叶黄素的分离纯化及其清除羟自由基活性

运用KOH-甲醇溶液皂化法将叶黄素酯转化为游离叶黄素,进一步采用硅胶柱层析进行分离纯化,并对不同纯度产品中叶黄素的含量进行HPLC法测定;以没食子酸丙酯为参照,采用流动注射化学发光法测定不同纯度叶黄素产品清除.OH的效果。结果表明:叶黄素浸膏通过皂化,游离叶黄素的含量由1.35%提高到30.25%,进一步柱层析处理得到80.32%的叶黄素产品;不同纯度叶黄素产品均具有较强的清除.OH活性,且其抗氧化活性与叶黄素的含量正相关。     

丰年虫水溶性蛋白的分离纯化及体外抗氧化性研究

目的:对丰年虫水溶性蛋白进行分离纯化,获得体外抗氧化活性最好的水溶性蛋白组分,并测定其分子质量。方法:丰年虫水溶性粗蛋白经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Sephadex G-100凝胶层析分离纯化,对纯化后的蛋白质进行体外抗氧化活性的研究,利用SDS-PAGE电泳测定蛋白质分子质量。结果:丰年虫水溶性蛋白经DEAE-Sepharose FF离子交换层析,梯度洗脱得到4个洗脱峰(峰1～4),峰2的体外抗氧化活性最强。峰2经Sephadex G-100凝胶层析分离纯化得到3个洗脱峰(峰2-1～2-3),峰2-1的体外抗氧化活性最强。利用SDS-PAGE对峰2-1进行鉴定,得到单一蛋白条带,纯度较高,蛋白分子质量为82.47kD。体外抗氧化活性比较,峰2-1远远强于水溶性粗蛋白。结论:蛋白组分峰2-1体外抗氧化活性最强,为单一蛋白组分,其分子质量为82.47kD。     

明胶抗氧化肽的分离、纯化及其清除羟自由基活性的研究

为制备具有抗氧化活性的明胶肽,本实验采用不同的酶水解明胶,并对酶解产物采用超滤技术分离,利用分光光度法检测超滤后所得多肽组分对羟基自由基(·OH)的清除能力;进一步对抗氧化活性较强的组分利用葡聚糖Sephadex C-25阳离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱和C18反向高效液相色谱进行分离、纯化,并对其各组分清除·OH活性进行了研究,最后对所得洗脱组分中具有最强清除自由基活性的多肽组分的分析氨基酸组成,结果显示:组分中甘氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸含量较高的肽具有较好的抗氧化活性,·OH清除率达到55.37%。     

苦丁茶冬青叶多糖的分离纯化及其对羟自由基的清除作用

苦丁茶冬青叶经乙醇脱脂、水提醇沉和Sevag法除蛋白,得苦丁茶冬青叶粗多糖KPS Ⅱ.KPS Ⅱ经DEAE-纤维素阴离子交换层析柱分离纯化,得到两个纯化多糖组分KPS Ⅲ a和KPS Ⅲ b.KPS Ⅲ a和KPS Ⅲ b经过硫酸水解,还原乙酰化,用气相色谱方法测定了其组成及相对含量.KPS Ⅲ a与KPS Ⅲ b均主要由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,其摩尔比分别为10.21.01.28.05.4和17.71.01.11.84.1.以Fenton反应为产生·OH模型,用紫外分光光度法实验了苦丁茶冬青叶多糖(KPS Ⅱ、KPS Ⅲ a、KPS Ⅲb)对模型中产生的·OH的清除作用.结果表明,KPS Ⅱ、KPS Ⅲa、KPS Ⅲb对·OH都具有一定的清除作用,且清除率与多糖的浓度存在一定的量效关系.苦丁茶冬青叶粗多糖KPS Ⅱ对·OH的清除作用均比纯化多精(KPS Ⅲa、KPS Ⅲb)强.     

