大鼠中等程度创伤性脑损伤后神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达与活性的时效关系

目的：观察大鼠中等程度创伤性颅脑损伤后神经细胞凋亡及凋亡执行因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和活性的时间动态演变，并探讨三者之间的时效关系。方法：实验于2004-04／10在解放军第三军医大学创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室完成。选择健康SD大鼠48只，随机分为假致伤组8只和损伤组40只，损伤组根据处死时间分为2，12，24，48，72h共5个时相点，每个时相点8只大鼠。损伤组制备中等程度创伤性脑损伤模型，假致伤组仅作颅骨钻孔而不致伤，术后24h处死。观察中度脑损伤后2h-3d伤侧大脑皮质、海马神经细胞凋亡情况采用原位末端标记技术；观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和活性的变化采用免疫组织化学及免疫荧光技术。结果：48只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠中度脑损伤后不同时间点大脑皮质、海马神经细胞凋亡情况：创伤性脑损伤后2h在伤侧皮质和海马区即可见有少量凋亡细胞，并呈逐渐增多趋势，主要分布在伤侧皮质、皮质下白质、海马等区域，12-24h凋亡细胞增多，48-72h达到凋亡高峰，明显高于假致伤组。②各组大鼠中度脑损伤后不同时间点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达：脑损伤后2h在损伤灶及其周围皮质即有少量的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞，脑损伤后24-48h阳性细胞数量明显增加。脑挫伤后72h半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数有所下降。假致伤组脑组织偶见半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞。③各组大鼠中度脑损伤后不同时间点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化：脑损伤后损伤灶及附近皮质神经细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性2h开始升高，伤后48h达高峰，损伤侧海马区域神经细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性2h开始升高，24h达高峰，而后开始下降。结论：大鼠创伤性脑损伤后损伤区周围皮质和损伤侧海马神经细胞凋亡数量的变化与伤后时程有关。伤后细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性增加可能是导致细胞凋亡的因素。     

大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的动态变化及其与caspase-3基因表达的关系

目的 探讨创伤性脑损伤(TBI)后神经细胞凋亡的变化规律及其与caspase-3基因表达的关系.方法 成年健康封闭群SD大鼠120只,随机分为对照组8只、损伤组和抑制物组各56只.Feeney法致伤,抑制物组伤后脑内注射5μg caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk.分别在伤后1,6,24,48 h和3,7,14 d处死取材(每个分析时相点8只大鼠),采集伤灶中心皮质、皮层下白质、海马、齿状回,以及对侧相应部位脑组织,应用原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)和流式细胞术检测神经细胞凋亡的变化;免疫组化法、蛋白印迹(western blot)和半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测caspase-3蛋白和mRNA的表达;并借助荧光分析试剂盒检测caspase-3活性的变化.所得数据采用SIDSS 10.1统计软件包进行Sprarman等级相关分析和方差分析(sNK-α检验).结果 伤后伤侧各脑区神经细胞凋亡指数(AI)和细胞凋亡百分率(AP)迅速增高,24～48 h达峰值,随后逐渐下降,但伤后14 d仍高于正常(P＜0.01).伤后caspase-3蛋白和mRNA的表达明显增加,caspase-3活性迅速上升,峰值在24～48 h.其中伤后24 h伤侧海马区caspase-3蛋白谱密度与对照组相比增加1484%,caspase-3 mRNA的表达量增加1043%,caspase-3活性增加148%;伤后48h伤灶皮层下白质caspase-3蛋白谱密度增加1690%,caspase-3 mRNA的表达量增加1181%,caspase-3活性增加183%.Western blot显示,伤后caspase-3原酶及p17活性亚单位的表达均增强.抑制物组caspase-3蛋白和mRNA的表达均明显下降,caspase-3活性明显降低;同时,AI值和AP值也明显降低.统计学相关分析发现.伤后神经细胞凋亡与caspase-3 mRNA和蛋白的表达间呈正相关(r=0.821和r:0.638,P＜0.01),伤后caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达间呈正相关(r=0.945,P＜0.01).结论 急性TBI后神经细胞凋亡的发生与caspase-3的激活有关;神经细胞凋亡与其调节基因caspase-3的表达间具有一致性,TBI对caspase-3的调节发生在转录水平前的某一环节.caspase-3抑制剂能有效地阻断TBI后的神经细胞凋亡.     

