日本血吸虫雌虫抗原模拟表位的筛选及免疫保护性

目的筛选日本血吸虫雌虫抗原的模拟表位，并探讨其抗日本血吸虫的免疫保护效果。方法用日本血吸虫雌虫免疫兔血清IgG作配体对噬菌体随机12肽库进行3轮亲和筛选，随机挑取18个噬菌体克隆用Dot-ELISA检测其特异性，并对其中的4个阳性克隆进行测序。分别在0、2、4周用混合噬菌体克隆免疫小鼠3次，第6周每鼠经腹部感染40条日本血吸虫尾蚴，42d后剖杀冲虫，计数虫数和每克肝卵数。结果经3轮筛选，特异性噬菌体富集了200多倍，随机挑取的18个克隆经Dot-ELISA鉴定有17个能与雌虫抗原免疫兔血清呈阳性反应。DNA自动测序的4个序列与GenBank的已知序列均无同源性。与对照组相比，混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率为26．57％，减卵率为65．34％。结论采用噬菌体随机肽库技术可获得模拟日本血吸虫雌虫特异性抗原表位的短肽分子，这些短肽分子能诱导一定程度的保护性免疫。     

利用噬菌体展示技术筛选日本血吸虫模拟抗原表位

目的　从噬菌体肽库筛选日本血吸虫抗原模拟抗原表位。方法　制备亲和纯化的日本血吸虫病人血清抗体 Ig G,用此 Ig G包被酶标板对 12肽库进行反复淘选 ,对获得的目的噬菌体进行鉴定及免疫原性分析。结果　获得一批阳性噬菌体克隆 ,其中一部分与血吸虫病人血清反应产生较高的吸光值 ,Western blotting分析表明这些噬菌体能被血吸虫病人血清所识别 ,具有类似于血吸虫抗原的免疫原性。结论　获得一批具有模拟日本血吸虫抗原表位的噬菌体克隆 ,为今后进一步研究它们在血吸虫病诊断及疫苗研究中的作用奠定了基础。     

噬菌体表达短肽模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的研究

目的　从噬菌体随机肽库中筛选模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的噬菌体克隆 ,并探讨其免疫保护效果。方法　用紫外线致弱尾蚴免疫兔血清IgG筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体外壳蛋白Ⅲ表达的随机 7肽库 ,三轮免疫筛选后获得的噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染 45d后剖杀 ,观察减虫和减卵效果。结果　经三轮筛选 ,特异性结合的噬菌体富集增加了 10 0多倍 ,随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 2个克隆能与致弱尾蚴免疫兔血清IgG特异性反应。混合噬菌体克隆免疫小鼠试验的减虫率与减卵率分别为 33.5 7%和 5 6 .0 7% (P均 <0 .0 0 1)。结论　采用噬菌体随机肽库技术可获得模拟致弱尾蚴特异性抗原表位的短肽分子 ,这些短肽分子能诱导一定程度的保护性免疫     

日本血吸虫模拟虫卵抗原表位的筛选和鉴定

目的　通过噬菌体肽文库技术探索可用于诊断日本血吸虫病的模拟虫卵抗原。　方法　用日本血吸虫虫卵单克隆抗体 6 B12作“诱饵”,采用生物淘金法从噬菌体 15 -肽文库中经过 3轮筛选 ,有效地富集与 6 B12有亲和力的噬菌体肽克隆。随后采用 EL ISA、竞争 EL ISA、Western blotting等检测方法 ,从 4 0 0个单克隆化的噬菌体株中得到 13株与 6 B12有特异性、高亲和力反应的噬菌体克隆。　结果　对噬菌体所携带的外源 DNA片段序列测序结果表明 ,13株噬菌体所携带的外源多肽序列完全相同。该噬菌体多肽抗原包被酶标板经 EL ISA方法对血吸虫病患者及健康人血清Ig G抗体检测结果表明 ,两者有显著性差异。　结论　噬菌体多肽模拟抗原有可能替代天然抗原用于血吸虫病诊断     

