欧洲鳗迟钝爱德华氏菌的分离鉴定

目的对欧洲鳗(Anguilla anguilla) 迟钝爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）菌株ET81126进行分离鉴定。方法采用形态特征观察、人工感染试验、API 20E细菌鉴定系统、16SrDNA测序以及属特异性PCR技术对菌株ET81126进行分析。结果人工感染试验表明菌株ET81126为致病菌,对欧洲鳗的半数致死量为4.55×104 cfu/g。按形态特征和API 20E细菌鉴定系统初步鉴定菌株ET81126为爱德华氏菌。通过16SrDNA测序,在GenBank上经同源性序列比对与迟钝爱德华氏菌（登录号EF467289）自然聚为一类,同源率达99％。属特异性PCR扩增图谱显示迟钝爱德华氏菌非典型菌株特有的230bp条带。结论综合生化指标和分子生物学鉴定结果,可确定菌株ET81126为欧洲鳗迟钝爱德华氏菌。     

食源性单核增生李斯特氏菌重复序列-PCR分型与鉴定研究

目的探索我国北方部分省市单核增生李斯特氏菌食品分离株与标准菌株间的亲缘关系,筛选食品中该菌的鉴定用标识序列。方法利用REP-PCR和ERIC-PCR技术,对单核增生李斯特氏菌的基因组进行分型研究,并以相似性系数构建进化树。回收、克隆该菌共有的ERIC-PCR扩增DNA条带,通过序列测定、BLAST分析及PCR验证,确定使用该序列鉴定该菌的可行性。结果本研究所用的单核增生李斯特氏菌分别被ERIC-PCR和REP-PCR扩增产生约1 800bp的共有扩增带;当欧式距离的平方为20时,ERIC-PCR和REP-PCR均将25株菌分为3个群,当欧式距离的平方为5时,ERIC-PCR将25株菌分为16个型,REP-PCR将25株菌分为20个型。ERIC-PCR得到的1 800bp共有扩增片段测序后的长度为1 816bp,为李斯特氏菌属共有的精氨酸生物合成双功能argJ基因。结论重复序列-PCR可将本研究的单核增生李斯特氏菌食品分离株分为3个群;筛选获得的ERIC-PCR特异DNA扩增片段可用于李斯特氏菌属的鉴定。     

羊肺炎克雷伯氏菌感染症及病原菌检验与系统发育分析

目的对一起小尾寒羊病害进行发病情况、临床表现与病理变化、病原等方面的检验,旨在明确感染症的特征及相应的病原菌。方法在发病情况调查的基础上,对新鲜病死羊进行体表及剖检后的病变检验;同时以病变肝、肺、心血组织为材料做细菌分离与纯培养,对所分离的细菌进行形态特征、理化特性等方面的鉴定;选取经鉴定后的1个代表菌株(SKp-1株)进行了16S rRNA基因的分子鉴定,测定了16S rRNA基因序列,构建了系统发育树;将代表菌株培养后制备成9×108CFU/ml的菌液,经接种感染健康小尾寒羊,测定其致病作用;对4株细菌以琼脂扩散法(K-B)做对抗菌类药物的敏感性测定。结果被检病死小尾寒羊无特征性临床表现,剖检可见肺肿胀,肠黏膜脱落、出血等。从肺、肝、心血组织均检出了纯一的同种细菌,经理化特性等鉴定表明为克雷伯氏菌属(KlebsiellaTrevisan 1885)的肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(K.pneumoniaesub-sp.pneumoniae)。所测代表菌株的16S rRNA基因序列长度为1415bp,在GenBank登录号为AY963633,与检索出的28种克雷伯氏菌属细菌16S rRNA基因序列同源性均在98~99%,在系统发育树中与肺炎克雷伯氏菌(登录号为AF453251)聚为一个分支。人工感染试验结果显示对小尾寒羊具有致病作用。用37种抗菌类药物所做的药敏试验结果显示在不同株间无明显的敏感与耐药性差异。结论所检小尾寒羊病例为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种感染。     

