柚皮素预处理对心肌缺血/再灌注损伤大鼠能量代谢的影响

 目的 探讨柚皮素预处理对心肌缺血/再灌注损伤大鼠能量代谢的影响。方法 将大鼠随机分为5组(n=10):假手术组、模型组,柚皮素分为三个剂量组(100、50、25 mg/kg),于建立模型前7 d开始腹腔注射给药,通过结扎冠脉30 min再灌注2 h建立心肌缺血/再灌注损伤模型;再灌注结束后,采用比色法测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,采用定磷法测定心肌组织Na^＋/K^＋-ATP酶和Ca²⁺/Mg²⁺-ATP酶的活力,采用染色法测定心肌梗死面积(myocardial infarction surface, MIS)。结果 柚皮素高剂量组MIS缩小至32.91%,与模型组MIS(39.78%)比较差异有统计学意义(P<0.05);柚皮素各剂量组CK活性分别降低为658.03、650.12、621.89 U/L,与模型组(809.45 U/L)比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);各剂量组LDH活性分别降低为1543.08、1506.27、1326.97 U/L,与模型组(2034.56 U/L)比较差异均有统计学意义(P<0.05或P< 0.01);柚皮素各剂量组可显著升高Na^＋/K^＋-ATP酶活力为6.82、6.83、6.94 mmol Pi/(g·h),与模型组[5.54 mmol Pi/(g·h)]比较差异均有统计学意义(P<0.05);高、中剂量组可显著升高,Ca²⁺/Mg²⁺-ATP酶活力为8.42、8.97 mmol Pi/(g·h),与模型组[7.06 mmol Pi/(g·h)]比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 柚皮素预处理对心肌缺血/再灌注所致心肌损伤的保护作用可能与改善心肌组织的能量代谢有关。     

重组人胰高糖素样多肽-1(rhGLP-1)对人肝细胞系HL-7702胰岛素信号通路的影响

 目的 通过研究重组人胰高糖素样多肽-1(rhGLP-1)对人肝细胞系 HL-7702胰岛素信号通路关键位点 Akt 表达的影响,揭示GLP-1对肝细胞胰岛素信号通路PI3K-AKT-mTORC的作用。方法 选用处于对数生长期的人肝细胞系HL-7702,分别在含有不同浓度rhGLP-1(7-36)( 10 nM、100 nM、1000 nM)的培养液中培养24 h,以空白培养液作为对照。用蛋白质免疫印迹法(western blot)检测 Akt 蛋白及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达量。结果 Akt 蛋白的表达水平在对照组与GLP-1低浓度组、GLP-1中浓度组、GLP-1高浓度组均无明显差异。与对照组相比,p-Akt(Thr308)的表达量在GLP-1低浓度组(0.60±0.27 vs 1±0,P<0.05)、GLP-1中浓度组(0.61±0.18 vs 1±0,P<0.05)、GLP-1高浓度组(0.54±0.15 vs 1±0,P<0.01)明显下降;p-Akt(Ser473)的表达量在对照组与GLP-1不同浓度组之间均没有差异。结论 GLP-1导致人肝细胞p-Akt的表达水平下降,提示GLP-1对肝细胞PI3K-AKT-mTORC通路可能具有抑制作用,这可能是GLP-1类降糖药物降低血脂的机制之一。     

二甲双胍联合利拉鲁肽对多囊卵巢大鼠炎性因子及性激素水平的影响

 目的 研究二甲双胍联合利拉鲁肽对经脱氢表雄酮诱导的多囊卵巢(PCOS)大鼠外周血清炎性因子及性激素水平的影响。方法 将80只PCOS(经脱氢表雄酮诱导)大鼠随机分为对照组(n=40)和干预组(n=40)。对照组大鼠每天给予二甲双胍(270 mg/kg·d)灌胃,干预组大鼠每天给予二甲双胍(270 mg/kg·d)灌胃+利拉鲁肽(5 μg/kg·d)皮下注射, 连续治疗28 d。治疗结束后测定两组大鼠外周血清炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)]、激素水平[卵泡雌激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌激素(E₂)、睾酮(T)]。结果 治疗后两组大鼠外周血清IL-6(23.88±7.32)pg/ml、TNF-α(13.24±2.23)ng/L、CRP(1.10±0.19)mg/L、LH(6.57±1.37)mIU/ml、LH/FSH(1.17±0.28)、E₂(1.11±0.18)pg/ml、T(12.21±1.32)ng/dL均较治疗前有所降低且差异有统计学意义(P<0.05),干预组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组大鼠FSH (5.63±0.77) mIU/ml较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05),干预组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 二甲双胍联合利拉鲁肽能很好的降低PCOS大鼠外周血清炎性因子浓度,改善激素水平,为临床实践提供一定的指导。     

槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖及HIF-1α、VEGF的影响

 目的 探讨槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖能力、HIF-1α以及VEGF表达的影响及其可能机制。方法 实验的细胞分为正常对照组、缺氧组、槲皮素+缺氧组,采用CoCl₂法诱导缺氧环境。采用MTT 法检测各组细胞增殖能力,实时定量PCR 及Western blot检测各组细胞缺氧诱导因子HIF-1α 和VEGF mRNA及蛋白表达。结果 与正常对照组比较,缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力降低(P<0.05),与缺氧组比较,槲皮素+缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力显著降低(P<0.05),正常组在24、48、72 h的光密度值分别为0.640±0.016、1.287±0.025、1.738±0.027,缺氧组的光密度值分别为0.551±0.021、0.851±0.028、1.268±0.018,槲皮素+缺氧组的光密度值分别为0.435±0.023、0.717±0.013、0.984±0.037。与正常对照组比较,缺氧组细胞HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),而槲皮素可下调缺氧细胞中VEGF mRNA及蛋白表达,对HIF-1α mRNA及蛋白表达无影响(P>0.05):正常对照组HIF-1α、VEGF的mRNA表达均为1.000±0.000,蛋白表达分别为0.616±0.016、0.831±0.034,缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达分别为2.298±0.031、2.065±0.090,蛋白表达分别为1.385±0.047、2.022±0.076,槲皮素+缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达2.326±0.027、0.990±0.077,蛋白表达分别为1.406±0.029、1.137±0.054。结论 槲皮素可抑制缺氧肝癌细胞HepG2 增殖能力,这可能与槲皮素下调细胞中VEGF表达有关。     

某部士兵高温高强度军事训练对血清生化指标的影响及其意义

 目的 分析某部士兵高温高强度军事训练对血清生化指标的影响及其意义。方法 随机选取某部参加10 km长跑训练士兵52例,于训练前后进行生化指标检测,比较训练前后生化指标的变化。结果 (1)训练后电解质Ca⁺、Na⁺较训练前升高[(2.6±0.07)mmol/L vs. (2.5±0.06)mmol/L,(145.2±1.6)mmol/L vs. (141.9±5.5)mmol/L,P<0.01],Mg⁺、K⁺较训练前降低[(0.9±0.06)mmol/L vs. (1.0±0.07)mmol/L,(4.4±0.4)mmol/L vs. (5.0±0.4)mmol/L,P<0.01];(2)训练后AST较训练前升高[(20.7±6.6)μmol/L vs. (18.7±4.2)μmol/L,P<0.01],ALT、GGT、ALP、TBIL、DBIL训练前后差异无统计学意义;(3)训练后Cr、UA、LAC较训练前升高[(74.1±11.2)μmol/L vs. (67.4±14.6)μmol/L,(426.4±77.3)μmol/L vs. (411.2±78.3)μmol/L,(7.4±0.6)μmol/L vs. (4.4±0.7)μmol/L,P<0.01],Urea、β₂-MG训练前后差异无统计学意义;(4)训练后LDH、CK较训练前升高[(229.9±24.1)U/L vs. (188.3±31.2)U/L,(188.3±57.2)U/L vs. (149.6±58.8)U/L,P<0.01],CHE、CK-MB训练前后的改变差异无统计学意义。结论 高温高强度训练可对机体造成影响,但未发生器官损伤,在训练后及时补充电解质,是尽快恢复体力的有效措施。     