大鼠创伤性脑损伤后不同时间神经细胞凋亡的变化

背景创伤性脑损伤神经细胞存在着细胞凋亡.有研究证实Bcl-2基因参与人脑挫裂伤后神经细胞的凋亡.聚二磷酸腺苷核糖多聚酶(poly adeno-sine diphosphate ribose polymerase,PARP)是细胞凋亡的一个重要标志.目的通过对大鼠创伤性脑损伤后PARP降解与DNA片段化的时序关系的研究,了解大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的变化进程.设计随机对照的实验研究.单位白求恩军医学院和白求恩国际和平医院.材料选择Wister大鼠30只,随机分为假手术组5只和脑损伤组25只.方法采用Feeney等的落体撞击法造成左顶叶局限性脑挫裂伤,落体致伤冲击力为500 g·cm(50 g,10 cm),分别于损伤后2,6,12,24,48 h处死取样.分别采用末端标记法测定DNA片段化,免疫组化法检测PARP降解.光镜下观察阳性细胞所在部位及形态,苏木精-伊红染色作对照观察.主要观察指标损伤后脑皮质PARP降解与DNA片段化阳性细胞数.结果脑损伤后2 h开始出现PARP降解,主要集中于损伤灶边缘部位.6 h开始出现DNA片段化,最高密度均集中于损伤灶边缘部位,随时间推移,损伤灶深部区可见散在单个阳性细胞.其中PARP降解高峰出现在12～24 h(48～46个阳性细胞/切片,t=-34.434,-41.196,P＜0.001).DNA片段化出现高峰在24～48h(60～56个阳性细胞/切片,t=-39.430,-61.933,P＜0.001).结论创伤性脑损伤后存在细胞凋亡,且PARP降解高峰出现早于DNA片段化.建议在脑损伤早期使用抑制PARP降解的药物,可延缓细胞的凋亡.     

海马局部脑组织血流量和神经元特征性变化与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8介导癫痫大鼠的关系

目的：检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8在癫痫大鼠海马神经元的表达及其与癫痫发作大鼠局部脑血流量和神经元变化的关系。方法：实验于2002—05／2003-10在复旦大学神经病研究所完成。选择清洁级SD雄性大鼠60只，随机分为①正常对照组6只：杏仁核注射磷酸盐缓冲液。②空白对照组6只：磷酸盐缓冲液(脑室) 磷酸盐缓冲液(杏仁核内)。③单纯癫痫组36只：杏仁核内注射红藻氨酸诱发癫痫发作，发作1h后经股静脉注射安定(30mg／kg)终止发作，根据处死大鼠的时间点分0，2，4，8，24，72h6组，每组6只大鼠。⑧试验给药组6只：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8抑制剂z-IETD-fmk(脑室，0．3μg于红藻氨酸注射前20min，5min及红藻氨酸注射后1h分3次给药) 红藻氨酸(杏仁核内)。⑤实验对照组6只：磷酸盐缓冲液(脑室) 红藻氨酸(杏仁核内)；均于安定注射终止发作后24h处死大鼠。结果评估：①激光多普勒血流测定仪记录局部脑血流。②用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记染色和cresvl violet染色观察海马神经元凋亡和存活的变化及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8抑制剂z—IETD—fmk对海马CA3区的脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞和存活细胞的影响。③用免疫荧光和蛋白印迹检测海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8的表达。结果：造模过程中有2只大鼠死亡，补充2只，进入结果分析大鼠保持为60只。①红藻氨酸注射后10～20min内脑灌注率显示轻微升高趋势，随后于20～60min内逐渐下降，60min后脑灌注率基本保持稳定，发作前后脑灌注率无明显变化。②发作终止即刻半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8出现裂解片断，8h时出现脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞，24h时达高峰，存活神经元减少。脑室内注射半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8抑制剂z-IETD-fmk可减少脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞，增加存活神经元。③用免疫荧光和蛋白印迹检测结果：发作后在红藻氨酸注射同侧海马的CA3区神经元半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8免疫反应性增强。结论：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8的激活参与了癫痫发作诱导海马CA3区神经元的损伤，且与局部脑血流量变化无关.     

