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腺病毒载体的研究近十几年来得到迅速发展,人们对腺病毒载体的研究兴趣主要源于使用腺病毒载体进行基因治疗,通过修饰病毒载体中与外源基因结合的相应部位,提高基因传递的效率,从而使腺病毒载体在基因治疗中的作用不断完善。人腺病毒C组血清2型(Ad2)和5型(Ad5)载体拥有很多特点,被广泛应用于体外与体内的基因传递中。作者对人腺病毒C组血清2型(Ad2)和5型(Ad5)感染的生物学特性,腺病毒载体的设计、构建、生产及腺病毒载体的应用进行了论述。 相似文献
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通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有0型口蹄疫病毒P1—2A和3C蛋白酶基因和3D基因的重组腺病毒表达载体。首先将P12A、3C和3D基因亚克隆连接到穿梭质粒pShuttle—CMV上,再将重组穿梭质柱用Pinel线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态菌,经细菌内同源重组产生pAdcmv—P12×5c和pAdcmv—p12×3cd重组腺病毒质粒,经序列测定证实目的基因已正确的插入到腺病毒骨架载体中。重组腺病毒质粒经Pacl线性化后转染HEK295细胞,转染1w内细胞出现典型病变。取转染细胞裂解液上清连续传代至第4代时,细胞于24~48h内即病变完全,收取接毒后24h细胞进行PCR和RT—PCR检测,表明目的基因已整合到腺病毒基因组内,且在mRNA水平上有表达。取第4、6、8和10代病毒,用蛋白酶K处理后可扩增出目的基因,证明此重组病毒可稳定存在。本研究为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 相似文献
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本研究选择O型FMDV VP1基因上保守序列作为可能的干扰位点,合成了siRNA,将siRNA克隆到pSIREN-Shuttle中,获得siRNA重组表达载体pShuttle-VP1。用限制性内切酶PI-Sce I和I-Ceu I双酶切siRNA重组表达载体和腺病毒质粒载体pAdeno-X,利用体外连接法获得了重组质粒。经过PCR扩增、酶切鉴定及序列测定,证明成功构建了重组腺病毒质粒pAdeno-VP1。利用脂质体转染法,将Pac I线性化的重组腺病毒质粒pAdeno-VP1转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAdeno-VP1。经过PCR鉴定正确后大量增殖,增殖的重组腺病毒经过浓缩、纯化得到了高滴度的病毒。用终点稀释法测定病毒滴度为2.5×109PFU/mL。将rAdeno-VP1感染IBRS-2细胞后,12 h后再加入100TCID50的FMDV O/HKN/2003。结果显示,重组腺病毒能够抑制FMDV的复制。 相似文献
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根据GenBank公布的序列设计1对引物扩增O型口蹄疫病毒P12A3C基因并亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV内.含有目的基因的穿梭质粒(pShuttle-PAC)线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-1共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细菌.利用细菌内同源重组法得到重组腺病毒质粒(pAd-PAC).在Lipofectamine2000介导下重组腺病毒质粒转染HEK293细胞得到重组腺病毒(Ad-PAC).半数组织培养感染剂量(TCID_(50))测定、免疫荧光试验(IFA)和连续传代后目的基因的PCR扩增,证实重组病毒滴度为10~(5.5) TCID_(50)/0.1 mL,重组病毒HEK293细胞中得以表达且遗传稳定性良好;动物试验表明,该重组病毒能够诱导小鼠产生较高水平的针对口蹄疫病毒的特异性抗体;本试验为口蹄疫重组腺病毒活载体疫苗的进一步研究和应用奠定了基础. 相似文献
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为研制口蹄疫病毒(FMDV)的新型重组腺病毒疫苗,本研究通过RT-PCR扩增FMDV GD株3C、P1、P1-2A、L-P1和L-2A基因,分别构建重组腺病毒穿梭质粒,并在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183E.coli中同源重组获得腺病毒重组质粒pAd-3C、pAd-P1、pAd-P1-2A、pAd-L-P1、pAd-L-2A,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得含有目的基因的重组腺病毒。将具有感染能力的复制缺陷型重组腺病毒rAd-3C分别与rAd-P1、rAd-P1-2A、rAd-L-P1、rAd-L-2A共感染Vero细胞,裂解细胞收集细胞上清液并进行小鼠免疫试验。经ELISA检测表明,重组腺病毒rAd-3C分别与rAd-P1-2A、rAd-L-2A共感染Vero细胞上清液能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。 相似文献
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自从痘苗病毒作为疫苗首次应用于预防天花以来,人们研制了许多疫苗以预防多种自然界病源的感染,至今已有200多年的历史。疫苗是最价廉高效的兽药,它包括:减毒活疫苗、亚单位疫苗、灭活疫苗。理想的疫苗应能诱导接种动物产生针对某病原的终生免疫。疫苗不仅用于控制动物出现症状, 相似文献