高压氧舱治疗新生儿缺氧缺血性脑病的疗效探讨

 目的 探讨高压氧舱治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床效果。方法 2013-01至2017-02选择住院治疗的130例新生儿缺氧缺血性脑病作为研究对象,按照随机数字法分为对照组和观察组,每组65例,对照组给予常规对症支持治疗,观察组在对照组治疗的基础上给予高压氧舱治疗,两组都治疗观察3个月。结果 治疗后观察组与对照组的总有效率分别为98.5%和81.5%,观察组的总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后观察组与对照组的MMSE评分分别为(89.45±5.39)分和(78.20±6.14)分,都明显高于治疗前的(65.23±8.14)分和(65.11±7.89)分(P<0.05),治疗后观察组的MMSE评分明显高于对照组(P<0.05)。治疗后两组的血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶及肌酸激酶同工酶含量都明显低于治疗前(P<0.05),治疗后观察组的各指标也明显低于对照组(P<0.05)。两组治疗后NOX2灰度比值和ROS较治疗前均显著降低,观察组治疗后NOX2灰度比值(0.37±0.06)显著低于对照组(0.42±0.09)(P<0.05),ROS(518.85±54.48)U/ml显著低于对照组(551.28±69.93)U/ml(P<0.05)。结论 高压氧舱治疗新生儿缺氧缺血性脑病能改善患儿的心肌功能,抑制氧化应激作用,从而提高治疗效果,促进认知功能的改善,有很好的应用价值。     

中药联合TACE对原发性肝癌患者免疫功能的影响

 目的 观察中药联合肝动脉灌注化疗栓塞术(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)对原发性肝癌患者免疫功能的影响。方法 原发性肝癌80例被分为治疗组(中药联合TACE组,40例)和对照组(TACE组,40例)。两组均于TACE术前24 h、术后1周和4周,检查外周血T淋巴细胞亚群、CD4CD25调节性T淋巴细胞(Treg),以及AFP含量,并进行临床疗效及生活质量评分(KPS)比较。结果 治疗1周后,对照组CD3⁺[(45.26±2.83) vs (50.16±6.31)]、CD4⁺[(22.65±2.35) vs (27.12±3.36)]、CD4⁺/CD8⁺[ (0.85±0.16) VS (1.16±0.27)]较术前降低,CD8⁺[(32.48±6.21) vs (27.36±5.64)]及CD4⁺CD25⁺[(12.65±5.12) vs (9.15±3.63)]调节性T淋巴细胞(Treg)呈升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组CD3⁺[(46.55±3.94) vs (49.33±3.12)]、CD4⁺[(23.13±2.72) vs (25.53±2.52)]、CD8⁺[(25.26±3.52) vs (27.69±5.13)]、CD4⁺/CD8⁺[(1.13±0.39) vs (1.22±0.16)]及Treg细胞[(10.36±5.62) vs (8.20±2.25)]较治疗前变化无统计学意义(P>0.05)。治疗4周后,两组患者T细胞亚群各项指标均较术前明显改善(P<0.05),组间比较差异无统计学意义(P>0.05);Treg细胞组间比较,治疗组优于对照组[(3.96±1.32) vs (6.21±3.42)],有统计学意义(P<0.05)。AFP测定及KPS评分,治疗组均优于对照组。结论 中药联合TACE可以更好的改善原发性肝癌患者的免疫状况及生活质量。     

白藜芦醇激活Notch1/Hes1信号减轻大鼠川崎病诱发心肌损伤的机制

 目的 探讨Notch1/Hes1信号在白藜芦醇减轻大鼠川崎病(KD)诱发心肌损伤中的作用。方法 将48只幼年雄性SD大鼠(4周龄)随机分为对照组(Control)、白藜芦醇对照组(Res)、干酪乳杆菌细胞壁提取物(LCWE)注射模拟川崎病组(KD)和KD联合白藜芦醇组(Res+KD),对照组腹腔注射生理盐水,Res组腹腔注射Res(100 mg/kg),KD组腹腔注射LCWE(1 mg/ml),而KD+Res组腹腔注射LCWE(1 mg/ml)和Res(100 mg/kg)。4周后,小动物超声检测各组心脏功能并计算左室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(LVFS),HE染色观察心肌形态,酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌组织中TNF-α和IL-1β含量,TUNEL染色观察细胞凋亡的变化,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白Bcl2和Bax的蛋白含量以及Notch1和Hes1信号的变化。结果 Res组各项检测指标与对照组相比均无统计学差异;与对照组相比,KD组发生心脏功能障碍和心肌细胞凋亡增加,表现为LVEF和LVFS明显降低(P<0.05),Bax蛋白表达与凋亡指数增加,Bcl2蛋白表达降低(P<0.05),心肌组织中TNF-α和IL-1β含量增加(P<0.05),HE染色显示心肌纤维排列紊乱并有断裂现象,同时,心肌组织中Notch1和Hes1蛋白表达显著降低(P<0.05);而与KD组比较,Res处理后,可改善KD引起的心脏功能障碍和细胞凋亡,降低心肌组织中TNF-α和IL-1β含量(P<0.05),改善心肌纤维排列,并增加心肌组织Notch1和Hes1蛋白表达(P<0.05)。结论 KD会导致心脏功能障碍和心肌细胞凋亡增加,同时引起心肌组织炎性反应,抑制Notch1/Hes1信号;而Res可通过激活Notch1/Hes1信号减轻心肌组织和冠状动脉炎症,改善KD引起的心肌损伤。     

