肺炎支原体P1C-IL-2融合基因疫苗鼻饲对小鼠免疫效果的检测

目的 研究肺炎支原体(Mp) P1C-IL-2融合基因疫苗经鼻饲免疫小鼠后的免疫应答水平和免疫保护作用,了解IL-2对P1C核酸疫苗的免疫佐剂效应.方法 将构建的P1C-IL-2核酸疫苗鼻饲免疫BALB/c鼠,ELISA检测免疫小鼠血清IgG滴度、IgG亚类和支气管肺泡灌洗液中IgA及IFN-γ、IL-4的水平;建立小鼠Mp感染模型,观察Mp攻击后小鼠肺组织炎症情况和支气管肺泡灌洗液中Mp菌落数的变化.结果 P1C-IL-2双基因疫苗组小鼠血清中的总IgG、IgG1、IgG2a亚类和支气管肺泡灌洗液中IFN-γ和IL-4水平均较PIC疫苗组小鼠显著增高(P＜0.05),但两组支气管肺泡灌洗液IgA差异无显著性(P＞0.05).用Mp滴鼻感染免疫小鼠,第1、3、6天P1C-IL-2双基因融合疫苗组小鼠肺组织炎症病理评分显著高于P1C单基因疫苗免疫组小鼠,两组小鼠支气管肺泡灌洗液中的Mp菌落数差异无显著性(P＞0.05).结论 IL-2能显著增强PIC疫苗的免疫应答水平,但在感染早期也激发了较强的肺组织炎症.     

汉滩病毒核酸疫苗滴鼻及肌注免疫小鼠效果的比较研究

观察汉滩病毒DNA疫苗滴鼻及肌注免疫诱导机体产生的免疫应答,探索汉滩病毒DNA疫苗新的免疫途径。以pcDNA3.1B-S1.3进行肌肉注射及滴鼻免疫小鼠,采用ELISA、淋巴细胞转化试验及特异性CTL杀伤活性测定等方法检测其诱导的系统和黏膜免疫反应的差异。实验结果表明,滴鼻组粪IgA滴度明显高于肌注组(P<0.05);而肌注组血IgG滴度均值虽高于滴鼻组,但两者统计上无显著意义(P>0.05);滴鼻组及肌注组小鼠脾细胞分别经ConA刺激后,其刺激指数作统计分析,结果无显著性差别(P>0.05);肌注组与滴鼻组效应细胞对靶细胞的杀伤力用方差分析进行比较,无显著性差异(P>0.05)。这些均表明,滴鼻免疫对特异的黏膜免疫激发作用明显优于肌肉注射,疫苗的滴鼻免疫途径较肌注途径有着明显的优势。     

核酸疫苗与婴幼儿免疫

编码引起保护性免疫反应的抗原基因重组于真核表达载体构建的疫苗，称核酸疫苗。本文对核酸疫苗的免疫机制，影响免疫应答的主要因素及用于婴幼儿免疫的利弊作一简要综述。     

佐剂白细胞介素2对乙型肝炎病毒核酸疫苗免疫效应的影响

核酸免疫是指将编码外源蛋白的核酸表达载体直接导入机体以激发机体产生特异性免疫应答。由于核酸疫苗可诱导机体产生较强的细胞免疫应答 ,故有望应用于慢性病毒性感染如乙型肝炎的治疗。探讨如何增强乙型肝炎病毒核酸疫苗的免疫效应 ,尤其细胞免疫效应具有重要意义。为此 ,我们构建了编码乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ ,ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ)表面抗原蛋白的重组真核表达质粒ｐＣＲ3 1 Ｓ作为ＨＢＶ核酸疫苗 ,研究了人白细胞介素 2 (ｒｈＩＬ 2 ,ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ 2 )对ＨＢＶ核酸疫苗诱导ＢＡＬ…     

核酸疫苗与蛋白疫苗的免疫特点及其联合免疫的研究进展

核酸疫苗和蛋白疫苗具有各自的免疫特点,分别诱导以细胞免疫和体液免疫为主的免疫应答,并能通过联合免疫提高机体预防病原体的免疫保护力,而核酸疫苗和蛋白疫苗的免疫特点以及联合使用核酸疫苗与蛋白疫苗协同免疫可以提高疫苗免疫效果。     