日本血吸虫模拟短肽诱导小鼠的免疫保护性研究

目的　研究日本血吸虫模拟短肽对小鼠的免疫保护效果,预测其在抗血吸虫感染中的作用。　方法　用粗提纯大鼠血清IgG为配基对噬菌体肽库进行3轮免疫学筛选。随机挑取噬菌体克隆,检测其特异性并进行序列分析;用阳性克隆免疫小鼠,以40条日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后42d剖杀取虫,计算减虫率和减卵率;用ELISA测定免疫鼠抗体反应。　结果　经过3轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集;自动测序仪测序获得2个模拟肽分子;将其用于免疫小鼠后,各免疫组与对照组相比,2个模拟肽混合免疫组的减虫率为34.9%P<0.05,肝内减卵率为67.6%(P<0.001)。 2个模拟肽分子分别免疫小鼠 ,各组的减虫率为31.0%(P<0.05)和14.5%(P>0.05)及肝内减卵率为61.2%(P<0.001)和35.7%(P<0.05)。ELISA检测其免疫组鼠血清特异性IgG抗体滴度均大于1∶6 400以上。　结论　利用噬菌体表面呈现技术获得的2个模拟肽分子均可诱导部分抗日本血吸虫感染的免疫保护力     

日本血吸虫抗原模拟表位免疫学活性的初步研究

目的研究从噬菌体12肽库中筛选得到的日本血吸虫抗原模拟表位的免疫学活性。方法以日本血吸虫急感患者血清免疫球蛋白(Ig)作为靶分子，筛选噬菌体12肽库。经过3轮吸附-洗脱-扩增的淘筛过程．在筛选得到的阳性噬菌斑中随机挑取42个扩增，用ELISA检测不同寄生虫病患者和正常人血清，以分析其敏感性和特异性。并进一步免疫昆明株小鼠，经日本血吸虫尾蚴攻击感染后剖检，计算减虫率和减卵率，以分析其在小鼠体内诱导的免疫保护性。结果在挑取的42个阳性克隆中，有9个与日本血吸虫急感患者血清有不同程度的结合(6．25％～100％)。除其中1个灵敏性较低的克隆与其它寄生虫病患者血清有一定的交叉反应外，其余均未发现。而经其免疫后的小鼠也分别获得了29．3％减虫率和35．9％减卵率。结论从噬菌体12肽库中筛选到的日本血吸虫抗原模拟表位具有较高的特异性和敏感性，并能够在小鼠体内诱导一定的免疫保护力。     

日本血吸虫22.6kDa有效抗原表位对小鼠免疫保护性的研究

目的研究日本血吸虫(中国大陆株)22.6 kDa有效抗原表位对小鼠的免疫保护性,预测其在抗血吸虫感染中的作用.方法用纯化的抗Sj 22.6 kDa的多克隆抗体IgG对噬菌体12肽库进行5轮免疫学筛选,挑取克隆,经Western-blot免疫识别、动物初筛及序列分析后,将获得的阳性克隆免疫BABL/c小鼠.结果共获得4个有效抗原表位,各免疫组和对照组相比,4种表位混合免疫组小鼠,获得了39.5%(P＜0.05)的减虫率及57.1%(P＜0.01)肝总减卵率;4种表位分别免疫4组小鼠,各组分别获得了27.5%(P＜0.05)、5.4%(P＜0.05)、22.8%(P＜0.05)、11.6%(P＜0.05)的减虫率及41.4%(P＜0.01)、29.7%(P＜0.05)、32.2%(P＜0.05)、30.9%(P＜0.05)肝总减卵率.结论所获得4种有效抗原表位均可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力,可望为血吸虫疫苗研究增加新的内容.     

噬菌体表达短肽模拟旋毛虫抗原表位及其抗血吸虫保护性免疫研究

目的　从噬菌体随机肽库中筛选出模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,探讨其抗血吸虫的交叉免疫保护效果。　方法　以纯化的旋毛虫感染鼠血清IgG为配基 ,亲合筛选法富集特异性噬菌体 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ;混合噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染后第 4 5天剖杀小鼠 ,观察减虫和减卵效果。　结果　经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到了有效的富集 ,第三轮洗脱噬菌体的产量约为第一轮的 15 0倍。随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 1个克隆能与旋毛虫感染鼠血清IgG特异性反应。与对照组相比 ,混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率与减卵率分别为 4 2 8%与 6 6 3% (P <0 0 0 1)。　结论　利用噬菌体随机肽库技术可获得模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,这些短肽分子能诱导明显的抗血吸虫的保护性免疫。     

