPO活性最低。粗提液又经30%硫酸铵沉淀去杂和80%饱和度硫酸铵析出、Sephadex-G200柱层析及HiPrepTM16/10QXL离子柱层析,得到电泳均一的PPO,分子量43kD。     

Polyphenol Oxidase from Bean Sprouts (Glycine max L.)

ABSTRACT: Polyphenol oxidase (PPO) was purified and characterized from bean sprouts by ammonium sulfate precipitation, DEAE‐Toyopearl 650M, CM‐Toyopearl 650M, SuperQ‐Toyopearl 650S and QAE‐Toyopearl 550C column chromatographies. Substrate staining of the crude extract on electrophoresis showed the presence of 2 isozymic forms of this enzyme. The molecular weight of the purified enzyme was estimated to be about 54 kDa. The optimum pH was 9.0 and optimum temperature 40 °C. Heat inactivation occurred about 30 °C. PPO showed activity to catechol, pyrogallol and dopamine. These compounds such as ascorbic acid, L‐cysteine, 2‐mercaptoethanol, and glutathione used was the effective inhibitor. Enzyme activity was maintained for 7 d at 4 °C but suddenly decreased after 8 d.     

不同金属离子对多酚氧化酶的影响

采用匀浆法从茄子中提取多酚氧化酶(PPO),以绿茶粉为底物,研究Cu2+、Mn2+、Mg2+、Ca2+、Na+、Al3+和Fe3+7种金属离子对PPO活性的影响。结果表明:Cu2+、Mn2+和Mg2+3种金属离子对PPO的活性有不同程度的促进作用,而Ca2+、Na+、Al3+和Fe3+对PPO的活性有抑制作用。其中,Cu2+浓度为3mmol/L时对PPO有激活作用,此时茶黄素总量达到7.45mg;Fe3+浓度为5mmol/L对PPO有显著抑制作用,此时茶黄素总量降低至0.26mg。     

蛋白交联中多酚氧化酶的酶源筛选及酶学性质研究

从多种植物和真菌中筛选出多酚氧化酶(PPO)活力高的原料,并对其酶学性质进行研究,以利于其在蛋白交联中的应用。双孢蘑菇和茄子中PPO 酶活相对较高,达到11004U/g 和9376U/g。双孢蘑菇PPO 和茄子PPO 的最适温度和pH 值均分别为20℃和7.0;在温度较高时,茄子PPO 比双孢蘑菇PPO 稳定性更好。Zn2+、Mn2+、Ag+对双孢蘑菇PPO 和茄子PPO 活力表现明显的抑制作用,Cu2+ 对双孢蘑菇PPO 活力表现明显的促进作用,而对茄子PPO 却有很强的抑制作用。双孢蘑菇PPO 和茄子PPO 的Km 和Vmax 分别为5.5mmol/L、1666.7U 和8.75mmol/L、2500U。     

莲藕多酚氧化酶的纯化方法研究

研究了莲藕多酚氧化酶(PPO)的提取纯化。结果表明：莲藕多酚氧化酶采用30% 硫酸铵盐析除杂、80%硫酸铵沉淀、DEAE Sephadex A-50 柱层析、Sephadex G-75 柱层析四步进行分离纯化,所得纯化物经SDS-PAGE检验为均一单带,其分子量约为21kD,其纯化倍数和产率分别为103 倍和0.38%。     

植物源多酚氧化酶氧化儿茶素形成茶黄素和聚酯型儿茶素的研究

目的:筛选出催化儿茶素氧化形成TFs和TSs的最佳酶源。方法:以丰水梨、贡梨、香梨、红富士苹果、茶鲜叶、漆酶等作为试验材料,研究不同来源PPO酶活性,并比较其对TFs和TSs合成的影响。结果:丰水梨PPO酶活性最高,为621.4 U/(min·g),是茶鲜叶酶活性的2.8倍。PPO合成TFs能力及质量浓度从大到小依次为丰水梨(0.228 mg/mL)、红富士苹果(0.011 mg/mL)、漆酶(0.008 mg/mL),其中丰水梨PPO有利于TF-3'-G和TFDG的合成,而其他PPO则有利于TF的合成;PPO合成TSs能力及质量浓度从大到小依次为:丰水梨(0.958 mg/mL)、漆酶(0.158 mg/mL)、红富士苹果(0.100 mg/mL),丰水梨PPO有利于TSA和TSB的合成,红富士苹果PPO、漆酶则有利于TSA和TSC的合成;在丰水梨、红富士苹果、漆酶这3种酶的催化作用下,TSs的合成量均高于TFs。结论:丰水梨PPO具有比红富士苹果、漆酶更强的合成TFs和TSs的能力。