siRNA干扰叉头框C2对乳腺癌中肿瘤干细胞标志物CD44的影响

目的：探讨siRNA干扰叉头框C2（FOXC2）对乳腺癌中肿瘤干细胞（CSC）标志物CD44 mRNA及蛋白表达的影响。 方法：常规培养乳腺癌MCF-7细胞株，再通过乳腺球形成实验培养、筛选乳腺癌CSC；将FOXC2-siRNA或阴性对照siRNA慢病毒载体转染至乳腺癌CSC，同时将转染载体的CSC作为空白对照。通过real time RT-PCR和Western blot检测FOXC2-siRNA对FOXC2的干扰效应，再通过real time RT-PCR和Western blot分别检测CD44 mRNA和蛋白在各组细胞中的表达，结果均以空白对照的表达量作为参照进行分析。 结果：从MCF-7细胞株中成功培养出乳腺癌CSC。与转染阴性对照siRNA的乳腺癌CSC比较，转染FOXC2-siRNA的乳腺癌CSC中FOXC2 mRNA和蛋白表达均明显降低（P=0.00509；P=0.00001），同时CD44 mRNA及蛋白的表达也均明显降低（P=0.00848；P=0.00218）。 结论：干扰乳腺癌CSC中FOXC2基因的表达能够抑制乳腺癌CSC中CD44 mRNA及蛋白的表达，FOXC2信号转导通路可能通过调控CD44来介导乳腺癌CSC的增殖、分化。     

“三阴”乳腺癌新辅助化疗前后BCSG1基因状况研究

目的 探讨乳腺癌特异基因（BCSG1）在“三阴”性乳腺癌新辅助化疗疗效评估中的价值。方法采用免疫组化S．P法和荧光定量PCR方法检测32例“三阴”性乳腺癌患者新辅助化疗（CEF方案）前后乳腺癌组织BCSG1的表达,比较化疗前后肿瘤体积的变化情况,分析新辅助化疗前后BCSG1蛋白表达与肿瘤形态学变化的关系。结果23例乳腺癌患者新辅助化疗后肿瘤体积均有明显缩小,病灶缓解率（CR＋PR）为84．4％;新辅助化疗后BCSG1mRNA表达水平亦明显低于化疗前（P〈O．05）,BCSG1蛋白高表达率低于新辅助化疗前（P〈0．01）。结论BCSG1分子和蛋白水平在“三阴”性乳腺癌新辅助化疗后均明显降低,与新辅助化疗后疗效呈负相关（r=-0．584,P〈0．01）,提示BCSG1可作为“三阴”乳腺癌新辅助化疗疗效的预测因子。     

Notch1在人乳腺癌细胞中的表达及其与乳腺癌耐药的关系

目的 检测乳腺癌细胞株MCF-7与MCF-7/ADR的 Notch1 表达、成球能力、干细胞池比例及干细胞内Notch1的表达,探讨Notch1 在逆转乳腺癌化疗耐药中的意义.方法 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot 法检测乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADR 及表型为ALDH1+/CD44+/CD24- 乳腺癌干细胞中Notch1 的表达;无血清培养检测MCF-7及MCF-7/ADR 的成球能力;流式细胞仪检测MCF-7与MCF-7/ADR的干细胞比例并分选干细胞.结果 MCF-7/ADR的Notch1 的表达明显高于MCF-7(0.0748±0.0043比0.0461±0.0022,P＜0.05),微球体形成能力也明显高于MCF-7 (P＜0.05);流式细胞仪检测干细胞比例,MCF-7/ADR高于MCF-7(11.40％比1.89％);分选出的干细胞Notch1 的表达明显高于非干细胞(0.3096±0.0324比0.0428±0.0061,P ＜0.05).结论 Notch1 在乳腺癌及乳腺癌干细胞中高表达,干预Notch1 可能可以逆转乳腺癌治疗的耐药.     

