宏观和微观放射自显影术对~(35)S-蛋氨酸掺入机体不同组织蛋白比较研究

在预先引入体内蛋白质标记前身物~(35)S-蛋氨酸后,用宏观和微观放射自显影术,探讨了不同脏器和细胞水平的蛋白质生物合成部位和合成的相对程度。由定位和定量分析研究的结果表明,以肝组织中的蛋白质生物合成能力最强,其次为肾脏、脾脏和大脑,以及骨髓幼稚细胞。而心、肺和骨骼肌等虽具有重要的生理活性,但其蛋白质的生物合成并不旺盛。     

大肠癌细胞辐射敏感相关蛋白的初步筛选

人大肠癌细胞LOVO和SW480细胞具有不同的辐射敏感性。用直线加速器分别予以0、2、4、6GyX射线照射，然后运用SELDI-TOF蛋白质芯片技术测定照射后24h细胞的蛋白质谱，分析两株细胞间在不同照射剂量后的蛋白质表达情况，通过Swiss-Prot数据库搜索初步筛选出可能与大肠癌细胞辐射敏感性相关的几种蛋白：GADD45B、Thioredoxin、Metallothionein1(MT1)。结果表明：大肠癌辐射敏感性的预测能够从蛋白质水平来体现，而SELDI-TOF蛋白质芯片技术可从蛋白质水平预测人大肠癌细胞辐射敏感性，为临床大肠癌患者的个体化放疗提供选择依据。     

宏观和微观放射自显影术对~(35)S-蛋氨酸掺入机体不同组织蛋白比较研究

在预先引入体内蛋白质标记前身物~(35)S-蛋氨酸后,用宏观和微观放射自显影术,探讨了不同脏器和细胞水平的蛋白质生物合成部位和合成的相对程度。由定位和定量分析研究的结果表明,以肝组织中的蛋白质生物合成能力最强,其次为肾脏、脾脏和大脑,以及骨髓幼稚细胞。而心、肺和骨骼肌等虽具有重要的生理活性,但其蛋白质的生物合成并不旺盛。     

60Coγ射线辐照对耐辐射菌Deinococcus radiodurans 蛋白质含量的影响

研究了耐辐射菌对60Coγ射线的辐射抗性,观察不同剂量照射后,细菌中蛋白质含量、辐照剂量及照射后培养不同时间的关系.应用平板菌落计数法,计数不同剂量辐照后的克隆数,计算存活率,绘制剂量-存活曲线.采用紫外分光光度法检测细菌中蛋白质的含量.结果表明,耐辐射菌的存活曲线呈肩型,具有极强的辐射抗性.蛋白质的含量随着照射剂量的升高而不断增加,当辐射剂量达到5kGy时,蛋白质含量最高(p＜0.01);若受照剂量＞5kGy时,则蛋白质含量随受照射剂量的升高而逐渐降低.5kGy辐照后,随照射后温育时间的延长,蛋白质含量不断降低,培养时间为6h,蛋白质的含量最低(p＜0.01),与对照组(未受照射组)相比,无显著性差异(p＞0.05).     

^60Coγ射线诱导HL-7702细胞子代蛋白质表达的改变

利用双向凝胶电泳（2-DE）和质谱技术,采用不同剂量60Coγ射线照射人正常肝细胞系HL-7702细胞,观察比较受照细胞克隆子代2-DE图谱的变化,并对差异蛋白质进行鉴定。结果表明,受照肝细胞克隆子代蛋白质表达发生了改变,串联质谱测序和串联质谱数据的Mascot共鉴定出17个差异表达的蛋白质点,4个是上调蛋白质,13个是下调蛋白质;上调蛋白质中,线粒体热休克蛋白60（HSP60）和珠蛋白转录因子1（GATA-1）明显高表达;免疫印迹技术进一步证实HSP60和GATA-1的表达随照射剂量的增加而增强。结果提示,在辐射诱发基因组不稳定性过程中,HSP60和GATA-1蛋白质可能发挥着作用。     