p53调控信号转导子和转录激活子3对肺癌细胞增殖及凋亡的影响

 目的 探讨p53调控信号转导子和转录激活子3(STAT3)对肺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 细胞分组为空白对照组、阴性对照组、p53 小干扰RNA(siRNA)组、p53 siRNA+STAT3 siRNA组,采用western blot法检测组织中p53和STAT3蛋白表达水平;采用Transwell法检测转染后体外迁移能力和侵袭能力;采用流式细胞术膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶(AV-PI)双染法检测转染后凋亡情况。结果 肺癌组织中p53表达水平明显下调,而STAT3表达阳性率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。转染p53的siRNA能显著上调肺癌细胞中STAT3的表达水平;p53 siRNA组和p53 siRNA+STAT3 siRNA组A549细胞凋亡率(17.91%±0.67%,22.51%±0.56%)、细胞的迁移速度[(55.16±6.50)μm/h,(63.30±5.98)μm/h]、穿膜细胞数(58.23±7.12,68.23±7.14),与空白对照组和阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 p53在肺癌中呈现低表达,p53能负向调控STAT3的表达,从而抑制其增殖和凋亡能力。     

有氧运动对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响

 目的 探讨有氧运动对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏纤维化的影响并探讨肾小管上皮－间质转化(EMT)在其间的作用机制。方法 将10只Wistar-Kyoto大鼠作为正常血压对照组(WKY),30只雄性SHR按照随机数字表法分为高血压安静组(SHR-S)和高血压运动组(SHR-E),每组15只。WKY和SHR-S组在鼠笼内安静饲养,SHR-E组进行8周跑台运动。实验后,利用无创血压仪检测尾动脉血压;测定24 h尿蛋白(UP)、血尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr)含量评价肾功能;Masson染色进行肾脏病理组织学观察并获取纤维化指数(FI);免疫印迹测定转化生长因子β₁(TGF-β₁)、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-CA)表达量。结果 与WKY组比较,SHR-S组血压[SBP:(177.3±17.2) mmHg vs. (110.6±13.3)mmHg,P<0.05;DBP:(108.1±6.3) mmHg vs. (75.6±4.9) mmHg,P<0.05;MAP:(131.1±7.4) mmHg vs. (87.3±4.7) mmHg,P<0.05]、肾脏FI[(7.87±1.89)% vs. (0.43±0.05)%,P<0.05]、UP[(197.3±41.6) mg/24 h vs. (89.2±9.5) mg/24 h,P<0.05]、BUN[(14.3±2.9) mmol/L vs. (4.9±1.0) mmol/L,P<0.05]和SCr[(98.6±10.1) μmol/L vs. (35.8±4.3) μmol/L,P<0.05]升高,TGF-β₁、p-Smad2、p-Smad3和α-SMA蛋白表达上调(P<0.05),E-CA蛋白表达下调(P<0.05);与SHR-S组比较,SHR-E组血压[SBP:(152.3±14.2) mmHg vs. (177.3±17.2) mmHg,P<0.05;DBP:(93.1±9.7) mmHg vs. (108.1±6.3) mmHg,P<0.05;MAP:(112.8±7.9) mmHg vs. (131.1±7.4) mmHg,P<0.05]、肾脏FI[(3.02±0.91)% vs. (7.87±1.89)%,P<0.05]、UP[(127.9±25.7)mg/24 h vs. (197.3±41.6) mg/24 h,P<0.05]、BUN[(6.8±1.7) mmol/L vs. (14.3±2.9) mmol/L,P<0.05]和SCr[(50.3±6.0) μmol/L vs. (98.6±10.1) μmol/L,P<0.05]下降,TGF-β₁、p-Smad2、p-Smad3和α-SMA蛋白表达下调(P<0.05),E-CA蛋白表达上调(P<0.05)。结论 有氧运动可能通过调控TGF-β₁/Smad信号途径抑制高血压肾病大鼠肾小管EMT,进而改善肾脏纤维化并提高肾功能。     