海马局部脑组织血流量和神经元特征性变化与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8介导癫痫大鼠的关系

目的:检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8在癫痫大鼠海马神经元的表达及其与癫痫发作大鼠局部脑血流量和神经元变化的关系。方法:实验于2002-05/2003-10在复旦大学神经病研究所完成。选择清洁级SD雄性大鼠60只,随机分为①正常对照组6只:杏仁核注射磷酸盐缓冲液。②空白对照组6只:磷酸盐缓冲液(脑室)+磷酸盐缓冲液(杏仁核内)。③单纯癫痫组36只:杏仁核内注射红藻氨酸诱发癫痫发作,发作1h后经股静脉注射安定(30mg/kg)终止发作,根据处死大鼠的时间点分0,2,4,8,24,72h6组,每组6只大鼠。④试验给药组6只:半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8抑制剂z-IETD-fmk(脑室,0.3μg于红藻氨酸注射前20min,5min及红藻氨酸注射后1h分3次给药)+红藻氨酸(杏仁核内)。⑤实验对照组6只:磷酸盐缓冲液(脑室)+红藻氨酸(杏仁核内);均于安定注射终止发作后24h处死大鼠。结果评估:①激光多普勒血流测定仪记录局部脑血流。②用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记染色和cresylviolet染色观察海马神经元凋亡和存活的变化及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8抑制剂z-IETD-fmk对海马CA3区的脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞和存活细胞的影响。③用免疫荧光和蛋白印迹检测海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8的表达。结果:造模过程中有2只大鼠死亡,     

尿酸影响大鼠脊髓损伤后半胱氨酸蛋白酶3的表达及神经细胞凋亡

目的:观察尿酸对大鼠脊髓损伤后损伤段半胱氨酸蛋白酶3的表达及神经细胞凋亡的影响。方法:实验于2005-07/12在同济医院矫形外科实验室完成。选用雌性SD大鼠55只,按随机数字表法分为3组,空白对照组5只,脊髓损伤组和尿酸处理组各25只。脊髓损伤组和尿酸处理组大鼠用改良的Allen’s打击法造脊髓损伤模型。空白对照组大鼠单纯切除椎板,不打击脊髓。脊髓损伤组和尿酸处理组大鼠分别于术后8h,24h,72h,7d,14d取材,每时点处死5只大鼠;空白对照组大鼠于术后8h处死取材。对损伤部位脊髓进行病理形态学观察;采用原位末端标记法标记凋亡细胞,计算凋亡细胞指数=凋亡细胞核数/总细胞核数;用免疫组化染色检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞。结果:纳入55只大鼠,全部进入结果分析,无脱失。①各组大鼠脊髓组织学检查结果比较:空白对照组大鼠脊髓未见出血、组织变性坏死等表现。与脊髓损伤组相比,尿酸处理组大鼠损伤脊髓出血坏死减少,炎性细胞浸润减轻。②各组大鼠脊髓组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数及神经细胞凋亡指数比较:相同时点尿酸处理组大鼠的神经细胞凋亡指数和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数均显著低于脊髓损伤组(t=3.057～6.965,P<0.05)。结论:尿酸可以抑制脊髓神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达,对损伤脊髓组织具有保护作用。     

