依那普利对自发性高血压大鼠心肌ACE和ACE2表达的影响

 目的 观察自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats, SHR)心肌的血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme, ACE)和ACE2的表达,以及依那普利干预的影响。方法 将15只SHR随机分为2组：SHR对照组(n=7)和依那普利组(n=8),分别给以安慰剂、依那普利15mg.kg-1.d-1灌胃干预4周。干预结束后处死大鼠,分离左心室,行RT-PCR、western blot蛋白质免疫印迹检测。同步取10只WKY大鼠作为正常血压对照组。结果SHR心肌的ACE的mRNA和蛋白质的表达都显著高于)WKY组(1.68±0.34 vs 0.33±0.12, P＜0.05;1.21±0.14 vs 0.71±0.11, P＜0.05),而ACE2 的mRNA和蛋白质表达皆明显低于WKY组(0.50±0.15 vs 1.16±0.24, P＜0.05; 0.71±0.24 vs 1.22±0.14, P＜0.05)。依那普利明显降低ACE的mRNA和蛋白质表达(0.44±0.19 vs 1.68±0.34, P＜0.01; 0.87±0.13 vs 1.21±0.14, P＜0.05),提升ACE2的mRNA表达(1.77±0.49 vs 0.50±0.15, P＜0.05),对ACE2的蛋白表达无明显影响(0.42±0.22 vs 0.71±0.24, P＞0.05)。结论 SHR心肌ACE明显升高,ACE2显著降低,有利于血压上调。依那普利能降低ACE,提升ACE2,可能是血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin-converting enzyme inhibitors, ACEI)的降压机制之一。     

小鼠止血带休克后肾组织ACE/ACE2表达变化及意义

目的: 通过观察小鼠止血带休克(TS)后,不同时点血管紧张素转换酶(ACE)和血管紧张素转换酶2(ACE2)在肾脏的表达变化与肾损伤程度的关系,探讨ACE/ACE2表达失衡在TS后肾损伤中的作用。方法: 复制小鼠TS模型,Western blotting测肢体缺血再灌注后12 h内肾组织ACE和ACE2蛋白的表达;利用化学比色方法测定血清和肾组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;制作肾病理切片,观察肾组织形态变化,并利用免疫组织化学方法观察ACE和ACE2的表达部位。结果: Western blotting结果显示,各时点与对照组比较,TS后ACE表达升高,ACE2表达降低;与对照组比较血清和肾MDA水平增高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05);HE病理切片显示,TS后各时点肾组织有充血、炎细胞浸润等不同程度损伤;免疫组化结果显示,ACE在肾小管上皮细胞胞浆表达,TS后表达明显增强;ACE2主要在肾小管上皮细胞管腔膜表达,TS后表达明显降低。结论: TS后肾组织ACE表达升高,ACE2表达降低,ACE/ACE2表达失衡可能与肾损伤有关。     

ACE2及其特殊功能

血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)是新发现的与血管紧张素转换酶(ACE)相关的羧肽酶,在肾素-血管紧张素系统(rennin-angiotensin system,RAS)中ACE2可以使AngⅡ转换为Ang1-7,从而产生与血管紧张素Ⅱ相反的效应,同时ACE2还可使AngⅠ转换为Ang1-9 .研究发现:ACE2与高血压、SARS以及肾脏、生殖等系统的疾病有着密切的关系.     

心力衰竭患者心肌组织ACE2表达与心功能的关系

目的观察心力衰竭(简称心衰)患者不同心功能状态下血管紧张素转换酶2(ACE2)基因和蛋白表达变化,探讨其与心衰患者心功能的关系。方法通过手术取材,采用RT-PCR和W estern B lot技术检测30例瓣膜病所致不同程度心衰患者和5例正常人心肌组织中ACE2 mRNA和蛋白表达。结果瓣膜病所致心衰患者心肌组织ACE2 mRNA和蛋白表达均较正常组明显升高(P<0.01),其中中重度心衰患者升高尤为显著(P<0.01)。结论心衰患者心肌组织ACE2基因和蛋白表达明显增强,这可能是心脏的代偿机制,促进ANG II降解,增加ANG1-7合成,保护残存的心功能。     

人血清白蛋白对近端肾小管上皮细胞骨调素和CD44表达的影响

目的：研究人血清白蛋白能否刺激人近端肾小管上皮细胞产生骨调素（OPN）和CD44。方法： 用人血清白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞系（HK-2细胞），分不同时间（0-48 h）、不同浓度（0.1-10 g/L）两组，以RT-PCR方法分别检测两组细胞表达的OPN mRNA，以Western blotting分别检测两组细胞表达的OPN。用免疫荧光法、激光共聚焦显微镜观察1 g/L的人血清白蛋白刺激HK-2细胞24 h、48 h后OPN、CD44的表达。结果： 人血清白蛋白刺激HK-2细胞上调表达OPN mRNA和蛋白，呈时间和剂量相关性。CD44的表达与OPN同步。 结论： 人血清白蛋白可刺激HK-2细胞表达OPN与CD44。     

脑内ACE2基因过表达对高血压前期大鼠血压进展和氧化应激的影响

目的:观察下丘脑室旁核内血管紧张素转换酶2(angiotension-converting enzyme 2,ACE2)基因过表达对高血压前期大鼠血压进展和中枢氧化应激的影响,并探讨ACE2基因中枢降压的分子机制.方法:ACE2基因以慢病毒为载体,载体上携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluore...     