亚低温治疗对脑创伤后三磷酸腺苷酶的影响

目的 观察亚低温治疗对大鼠脑外伤后脑组织Na^ -K^ -ATP酶、Mg^2 -ATP酶以及Ca^ -ATP酶的影响。方法 75只大鼠随机分为常温对照组（33只）、常温受伤组（22只）和亚低温治疗组（20只）,后两组用自由落体方法致大鼠左侧脑外伤,亚低温治疗组受伤后用冰袋全身降温至脑温30℃后维持1h,然后加热复温至37℃。每组大鼠在伤后3h,1,3,5和7d取大脑组织,测定组织匀浆液中ATP酶的活性。结果 （1）Na^ -K^ -ATP酶;常温受伤组和亚低温治疗组在3h明显高于对照组,而后明显下降。亚代温治疗组在第3天明显高于常温受伤组;（2)Mg^2 -ATP酶;常温受伤组和亚低温治疗组在1d后才开始明显下降,但亚低温治疗组在1d和3d中较常温组睛降速度明显变慢;（3）Ca^2 -ATP酶：常温受伤组第1天就较常温对照组明显下降,而亚低温治疗组3h和第1天保持正常,有3天才明显下降,但仍然显著高于常温受伤组。结论（1）脑外伤大鼠脑细胞Na^2 -K^ -ATP酶早期对脑外伤有应激反应,亚低温治疗对细胞钠通道的作用不明显;（2）亚低温对钙泵有明显的调节作用,较常温受伤组显著提高脑细胞Ca^2 -Mg^2 -ATP酶的活性;（3）亚低温治疗能延缓脑细胞钙通道的损伤时间,且在7d内脑细胞的钠通道和钙通道在低水平保持相对稳定,从而减少Ca^2 的内流,减轻脑水肿。     

脑复合剂对脑损伤大鼠Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Ca2+调控的影响

目的 观察刨伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)大鼠脑组织匀浆及线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性、神经细胞内游离Ca2+浓度及脑组织钙调蛋白(CaM)表达的动态变化,探讨脑复合剂脑保护作用的分子生物学机制.方法 建立大鼠TBI模型,分别设立假手术组、TBI组及中药治疗组.中药治疗组给予脑复合剂10 g·kg-1·d-1,假手术组及TBI组给予同等剂量等渗盐水,2次/d,连续7 d.分别于TBI后24 h、72 h、1周等3个时相点处死大鼠,动态定量分析各组大鼠脑组织匀浆及线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性、神经细胞内游离Ca2+浓度及脑组织CaM表达的变化.结果 TBI组各时相点大鼠脑组织匀浆及线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均明显降低,于TBI后72 h后逐渐恢复,1周时仍明显低于假手术组.中药治疗组大鼠脑组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性显著增加(P＜0.05);TBI组各时相大鼠脑组织神经细胞内游离Ca2+浓度及脑组织CaM表达均有不同程度增高,于伤后24 h达高峰,持续至72 h仍高于假手术组.而中药治疗组各时相大鼠神经细胞内游离Ca2+浓度及脑组织CaM表达明显低于TBI组(P＜0.05).结论 脑复合剂的脑保护作用可能与增加脑组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶的活性,从而减轻TBI后脑细胞的能量代谢障碍,降低神经细胞内游离Ca2+浓度及脑组织CaM表达,减轻Ca2+超载所导致的继发性脑损伤有关.     