大鼠创伤性脑损伤后不同时间神经细胞凋亡的变化

背景：创伤性脑损伤神经细胞存在着细胞凋亡。有研究证实Bcl-2基因参与人脑挫裂伤后神经细胞的凋亡。聚二磷酸腺苷核糖多聚酶(poly adenosine diphosphate ribose polymerase，PARP)是细胞凋亡的一个重要标志。目的：通过对大鼠创伤性脑损伤后PARP降解与DNA片段化的时序关系的研究，了解大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的变化进程。设计：随机对照的实验研究。单位：白求恩军医学院和白求恩国际和平医院。材料：选择Wister大鼠30只。随机分为假手术组5只和脑损伤组25只。方法：采用Feeney等的落体撞击法造成左顶叶局限性脑挫裂伤，落体致伤冲击力为500g&;#183;cm(50g，10cm)，分别于损伤后2，6,12，24,48h处死珀样。分别采用末端标记法测定DNA片段化，免疫组化法检测PARP降解。光镜下观察阳性细胞所在部位及形态，苏木精．伊红染色作对照观察。主要观察指标：损伤后脑皮质PARP降解与DNA片段化阳性细胞数。结果：脑损伤后2h开始出现PARP降解，主要集中于损伤灶边缘部位。6h开始出现DNA片段化，最高密度均集中于损伤灶边缘部位，随时间推移，损伤灶深部区可见散在单个阳性细胞。其中PARP降解高峰出现在12～24h(48～46个阳性细胞／切片，t=-34．434,-41．196,P&;lt;0．001)，DNA片段化出现高峰在24～48h(60～56个阳性细胞／切片，t=-39．430，-61．933,P&;lt;0．001)。结论：创伤性脑损伤后存在细胞凋亡，且PARP降解高峰出现早于DNA片段化。建议在脑损伤早期使用抑制PARP降解的药物，可延缓细胞的凋亡。     

急性脑损伤后神经细胞凋亡机制的研究进展

<正>1972年,Kerr等根据细胞的超微结构特征把细胞死亡分为坏死和凋亡2种方式。1973年,Schweichel等在此基础上又将溶酶体的作用纳入其中,把细胞死亡分为3种类型。然而早期对神经细胞凋亡的研究[1-2]大多集中在神经元正常发育过程中,或者是神经细胞的慢性变性的病变     

大鼠液压脑损伤后fos蛋白表达与细胞凋亡

目的 探讨颅脑损伤后神经细胞凋亡分子的病理机制，为临床防治提供实验依据。方法 采用免疫组织化学技术和原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠伤灶边缘皮层的fos蛋白及凋亡细胞。结果外伤组在伤后24h检测到高水平表达的fos蛋白及明显增多的凋亡神经细胞。结论 外伤后fos表达参与诱导了神经细胞凋亡过程。     

天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶—3mRNA在人脑挫裂伤后神经细胞中的表达

目的：研究天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（Caspase)－3mRNA在脑挫裂伤患神经细胞中的表达与预后的关系。方法：用原位杂交技术检测脑组织15例Caspase－3mRNA的表达情况。结果：均有不同程度的Caspase－3mRNA表达，死亡组表达值较存活组明显升高，两组之间表达差异有显性意义。结论：脑挫裂伤后Caspase－3mRNA表达程度较高，Caspase－3mRNA过度表达在脑挫裂伤后神经细胞凋亡的调控中起一定的作用。     

亚低温辅助运动通过抑制脑神经凋亡改善缺氧缺血性脑损伤大鼠幼崽脑神经功能的机制探讨

目的 探讨亚低温辅助运动通过抑制脑神经凋亡改善缺氧缺血性脑损伤大鼠幼崽脑神经功能的机制.方法 选择无特定病原体(SPF)级新生7日龄Wistar大鼠,采用手术结扎左颈总动脉法建立缺氧缺血性脑损伤幼鼠模型.按照随机数字表法分为假手术组(假手术幼鼠,正常饲养不进行任何干预)、HIE模型组(HIE模型幼鼠,正常饲养不进行任何...     