模拟高原缺氧不依赖肺动脉高压促进大鼠右心室ACE2的表达

目的： 研究模拟高原缺氧环境下大鼠心脏血管紧张素转换酶2（ACE2）的变化规律及调节因素,初步探讨ACE2与高原心脏病的关系。 方法： 在低氧环境（模拟海拔5 000 m高原、23 h/d）下饲养成年雄性 Sprague Dawley（SD）大鼠,并分为缺氧1、15、30 d组,设立平原对照组;检测各组大鼠右心室ACE2活性,同时测定右心室功能、重量指数以及肺动脉压力变化。在此基础上,我们观察了卡托普利、尼群地平灌胃对慢性缺氧30 d组大鼠右心室ACE2活性的影响。结果： 缺氧30 d 组右心室ACE2 mRNA、蛋白表达显著上调,ACE2活性明显增加,同时伴明显心室肥厚及心功能显著升高。另外,卡托普利、尼群地平虽然显著降低了肺动脉压力以及心脏功能,但对ACE2活性无显著影响。结论： 慢性高原缺氧环境促使心脏ACE2的表达与活性上调,提示ACE2可能与缺氧心脏结构功能变化有关;表达增加是缺氧环境中大鼠右心室ACE2活性升高的原因之一,而肺动脉高压可能并非是缺氧情况下ACE2活性变化的主要原因。     

ACE/ACE2在AGT-REN双转基因高血压小鼠肾组织的表达变化及意义

目的: 观察血管紧张素原(AGT)-肾素(REN)双转基因高血压小鼠肾脏组织病理改变及血管紧张素转化酶(ACE)/血管紧张素转化酶2(ACE2)的表达变化,探讨ACE和ACE2在高血压肾损伤中的作用。方法: 实验分为4组,随机选择10月龄野生型、AGT转基因、REN转基因以及AGT-REN双转基因雄性C57小鼠各6只。每组动物颈动脉插管检测平均动脉压(MAP),1 h后处死小鼠;左侧肾脏置于10%中性甲醛固定,常规HE染色方法观察肾脏组织病理改变,免疫组化法观察肾脏ACE及ACE2的表达变化;右侧肾脏取出后放入蛋白裂解液中,提取蛋白,进行Western blotting实验,观察肾组织中ACE和ACE2蛋白表达。结果: 与野生型小鼠相比,AGT转基因小鼠MAP无明显变化(P>0.05),REN转基因小鼠MAP降低约15 mmHg(P<0.05);AGT-REN双转基因小鼠MAP明显升高约30 mmHg(P<0.05)。与野生型小鼠相比,AGT转基因和REN转基因小鼠肾组织未见明显病理改变,AGT-REN双转基因小鼠肾组织可见肾小动脉内膜及管壁显著增厚、管腔狭窄、纤维素样坏死、玻璃样变等典型恶性高血压肾损伤病理改变。免疫组化结果显示,与野生型小鼠相比,AGT转基因和REN转基因小鼠肾组织ACE和ACE2表达无明显差异(P>0.05),AGT-REN双转基因鼠肾组织ACE表达明显增高(P<0.05),而ACE2表达明显降低(P<0.05)。Western blotting结果显示:与野生型小鼠相比,AGT转基因鼠肾组织ACE和ACE2表达无明显变化;REN转基因鼠肾组织ACE表达无明显变化,ACE2表达稍降低(P<0.05);双转基因鼠肾组织ACE蛋白表达明显增强, ACE2蛋白表达水平显著降低,ACE/ACE2表达显著失衡。结论: AGT-REN双转基因可致小鼠恶性高血压,导致肾脏严重损伤;ACE/ACE2的表达失衡与血压改变密切相关,降低ACE或提高ACE2的表达可能对防治高血压具有重要意义。     