小剂量辐射诱导小鼠免疫细胞早期蛋白质合成动力学变化

采用３ＨＬｅｕ掺入示踪观察７５ｍＧｙＸ射线全身照射对小鼠免疫细胞蛋白质早期合成的影响。结果表明，小剂量Ｘ射线全身照射后小鼠胸腺细胞蛋白质合成开始增加，６～８ｈ达到峰值，随后逐渐下降。ＳＤＳＰＡＧＥ及光密度扫描结果表明，照射后小鼠胸腺及脾细胞蛋白质合成增加，同一细胞中不同分子量的蛋白质各有其消长特点，不同细胞间合成增加的蛋白质分子量有所不同。这些早期变化的蛋白分子参与复杂的细胞功能调节，可能与辐射兴奋效应有关。     

~(211)At、~(131)I标记蛋白质的合成

~(211)At和~(131)I通过氯胺T和过氧化氢直接氧化标记牛血清白蛋白和胰蛋白酶,采用凝胶色谱Sephadex G-75柱洗脱分离蛋白质,γ计数测量和相对比较法计算标记产额。一般认为~(211)At标记蛋白质时使用H_2O_2较好,~(131)I标记蛋白质时则适合使用氯胺T,且蛋白质的结构强烈影响标记结果。在八个不同的实验中,过氧化氢氧化标记的~(211)At-牛血清白蛋白产率为96.9％,氯胺T氧化标记的~(131)I-牛血清白蛋白产率为66.1％。     

小剂辐射诱导小鼠免疫细胞早期蛋白质合成动力学变化

采用＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入示踪观察７５ｍＧｙＸ射线全身照射对小鼠免疫细胞蛋白早期合成的影响。结果表明：小剂量Ｘ射线全身照射衙小鼠胸腺细胞蛋白质合成开始增加，６－８ｈ达到峰值，随后逐渐下降。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及光密度扫描结果表明，照射后小鼠胸腺及脾细胞蛋白质合成增加，同一细胞中不同分子量的蛋白质各有其消长特点，不同细胞间合成增加的蛋白质分子量有所不同。     

基于液相色谱-同位素稀释质谱法测定氨基酸的蛋白质定量方法

为定量分析蛋白质，建立蛋白质水解液中氨基酸的液相色谱-同位素稀释质谱分析方法。蛋白质在6 mol/L盐酸溶液存在下130℃水解，经Hypercarb多孔石墨碳色谱柱、0.1%全氟戊酸水溶液/乙腈流动相体系分离，选择脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸5种较为稳定的氨基酸，以其相应的稳定同位素标记物为内标括号法定量，结合蛋白质的氨基酸序列信息实现对蛋白质的绝对定量。结果表明，5种氨基酸在10～1 000 ng/mL范围内线性关系良好(R²>0.995),检出限和定量限分别在0.02～0.07 ng/mL和0.06～0.2 ng/mL之间，3个不同质量水平下经水解处理的回收率在97.0%～102.4%之间、相对标准偏差在1.1%～3.0%之间。对新型冠状病毒(新冠病毒)N蛋白人源IgG单克隆抗体有证标准物质的分析结果和新冠病毒N蛋白国家计量比对的测量结果满意，证明该方法具有足够的准确度。     

甲状腺激素对小鼠胰腺蛋白质更新率的影响

本文用参入法、双同位素法和衰减曲线法测定组织蛋白质更新率,探讨甲状腺激素对小鼠胰腺蛋白质更新率的影响。连续5天给正常成年小鼠每只注射L-甲状腺素100μg,致使参入小鼠胰腺总蛋白质的标记氨基酸显著减少,标记蛋白质中~3H/~(14)C比值下降、蛋白质更新率常数减小、半减期延长。这些结果表明,大剂量甲状腺激素处理可抑制小鼠胰腺蛋白质更新率,既减慢其合成,又减慢其降解。     