肺炎链球菌核酸疫苗在恒河猴体内的免疫原性研究

目的 研究肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,PN)核酸疫苗在恒河猴体内的免疫原性.方法 将肺炎链球菌溶血素全长基因和切去羧基端33个核苷酸的基因分别插入到质粒pVAX1载体中,构建成Ppn和Ppnd两种核酸疫苗.采用体内电转染初免结合相应蛋白质抗原加强的策略免疫恒河猴.结果 切去肺炎链球菌溶血素基因羧基端33个核苷酸.表达的重组截短溶血素蛋白保留了抗原性但去除了溶血活性,从而保证了疫苗的安全性.给恒河猴肌肉内注射500μg核酸疫苗加电转染能诱导出特异性抗体免疫应答,用相应蛋白质加强免疫后血清抗体几何平均滴度提高了约4倍.结论 采用电转染技术结合蛋白质加强免疫的策略,能增强肺炎链球菌溶血素核酸疫苗在恒河猴体内的特异性抗体水平.     

GM-CSF增强DNA疫苗免疫效果的研究进展

DNA疫苗因既能诱导体液免疫应答，又能诱导细胞免疫应答而受到广泛关注，但作为治疗性疫苗其免疫效果尚需进一步提高。细胞因子作为DNA疫苗免疫佐剂受到了广泛重视，特别是GM—CSF，由于在细胞因子网络中占有重要地位，在免疫反应中具有重要作用，而成为研究的热点之一。本文就GM—CSF增强DNA的免疫效果及其作用机理作一简要综述。     

IL-12、IL-18基因对HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导的免疫应答的影响

目的 研究IL-12、IL-18基因对HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导免疫应答的影响，以探求HIV-1核酸疫苗的新策略。方法 pVAX1GP120联合IL-12、IL-18基因或者pVAX1GP120单独免疫BALB／c小鼠，采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN-γ水平，以NIT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细脯增殖，用乳酸脱氢酶（LDH）试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞（CIL）的应答。结果 与pVAX1GP120免疫组比较，pVAX1GP120联合IL-12、IL-18基因免疫组小鼠血清的抗HIV-1 gp120抗体滴度升高，IFN-γ升高，小鼠的脾淋巴细胞增殖实验刺激指数（SI）以及特异性CTL活性均高，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论 IL-12、IL-18基因联合HIV-1核酸疫苗免疫小鼠，有可能增强特异性TH1细胞和CTL反应，IL-12、IL-18基因对体液免疫可能有抑制作用。因此，IL-12、IL-18基因对于治疗性HIV-1核酸疫苗可能是具有较好应用前景的免疫佐剂。     

羊种布氏杆菌核酸疫苗的制备及其免疫效果

目的：构建羊种布氏杆菌基因组DNA表达文库,并研究其免疫效果。方法：将羊布氏杆菌基因组DNA经限制性内切酶Hind Ⅲ消化后,克隆入pSV-β-Gal质粒,构建含羊布氏杆菌基因组DNA酶切片段的表达文库,用构建的表达文库经股四头肌免疫小鼠,结果：从文库中筛选了26个含羊种布氏杆菌基因组DNA片段的细菌克隆。免疫小鼠,可以刺激小鼠产生羊种布氏菌凝集抗体,并使淋巴细胞转化率明显增高,结论：构建的羊布氏杆菌基因组DNA表达文库可以刺激小鼠产生体液免疫应答和细胞免疫应答。此工作为制备有效的布氏杆菌及其它胞内寄生菌疫苗提供了实验基础。     

IL-15增强小鼠卵透明带3DNA疫苗的滴鼻免疫效果

目的:观察以细胞因子IL-15作为DNA疫苗的免疫佐剂,壳聚糖作为发送载体,增强经滴鼻途径接种的小鼠卵透明带3(mZP3)DNA疫苗的免疫效果。方法:将壳聚糖包裹的mZP3 DNA疫苗(pcD-mZP3)单独或IL-15+pcD-mZP3通过滴鼻途径免疫雌性C57BL/6 36只小鼠后。用ELISA法检测小鼠体内特异性抗mZP3抗体IgG和sIgA的水平。免疫后的雌鼠和有生育能力的雄鼠合笼后进行生育实验。观察小鼠免疫和生育后的肺脏和卵巢病理切片。结果:ELISA法检测结果显示,IL-15能够增加免疫小鼠抗mZP3 IgG的水平,生育率有一定的下降。结论:IL-15与壳聚糖可以增强mZP3DNA疫苗诱导的抗体水平,可一定程度上降低小鼠的生育率。     