日本鳗鲡混合感染迟缓爱德华氏菌与创伤弧菌的分离与鉴定

目的对日本鳗鲡混合感染迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的病原进行了分类鉴定。方法对两株病原菌进行了形态、API-ID32E鉴定系统和分子生物学鉴定,分别测定了菌株AnGH080301和An-GH080302的16SrRNA和HSP60基因序列,构建了系统进化树。结果按形态特征和API-ID32E鉴定系统分别初步鉴定菌株AnGH080301和AnGH080302为迟缓爱德华氏菌和创伤弧菌。菌株AnGH080301的16SrRNA基因部分序列(登录号FJ646618)与迟缓爱德华氏菌的16S rRNA基因(登录号AB050832)同源性最高,达99.7%;菌株AnGH080302的HSP60基因部分序列(登录号FJ646619)与创伤弧菌HSP60基因(登录号BA000037)的同源性最高,达99.8%。结论综合菌株的生理生化特性和分子生物学鉴定结果,可将菌株AnGH080301和AnGH080302分别鉴定为迟缓爱德华氏菌和创伤弧菌,迟缓爱德华氏菌与创伤弧菌均为人兽共患病病原,其混合感染日本鳗鲡致病的报道尚属首次。     

贵州省两株山羊源羊种布鲁菌MLST分析

目的了解贵州省2010年分离自山羊的两株羊种布鲁菌的等位基因序列型(Sequence type, ST)及遗传学特征,为动物间和人间布病疫情的预防和控制提供科学依据。方法应用布鲁菌属特异性PCR(BCSP31-PCR)和种/型特异性PCR(AMOS-PCR)对2010年分离自山羊的两株布鲁菌进行鉴定,采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing, MLST)技术对两株布鲁菌菌株的7个管家基因、1个外膜蛋白基因及1个基因间区的序列进行测定,将各个基因的序列与参考菌株的等位基因型进行比对,确定其等位基因谱及序列型(STs),分析与两株菌ST型与各种型布鲁菌代表菌株的遗传进化关系。结果来自贵州省山羊的两株布鲁菌株经BCSP31-PCR鉴定为布鲁菌属细菌,AMOS-PCR将其鉴定为羊种布鲁菌。MLST分析显示,两株菌的9个等位基因序列型为ST8型,与同属羊种布鲁菌的ST7、ST9~ST12、ST34和ST35遗传关系最近。结论贵州省2010年分离的2株布鲁菌分离株均为ST8型布鲁菌,与同属羊种布鲁菌的ST型遗传关系最近,结果为贵州省人间和动物间布病疫情的预防和控制提供了科学依据。     

卡他莫拉菌感染的诊治进展

卡他莫拉菌（Moraxella catarrhalis,MC）曾被称为卡他微球菌（Micrococcus catarrhalis）卡他奈瑟菌和卡他布兰汉菌（BC）,是寄居于人类上呼吸道的莫拉菌属的一种细菌。随着对本属细菌的深入研究,其命名还将会发生变化。过去认为仅是健康人呼吸道的正常寄居菌群,近年来被认为是一种重要的呼吸道病原菌,其发病率逐年增加,尤其多见于儿童呼吸道感染和慢性阻塞性肺病（COPD）患者。据国外报道,MC菌已跃居为呼吸道感染的第3位重要病原菌（仅次于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌）。     

奥斯陆莫拉菌致多发性骨髓炎1例报道并文献复习

<正>莫拉菌属是需氧革兰阴性球菌，包括7种：亚特兰大莫拉菌、犬莫拉菌、卡他莫拉菌， 腔隙莫拉菌、林氏莫拉菌、非液化莫拉菌和奥斯陆莫拉菌。奥斯陆莫拉菌是人类皮肤、黏膜和呼吸道正常菌群的一部分，奥斯陆莫拉菌引起的感染包括菌血症、导管相关血流感染(catheter related blood stream infection, CRBSI)、感染性心内膜炎、脑膜炎、腹膜炎、眼内炎、化脓性关节炎[1～12],     