Studies on aggregation-propensities and secondary structural transformations of proteins

The insoluble and fibrillar aggregates of some proteins are thought to be the pathological cause of neurodegenerative diseases. The aggregation-propensities of different types of proteins were investigated by Thioflavine T fluorescence assay and atomic force microscopy imaging. Then, the structural transformations of the proteins from aqueous state to solid state were studied by circular dichroism spectroscopy. The results indicate that proteins of different secondary structure show variations in their aggregation-propensities, together with their various structural transformations from aqueous state to solid state. Our studies imply that the structural transformation of proteins from solution to solid state is closely associated with their aggregation-propensities, which will provide insight into the molecular mechanism of protein aggregation in neurodegenerative diseases.     

铀酰与多肽和蛋白质相互作用研究进展

随着核能事业的快速发展,人们越来越关注锕系核素对生态环境和生物体所造成的影响,其中锕系元素的生物毒理行为正成为核能基础研究热点之一。锕系阳离子与生物分子特别是多肽和蛋白质的相互作用研究对于理解其在生物体内转运、吸收和沉积等基本毒理学问题至关重要。铀作为核燃料循环中主要的锕系元素,其毒理学问题更具研究意义。本文综述了铀酰离子(UO2+2)在分子水平上与氨基酸、多肽和蛋白质之间相互作用机理的研究进展。分析了所形成配合物的配位模式、分子结构以及热力学数据等;评价了血浆蛋白对铀在人体内转运、吸收和沉积所起的作用;讨论了能特异性识别UO2+2的多肽和蛋白质的设计原理,对本领域今后的发展动向也进行了展望。     

蛋白质自由基损伤的保护和修复

纵然具有酶和非酶系统保护人体免受活性氧自由基的损伤,但一旦两者间失去平衡就会造成各种疾病。考虑到蛋白质占了人体干重的20％,所以蛋白质应当是活性氧进攻的主要靶物质之一。     

炎症显像剂的临床应用及研究进展

目前,临床常用炎症显像剂有67Ga-枸椽酸盐1、8F-FDG,放射性核素标记的非特异性人免疫球蛋白、白细胞、抗粒细胞单克隆抗体以及环丙沙星。本文对它们的显像原理、临床应用概况以及各自的优缺点进行了简述;并详细介绍了在研的炎症特异性显像剂,如放射性核素标记的细胞因子及其拮抗剂,以及针对病原微生物的感染特异性显像剂,如放射性核素标记的抗菌药、噬菌体、甲壳酶与甲壳结合蛋白、抗菌肽、核苷及其类似物,在炎症/感染灶内的定位机制和它们的研究现状。     

耐辐射奇球菌pprI和pprA基因在真核细胞293T中的表达

以pGADT-7-pprA、pet28a-pprI载体为模板,构建pEGFP-N1-pprA、pDsRed1-N1-flag-pprI真核表达载体,脂质体2000介导将两个重组载体共转入293T细胞。双酶切及琼脂糖凝胶电泳显示在4700、1000 bp处与4800、1100 bp处出现目的条带。测序结果显示构建序列与模板序列一致,氨基酸序列100%正确。荧光显微镜下见到红色和绿色荧光;Western blot结果显示在不同检测水平65 kDa及60 kDa大小处有融合蛋白表达。结果提示pEGFP-N1-pprA、pDsRed1-N1-flag-pprI真核表达载体构建成功,并在离体293T细胞中共同表达蛋白。证明原核基因pprI、pprA能够在真核细胞中共表达,为后续实验验证DR菌高抗性基因pprA、pprI及其产物在辐射调控网络中的相互作用和协同作用、提高真核细胞的辐射抗性提供了研究基础。     