不同免疫方式对新冠DNA疫苗应答效果的影响

目的探究气管灌注和电脉冲肌肉导入2种免疫方式对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)DNA疫苗免疫应答的影响。方法利用真核表达载体pVAX-1,设计并构建p RBD、p S-2P和p S-2P.351 3种SARS-CoV-2 DNA疫苗。在第0、2和4周采用气管灌注以及电脉冲肌肉导入2种方式免疫小鼠。末次免疫后2周,ELISA检测血清及阴道灌洗液特异性IgG抗体水平,肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)、鼻腔灌洗液(nasal solution, NS)以及阴道灌洗液(vaginal wash)特异性sIgA抗体水平;ELISpot检测免疫后小鼠脾细胞分泌特异性IFN-gamma的水平。结果气管灌注及电脉冲肌肉导入2种方式免疫SARS-CoV-2DNA疫苗,仅气管灌注免疫可诱导特异性呼吸道黏膜sIgA应答,而电脉冲肌肉导入诱导了更强的细胞免疫应答。与气管灌注pRBD相比,气管灌注pS-2P和p S-2P.351可诱导更强的黏膜免疫应答和细胞免疫应答。结论气管灌注和电脉冲肌肉导入2种免疫方式均可诱导特异性体液免疫以及细胞免疫应答,电脉冲肌肉导...     

登革病毒2型NS1蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果观察

目的　以登革病毒 2型 (denguevirus2 ,DV2 )非结构蛋白 (non structrulprotein 1,NS1)为靶基因 ,构建DV2 NS1的候选DNA疫苗 ;并探讨其在小鼠体内诱导特异性体液免疫和细胞免疫的作用。方法　将登革病毒 2型NS1 NS2a基因片段克隆至含AG强启动子的真核表达载体pCXN2上 ,构建成重组体pCXN2 NS1 NS2a。在体外将重组质粒转染Cos 7细胞 ,间接免疫荧光检测其在真核细胞中的表达。大量提取空质粒和重组质粒 ,进行动物免疫实验。结果　重组质粒可在真核细胞中有效地表达NS1蛋白。免疫接种小鼠后可诱发机体产生针对NS1蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫。末次免疫前已有抗体产生 ,4周后达高峰。抗体依赖补体介导的溶细胞作用 (antibody dependentcomple ment mediatedcytolysis,ADCC)试验结果显示产生的抗体在体外具有特异的杀细胞作用。淋巴细胞增殖实验结果显示 ,实验组小鼠的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异有显著性。流式细胞计数仪(FACS)检测DNA免疫鼠CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞变化情况 ,与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比 ,CD4 + 、CD8+ 细胞水平有较大升高 (P <0 .0 1)。动物保护性实验结果显示 ,当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时 ,有 6 6 .6 %的免疫鼠受到保护。结论　NS1 NS2a基因重组质粒免疫小鼠可以诱     

肺炎支原体P1蛋白片段免疫学活性及黏附功能的研究

目的 了解肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1蛋白第1125 ～1395氨基酸片段(P1C蛋白)的免疫学活性及其细胞黏附作用.方法 构建用于表达重组P1C片段(rP1C)的原核表达载体pGEX6p-2/p1c,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定rP1C.采用基于GST的亲和层析法提纯rP1C,提纯的rP1C免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠抗rP1C血清的效价.采用Western blot检测rP1C对Mp感染患者血清的免疫反应性.采用间接免疫荧光法检测rP1C黏附HeLa细胞及其免疫血清黏附抑制作用.结果 所构建的原核表达系统能有效表达相对分子质量约为66×103的可溶性rP1C.rP1C免疫小鼠后,其抗血清ELISA效价高达1∶64000.rP1C能被Mp感染者血清及小鼠抗rP1C血清识别并与之结合.rP1C能黏附HeLa细胞,其抗血清可阻断Mp对HeLa细胞的黏附,该黏附阻断作用随抗血清浓度增高而增强.结论 rP1C具有良好的免疫原性和免疫反应性及黏附细胞功能,可作为Mp疫苗及血清学检测的候选抗原.     

插入IL-2基因优化HBV DNA疫苗的研究

目的：观察IL-2基因的插入对DNA疫苗免疫效应的影响，探讨优化DNA疫苗设计、提高DNA疫苗兔疫效应的途径。方法：采用PCR产物直接克隆和重组DNA技术构建了人IL-2和HBsAg融合基因的真核表达载体pcDNA3．1 -S/IL-2，通过脂质体基因转移技术导入Cos-7细胞中检测其瞬间表达，并经肌肉注射免疫C57Bl/6小鼠，以检测和比较它们的细胞和体液免疫应答。结果：通过酶切、PCR及测序证实已正确完整地插入 IL-2基因，成功构建了 pcDNA3．1 -S/IL-2重组质粒。体外转染Cos-7后可见基因的表达和分泌，pcDNA3．1 -S/IL-2可以提高免疫小鼠的抗 HBs抗体滴度和脾淋巴细胞诱生的IL-2的生物活性水平，增加 HBsAg特异性的脾淋巴细胞增殖指数。结论：IL-2和 HBsAg基因的融合表达对 DNA疫苗的免疫反应起协同和增强作用，提示IL-2基因插入可能是增强DNA疫苗的免疫效应的可行途径。     