CD105 mRNA在原发性肝细胞癌的表达与术后复发的关系

目的研究原发性肝细胞癌（HCC）组织CD105 mRNA表达与根治术后早期复发的关系。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法，检测32例HCC行根治性切除术后随访1年以上患者及20例肝内胆管结石患者（对照组）肝组织CD105 mRNA的表达情况。结果中心处癌组织中CD105 mRNA的表达水平为0．45±0．02，明显高于对照组肝组织的0．26±0．02（P〈0．05）；肿瘤边缘处癌组织中CD105 mRNA的表达水平为0．65±0．08，明显高于中心处癌组织（P〈0．05）。边缘癌组织CD105 mRNA高表达与根治术后早期复发有关（t=4．34，P=0．00）；中心处癌组织CD105 mRNA表达与根治术后早期复发无关（t=0．81，P=0．43）。中心癌组织、边缘癌组织CD105 mRNA表达与患者年龄、肿瘤的大小、临床病理分期和病理类型等均无关（P〉0．05）。结论HCC边缘处癌组织CD105 mRNA表达水平明显高于中心处癌组织及对照组肝组织，且其高表达水平与HCC根治术后早期复发有关。     

Syndecan-1和乙酰肝素酶mRNA表达与胃癌转移和预后的关系

目的探讨syndecan-1和乙酰肝素酶（heparanase）mRNA在胃癌组织中的表达及其与胃癌转移和预后的关系。方法采用原位杂交方法,检测118例胃癌组织中syndecan-1和乙酰肝素酶mRNA的表达水平。结果118例胃癌组织中syndecan-1mRNA及乙酰肝素酶mRNA的阳性率分别为42．4％和55．9％;syndecan-1 mRNA及乙酰肝素酶mRNA阳性表达率与肿瘤浸润深度（X^2=32．95,P=0．001;X^2=23．19,P=0．001）、脉管侵犯（X^2=46．22,P=0．001;X^2=33．78,P=0．001）、淋巴结转移（X^2=28．62,P=0．001;X^2=25．43,P=0．001）和远处转移（X^2=63．30,P=0．001;X^2=65．76,P=0．001）密切相关;而syndecan-1 mRNA的表达还与肿瘤大小有相关性（X^2=6．25,P=0．012）。Syndecan-1 mRNA表达水平与乙酰肝素酶mRNA表达呈负相关（r=-0．844,P=0．001）;Syndecan-1 mRNA低表达病例平均生存时间和5年生存率低于高表达组,乙酰肝素酶mRNA阳性表达病例的平均生存时间和5年生存率均明显低于阴性表达的病例。结论Syndecan-1 mRNA低表达和乙酰肝素酶mRNA高表达参与胃癌的浸润和转移过程,是指导临床治疗及估计预后的有意义指标。     

DJ-1 shRNA靶向逆转人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的耐药性

目的探讨干扰癌基因DJ-1表达对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM多药耐药性(multi-drug resistence,MDR)的影响。方法将构建的DJ-1 shRNA真核表达载体,用脂质体转染至人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM;用RT-PCR和Western blot法分别检测细胞MDR 1 mRNA和P-糖蛋白(P-glycopro-tein,P-gp)的表达;MTT法检测细胞对化疗药物的敏感性。结果 DJ-1 shRNA靶向干预MCF-7/ADM细胞DJ-1表达后,DJ-1 shRNA组细胞MDR 1 mRNA和P-gp表达水平较空白与阴性对照组明显下降(P0.0 1);细胞内Adriamycin浓度明显增加;细胞对Adriamycin的敏感性增强2.6 8倍。结论 DJ-1shRNA可降低乳腺癌MCF-7/ADM细胞的MDR,为研究逆转乳腺癌化疗耐药提供了新方法。     