硒蛋白和过氧化氢酶清除羟自由基作用的研究

在甲基紫-Fe~(2+)-H_2O_2体系中,试验得到最佳测定条件:缓冲溶液用量为1.0 mL、甲基紫用量为3.5 mL、Fe~(2+)用量为3.0 mL和H_2O_2加样量为2.5 mL。采用紫外可见分光光度法研究富硒食用菌中硒蛋白和过氧化氢酶对羟自由基的清除作用。结果表明:硒蛋白清除羟自由基的能力明显高于相同浓度的无机硒和蛋白质,且清除率随着各自加入量的增加而相应增加;硒蛋白和过氧化氢酶对清除羟自由基具有一定的协同作用,为富硒食品的合理开发和利用提供了一定的参考依据。     

抗氧化剂对羟自由基引起的乳清分离蛋白氧化抑制效果的研究

采用羟自由基对乳清分离蛋白(WPI)进行氧化,并采用在氧化前添加抗氧化剂的方法,研究其对乳清分离蛋白氧化的抑制作用。实验分为3 组,即不添加抗氧化剂的对照组、添加α- 生育酚和丁羟基茴香醚(BHA)的处理组,测定氧化1、5h 和12h 后WPI 羰基、总巯基、二聚酪氨酸、表面疏水性和SDS-PAGE 的变化。结果表明,蛋白氧化会显著提高WPI 中的羰基含量和二聚酪氨酸含量(P ＜ 0.05),而且会使蛋白质的疏水性增加(P ＜ 0.05)。添加α- 生育酚和BHA 的乳清蛋白氧化5h,与对照组相比可以使羰基含量降低 35.11% 和50.15%,巯基含量增加27.73% 和38.82%。通过SDS-PAGE 表明,添加抗氧化剂可以减少蛋白质的聚合。抗氧化剂的添加抑制了乳清蛋白的氧化。     

决明子水溶性多糖的分离纯化

用热水浸提法从决明子炒品中获得决明子水溶性粗多糖CP1，经斐林试剂络合，得到两种组分C1A与C1C。同时从决明子生品，决明叶中分别获得水溶性粗多糖CP2，CP3。各组分经DEAE－纤维素柱层析进行分析，结果表明C1A为组分较单一的中性多糖，C1C为组分较复杂的混合多糖；CP1与CP2的洗脱曲线无明显区别，主要洗脱部分为中性多糖，表明炒制对决明子多糖无明显影响，CP3洗脱曲线有较明显的不同，主要洗脱部分为酸性多糖。     

大豆分离蛋白酶解物清除羟自由基作用的研究

用比色法测定了大豆分离蛋白(SPI)酶解物对羟自由基的清除作用。结果表明,SPI酶解物对Fenton体系产生的·OH自由基有清除活性。SPI经木瓜蛋白酶水解15min,其酶解物清除能力已达最大值,为56.5%;经SephadexG-50凝胶柱分离,所得肽段各组分间的清除活性存在明显差异;用SDS-PAGE凝胶电泳测定各组分的分子量,结果显示分子量在11.355KD～5.154KD的肽段清除能力最强,达60.4%。     

乳清蛋白肽的制备及羟自由基的清除作用

以全乳清为原料，利用碱性蛋白酶对乳清蛋白进行降解。结果表明，水解后的蛋白多肽对Fenton体系产生的羟自由基有清除能力。并通过正交试验，得出最优水解条件，即碱性蛋白酶[E／S]=1％，温度为60℃，pH=8．0，时间为1h，水解度12．46％的条件下，乳清蛋白肽的羟自由基清除能力最强．达到93．50％。     

灵芝菌丝体碱提水溶性多糖工艺条件及对羟自由基的清除作用

通过单因素实验对影响碱提灵芝茵丝体多糖的各种因素进行了研究，确定提取条件为：提取温度65℃，提取时间4h，碱料(体积：质量)比4：1，碱液浓度0．5mol／L．在此条件下提取并对所得水溶性多糖的抗氧化作用进行了初步研究，表明其对羟自由基有较好的清除能力，在一定范围内清除率与糖的质量浓度呈正相关．     

Optimization of stress medium enhance hydroxyl radical inhibition by water-soluble protein from germinated millet