利拉鲁肽对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响

 目的 探究胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)类似物利拉鲁肽(GLP-1 analogue,Liraglutide)对大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells, CMEC)缺氧复氧损伤的影响。方法 双酶消化法体外分离培养SD大鼠CMEC,实验的细胞分为正常对照组、Liraglutide(0~100 nM)组、H/R组、H/R+Liraglutide组。建立缺氧复氧模型(hypoxia/reoxygenation model,H/R)诱导的细胞氧化应激凋亡模型,流式细胞学检测细胞凋亡率,DCFHDA荧光探针检测胞内ROS的变化免疫荧光染色和Western Blot检测XO、caspase3等蛋白分子的表达情况,通过比较各组中XO、ROS以及凋亡相关蛋白caspase3的表达情况阐明Liraglutide在抗细胞氧化应激过程中的保护作用机制。结果 与正常对照组细胞相比,H/R模型条件诱导细胞中XO表达增加,生成过量ROS及凋亡蛋白的表达,最终导致凋亡细胞数量显著提高至20.66%±1.30%。Liraglutide预处理12 h抑制了H/R诱导的XO的激活,最终降低胞浆过量ROS并将细胞的凋亡数量降低至8.36±1.19%。结论 H/R模型导致XO-ROS激活,生成过量胞浆ROS,最终介导了CMEC的线粒体凋亡通路激活,而予以Liraglutide预处理可以逆转上述过程。     

Caspase-3对5-ALA诱导鳞状细胞癌Colo-16细胞凋亡效应的影响

 目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)对光敏剂5-氨基酮戊酸(5-ALA)诱导鳞状细胞癌Colo-16细胞凋亡效应的影响。方法 取对数生长期的Colo-16细胞用于实验,将细胞分为对照组、5-ALA-光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)组和Caspase-3抑制剂组(Z-DEVD-FMK),对照组不给予光敏剂和照光处理,5-ALA-PDT组给予0.4 mg/ml的5-ALA避光孵育4 h后,采用(功率密度10 mW/cm²,能量密度2.5 J/cm²)激光照射3 min,之后继续培养12 h。Caspase-3抑制剂组除孵育时同时加入Z-DEVD-FMK(终浓度40 μmol),其余处理与5-ALA-PDT组相同。实验后收集各组细胞,通过免疫荧光观察各组细胞胞内Caspase-3荧光强度的变化,通过流式细胞术检测活性Caspase-3阳性细胞百分率和细胞凋亡率。结果 免疫荧光结果发现对照组和Caspase-3抑制剂组Colo-16细胞胞浆中有微弱绿色荧光,表明Caspase-3表达量低,而5-ALA-PDT组中绿色荧光显著增强,表明其胞浆内Caspase-3含量显著增高。流式细胞仪的检测结果显示,对照组、5-ALA-PDT组和Caspase-3抑制剂组active-Caspase-3阳性细胞百分率分别为(2.26±0.16)％、(32.16±1.31)％和(3.36±0.31)％,5-ALA-PDT组高于对照组和Caspase-3抑制剂组,差异有统计学差异(P<0.05)。对照组、5-ALA-PDT组和Caspase-3抑制剂组的凋亡率分别为(2.35±0.22)％、(31.55±3.68)％和(11.46±2.25)％,三组之间两两比较,差异都有统计学意义(P<0.01)。结论 5-ALA-PDT可以诱导Colo-16细胞发生凋亡,且这种效应与caspase-3的激活密切相关。     