日本血吸虫抗原模拟表位免疫学活性的初步研究

目的　研究从噬菌体 12肽库中筛选得到的日本血吸虫抗原模拟表位的免疫学活性。　方法　以日本血吸虫急感患者血清免疫球蛋白 (Ig)作为靶分子 ,筛选噬菌体 12肽库。经过 3轮吸附 -洗脱 -扩增的淘筛过程 ,在筛选得到的阳性噬菌斑中随机挑取 42个扩增 ,用ELISA检测不同寄生虫病患者和正常人血清 ,以分析其敏感性和特异性。并进一步免疫昆明株小鼠 ,经日本血吸虫尾蚴攻击感染后剖检 ,计算减虫率和减卵率 ,以分析其在小鼠体内诱导的免疫保护性。　结果　在挑取的 42个阳性克隆中 ,有 9个与日本血吸虫急感患者血清有不同程度的结合 (6.2 5 %～ 10 0 % )。除其中 1个灵敏性较低的克隆与其它寄生虫病患者血清有一定的交叉反应外 ,其余均未发现。而经其免疫后的小鼠也分别获得了 2 9.3 %减虫率和 3 5 .9%减卵率。　结论　从噬菌体 12肽库中筛选到的日本血吸虫抗原模拟表位具有较高的特异性和敏感性 ,并能够在小鼠体内诱导一定的免疫保护力。     

两种方法筛选噬菌体肽库所获日本血吸虫抗原模拟表位的抗原性比较

目的比较两种不同方法筛选噬菌体肽库所获得的日本血吸虫抗原模拟表位的抗原性.方法以日本血吸虫病患者血清免疫球蛋白(Sj-Ig)作为靶分子, 分别以噬菌体12肽库(SjA)和经过蚯蚓免疫兔血清免疫球蛋白(L-Ig)筛选一轮后的噬菌体12肽库(SjB)为原肽库,进行3轮吸附-洗脱-扩增免疫筛选.随机挑取SjA和SjB蓝色噬菌斑各24个, 扩增后用ELISA方法检测其抗原性.结果 24个SjA克隆中有6个可以与Sj-Ig特异结合, 其中A491 nm值较高的2个克隆具有较好的特异性和敏感性;24个SjB克隆中有10个可以与Sj-Ig特异结合, 其中A491 nm值较高的5个克隆具有较好的抗原性.比较SjA 和SjB两组间克隆的抗原性,结果显示SjB的目的克隆具有更好的特异性和敏感性.结论从SjA 和SjB中均筛选到了对日本血吸虫病具有较高潜在诊断价值的抗原模拟表位,提示以异源性抗体结合后的肽库作为原肽库来筛选寄生虫抗原模拟表位是可行的,同时也为从噬菌体肽库中筛选抗原模拟表位提供了一个新的实验方法.     

日本血吸虫重组抗原保护性免疫力的诱导

采用日本血吸虫重组抗原加福氏佐剂免疫小鼠,攻击感染后,不仅可减少虫负荷(减虫率为29.2％—51.0％),还可降低血吸虫雌虫的产卵量(减卵率为52.1％—74.3％),抗体滴度在初次免疫后3wk即显著升高,并持续维持较高水平。结果表明,经大肠杆菌表达的日本血吸虫重组抗原能够诱导抗攻击感染的保护性免疫力,可望作为混合多价疫苗的候选组分。     

血吸虫合成多肽抗原保护性免疫效果及小鼠外周血细胞的变化(英文)

根据公认的血吸虫保护性抗原候选分子Ｓｍ２８ 的氨基酸序列人工合成４ 个不同血吸虫多肽片段,对小鼠进行免疫保护实验。采用２００ μｇ／只,皮下注射共免疫３ 次,每次间隔１ 周,末次免疫后２ 周以（４０ ±２） 条日本血吸虫正常尾蚴攻击感染。另设不免疫攻击感染日本血吸虫的小鼠为对照组。实验组小鼠分别获得２４．３ ％ ～４７ ．９ ％ 的减虫率和３５．１ ％ ～５０ ．４ ％ 的减卵率。各组小鼠免疫前和免疫后尾部取血涂片染色,观察比较外周血白细胞及Ｔ 细胞、Ｂ细胞的变化,结果免疫后较免疫前嗜酸性白细胞和Ｔ细胞升高。实验提示,血吸虫多肽抗原有一定免疫效果,值得进一步研究。     

日本血吸虫成虫31/32 kDa蛋白的纯化及保护性免疫力的研究

本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫 31/32 kDa 蛋白(Sj 31/32蛋白)。SDS-PAGE、免疫印迹试验(EITB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明采用该方法分离纯化的 Sj 31/32 蛋白纯度高,且具有较高的活性。用纯化的 Sj 31/32 蛋白加福氏佐剂免疫的小鼠,不仅可减少虫负荷(减虫率 28.1％),还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率 71.4％),抑制虫卵肉芽肿的形成。结果提示:Sj 31/32 蛋白具有较高的减卵率,可望作为混合多价疫苗候选组分。     