人乳腺癌细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶基因的表达和意义

目的：探讨葡萄糖神经酰胺合成酶（glucosylceramide synthase，GCS）基因在人乳腺癌细胞的表达及意义。方法：体外培养人耐阿霉素乳腺癌细胞MCF-7／ADR和人敏感乳腺癌细胞MCF-7，MTT法检测MCF-7／ADR细胞耐药倍数，RT-PCR法检测两种细胞GCSmRNA的表达，免疫细胞化学法检测GCS蛋白表达水平。结果：MCF-7／ADR细胞耐药倍数为53倍，RT—PCR检测结果显示两种细胞均有GCSmRNA表达，且MCF-7／ADR细胞GCSmRNA表达水平较MCF-7细胞有显著升高（P〈0．05），免疫细胞化学结果显示二者GCS蛋白均有表达且表达水平有显著差异（P〈0．05）。结论：GCS基因在乳腺癌细胞中表达，GCS对于乳腺癌的发生发展具有重要作用，GCS在耐药乳腺癌细胞的高表达证明GCS与肿瘤耐药密切相关，为肿瘤耐药的逆转治疗提供了新的方向。     

靶向Chk2逆转乳腺癌启动细胞化疗耐药的实验研究

目的探讨化疗压力下,乳腺癌启动细胞DNA损伤修复的能力以及DNA损伤修复机制在乳腺癌启动细胞化疗耐药中的作用。方法获取乳腺癌细胞株MCF-7及其阿霉素耐药株AdrR/MCF-7,球囊培养检测乳腺癌细胞的自我更新功能,流式细胞技术检测CD44＋/CD24-细胞和侧群细胞的比例,单细胞凝胶电泳实验检测DNA断裂程度。结果 AdrR/MCF-7的球囊形成率高于MCF-7（[8.71±0.71）%vs（3.94±1.90）%,P〈0.05];AdrR/MCF-7中高表达CD44＋/CD24-（[59.27±4.86）%vs（1.86±0.60）%,P〈0.001],并含有更高比例的侧群细胞（[8.43±1.82）%vs（0.20±0.10）%,P〈0.01];AdrR/MCF-7比MCF-7能更加迅速地修复阿霉素引起的DNA损伤,拖尾消失（28.33±21.60vs315.00±24.54）,且伴有Chk2的异常激活。干预Chk2的激活可以降低乳腺癌启动细胞的DNA损伤修复能力,凋亡细胞比例由（4.86±0.89）%增加至（19.17±0.70）%。结论乳腺癌启动细胞的化疗耐药性与DNA损伤修复能力增强有关,该功能与Chk2的异常激活相关。     

CD44与CD133蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的研究肿瘤干细胞标志物CD44及CD133蛋白的表达与胃癌临床病理特征和预后的关系。方法应用免疫组化方法检测100例胃癌组织中CD44和CD133蛋白的表达情况,并对CD133及CD44表达与胃癌患者的临床病理资料和生存率进行统计分析。结果CD133和CD44蛋白均主要表达在细胞膜,少量在细胞浆中表达。两者的表达均与患者的年龄和性别无关（P〉0．05）,但与肿瘤的大小、组织学分化程度、血管浸润、淋巴管浸润、淋巴结转移以及pTMN分期有关,肿瘤直径越大（CD44P=0．015;CD133P=0．002）、组织学分化程度越差（CD44P=0．008;CD133P=0．019）、有血管浸润（CD44P=0．043;CD133P=0．023）、有淋巴管浸润（CD44P=0．020;CD133P=0．044）、有淋巴结转移（CD44P=0．002：CD133P=0．004）、肿瘤浸润越深（CD44P=0．006;CD133P=0．021）以及pTNM分期越高（CD44P=0．034;CD133P=0．001）,其CD44和CD133蛋白的表达阳性率越高。CD44＋CD133＋双阳性表达与患者的年龄、性别、肿瘤的组织学分化程度以及血管浸润均无关（P〉0．05）,但与肿瘤大小、淋巴管浸润、肿瘤T分期、N分期以及pTNM分期有关,其中,肿瘤直径越大（P=0．010）、有淋巴管浸润（P=0．003）、有淋巴结转移（P=0．045）、肿瘤浸润越深（P=0．041）以及pTNM分期越高（P=0．049）,其CD44＋CD133＋双阳性表达率越高。单因素生存分析结果显示,淋巴结转移（P〈0．001）、TNM分期（P=0．013）、CD44蛋白阳性表达（P=0．005）、CD133蛋白阳性表达（P=0．002）以及CD44＋CD133＋双阳性表达（P〈0．001）和患者的3年生存率均有关。Spearman等级相关分析结果表明,CD44蛋白的表达与CD133蛋白的表达呈正相关（r=0．207,P=0．039）。logistic回归分析提示CD44＋CD133＋蛋白双阳性表达是淋巴结转移（P=0．038）的独立危险因素。Cox风险回归多因素生存分析显示,淋巴结转移（P=0．006）以及CD44和CD133蛋白的共表达（P=0．003）是影响胃癌患者术后生存的独立预后因素。结论CD44和CD133可作为胃癌干细胞的肿瘤标志物;CD44与CD133蛋白的共表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素,与患者预后密切相关,其表达水平越高,预后越差。     