一株鸭源大肠埃希菌的分离鉴定及毒力基因的检测

目的对从山东省枣庄市一鸭养殖场樱桃谷病死鸭中分离出的1株疑似大肠埃希菌进行鉴定,并进行其毒立基因的检测。方法采集山东省枣庄市一鸭养殖场病死鸭的脏器,进行病原菌的分离培养,革兰染色镜检,生化特征鉴定及药物敏感性试验;制作肝脾组织切片HE染色后观察组织病理学变化;通过PCR扩增16SrRNA进行分子鉴定、核苷酸同源性序列对比和系统进化树分析,对部分毒力基因进行PCR检测。结果该分离菌革兰染色阴性,菌落与菌体形态及生化鉴定结果均与大肠埃希菌相符。该菌对17种药物呈不同程度的耐药性,对4种药物中度敏感,4种药物敏感。病理切片观察病鸭心脏、肝脏、脾脏均出现不同程度的病变。PCR扩增16S rRNA序列长度为1 108bp,该序列与GenBank中公布的大肠埃希菌FJ949576.1、MH671483.1、JQ800462.1 16SrRNA核苷酸序列同源性99%,进化树显示该分离菌与大肠埃希菌FJ950548.1亲缘性较近。PCR检测该菌携带phoA、luxS、pfs、fimC、ompA、iss、tsh、ompT、iroN等9种毒力基因。结论樱桃谷病死鸭分离菌株为大肠埃希菌,携带多种毒力基因,具有高度耐药性。     

2012年中国成人社区获得性呼吸道感染主要致病菌耐药性的多中心研究

目的 调查2012年我国11家医院成人社区获得性呼吸道感染病原菌的耐药性.方法 收集2012年1-12月全国11家中心分离的599株成人社区获得性呼吸道感染病原菌,其中肺炎链球菌381株,流感嗜血杆菌137株,卡他莫拉菌81株.采用琼脂稀释法测定抗菌药物的MIC值.结果 50％(300/599)的菌株分离自60岁以上的患者,16.2％(97/599)的菌株分离自40岁以下的患者.按照肺炎链球菌口服青霉素的折点判定标准,56.7％(216/381)的肺炎链球菌为青霉素不敏感菌株(PNSSP),肺炎链球菌对大环内酯类的耐药率超过90％(345/381),对口服头孢菌素的耐药率为39.9％ ～50.7％(152 ～ 193株).肺炎链球菌对左氧氟沙星和莫西沙星的敏感度分别为97.8％(372/381)和99％(377/381).PNSSP对头孢曲松、阿莫西林/克拉维酸、头孢克洛、头孢呋辛的耐药率显著高于青霉素敏感菌株(PSSP).流感嗜血杆菌对除氨苄西林(71.5％,272/381)和头孢克洛(75.2％,286/381)外的抗菌药物的敏感度均超过90％.流感嗜血杆菌中β-内酰胺酶阳性率为21.9％(30/137),且β-内酰胺酶阳性菌株对氨苄西林、头孢克洛、氯霉素和四环素的耐药性显著高于β-内酰胺酶阴性菌株.氟喹诺酮类药物对流感嗜血杆菌的作用效果明显.除克林霉素、阿奇霉素和克拉霉素对卡他莫拉菌作用较差外,其他药物对卡他莫拉菌均具有较高的抗菌活性.结论 大环内酯类和口服头孢菌素类药物对肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌的抗菌活性有限,左氧氟沙星和莫西沙星对肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌仍具有较高的抗菌活性.     