日本血吸虫未成熟卵抗原和成虫抗原分别与联合免疫小鼠的研究

目的探讨日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（SIEA）和成虫抗原（SA）分别与联系免疫小鼠的抗卵胚胎发育效果和抗感染效果。方法采用SIEA与SA分别与联合免疫小鼠,于攻击感染后48天剖杀,统计雌雄虫数及肝脏各期虫卵数。结果与对照组比较,SIEA单独免疫产生显著抗卵胚胎发育的免疫力,肝组织成熟卵数下降37,3％,成熟卵比例下降24．0％;SA单独免疫产生显著抗感染免疫力,减虫率为34．5％;SIEA与SA联合免疫,产生显著抗感染免疫力和最佳抗卵胚胎发育免疫力,减虫率33．5％,成熟卵数和成熟卵比例分别下降73．8％和45．0％,抗卵胚胎发育免疫力显著高于SIEA单独免疫组。结论提示来源于成虫的抗感染抗原与来源于未成熟虫卵的抗卵胚胎发育抗原联合应用是血吸虫疫苗研制中有希望的发展方向。     

用双向电泳分析日本血吸虫雌虫和雄虫抗原

目的 研究日本血吸虫雌虫和雄虫的可溶性抗原,方法 用SDS-PAGE和双向电泳方法,对日本血吸虫两性成虫全虫可溶性抗原进行分析。结果 用SDS-PAGE分析日本血吸虫雌虫和雄虫分别有10条和17条蛋白带,其中有9条相同蛋白带;用双向电泳分析雌雄虫体多肽斑点分别有111个（主多肽斑点有19个）和132个（主多肽斑点有28个）,分子量范围在27kD-100kD,而pI范围为3.20-8.15 ,两性有35个相同多肽点,但其多肽含量略有差异。结论 日本血吸虫雌、雄成虫存在许多共同蛋白带和多肽斑点（其中有些蛋白和多肽含量差异明显）,而且还各有牧民的蛋白带和多肽斑点。     

日本血吸虫成虫抗原合并蚯蚓抗原对小鼠胸腺淋巴细胞及亚群的影响

ＢＡＬＢ／ｃ小鼠经可溶性日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡＰ）或／和可溶性蚯蚓抗原（ＳＥＷＰ）免疫后,观察、计数其胸腺Ｔ细胞总数、活性Ｔ细胞、Ｌ３Ｔ４细胞以及Ｌｙｔ２细胞。结果显示,ＳＷＡＰ免疫组Ｌ３Ｔ４细胞明显增加（Ｐ＜０．０５）;ＳＥＷＰ免疫组４个指标则均无明显变化（Ｐ＞０．０５）;ＳＷＡＰ与ＳＥＷＰ混合制剂免疫组Ｔ细胞总数、活性Ｔ细胞以及Ｌ３Ｔ４细胞均显增加（Ｐ＜０．０５）。相关分析表明：ＣＤ＋４Ｔ细胞（即Ｌ３Ｔ４细胞）在ＳＷＡＰ所诱导的保护性免疫力中可能起重要作用,而ＳＥＷＰ存在细胞免疫以外的其它可能保护性免疫机制,但ＳＥＷＰ与ＳＷＡＰ有明显的协同作用     

日本血吸虫循环抗原的生化检测

Ｓｊ６５蛋白为来源于日本血吸虫虫卵的循环抗原，该蛋白免疫原性较弱，能与一种分子量为６８ＫＤ的糖蛋白（Ｓｊ６５结合蛋白）专一结合。利用酶标记Ｓｊ６５结合蛋白，建立Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测感染血清中的Ｓｊ６５。用该法测定急、慢性血吸虫病人血清，阳性率分别为１００％及８１．３％。正常人、兔、鼠、肝炎病人血清及蛔、钩虫病人血清均未见阳性反应。在感染兔血清及并殖吸虫病人血清中可检出Ｓｊ６５，而在感染小鼠血清及并殖吸虫感染犬血清中却未检出。感染兔经吡喹酮治疗５周后，９０％转为阴性。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗１年后，６０％转为阴性。结果表明，感染血清中Ｓｊ６５的生化检测似能反映感染程度及考核治疗效果，同时也提示，血清中Ｓｊ６５的水平可因宿主的不同而不同。     

重组日本血吸虫铁蛋白诱导小鼠保护性免疫的研究

目的 用重组日本血吸虫铁蛋白免疫小鼠,观察抗血吸虫的免疫保护作用。方法 用重组的日本血吸虫铁蛋白（ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ）免疫小鼠,经皮下免疫３次,在第３次免疫后４周,经腹部感染日本血吸虫尾蚴４０条或５０条,４５ｄ后杀鼠,观察减虫效果。结果 用ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ,ＩＬ－１２＋ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ和ＦＣＡ＋ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ免疫小鼠分别获得２