Exendin-4介导的猪髋动脉内皮细胞NO释放与细胞内钙离子浓度变化的关系

目的 观察Exendin-4(Ex-4)介导的猪髋动脉内皮细胞(PIEC)内一氧化氮(NO)释放与钙离子变化的关系,探讨Ex-4影响内皮细胞功能的机制.方法 免疫荧光法检测确认PIEC上存在胰高血糖素样肽-1受体(GLP-IR).NO荧光探针(DAF-FM DA)标记细胞内NO,荧光酶标仪检测Ex-4作用内皮细胞后不同时间点[加药前(0h),加药后l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12h,共13个时点]细胞内NO释放情况;钙离子荧光探针(Fura-2 AM)标记细胞内钙,荧光酶标仪检测细胞内3个不同时段(0～30min,4～4.5h,8～8.5h)钙浓度变化情况;评价Ex-4诱导PIEC释放NO与细胞内钙的关系.结果　PIEC上有GLP-1R表达.Ex-4引起PIEC内NO增加,且有时间依赖关系,与0h比较,4h开始NO明显增高(P＜0.05),8h时细胞内NO含量较其他各时点均明显增高(P＜0.05).Ex-4干预后0～30min、4～4.5h和8～8.5h 3个时段细胞内钙均较对照组高(2.042±2.115 vs 0.634±0.352,P＜0.01;0.413±0.154 vs 0.113±0.111,P＜0.01;0.309±0.133 vs 0.063±0.120,P＜0.01).Ex-4干预PIEC后NO释放前期前段(0～30min),细胞内钙逐渐上升(拟合曲线:y=0.106x+l.326); NO释放中期前段(4～4.5h,y=0.003x+0.374)和NO释放后期前段(8～8.5h,y=-0.001x+0.324)细胞内钙浓度虽同NO一样也高于对照组,但没有明显的变化趋势.结论 Ex-4可增加内皮细胞内NO释放,该过程与细胞内钙变化密切相关.     

低氧习服对大鼠心肌肌浆网酶活性和钙摄取能力的影响

目的 研究低氧习服对大鼠心肌功能的影响。方法 18只雄性Wistar大鼠,随机分为常氧对照组、急性低氧组和间断低氧习服组3组,每组n=6。经间断低氧习服（先后模拟海拔3000m和5000m低氧各14d,每天4h,最后8000m低氧4h）和急性低氧（模拟海拔8000m低氧4h）的大鼠,断头处死,迅速取出心脏,分离心肌浆网SR,用水解磷酸根法测定ATP酶活性,用γ-32Pi参入法测定PLB的磷酸化,用微孔滤膜过滤技术测定ATP依赖性心肌SR^45Ca^2＋摄取功能。结果 1）低氧对大鼠心肌SRNa^＋,K^＋-ATPase的活性无明显影响;2）急性低氧大鼠心肌SRCa^2＋,Mg^2＋-ATPase活性较正常大鼠显著降低（P〈0．01）,而低氧习服大鼠心肌SRCa^2＋,Mg^2＋-ATPase活性则较未习服者明显为高（P〈0．01）,接近正常水平;3）急性低氧大鼠心肌SRPLB的磷酸化显著减弱,而低氧习服大鼠PLB的磷酸化则明显提高,表明低氧习服可减轻对钙泵的抑制;4）急性低氧可显著抑制心肌SR对^45Ca^2＋的摄取,而低氧习服时,SR摄取^45Ca^2＋的能力显著增强,最大摄取量显著增高。结论 低氧习服可以明显提高心肌SRCa^2＋,Mg^2＋-ATPase及钙泵的活性,从而提高心肌收缩和舒张功能。     

硫氧还蛋白通过阻断过氧亚硝酸阴离子导致的蛋白硝基化减少缺血后心肌细胞凋亡

目的本研究旨在阐明硫氧还蛋白(Trx)心肌保护作用的机制.方法采用成年雄性小鼠心肌30 min缺血/3 h再灌注模型,再灌注前10 min随机给予磷酸缓冲液(PBS,对照)或重组人Trx (hTrx,2 mg/kg) 腹腔注射.在再灌注终末,摘取实验动物的心脏,分别检测心肌细胞凋亡和心肌组织中硝基酪氨酸的含量.结果再灌注前给予Trx可以显著减少缺血/再灌注导致的心肌细胞凋亡(P＜0.01);与对照组相比,Trx组心肌组织中硝基酪氨酸的含量显著减少 (4.8±0.53 比 9.5±0.86 pmol/mg蛋白质,P＜0.01), 提示Trx可能通过阻断蛋白硝基化和随后的细胞凋亡而发挥心脏保护作用.为了寻找Trx可以阻断蛋白硝基化的直接证据,在培养的成年心肌细胞给予SIN-1 (过氧亚硝酸阴离子供体) 50 μmol处理、或SIN-1 和hTrx(500 nmol)共同处理后,观察Trx 在过氧亚硝酸阴离子诱导的细胞凋亡中的作用.结果表明SIN-1 处理导致心肌细胞凋亡显著增加 (P＜0.01),Trx可以显著减少SIN-1导致的心肌细胞凋亡(P＜0.01) .结论硫氧还蛋白,一种新的抗凋亡和心肌保护分子,通过阻断过氧亚硝酸阴离子导致的蛋白硝基化和随后的细胞凋亡而发挥心脏保护作用.     