病毒蛋白与宿主相互作用及其对细胞放射敏感性的影响

为了解病毒感染对电离辐射生物效应的可能影响和作用机理,本文着重评述了病毒编码蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用,特别是干扰宿主DNA 损伤修复、影响辐射致细胞凋亡、干扰DNA损伤后的细胞周期检查点,以及其对哺乳动物细胞的放射敏感性的影响.病毒蛋白与宿主细胞的相互作用,不仅在病毒感染及相应致病作用中扮演着重要角色,而且也影响到被感染组织对辐射或某些化学物质的反应.业已证实,一系列的病毒蛋白与宿主蛋白发生作用,这种作用与包括DNA修复、凋亡、细胞周期检查点在内的DNA双链断裂的细胞反应有关,造成宿主蛋白的细胞定位改变、降解、失活或激活等;另外一些蛋白直接或间接调节多种宿主基因的转录水平,或诱发辐射损伤反应相关蛋白的转录后修饰的变化,使得这些基因产物上调或下调、活性改变.病毒蛋白与宿主的相互作用,在一定程度上改变了细胞的放射敏感性.充分、准确地了解病毒感染的辐射生物学意义,将促进我们关于人体对辐射健康效应的个体敏感性的理解和对未来辐射防护思路的拓展.     

金属硫蛋白在辐射照射中的诱导及防护作用

金属硫蛋白(Metallothionein，简称MT)是一类广泛存在于生物体内的低分子量(约6—7ku)，富含半胱氨酸(30％)，能被诱导合成的金属结合蛋白。其生物功能广泛，主要参与微量元素的贮存、运输和代谢，有拮抗电离辐射，清除自由基等多种作用。介绍了MT的分类、MT基因结构、基因放大和基因调控，MT合成的辐射诱导及其机理以及MT在辐射照射中所起的保护作用。     

电离辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞G1期阻党政军及相关蛋白的表达

探讨X射线诱导EL－4细胞G1期阻滞及相关蛋白的表达。采用PI荧光标记 ,流式细胞术检测细胞周期的变化。用单克隆抗体免疫荧光标记,流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果表明,2．0Gy和4.0Gy照射后12-72h,G1期EL－4细胞百分数显著高于假照射组（P＜0．05－p＜0.001).4.0Gy照射后EL-4细胞p53蛋白表达从照射后2h开始明显增高,持续至照射后24h(p＜0．05－p＜0．001）;p21蛋白表达在照射后2h开始明显增高,持续至照射后48h(p＜0.05-p＜0.001);GADD45蛋白表达在照射后2h开始明显增高,持续至照射后48h(p＜0．05－p＜－0．001）;MDM2蛋白表达在照射后4h开始明显增高,持续至照射后24h（p＜0.05-p＜0.01）。结果提示,中等剂量X射线照射可诱导EL－4细胞G1期阻滞。p53、p21和GADD45蛋白表达在电离辐射诱导EL－4细胞G1期阻滞中起重要作用。     

A proteomics analysis for certain signature proteins of rabbit lacrimal passages after 125I seeds brachytherapy

To search for certain signature proteins and the expression profiles in lacrimal passage stenosis,rabbit models of lacrimal passage stenosis were treated by 125I seed brachytherapy.All the signature proteins were separated by two-dimensional electrophoresis,and identified by mass spectrometry.The results show that the up-regulated proteins are peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A(PPIase A),and epidermal fatty acid-binding protein(E-FABP),while the down-regulated proteins are myosin light chain 1(isomer of skeletal muscle),myosin light polypeptide 6(isomer 1 of smooth muscle and non-muscle),myosin light chain 1(isomer of slow-twitch muscle A),isomer 2 of ERC protein 2,and α-crystallin family protein.The proteins may play a role in healing the wound and regulating synaptic active zone of neurons due to correlation to cell apoptosis,proliferation and migration of smooth muscle cell.These provide molecular mechanism for preventing stenosis and restenosis of lacrimal passage.