肺炎支原体膜脂蛋白通过TLR2介导mICAM-1表达的上调

目的　观察肺炎支原体膜脂蛋白 (Mp LAMP)对THP 1 (前单核白血病细胞系 )细胞TLR2 (Toll样受体 )与mICAM 1 (膜结合型细胞间黏附分子 1 )表达的影响 ,探讨膜脂蛋白中的活性成分及二者表达的相互关系。方法　用流式细胞术检测Mp LAMP刺激组、抗人TLR2功能纯化抗体(TL2 .1 )阻断组及消化酶处理组的THP 1细胞mICAM 1和TLR2的表达水平。结果　与对照组相比 ,不同刺激浓度的Mp LAMP对THP 1细胞膜上TLR2及mICAM 1的表达均有明显的上调作用 (P <0 .0 5 ) ,且表达水平的增加对Mp LAMP的刺激具有浓度依耐性 ;用TL2 .1将THP 1细胞膜上的TLR2阻断后 ,Mp LAMP对mICAM 1表达的诱导作用明显受到抑制 (P <0 .0 1 ) ,其阻断效果随TL2 .1量的增加而加强 ;酶消化试验证实Mp LAMP的活性成分是其脂质部分。相关分析表明 ,mICAM 1在THP 1细胞上的表达水平与TLR2密切相关 (r=0 .989,P <0 .0 1 )。结论　肺炎支原体膜脂蛋白通过TLR2介导上调THP 1细胞mICAM 1的表达 ,在一定程度上影响着肺炎支原体感染所导致的炎性反应的强弱。     

DNA免疫激发针对肾母细胞瘤CTL效应初步研究

目的 将鼠源肾母细胞瘤WT1基因一段序列(WT1y)构建于真核表达质粒pCDNA3.1( ),通过小鼠和体外细胞模型初步研究所激发的针对肾母细胞瘤CTL效应.方法 人工合成WT1基因一段序列,含有HLA-A*2402锚定残基的9个氨基酸.构建重组真核表达质粒pCDNA3.1( )/WT1y.免疫Balb/c小鼠,通过ELISA方法检测体液免疫反应;分离脾淋巴细胞,FCM检测脾淋巴细胞中CD4/CD8;将分离的脾淋巴细胞与小鼠肾母细胞瘤细胞共培养,检测其体外溶解组织相容性抗原型别一致的外源性靶细胞能力.结果 构建的重组质粒经测序鉴定,与GenBank中登录的序列完全一致;免疫组小鼠T淋巴细胞增殖及CTL活性均明显优于对照组(P＜0.01);体外具有较强溶解靶细胞的功能.结论 WT1基因的DNA疫苗初步研究具有很强的CTL效应,为小儿肾母细胞瘤的治疗提供了新的思路.     

CVB3-VP1基因免疫诱导特异性抗病毒免疫应答及保护作用

目的 :构建表达柯萨奇病毒B3(CVB3)主要包膜蛋白VP1的基因疫苗 ,并研究该疫苗诱导CVB3特异性免疫应答及免疫保护的作用。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增VP1基因 ,克隆于真核表达载体 pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1。将该质粒转染Hela细胞 ,观察其表达情况 ;以 5 0 μgpcDNA3 VP1质粒DNA肌注免疫BALB/c小鼠 3次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答。间隔 4wk以 5×LD50 的CVB3攻击小鼠 ,观察攻击后小鼠的存活情况。结果 :构建了重组质粒 pcDNA3 VP1,并在体外获得有效表达。以该质粒肌肉免疫BALB/c小鼠 ,可诱生高水平的IgM和IgG ,VP1多肽特异性淋巴细胞增殖反应及CTL活性均显著高于 pcDNA3免疫的对照组。病毒攻击试验表明 ,pcDNA3 VP1免疫组33.3%小鼠可长期存活 ,其心肌组织未见明显的病理学改变 ;而对照小鼠平均仅存活 6 .7d ,心肌显示大量的局灶性坏死和炎性细胞浸润。结论 :pcDNA3 VP1免疫可诱生CVB3特异性体液及细胞免疫应答 ,保护免疫小鼠抵抗CVB3的致死性攻击