内蒙古地区乳源性金黄色葡萄球菌的分离与分子鉴定

目的对从内蒙古通辽市地区患乳腺炎奶牛乳中分离到的1株疑似金黄色葡萄球菌进行分子鉴定,并建立一种能直接从牛奶中检测金黄色葡萄球菌的PCR方法。方法采集疑似金黄色葡萄球菌感染乳腺炎奶牛乳液标本,进行细菌的分离培养,革兰染色、镜检、生化特征鉴定,溶血及药敏试验,并进行16SrDNA序列扩增、测序分析、分子鉴定,采取扩增序列NCBI Blast比对方法建立进化树进行分子进化分析。结果该分离株菌为革兰染色阳性,菌落形态、菌体形态、培养特性与分子特征均与金黄色葡萄球菌相符。PCR扩增出金黄色葡萄球菌16SrDNA序列,长度为611bp,该序列与GenBank公布的葡萄球菌(KY784112.1)16SrDNA序列相似性为100%,进化树分析该分离株与KY784112.1金黄色葡萄球菌属于近缘发育分枝。结论分离菌株为乳源性金黄色葡萄球菌,采用PCR法可作出快速检测。     

Moraxella osloensis als Sepsis-Erreger

Summary A case of septicemia caused by Moraxella osloensis is described. A 4-year old girl fell ill with symptoms similar to those described in cases of septicemia caused by Neisseria meningitidis. Two days after the commencement of treatment with penicillins, however, Moraxella osloensis could be isolated from cerebral fluid, which contained only a small number of cells. It is assumed that the delayed recovery of the child was directly related to the diminished susceptibility of this Moraxella strain to penicillins. Since Moraxella strains may be resistant to these antibiotics, it is necessary to distinguish between Moraxella and N. meningitidis by means of laboratory tests. The symptoms elicited by Moraxella are similar to those in septicaemia caused by N. meningitidis, but are considerably milder in character.

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Moraxella osloensis als Sepsis-Erreger

Zusammenfassung Bericht über ein 4jähriges Mädchen, das mit grippalen Erscheinungen erkrankte und schließlich Hautblutungen und Hautnekrosen wie bei Menigokokkensepsis entwickelte. Knapp 48 Stunden nach Beginn der Penicillin-Behandlung wurde M. osloensis aus dem Liquor gezüchtet, der nur eine geringe Zell- und Eiweißvermehrung aufwies. Das langsame Abklingen des insgesamt leichten Krankheitsbildes wird auf die verminderte Penicillin-Empfindlichkeit von M. osloensis zurückgeführt. Wegen der therapeutischen Konsequenzen ist es wichtig, Moraxellen von Neisserien zu unterscheiden. Die durch Moraxellen hervorgerufenen Krankheitsbilder ähneln denen, die durch Neisserien verursacht werden, verlaufen aber meist leichter.

     

竹鼠肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定

报告四川省竹鼠养殖过程中致病性细菌的检测及生物学特征。通过对发病濒死竹鼠病变组织进行细菌学检查及分离,对分离得到的一株优势菌进行形态特征、理化性质和16SrDNA序列的分子鉴定,人工感染及药敏试验,判定为肺炎克雷伯氏菌。该菌对供试的小白鼠有致病性,对供试的头孢美唑等药物高度敏感,对丁胺卡那霉素等中度敏感,对洁霉素等耐药。推断此株肺炎克雷伯氏菌是导致竹鼠死亡的主要病原菌。     

中国大鲵腐皮病病原菌的分离与鉴定

目的报告中国大鲵(Andrias davidianus)腐皮病的主要病原菌的检测及其生物学特征。方法对发病濒死的大鲵病变组织进行细菌学检查及分离,对分离菌进行形态特征、理化特性16S rDNA序列的分子鉴定,并构建系统发育树;进行人工感染试验及药敏试验。结果分离到1株优势菌,根据此株分离菌的形态特征及理化特性,结合16S rDNA序列测定与系统发育分析结果,判定其为气单胞菌属的维氏气单胞菌。此菌对供试健康大鲵、斑点叉尾鮰和小白鼠有较强的致病作用,对供试27种抗菌药物中的头孢美唑等6种高度敏感,对阿奇霉素和新霉素2种中度敏感,对氟哌酸等19种药物耐药。结论所检出的维氏气单胞菌为导致中国大鲵腐皮病的病原菌。     