CK20mRNA、CD44v6和PCNA对大肠癌早期肝转移预测的研究

目的:研究CK20mRNA、CD44v6和PCNA与大肠癌肝转移的关系,探讨临床预测大肠癌早期肝转移的客观指标。方法:应用荧光定量RT-PCR法检测50例大肠癌患者回流门静脉血中 CK20mRNA,同时应用免疫组织化学方法测定大肠癌癌组织中CD44v6、PCNA的表达,并与对照组比较。结果:大肠癌患者门静脉血CK20mRNA、癌组织中CD44v6、PCNA表达阳性率明显高于良性病变对照组(P<0．01)和正常对照组(P<0．01);大肠癌组织中CD44v6及PCNA的表达与门静脉中 CK20mRNA的表达有显著相关性(γ1=0．933,γ2=0.906,P<0．05);肝转移组CK20mRNA、CD44v6、 PCNA阳性表达率均高于非肝转移组(P<0.05)。结论:联合检测CD44v6、PCNA及CK20mRNA预测大肠癌肝转移,可显著提高预测的灵敏度及特异性,对于大肠癌早期肝转移监测具有很高的临床价值。     

CD326在乳腺癌细胞系的表达及其与乳腺癌细胞耐药的关系

目的 探讨上皮细胞黏附分子(CD326)在乳腺癌细胞系中的表达及其与乳腺癌细胞耐药的关系.方法 流式细胞仪分析MCF-7、MCF-7/ADR及MDA-MB-231中cD326表达情况;细胞计数法(CCK-8法)检测流式细胞仪分选获得的CD326阳性和阴性细胞亚群体外对表阿霉素、多西他赛耐药情况;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同细胞亚群中多药耐药基因(MDR1)及乳腺相关耐药基因(BCRP)的表达情况.结果 MCF-7/ADR中CD326的表达(31.03%)明显高于亲本株MCF-7(27.02%),MDA-MB-231中CD326的表达(33.43%)明显高于MCF-7及MCF-7/ADR;MCF-7和MDA-MB-231中CD326阳性细胞亚群对表阿霉素及低浓度多西他赛(0.25～1.0*IC50)的体外耐受性明显高于阴性细胞亚群(P＜0.01),但对高浓度多西他赛(1.5～2.0* IC50)的体外耐受性差异无统计学意义(P＞0.05);CD326阳性与阴性细胞亚群间MDR1、BCRP基因表达差异元统计学意义(P＞0.05).结论 CD326与乳腺癌化疗药物的耐药有关,其诱导耐药并不是通过经典的耐药途径.     