A growth-promoting medium was developed to enhance the production of a hydroxyl radical inhibitory water-soluble protein from germinated millet. The single factor test indicated that H₂O₂ plays a key role in the inhibition activity. An optimal medium composition, consisted of H₂O₂, gibberellin, Protamex and Tween-40, was achieved using statistical experimental designs. A fractional factorial design was applied to determine the key factors that affected the hydroxyl radical scavenging activity, and a central composite experimental design and response surface methodology were used to optimize those factors, respectively. A second-order polynomial prediction equation was obtained, that could determine the effects of H₂O₂ and Protamex on the response. It was found that a low concentration of H₂O₂ and Protamex could enhance the inhibition of hydroxyl radicals. The optimal medium composition for growth-promoting was as follows: H₂O₂ 1.56 mL/100 mL, gibberellin 0.2595 mg/L, Protamex 0.25 mg/mL and Tween-40 0.7 mL/100 mL. With the optimal medium, the highest hydroxyl radical inhibition (58.16%) was achieved.     

羟自由基和过氧自由基氧化对美藤果蛋白功能性质的影响

以碱提酸沉法从美藤果饼中提取美藤果蛋白,并采用羟自由基和过氧自由基氧化体系对其进行不同程度的模拟氧化,通过分析羰基、巯基、溶解性、乳化性和起泡性的变化规律,探讨羟自由基和过氧自由基氧化对美藤果蛋白功能性质的影响。结果表明:两个体系中的自由基可使美藤果蛋白羰基含量显著增加,最大增幅分别为2.10倍和2.28倍;总巯基与游离巯基含量显著降低,总巯基最大降幅分别为25.75%和31.79%,游离巯基最大降幅分别为85.97%和83.33%;溶解性显著降低,最大降幅分别为46.92%和30.51%;乳化性与乳化稳定性先升高后降低,在双氧水(H2O2)和2,2'-盐酸脒基丙烷(AAPH)浓度均为1 mmol/L时达到最大;起泡性与泡沫稳定性先升高后降低,分别在H2O2浓度为5 mmol/L和AAPH浓度为3 mmol/L时达到最大。美藤果蛋白在羟自由基和过氧自由基氧化体系中均发生显著氧化,从而导致其功能性质改变。     

羟基自由基氧化对蛋清蛋白质结构的影响

研究蛋清蛋白质经过FeCl₃/抗坏血酸（Asc）/H₂O₂产生的羟基自由基氧化体系氧化后化学结构的变化。用不同浓度的H₂O₂（0、1、5、10和20 mmol/L）对蛋清蛋白质氧化3 h,研究氧化前后蛋清蛋白质羰基、游离巯基、总巯基、游离氨基、粒径分布及二级结构的变化趋势。结果表明:氧化可使蛋清蛋白质羰基含量显著升高（p<0.05）,游离巯基和总巯基含量显著下降（p<0.05）,游离氨基显著下降（p<0.05）,平均粒径逐渐增大。当H₂O₂浓度为20 mmol/L时,与对照组相比羰基含量增加2.01倍,游离氨基降低了29.1%,平均粒径增加到666 nm。在H₂O₂浓度低于5 mmol/L时,α-螺旋和β-折叠含量升高,β-转角降低;H₂O₂浓度高于5 mmol/L时蛋清蛋白质的肽链发生断裂,进一步导致蛋白质结构发生了变化。以上结果表明氧化能在一定程度上改变蛋清蛋白的结构特性。      

羟自由基氧化对鹰嘴豆蛋白质结构及功能性质的影响

目的 探究羟自由基氧化对鹰嘴豆蛋白质结构及功能性的影响.方法 以鹰嘴豆为研究对象,用羟自由基体系氧化鹰嘴豆蛋白,分别测定不同氧化程度氧化蛋白的羰基、内源荧光、溶解度、乳化性、乳化稳定性、起泡性、泡沫稳定性、凝胶持水性和硬度等指标并分析与表征.结果 随着氧化蛋白浓度的增加,羰基值显著增加,从1.82 nmol/mg增至6...     