产丙酮酸棒状杆菌的鉴定及微生物学性状研究

目的对临床分离于皮脂腺囊肿标本中的菌株进行表型和基因型鉴定,描述该菌株的生物学特性及致病性,为临床诊断提供准确地病原学依据。方法对分离菌株进行革兰氏染色等,并使用VITEK 2Compact全自动微生物分析仪进行鉴定。采用K-B法进行药敏试验。提取分离菌株DNA,采用通用引物对16S rRNA基因进行PCR扩增并测序,将测序结果与GenBank中收录的16S rRNA基因序列进行BLAST同源性对比。结果分离菌株经VITEK 2Compact鉴定为玫瑰色库克菌,后经16S rRNA序列测定方法鉴定,分离菌株为产丙酮酸棒状杆菌。药敏试验显示该菌株对四环素、万古霉素、利福平敏感,对青霉素、红霉素、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、头孢吡肟、亚胺培南、庆大霉素等均耐药。结论对于表现型不易鉴定或鉴定不准确的细菌,采用16SrRNA序列测定的方法进行鉴定是最准确的。产丙酮酸棒状杆菌是引起患者疾病的致病菌。在完善产丙酮酸棒状杆菌生化反应信息的同时,探索出有效可行的生物学鉴定方法。     

Investigate of nasopharyngeal flora in infants and children with influenza

To clarify the bacteriological interpretation of nasopharyngeal flora from infants and children with influenza (n = 38), nasopharyngeal swabs were obtained. From 38 patients, 83 strains of bacterias were obtained. Chief pathogenic bacteria isolated from infants and children with influenza were B. catarrhalis (28 strains), S. pneumoniae (22 strains), H. influenzae (19 strains), S. aureus (6 strains) and chief nonpathogenic bacteria isolated from infants and children with influenza were Corynebacterium spp. and alpha-streptococcus (3 strains each) and Moraxella sp (2 strains). From infants and children without influenza (n = 34), 83 strains were obtained. The chief pathogenic bacteria isolated from infants and children without influenza were B. catarrhalis (23 strains), H. influenzae (22 strains), S. pneumoniae (18 strains), S. aureus (7 strains) and chief nonpathogenic bacteria isolated from infants and children without influenza were Corynebacterium spp. and Moraxella sp (5 strains each), alpha-streptococcus (2 strains) and Neisseria sp (1 strain). There was no significant difference in nasopharyngeal flora between infants and children with influenza and infants and children without influenza. In cases showing detection of multiple bacterial strains, common combinations were one or more of B. catarrhalis, S. pneumoniae, H. influenzae, S. aureus and nonpathogenic or weakly pathogenic bacteria. There was also no significant difference in combinations of nasopharyngeal flora between infants and children with influenza and those without influenza. We emphasize that we must study whether a difference in nasopharyngeal flora between infants and children with influenza and infants and children without influenza develops with time. Therefore, we must repeatedly obtain nasopharyngeal swabs from infants and children with influenza and infants and children without influenza.     

Clinical "pneumococcal pneumonia" due to Moraxella osloensis: case report and a review

A previously healthy 6-y-old girl presented with a disease very similar to pneumococcal pneumonia. However, Moraxella osloensis was isolated by lung tap. The patient responded well to a course of parenteral penicillin. This is probably the first documented case of community-acquired pneumonia associated with this agent. Clinical isolates of M. osloensis are rare and its pathogenesis has not been delineated; however, a literature review suggests that the organism is more common than is generally recognized.     