血清ACE2水平在冠心病发生发展中的变化

目的:通过检测血清血管紧张素转换酶2(ACE2)水平,分析ACE2与冠心病(CHD)不同病程之间的相关性,探讨其在CHD发生发展中的变化规律。方法:选取非CHD对照组样本85例,CHD样本174例,并按照冠状动脉狭窄严重程度分成轻度(50%)狭窄组(ls-CHD组)、中度(50%~75%)狭窄组(ms-CHD组)和严重(≥75%)狭窄组(ss-CHD组)。通过ELISA检测所有样本血清中ACE2水平,统计分析CHD不同病程下的ACE2水平,从而探讨血清ACE2水平与CHD发生发展间的关系。结果:ls-CHD、ms-CHD和ss-CHD组血清ACE2水平均高于非CHD组,并且随着冠状动脉狭窄严重程度的加深而上升。男性血清ACE2水平要比女性的高。单一性别内,ls-CHD、ms-CHD和ss-CHD组血清ACE2水平均高于非CHD组,并有显著性差异。回归分析发现性别、糖尿病、CHD与血清ACE2水平相关,并且性别和CHD是血清ACE2水平的独立影响因素。结论:男性血清ACE2水平高于女性;与非CHD患者相比,CHD患者血清ACE2水平升高;在CHD发生发展过程中,血清ACE2水平随CHD病情的恶化而持续升高。     

白蛋白超载诱导近端肾小管上皮细胞表达α-平滑肌肌动蛋白

目的：探讨白蛋白超载是否可以诱导近端肾小管上皮细胞（PTCs）向成肌纤维细胞转化（EMT）。方法：大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK52E培养至70％融合或完全融合时，用不同浓度（0-30 g/L）去脂牛血清白蛋白(dBSA)超载144 h。NRK52E形态和结构改变用光镜和电镜观测。上皮细胞标记抗原E-钙黏蛋白和β-连环蛋白，以及成肌纤维细胞标记抗原α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达用免疫荧光和Western 印迹法检测。结果：dBSA超载可诱导未完全融合NRK52E表达α-SMA，少数细胞变为长梭形，但α-SMA 的表达不呈剂量依赖性。dBSA超载处理不能诱导完全融合的NRK52E表达α-SMA，细胞形态也无改变。dBSA超载完全或未完全融合NRK52E均不能抑制E-钙黏蛋白和β-连环蛋白表达，电镜显示这些细胞仍保持上皮细胞结构，包括微绒毛和紧密连接。结论：白蛋白超载可以诱导PTCs表达α-SMA，促进EMT，但不能诱导PTCs完全转化为成肌纤维细胞，细胞完全融合可抑制白蛋白超载诱导PTCs表达α-SMA。     

乙肝病毒X蛋白通过激活JAK2/STAT3信号通路调节肾小管上皮细胞凋亡

 目的：观察乙肝病毒X蛋白(HBx)对肾小管上皮细胞凋亡的作用,并探讨其在乙型病毒肝炎相关性肾炎(HBVGN)发病中的分子机制。方法：将构建好的HBx真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx转染至体外培养的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)中。Western blotting法检测转染后目的蛋白的表达及JAK2/STAT3信号通路的活化。细胞免疫荧光检测STAT3及p-STAT3表达水平。CCK-8法检测细胞增殖活性。Hoechst 33342染色观察细胞的形态学改变。透射电镜观察细胞的超微结构及凋亡。Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：转染目的基因HBx后,p-JAK2及p-STAT3表达水平均显著增加;同时,细胞增殖明显受抑。透射电镜、Hoechst 33342染色及Annexin V/PI双染流式细胞术检测发现HBx促进HK-2细胞凋亡。AG490（JAK2/STAT3信号通路阻断剂）孵育后能够部分阻断JAK2/STAT3信号通路,减少HBx所致细胞凋亡。结论：HBx通过激活JAK2/STAT3信号通路导致肾小管上皮细胞凋亡,可能参与了HBV直接损伤肾组织的致病机制。     

EGFR在高糖诱导下人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的观察EGFR信号通路对高糖诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响和机制。方法体外培养HK-2细胞,将细胞分为4组:对照组、渗透压对照组、高糖组和高糖加EGFR抑制剂AG1478组。用Western blot检测p-EGFR、total EGFR、cleaved caspase-3、BAX、BCL-2及β-actin的蛋白表达,四唑盐比色法(MTT)检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组和渗透压对照组相比,高糖组HK-2细胞EGFR活性、cleaved caspase-3表达、BAX/BCL-2比值和内质网应激(ERS)明显升高,细胞活性降低(P0.01)。EGFR抑制剂AG1478能够明显抑制高糖诱导的HK-2细胞EGFR活化和细胞凋亡(P0.05),提高细胞活性(P0.05),同时抑制内质网应激(P0.05)。结论抑制EGFR活性能够减少高糖诱导的HK-2细胞凋亡,这可能是通过减少内质网应激实现的。     