亚低温对大鼠脑创伤后海马组织ATP酶及神经细胞凋亡的影响

目的观察亚低温对脑创伤后海马组织ATP酶活性及神经元凋亡的影响,为其临床作用机制提供理论依据.方法 42只Spregue-Dawley大鼠随机分为假手术对照组、脑创伤组和亚低温治疗组,复制动物脑创伤模型,亚低温治疗组伤后快速予31℃±1℃亚低温,维持约24 h.各组均在受伤后2 d行神经功能行为评分及伤侧取材检测海马ATP酶活性、原位缺味端标记(TUNEL)法检测CA1区神经元凋亡情况.结果亚低温明显提高脑创伤后的神经功能行为评分(P﹤0.05),增加脑创伤后下降的Ca2 -ATP酶活性(P﹤0.01),减少海马CA1区凋亡的神经元数量(P﹤0.01).结论亚低温对创伤脑组织的保护作用与其增加Ca2 -ATP酶活性,减轻钙超载,抑制神经元凋亡有关.     

大鼠脊髓损伤后p75早期表达对神经细胞凋亡的意义

目的:探讨p75与脊髓损伤后早期细胞凋亡的关系。方法:采用Allen's打击法制成大鼠脊髓损伤模型,分别在损伤后30min,1,3,6h,1,2,3d,1,2,4周应用免疫组织化学方法对p75免疫染色阳性细胞进行观察,并在电镜下观察凋亡细胞。结果:损伤后1h主要在灰质中的神经元细胞和胶质细胞有p75的阳性表达。损伤后6h在白质中也可见p75的表达,并出现凋亡现象。伤后1～3d,p75在灰质中表达减少,在白质中增加。在白质中表达持续至伤后2周。伤后4周,损伤的脊髓组织中没有免疫染色阳性细胞的存在。结论:p75在脊髓损伤后介导了凋亡过程。阻断p75系统可能是脊髓损伤治疗的一种新方法。     