雌激素受体真核表达质粒对乳腺癌耐药细胞耐药性和细胞增殖的影响

目的　研究雌激素受体 (ER )表达质粒对MCF 7/ADR乳腺癌阿霉素耐药细胞耐药性和细胞增殖的影响。方法　Westernblot法检测MCF 7细胞和MCF 7/ADR细胞ER状态。构建ER的真核细胞表达质粒 pCER ,导入MCF 7/ADR细胞 ,流式细胞仪检测细胞周期分布 ,MTT法检测细胞生长。结果　MCF 7细胞ER为阳性 ,MCF 7/ADR细胞ER为阴性。成功构建真核细胞表达质粒 pCER ,转染MCF 7/ADR细胞 ,获得阳性克隆MTER/ADR。与对照组相比 ,MTER/ADR生长速度增快 ,S期细胞为 17.2 3 % (对照组为 14 .66% ) ,细胞对阿霉素的耐药性下降 ,阿霉素为 3mg/L时对细胞的抑制率为 45 % ,大于对照组细胞的抑制率 (为 2 4% ) ;且雌二醇 (E2 )能增加阿霉素对MTER/ADR细胞生长的抑制作用。结论　MCF 7/ADR乳腺癌耐药细胞的耐药性与其雌激素受体的表达缺失有一定关系。     

人平衡型核苷载体在乳腺癌细胞中的表达情况及其对5-FU药效的影响

目的研究乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3、MCF-7中人平衡型核苷载体（hENTS）的表达及其对5氟尿嘧啶（5-Fu）细胞毒性的影响。方法MDA-MB-231、MDA—MB-468、SK-BR-3、MCF-7细胞常规培养于含10％小牛血清的高糖DMEM培养液中。逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测4种细胞株中hENTlmRNA及hENT2mRNA的表达。每种细胞分别在含有一定浓度序列（1．28×10^4ng／L～2．00×10^8ng／L）5-FU的培养液中培养48h。MTT法检测4种细胞株增殖,并计算其5-FU的半数抑制浓度（IC50）。结果①bENT1及hENT2mRNA在MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞中的表达均较其在MCF-7细胞中（P伊〈0．05）,但其表达在MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞中差异无统计学意义（P〉0．05）。hENT2mRNA表达在4种细胞中均较hENT1 mRNA表达低,差异有统计学意义（P〈0．05）。②MTT结果显示,5-FU的IC50在MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞株中均较在MCF-7细胞株中低（P〈0．05）,在MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞株之间差异无统计学意义（P〉0．05）。③在5-FU的IC50 较低的乳腺癌细胞株（MDA-MB-231、MDA—MB-468、SK-BR-3）中高表达hENTs,而在5-Fu的Ic50较高的乳腺癌细胞株（MCF-7）中,低表达hENTs或无表达。结论在乳腺癌细胞株中,细胞膜上hENTs的表达情况能显著影响5-FU的作用效果,其结果提示,在临床上可能需要依据hENTs的表达情况来选择核苷类抗癌药物。     

CD133与胃癌细胞化疗耐药的关系及其机制

目的探讨CDl33阳性胃癌起始细胞对常规化疗药物氟尿嘧啶（5．FU）的敏感性及其耐药机制。方法免疫磁珠法分选KATO—III、SGC7901和MKN-45胃癌细胞株并分为未分选组、CDl33＋组及CDl33一组。Westernblot法和RT—PCR法分别检测分选后胃癌细胞CDl33、P—gP、Bax和Bcl-2蛋白及mRNA表达水平。免疫荧光法检测各组细胞P-gP及Bcl-2蛋白的表达。CCK-8法和Hoechest染色检测各组细胞对5．FU的敏感性。siRNA干扰MKN45细胞CDl33表达后，检测CDl33、P-gP、Bcl-2、Akt及p-Akt蛋白及mRNA表达。结果CDl33＋组胃癌细胞中CDl33、P—gP及Bcl-2蛋白和mRNA表达水平均显著高于未分选组及CDl33-组（均P〈0．05），而促凋亡因子Bax的表达水平则明显降低（P〈0．05）。在相同药物浓度下，5-Fu对CDl33＋组的抑制率显著低于CDl33一组（P〈0．05）。5-FU处理胃癌细胞后，CDl33＋组胃癌细胞中凋亡细胞比率明显低于CDl33-组及未分选组（P〈0．05）。CDl33特异siRNA干扰胃癌细胞后，干扰组P—gP、Bcl-2和p-Akt蛋白及mRNA表达显著降低（均P〈0．05），而Bax表达水平则显著增加（P〈0．05）。结论CDl33可能通过调节P-gp和Bcl-2的表达来促进胃癌的化疗耐药；在胃癌化疗耐药产生中，CDl33＋细胞可通过P13K／Akt通路起作用。     