血管紧张素转换酶2基因转染对人内皮细胞MIF表达的影响

目的：探讨重组血管紧张素转换酶2（ACE2）基因转染对体外培养的人血管内皮细胞中由血管紧张素（Ang）II诱导的巨噬细胞移动抑制因子（MIF）表达的影响。方法:克隆和构建含人ACE2基因全长的重组质粒（pACE2），并将之转染入人血管内皮细胞中。分别采用实时定量PCR和Western印迹技术检测转染细胞中的MIF mRNA与蛋白表达情况。结果: Ang Ⅱ（100 nmol/L）和Ang IV（100 nmol/L）刺激后均可诱导人血管内皮细胞中MIF mRNA及蛋白表达增加（P<0.01）。pACE2基因转染可明显抑制内皮细胞中由Ang II和Ang IV诱导的MIF mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结论: ACE2基因过表达可明显抑制人内皮细胞中炎症介质MIF的表达，提示ACE2基因具有一定的抗炎症效应。通过调节ACE2基因的活性和表达，很可能为炎症相关疾病如动脉粥样硬化治疗提供新的策略。     

新型冠状病毒受体ACE2在多种疾病中的作用

自2019冠状病毒病(coronavirus disease 2019, COVID-19)暴发以来,血管紧张素转换酶2(angio?tensin-converting enzyme 2,ACE2)作为新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SAR...     

Renal ACE2 expression in human kidney disease

Angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) is a recently discovered homologue of angiotensin-converting enzyme (ACE) that is thought to counterbalance ACE. ACE2 cleaves angiotensin I and angiotensin II into the inactive angiotensin 1-9, and the vasodilator and anti-proliferative angiotensin 1-7, respectively. ACE2 is known to be present in human kidney, but no data on renal disease are available to date. Renal biopsies from 58 patients with diverse primary and secondary renal diseases were studied (hypertensive nephropathy n = 5, IgA glomerulopathy n = 8, minimal change nephropathy n = 7, diabetic nephropathy n = 8, focal glomerulosclerosis n = 5, vasculitis n = 7, and membranous glomerulopathy n = 18) in addition to 17 renal transplants and 18 samples from normal renal tissue. Immunohistochemical staining for ACE2 was scored semi-quantitatively. In control kidneys, ACE2 was present in tubular and glomerular epithelium and in vascular smooth muscle cells and the endothelium of interlobular arteries. In all primary and secondary renal diseases, and renal transplants, neo-expression of ACE2 was found in glomerular and peritubular capillary endothelium. There were no differences between the various renal disorders, or between acute and chronic rejection and control transplants. ACE inhibitor treatment did not alter ACE2 expression. In primary and secondary renal disease, and in transplanted kidneys, neo-expression of ACE2 occurs in glomerular and peritubular capillary endothelium. Further studies should elucidate the possible protective mechanisms involved in the de novo expression of ACE2 in renal disease.     

ACE2内源性激动剂DIZE对糖尿病肾病大鼠的保护作用

目的:观察血管紧张素转换酶2(ACE2)内源性激动剂乙酰甘氨酸重氮氨苯脒(DIZE)对糖尿病肾病(DN)大鼠的保护作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、DN组和DIZE处理组(DIZE组)。DN组与DIZE组一次性腹腔注射链脲佐菌素(65 mg/kg)建立糖尿病模型,12周后糖尿病肾病大鼠模型建立后给予DIZE 15 mg·kg~(-1)·d~(-1)或等量生理盐水皮下注射4周处理。16周末称量体重和肾重,计算肾质量体质量比(KW/BW),收集血、尿标本,检测血糖(GLU)、24 h尿蛋白(24UP)及血清肌酐(SCr)等指标。通过PAS染色观察各组肾脏病理变化;ELISA法检测大鼠AngⅡ、Ang-(1-7)、TGF-β1及VCAM-1水平的变化;通过免疫组化观察collagenⅠ和FN蛋白表达的变化;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测大鼠肾组织collagenⅠ和FN mRNA含量的变化;Western blot观察各组大鼠ACE2蛋白表达的变化。结果:DIZE显著提高了糖尿病大鼠ACE2的表达(P0.05),降低了糖尿病大鼠血浆AngⅡ含量(P0.05),提高了Ang-(1-7)的水平(P0.05)。与NC组大鼠相比,DN组与DIZE组大鼠的24UP、SCr和KW/BW明显升高(P0.05),collagenⅠ和FN mRNA水平及蛋白表达量增加,肾脏组织TGF-β1及VCAM-1明显上升(P0.05)。DIZE组与DN组大鼠相比,24UP和SCr水平降低(P0.05),GLU和KW/BW无明显差异,collagenⅠ和FN mRNA含量及蛋白表达量减少,肾脏组织TGF-β1及VCAM-1水平降低(P0.05)。结论:ACE2内源性激动剂DIZE显著提高了ACE2的活性,增加了Ang-(1-7)的含量,从而降低了肾脏纤维化及炎症水平,并对糖尿病肾病大鼠起到保护性作用。