电针对新生鼠缺氧缺血脑组织神经细胞凋亡及神经生长因子蛋白表达的影响

目的：观察电针治疗对新生鼠缺氧缺血脑神经细胞凋亡及神经生长因子蛋白表达，肢体功能的影响，分析该种影响是否与针刺时间有关。 方法：实验于2005—08／10在广州中医药大学实验动物中心清洁级实验室及针灸推拿学院实验室完成。①选用7d龄新生SD幼鼠109只。将大鼠结扎左侧颈总动脉后恢复2h，置于透明密闭容器中，并人37℃恒温水中以1L／min的速度通人低氧气体（体积分数0．08氧气和0．92氮气），2．5h后将动物取出，将存活者继续保温1h时后作行为测定，翻身不能、平衡异常或左旋者视为成功的模型（72只）。②将其余24只大鼠设为假手术组：只分离左颈总动脉后不结扎，亦不作低氧处理。将造模成功的大鼠72只按随机抽签法分为3组：缺氧缺血＋针刺Ⅰ组、缺氧缺血＋针刺Ⅱ组、模型组，每组24只。选用大鼠百会、患侧颞Ⅰ针、内关、曲池、足三里、涌泉。缺氧缺血＋针刺Ⅰ组于造模后24h开始针刺，前7d仅针四肢部穴位，第8天开始加针头部穴位。缺氧缺血＋针刺Ⅱ组造模后第8天开始针刺，头、体针同步。两组均以针灸针先在内关、涌泉速刺微出血，不留针，然后针头部及曲池、足三里。百会、颞Ⅰ针及曲池、足三里接G6805-Ⅱ电针仪，连续波，频率5-10 Hz，持续10 min,1次／d，缺氧缺血＋针刺Ⅰ组连续针刺20 d，缺氧缺血＋针刺Ⅱ组连续针刺13 d。假手术组针刺方法与缺氧缺血＋针刺Ⅰ组相同；模型组只造模，不予以任何治疗。⑧于术后第7，14，21天，将胶布粘于大鼠两前爪腹侧面后，记录其撕去胶布所用时间。④术后第21天各组随机选取10只大鼠作以下检测：分别采用原位末端标记法及免疫组化方法测定大鼠额页皮质与海马区神经元凋亡及海马区神经生长因子表达，用图像分析仪在光镜下（&;#215;400）计数神经细胞凋亡数目及神经生长因子免疫阳性细胞表达数目。⑤率的比较采用X^2检验，组间多均数比较采用方差分析（F-q检验）。 结果：纳入大鼠109只，因造模失败脱失13只，假手术组动物无死亡。造模后7 d，缺氧缺血＋针刺≈组、缺氧缺血＋针刺Ⅱ组、模型组分别死亡2，5，3只；造模后7-14 d，上述3组分别死亡2，2，4只；造模后14—21 d，上述3组分别死亡0，0,2只。①大鼠海马和大脑额叶皮质神经元凋亡情况：2个电针治疗组大鼠海马和大脑额叶皮质内原位末端标记法染色阳性细胞显著减少，与模型组相比，差异明显（P〈0．05）。且缺氧缺血十电针Ⅰ组神经细胞凋亡计数明显低于缺氧缺血十电针Ⅱ组（P〈0．05）。②大鼠海马神经元神经生长因子蛋白表达：2个电针治疗组大鼠神经生长因子蛋白表达明显增强，在数量和强度方面均明显多于或高于假手术组和模型组（P〈0．01），缺氧缺血＋针刺Ⅰ组明显多于或高于缺氧缺血＋针刺Ⅱ组（P〈0．01）。⑧术后第7天，缺氧缺血＋针刺Ⅰ组鼠撕去胶布所用时间明显短于模型组（P〈0．01）；术后第14天，模型组明显长于其他3组（P〈0．05-0．01）；术后第21天，2个针刺组和模型组鼠前肢功能均显著改善，缺氧缺血＋针刺Ⅰ组基本接近正常水平（与假手术组比较，差异不明显，P〉0．05），但模型组仍明显长于缺氧缺血＋针刺Ⅰ组和假手术组（P〈0．01）。 结论：电针可抑制脑缺氧缺血后脑内神经细胞的凋亡，增强缺氧缺血损伤大鼠脑组织的神经生长因子的表达，改善肢体功能，对缺氧缺血脑损伤具有一定的保护作用，且越早干预效果越好。     