畸胎瘤细胞源性生长因子对雌激素受体阴性乳腺癌细胞雌激素依赖性的影响

目的分析乳腺癌细胞雌激素依赖性与畸胎瘤细胞源性生长因子（PC—cell derived growth factor,PCDGF）表达之间的关系,探讨雌激素受体（ER）阴性乳腺癌患者接受内分泌治疗的可能性。方法荧光定量聚合酶链反应检测乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、T47D、MDA-MB-435s中PCDGF的表达,CCK-8法检测不同浓度雌激素培养条件下细胞的存活情况。以ER阳性乳腺癌细胞系MCF-7为对照,用RNA干扰技术抑制ER阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中PCDGF基因的表达,观察抑制前后雌激素依赖性的变化。结果PCDGF在4株乳腺癌细胞系中均有不同程度的表达,其中在MDA-MB-435s中表达量最高,PCDGF高表达的乳腺癌细胞系的雌激素依赖性较高,PCDGFshRNA可以有效抑制乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-213中PCDGF的表达（抑制率分别为81．1％和86．7％）。MDA-MB-231细胞系雌激素依赖性增加的程度高于MCF-7细胞系（P〈0．05）。结论PCDGF高表达于ER阴性乳腺癌细胞,抑制其表达可能会更好的逆转内分泌治疗的耐药性。     

MK-2206 逆转人乳腺癌细胞耐药的作用及机制研究

目的：探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂MK-2206对人乳腺癌细胞耐药的逆转作用及机制。 方法：用CCK-8法检测阿霉素与MK-2206对MCF-7细胞（阿霉素敏感）与MCF-7/ADR（阿霉素耐药）细胞生长的抑制情况并计算各自IC50值。根据IC50结果,选择低毒浓度阿霉素单独或联合不同浓度MK-2206处理MCF-7细胞和MCF-7/ADR细胞后,分别用CCK-8法和流式细胞术检测MK-2206对阿霉素耐药与阿霉素诱导细胞凋亡的影响,以及对MCF-7/ADR细胞内阿霉素蓄积的影响。用MK-2206 单独作用MCF-7细胞与MCF-7/ADR细胞后,采用Western blot法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。 结果：阿霉素与MK-2206作用后,两种细胞的增殖均受到明显抑制,阿霉素对MCF-7/ADR的IC50值明显高于MCF-7的IC50值（P<0.05）,而MK-2206对两种细胞的IC50差异无统计学意义（P>0.05）。联合MK-2206可明显降低阿霉素对两种细胞IC50值,但MCF-7/ADR细胞的降低程度明显大于MCF-7细胞（P<0.05）;MK-2206对阿霉素诱导的MCF-7细胞凋亡影响不明显,但能明显增加MCF-7/ADR细胞的凋亡率（P<0.05）。不同浓度MK-2206对MCF-7/ADR细胞内阿霉素的蓄积差异无统计学意义（P>0.05）。单独MK-2206处理后,MCF-7细胞p-（Thr308）Akt蛋白表达明显下调（P<0.01）,但p-（Thr246）PRAS40蛋白表达无明显改变（P>0.05）;MCF-7/ADR细胞以上两种蛋白的表达均明显下调（均P<0.05）。 结论：MK-2206可以通过抑制PI3K/Akt信号通路来部分逆转人乳腺癌细胞的耐药性,且乳腺癌细胞耐药可能主要与该通路的PRAS40蛋白活化有关。     