黄米盐溶性蛋白提取工艺研究

以脱脂黄米为原料,提取黄米盐溶性蛋白,分析了提取时间、料液比、NaCl溶液浓度对盐溶蛋白得率的影响,并以提取时间、料液比、NaCl溶液浓度为考察因素,通过L9(33)正交实验确定了盐溶蛋白的最佳提取工艺条件为NaCl溶液浓度为2%,料液比为1∶9,提取时间为30min,盐溶蛋白的得率达到3.96%.     

液相法微量检测胶原肽清除羟基自由基能力

建立了一种微量检测样品清除羟基自由能力的液相分析方法。采用Inertsil ODS-SP C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为v(甲醇):v(0.02mol/L乙酸铵水溶液)=5:95,流速1.0mL/min,柱温30℃,样品使用量为30μL,液相检测时间为6min。在上述条件下测得胶原肽清除羟基自由基的半抑制浓度(IC50值)为15mg/mL,与传统分光光度法测定值一致。该方法灵敏度高,准确度和重现性好,样品使用量少,并且不受样品本身颜色的干扰,可广泛应用于微量检测天然抗氧化剂对羟基自由基的清除能力。     

小米中四种蛋白的分级提取及结构表征

利用扫描电子显微镜、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、粒径和Zeta电位、傅里叶红外光谱、紫外光谱、荧光光谱以及表面疏水性对小米四种蛋白组分进行结构表征。结果表明：微观状态下的清蛋白和球蛋白存在簇状结构,有聚集成块的趋势,醇溶蛋白和谷蛋白形状完好,没有融合,但堆积程度高,醇溶蛋白亚基带分布明显清晰,亚基分子质量小且不杂乱,清蛋白、球蛋白和谷蛋白亚基带分布广泛,球蛋白的粒径分布区间小,强度高,谷蛋白的Zeta-电位高,其稳定性最好。二级结构表明四种蛋白在各个结构都有分布,但醇溶蛋白的有序结构相比其他三种蛋白最少。三级结构发现四种蛋白在紫外光的照射下均出现不同波长下的特征吸收峰,清蛋白的表面疏水性最低,溶解特性更好,醇溶蛋白疏水性高,溶解性低。     

大豆分离蛋白对小米粉性质的影响

以普通小米和糯小米为原料,探讨大豆分离蛋白含量对米粉性质的影响。结果表明:大豆分离蛋白含量与糯小米粉黏滞曲线成正相关,而与普通小米粉黏滞曲线呈负相关。含大豆分离蛋白9%的糯小米粉衰减值为746 cP,含大豆分离蛋白3%的普通小米粉衰减值为487.5 cP;二者的糊化温度约为75℃;糯小米粉的峰值黏度比普通小米粉出现的早,但谷值黏度、回生值均低于普通小米粉;糯小米粉和普通小米粉在85℃时的可溶指数最大;大豆分离蛋白添加量与2种小米粉的凝沉性无明显关系,普通小米粉的凝沉性是糯小米粉的2倍。     

羟自由基氧化对花生球蛋白结构和功能性质的影响

为深入研究自由基氧化对花生球蛋白的影响,建立由铁/过氧化氢/抗坏血酸组成的羟自由基氧化体系,通过控制过氧化氢浓度对花生球蛋白进行不同程度的氧化处理,考察羟自由基氧化对花生球蛋白结构和性质的影响。研究表明,随着过氧化氢浓度的增大,花生球蛋白的羰基含量、浊度、起泡稳定性呈上升的趋势;游离巯基、总巯基、溶解度和表面疏水性呈现明显下降的趋势;乳化性、乳化稳定性和起泡性呈先上升后下降的趋势;紫外扫描图谱表明,氧化导致花生球蛋白的紫外吸收峰强度明显减弱,最大波长发生轻微蓝移;差示扫描量热法结果显示,羟自由基修饰后的花生球蛋白的放热峰依次为74、72、70、75、70、72、73℃,与对照组(72℃)相比无明显变化;圆二色谱分析表明,随着过氧化氢浓度的增加,花生球蛋白的二级结构发生改变,其α-螺旋结构明显减少,无规则卷曲结构明显增加。结果表明,羟自由基氧化对花生球蛋白的性质和结构有较大影响,可通过适度氧化对花生球蛋白结构和功能性质进行调控,获得具较好乳化性和起泡性的花生球蛋白。