Infective endocarditis due to Moraxella lacunata: report of 4 patients and review of published cases of Moraxella endocarditis

Moraxella is an aerobic, oxidase-positive, Gram-negative coccobacillus, which is rarely associated with serious and invasive infections. We describe 4 cases of Moraxella lacunata endocarditis and review 12 previously published cases of Moraxella endocarditis, including 1 further case with M. lacunata, 5 with M. catarrhalis, 2 with M. phenylperuvica and the remainder consisting of 1 case each of M. liquefaciens, M. osloensis, M. nonliquefaciens and 1 non-specified. Of these 16 patients, 5 had prosthetic valves, 5 suffered from an underlying heart abnormality, and the other 6 had normal hearts. Therapy consisted of a beta-lactam antimicrobial and, in several instances, an aminoglycoside as well. The mean duration of antibiotic treatment was 35+/-13 d. Four patients (25%) underwent surgery and 4 out of 16 (25%) died. Moraxella should be added to the growing list of organisms which may occasionally cause infective endocarditis, even in patients without preexisting valvular abnormality.     

Identification and characterization of soil-isolated Streptomyces SJE177 producing actinomycin

One hundred seventy-seven actinomycetes strains were isolated from soils collected from fruit orchards in Thailand. All were tested for antibacterial activity against seven pathogenic bacteria using co-cultivation methods. Forty strains (22.6%) were active against at least one indicator bacteria. Twenty-seven strains (15.3%) inhibited only gram-positive bacteria, four strains (2.3%) inhibited only gram-negative bacteria, and nine strains (5.1%) showed activity against both. Strain SJE177 had potent activity against all tested bacteria, and was selected for further investigation. A crude ethyl acetate extract of this strain retained inhibitory activity as tested by disk-diffusion method. Analysis of morphological and biochemical characteristics and the 16S rRNA gene sequence indicated this strain belonged to the genus Streptomyces. The strain formed a monophyletic line in a phylogenetic tree of 16S rRNA gene sequences with other Streptomyces reference strains. High performance liquid chromatography (HPLC) analysis showed SJE177 produced actinomycin. Since many isolates showed inhibitory activity against indicator bacteria, these results suggest Thai soil could be an interesting source to explore for antibacterial substances.     

晚期肺癌化疗后下呼吸道感染31例临床分析

目的 分析晚期肺癌化疗后下呼吸道感染的致病菌种类和药敏结果,正确选择抗菌素。方法对３１例确诊为肺癌并且出现化疗后下呼吸道感染患者,进行致病菌和药物敏感性分析。结果 ３１例菌株中,革兰氏阴性杆菌２９株（９３．５％）,其中肺炎克雷伯氏杆菌１４株,硝酸盐阴性杆菌１０株。对上述两种杆菌,阿米卡星和亚胺培南１００％敏感,庆大霉素、环丙沙星和头孢他啶敏感性亦较高。结论 了解肺癌患者化疗后引起下呼吸道感染的致病     

一种引起鳗鲡和人肠炎样疾病的新致病菌——海安气单胞菌

从江苏海安境内的病鳗和病人腹泻便中分离出 9株细菌。这些细菌均为G杆菌 ,有动力 ,在 3 7℃无盐胨水中生长 ,氧化酶阳性 ,发酵莆萄糖 ,能迅速产生褐色色素 ,对O/ 12 9抗性 ,主要生化特征符合气单胞菌 ,但有几项不同于已报道的其他种。G +Cmol%测定 ,DNA杂交 ,16SrRNA测序比较结果显示这些菌是气单胞菌中的一个新种。脂肪酸甲脂分析进一步确认这一结论。菌株对氟哌酸、痢特灵及中草药五倍子、大黄比较敏感 ,对青霉素、复方新诺明有抵抗力。小鼠的半数致死量为 3 9× 10 6 ,鳗鲡的半数致死量为 1 2× 10 5。具有菌毛 ,胞外蛋白酶等毒力因子 ,结合流行病的调查 ,临床症状观察 ,认为这些菌是引起鳗鲡和人肠炎样疾病的新的致病菌。模式菌株为 95 - 173 (CCTCCAB970 2 6=IFO16641) T,特以发现地命名为海安气单胞菌 (Aeromonashaianesis)。