不同生理等效高度的富氧环境对大鼠急进高原肺水肿的防护作用

目的研究不同生理等效高度的富氧环境对大鼠急进高原肺水肿的防护作用。方法50只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为地面对照组、缺氧组、富氧1组、富氧2组及富氧3组,每组10只。除地面对照组外,分别将各实验组大鼠置于实验舱内,均以10m／s的速度上升至气压高度6000m,上升同时缺氧组输入空气,富氧1组和富氧2组分别输入氧浓度35％和30％的富氧气体,富氧3组则每4h交替输入空气与35％富氧气体,流量均为7L／min。24h后实验舱下降至地面,处死大鼠,测肺部含水率及病理学效应,测肺组织匀浆中的内皮素-1浓度和-氧化氮合酶活力。结果地面对照组大鼠肺含水率最低（0．80％±0．01％）,与其它各组比差异有统计学意义（P〈0．01）;缺氧组最高（0．83％±0．01％）,与地面对照组和富氧3组比差异有统计学意义（P〈0．01）;3个供氧组居中,其中富氧3组以o．81％土0．01％显著低于富氧1组和富氧2组（P〈0．05）。病理结果表明各实验组出现了不同程度肺水肿表现,由重至轻依次为缺氧组、富氧2组、富氧1组和富氧3组。内皮素-1浓度各组间差异无统计学意义。地面对照组一氧化氮合酶活力最高,为（1．49土0．24）U／mg,与其它各组比差异有统计学意义（P〈0．01）;缺氧组最低,为（0．78±0．28）U／mg,富氧1组和富氧3组一氧化氮合酶活力较强,分别为（1．06±0．17）U／mg、（1．09土0．20）U／mg,与缺氧组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论在6000m停留24h后大鼠出现了高原肺水肿。氧浓度为35％富氧环境（生理等效高度约2500m）能够有效预防肺水肿,而氧浓度为30％的富氧环境（生理等效高度约3500m）防护效果不显著。4h间断供给含氧35％气体同样可以有效预防大鼠在6000m出现的高原肺水肿。     

运动预适应对急性低压低氧大鼠脑海马线粒体生物合成的影响

 目的 探讨运动预适应对急性低压低氧大鼠脑海马线粒体生物合成影响。方法 大鼠分为对照组(normal control group, NC)、急性低氧组(acute hypoxia group, AH)和运动预适应(exercise preconditioning,EP)联合急性低氧组(acute hypoxia group,AH),每组8只。EP联合AH组大鼠在常氧环境进行6周跑台训练,坡度5°, 速度17 m/min,60 min/d,5次/周。AH组和EP+AH大鼠置于低压低氧舱8 h,压力0.06 MPa,氧含量10%±2%。荧光定量PCR法检测mtDNA拷贝数,荧光探针法检测线粒体膜电位,ROS生成速率和ATP合成活力,Western blotting 检测PGC-1α、NRF-1和Tfam蛋白表达。结果 AH组大鼠脑海马mtDNA拷贝数为1.69±0.20,较NC组(1.00±0.13)明显增高;线粒体ROS产生速率为(9.49±1.25) pmol/(min·mg protein),较NC组值(4.83±0.66) pmol/(min·mg protein)明显增高;PGC-1α蛋白表达量为(189.24±21.77),较NC组(100.00±12.90)明显增高;线粒体膜电位为(4.51±0.65),较NC组(8.27±1.02)明显降低;差异均具有统计学意义(P＜0.05)。EP+AH组大鼠脑海马mtDNA拷贝数为(1.19±0.15),较AH组(1.69±0.20)明显降低;线粒体ROS产生速率为(6.01±0.93) pmol/(min·mg protein),较AH组值(9.49±1.25) pmol/(min·mg protein)明显降低;PGC-1α蛋白表达量为141.95±18.12,较AH组(189.24±21.77)明显降低;线粒体膜电位为(7.02±1.10),较AH组(4.51±0.65)明显升高;上述差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论 运动预适应可抑制急性低压低氧对线粒体生物合成的上调效应,同时改善线粒体能量代谢能力,抑制氧化应激。