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犬腺病毒2型也称犬传染性喉气管炎病毒,可诱导宿主产生细胞免疫、体液免疫和黏膜免疫。将外源基因插入犬腺病毒2型早期转录区后可诱导宿主产生低水平的先天免疫,且能够在宿主体内安全、持续、稳定地表达外源基因,为基因转移提供了条件。犬腺病毒2型载体具有安全性和稳定性高、抗原表达能力强、易于进行各种遗传改造操作和携带大片段的外源基因等特点,是目前作为动物疫苗与基因治疗最有发展前景的非人类腺病毒载体之一。犬腺病毒2型载体已经广泛应用于动物疫苗研制、基因治疗等多个生物医学领域。笔者就犬腺病毒2型的分子生物学特性及犬腺病毒2型载体的发展、构建方式及在动物疫苗研制和基因治疗中的应用进行综述,旨在进一步挖掘犬腺病毒2型载体在基因治疗、动物疫苗研制中的作用,以及为下一代犬腺病毒2型载体平台的建设提供理论基础。 相似文献
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自从20世纪50年代开始认识腺病毒(Adenovirus)以来,对腺病毒的生物学和免疫学特征已经有比较多的认识。腺病毒科包括禽腺病毒属(AViadenovius)和哺乳动物腺病毒(Mastadenovirus)两个属。除人腺病毒以外,一些哺乳动物的腺病毒和禽腺病毒也成为基因治疗和载体疫苗研究的热点,如猪腺病毒3型(PAV-3)、牛腺病毒3型(BAV-3)、绵羊腺病毒(0vineadenovirus,0AV)、禽腺病毒(Aviadenovirus)、犬腺病毒(Canineadenovirus,CAV)和黑猩猩腺病毒(Chimpanzeeadeno—virus. 相似文献
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腺病毒表达载体研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
基因治疗和基因免疫技术已成为解决生物学领域问题的重要手段之一,多种治疗因子的设计、研发和应用,促进了更多高效转移载体的发展.腺病毒载体由于宿主范围广泛和对人体的低致病性、病毒颗粒比较稳定、基因组较少发生重排等优点,已经成为最常用的病毒载体之一.但由于细胞的靶向性和宿主的免疫反应限制了腺病毒载体的应用和发展,针对这种情况,对腺病毒载体进行了不断改进和完善,其潜在的应用价值也得到了广泛关注.文章综述了腺病毒载体的性质、研发过程及应用前景,为进一步优化和利用腺病毒表达载体提供参考. 相似文献
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牛口蹄疫Asia-Ⅰ型灭活疫苗LPB-E抗体滴度与免疫保护相关性研究 总被引:1,自引:1,他引:1
抽取7批牛口蹄疫Asia—Ⅰ型灭活疫苗,用OIE推荐的50%保护(PD50)试验方法进行免疫保护试验;同时,用OIE推荐的液相阻断酶联免疫吸附试验(LPB—E)检验程序测定了7批疫苗免疫保护试验的103头牛的血清抗体滴度。经过对获得数据的统计和处理分析证明,LPB—E抗体滴度与牛免疫保护率存在着显著的正相关性(P〈0.05),相关系数为0.91,概率分析表明,LPB—E抗体滴度≥2.1(1:126)时,95%的免疫牛能够抵抗与疫苗毒株同源的10^4ID50强毒的攻击。 相似文献
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LI Xia-ying ZHENG Lu-fei ZHANG Xiu-jie YANG Kun WANG Qi-huai ZHOU Rong WU Tian-wen 《中国畜牧兽医》2015,42(7):1910-1916
Foot-and-mouth disease (FMD) is an acute,febrile and highly contagious animal disease caused by foot-and-mouth disease virus (FMDV),and has been recognized as the most important constraint to international trade in animals and animal products.An outstanding feature for FMDV infection is that the FMDV infected animals may remain as a carrier state,some of the animals exposed to FMDV may have a long term asymptomatic infection.This article will review the advance of FMDV in the following aspects,epidemiology,etiology and pathogenesis. 相似文献
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口蹄疫病毒重组鸡痘病毒活载体疫苗和DNA疫苗免疫牛的试验研究 总被引:5,自引:0,他引:5
将本课题组构建的共表达FMDV衣壳蛋白前体P1—2A基因以及蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1以及共表达P1—2A和猪白介索18基因的重组DNA疫苗(pVIRIL18P1),分别以单独及混合的共3种方式接种牛,然后通过间接ELISA、中和试验和T淋巴细胞增殖试验评价其诱导的特异性体液和细胞免疫水平。结果表明这2种基因工程疫苗均能诱导牛产生特异性的体液及细胞免疫应答。其中重组鸡痘病毒vUTAL3CP1免疫组以及联合免疫组(vUTAL3CP1/pVIRIL18P1,pVIRIL18P1/vUTAL3CP1)诱导的中和抗体滴度分别达到1:64、1:64和1:54,已接近于常规灭活疫苗水平(1:90),而特异性的T淋巴细胞增殖反应则比后者高得多(P〈0.01)。该研究结果为进一步进行免疫攻毒试验,并最终筛选出最佳疫苗和免疫程序奠定了基础。 相似文献
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负链RAN病毒的反向遗传系统建立以后,非节段负链RNA病毒作为疫苗载体的研究取得了重要进展.文章从病毒载体的构建策略、插入基因在载体中的位置、插入片段的大小、数量以及外源基因的表达对载体的毒性作用进行了综述;对外源糖蛋白整合到病毒粒子上对载体的影响,通过不同的方法和途径来提高载体疫苗的免疫效果方面进行阐述. 相似文献