球体形成实验联合药物筛选建立耐顺铂胰腺癌干细胞株

目的 探索建立顺铂耐药人胰腺癌干细胞株,并进行初步鉴定.方法 通过球体形成实验联合顺铂药物筛选建立耐顺铂胰腺癌干细胞株;MTT法计算耐药指数;免疫荧光半定量检测OCT-4、SOX-2表达水平,检测干细胞标记物;免疫荧光半定量检测MUC-1表达水平,检测细胞分化能力;通过流式细胞仪测量侧群细胞和表面特异抗原标记（CD44＋/CD24＋）检测肿瘤干细胞含量.结果 耐顺铂干细胞株的耐药指数是亲代株PANC-1的71.5倍;干细胞标记物的免疫荧光检测发现,耐药株中OCT-4、SOX-2、MUC-1均有不同程度的表达;耐药干细胞株及亲代株SP细胞比例分别为（25.1±1.1）％和（7.8士0.9）％,差异有统计学意义（t=6.89,P＜ 0.01）;耐药株及亲代株中CD44＋/CD24＋表型的细胞亚群分别占（20.8±1.3）％和（2.4±0.8）％,差异有统计学意义（t=16.13,P＜ 0.01）.结论 球体形成实验联合顺铂药物筛选能建立耐顺铂胰腺癌细胞株,该细胞株能高效富集胰腺癌肿瘤干细胞.     

OPN和CD44V6在结直肠癌和结直肠腺瘤中的表达及意义

目的 探讨骨桥蛋白（OPN）和CD44拼接变异体6（CD44v6）在结直肠癌和结直肠腺瘤中的表达及意义.方法采用免疫组化法检测72例结直肠癌标本、60例结直肠腺瘤标本中OPN和CD44v6的阳性表达情况,分析两者与结直肠癌临床病理特征的关系.结果结直肠癌、腺瘤、正常组织OPN表达阳性率分别为81.9%、66.7%、2.8%,CD44v6表达阳性率分别为75.0%、56.7%、2.8%,各组OPN和CD44v6的表达阳性率差异均有统计学意义（P＜0.05）.OPN的表达与肿瘤浸润深度、分化状态、有无淋巴结转移存在相关性（P＜0.05）,CD44v6的表达与肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移存在相关性（P＜0.05）.OPN与CD44v6表达存在显著正相关关系（r=0.517,P＜0.05）.结论 OPN、CD44v6的表达与结直肠腺瘤-癌的转化及结直肠癌细胞的侵袭力等密切相关,通过检测两者水平可对结直肠癌的早期预防、诊断及预后评估提供重要依据.     

siRNA特异性靶向沉默Livin基因对人乳腺癌MCF－7多药耐药细胞耐药性的研究

目的研究siRNA特异性靶向沉默Livin基因对人乳腺癌MCF－7多药耐药细胞耐药性的影响。 方法采用ADM低浓度梯度递增结合大剂量间歇诱导方法建立5－FU诱导的多药耐药细胞系,采用ATP生物荧光肿瘤体外药物检测技术(ATP－TCA)法检测细胞耐药性,采用免疫组织化学方法检测Livin蛋白在MCF－7耐药细胞株系中的表达情况,采用Livin SiRNA联合表柔吡星、5－氟尿嘧啶、多西他赛、健择诱导乳腺癌MDR细胞的凋亡。采用SPSS 20.0处理数据,耐药情况、细胞的凋亡情况用( ±s)表示,采用t检验,当P<0.05时差异具有统计学意义。 结果结果显示,MCF－7多药耐药细胞存在多药耐药问题;联合组MCF－7增敏(19.48±12.00) μM、MCF－7/MDR增敏(35.62±2.37) μM,与转染组与加药组对比,数据差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论siRNA特异性靶向沉默Livin基因可增强人乳腺癌MCF－7多药耐药细胞的敏感性,提高细胞凋亡率。