电针对新生鼠缺氧缺血脑组织神经细胞凋亡及神经生长因子蛋白表达的影响

目的:观察电针治疗对新生鼠缺氧缺血脑神经细胞凋亡及神经生长因子蛋白表达,肢体功能的影响,分析该种影响是否与针刺时间有关。方法:实验于2005-08/10在广州中医药大学实验动物中心清洁级实验室及针灸推拿学院实验室完成。①选用7d龄新生SD幼鼠109只。将大鼠结扎左侧颈总动脉后恢复2h,置于透明密闭容器中,并入37℃恒温水中以1L/min的速度通入低氧气体(体积分数0.08氧气和0.92氮气),2.5h后将动物取出,将存活者继续保温1h时后作行为测定,翻身不能、平衡异常或左旋者视为成功的模型(72只)。②将其余24只大鼠设为假手术组:只分离左颈总动脉后不结扎,亦不作低氧处理。将造模成功的大鼠72只按随机抽签法分为3组:缺氧缺血 针刺Ⅰ组、缺氧缺血 针刺Ⅱ组、模型组,每组24只。选用大鼠百会、患侧颞Ⅰ针、内关、曲池、足三里、涌泉。缺氧缺血 针刺Ⅰ组于造模后24h开始针刺,前7d仅针四肢部(位,第8天开始加针头部(位。缺氧缺血 针刺Ⅱ组造模后第8天开始针刺,头、体针同步。两组均以针灸针先在内关、涌泉速刺微出血,不留针,然后针头部及曲池、足三里。百会、颞Ⅰ针及曲池、足三里接G6805-Ⅱ电针仪,连续波,频率5～10Hz,持续10min。1次/d,缺氧缺血 针刺Ⅰ组连续针刺20d,缺氧缺血 针刺Ⅱ组连续针刺13d。假手术组针刺方法与缺氧缺血 针刺Ⅰ组相同;模型组只造模,不予以任何治疗。③于术后第7,14,21天,将胶布粘于大鼠两前爪腹侧面后,记录其撕去胶布所用时间。④术后第21天各组随机选取10只大鼠作以下检测:分别采用原位末端标记法及免疫组化方法测定大鼠额页皮质与海马区神经元凋亡及海马区神经生长因子表达,用图像分析仪在光镜下(×400)计数神经细胞凋亡数目及神经生长因子免疫阳性细胞表达数目。⑤率的比较采用χ2检验,组间多均数比较采用方差分析(F-q检验)。结果:纳入大鼠109只,因造模失败脱失13只,假手术组动物无死亡。造模后7d,缺氧缺血 针刺Ⅰ组、缺氧缺血 针刺Ⅱ组、模型组分别死亡2,5,3只;造模后7～14d,上述3组分别死亡2,2,4只;造模后14～21d,上述3组分别死亡0,0,2只。①大鼠海马和大脑额叶皮质神经元凋亡情况:2个电针治疗组大鼠海马和大脑额叶皮质内原位末端标记法染色阳性细胞显著减少,与模型组相比,差异明显(P<0.05)。且缺氧缺血十电针Ⅰ组神经细胞凋亡计数明显低于缺氧缺血十电针Ⅱ组(P<0.05)。②大鼠海马神经元神经生长因子蛋白表达:2个电针治疗组大鼠神经生长因子蛋白表达明显增强,在数量和强度方面均明显多于或高于假手术组和模型组(P<0.01),缺氧缺血 针刺Ⅰ组明显多于或高于缺氧缺血 针刺Ⅱ组(P<0.01)。③术后第7天,缺氧缺血 针刺Ⅰ组鼠撕去胶布所用时间明显短于模型组(P<0.01);术后第14天,模型组明显长于其他3组(P<0.05～0.01);术后第21天,2个针刺组和模型组鼠前肢功能均显著改善,缺氧缺血 针刺Ⅰ组基本接近正常水平(与假手术组比较,差异不明显,P>0.05),但模型组仍明显长于缺氧缺血 针刺Ⅰ组和假手术组(P<0.01)。结论:电针可抑制脑缺氧缺血后脑内神经细胞的凋亡,增强缺氧缺血损伤大鼠脑组织的神经生长因子的表达,改善肢体功能,对缺氧缺血脑损伤具有一定的保护作用,且越早干预效果越好。     

大鼠脊髓损伤后细胞凋亡及Caspase-3、Fas的表达和意义

目的：研究脊髓损伤后神经细胞凋亡表达及Caspase-3、Fas的表达变化规律.方法：使用改良Allen法制作大鼠急性SCI模型,实验分对照组（脊髓未受打击）和损伤5个组,致大鼠脊髓（T9、T10）中度撞击损伤,损伤后6h、1d、3d、7d、15d取材,共分6组,采用HE染色、荧光Hoechst33258染色、原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导DUTP标记法（TUNEL）对损伤脊髓组织进行标记;免疫组化方法测Caspase-3及凋亡因子Fas,半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）测定各时间段Caspase-3的表达变化.结果：大鼠急性损伤后TUNEL标记阳性凋亡细胞6h开始出现,多位于脊髓白质;3d达到高峰,在灰质和白质均有表达,7d后开始降低,持续15d;免疫组化检测Fas表达的阳性细胞6h开始增高,2d达到高峰,15d下降;Caspase-3 mRNA 6h开始增高,3d达到高峰,7d后恢复正常.免疫组化检测Caspase-3表达的阳性细胞与TUNEL标记阳性凋亡细胞出现的时限相似.结论：脊髓损伤后存在神经细胞凋亡现象发生,Caspase-3参与了脊髓损伤细胞凋亡的调节.Caspase-3的表达和Fas的变化有一定的相关性.