抑制素A及促性腺激素对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨抑制素A(Inhibin A,INH A)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟(In vitro maturation,IVM)的影响.方法:从孕马血清促性腺激素(Pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG)组(使用PMSG组,16例)及无PMSG组(未使用PMSG组,20例)获得的生殖泡期(Germinal vesele,Gv)卵母细胞在不同浓度INH A的培养液中进行体外培养,观察第一极体(The first polar body,PBI)排出和皮质颗粒(Cortical granules,CG)染色情况.结果:PMSG组获卵数为(17.2±2.6)个/只,无PMSG组获卵数为(15.9±1.8)个/只(P>0.05);PMSG组与无PMSG组的PBI率分别为57.7%、50.7%(P＞0.05).PMSG组中INH A 200、350 ng/ml组的PBI率较对照组高(P<0.05);无PMSG组中各INHA组PB1率与对照组比较无显著差异(P＞0.05);结论:INHA和PMSG对体外培养GV期卵母细胞核成熟有促进作用.     

未成熟卵母细胞体外成熟培养技术研究进展

<正>1935年,Pincus和Enzmanz[1]观察到兔的未成熟卵母细胞在体外培养条件下可以自发完成卵母细胞的成熟过程,自此在生殖领域引入了一个新的概念即卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)。自1991年Cha[2]等报道IVM技术取得第1例妊娠以来,IVM技术已应用于治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的不孕,预     

氯化锌对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的探讨氧化锌对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法采用细胞体外培养的方法,观察卵母细胞在分别含有低、中、高浓度(0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)氯化锌的M199培养液中体外成熟率和减数分裂的变化情况。结果1μg/mlZnCl2组GVBD发生率在4、8h明显高于对照组(P<0.01),16、24h高于对照组(P<0.05);而10μg/mlZnCl2组GVBD发生率在各时间点均明显低于对照组(P<0.01)。8h后,1μg/mlZnCl2组PB1排出率明显高于对照组(P<0.05),而10μg/mlZnCl2组PB1排出率明显低于对照组(P<0.05)。结论锌对体外小鼠卵母细胞成熟和减数分裂有重要的影响。     

HCG刺激对未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响

目的:探讨获取未成熟卵母细胞之前使用人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin,HCG)能否改善未成熟卵母细胞在体外培养条件下成熟的时间、体外受精率、2细胞、4细胞发生率.方法:将HCG刺激后或未刺激所获得的小鼠生殖泡(Germinal reside,GV)期卵丘-卵母细胞复合物在培养...     

表皮生长因子对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠卵母细胞体外成熟及受精的作用.方法 在体外成熟液中分别添加0、0.1、1、5、10ng/Mlegf,12h后检查成熟率,并观察EGF对体外受精的影响.结果 添加5ng/Ml和10ng/Mlegf组卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),并且5ng/Ml组的效果显著高于其他各组(P<0.05);比较培养液中添加以上浓度EGF对体外受精胚发育的影响,结果发现添加5ng/Ml EGF虽不能显著提高囊胚发育率(P>0.05),但可显著提高其通过二细胞阻滞率和囊胚孵化率(P<0.01).结论 EGF对小鼠卵母细胞体外成熟及受精有促进作用,可提高体外成熟率及囊胚孵化率,还可促进受精卵通过二细胞阻滞.     

昆明小鼠成熟卵母细胞体外受精及受精卵体外培养的研究

目的通过比较获能受精液成分及成熟卵母细胞的处理方法，观察对昆明小鼠体外受精(IVF)效果的影响和用于早期胚胎培养的三种发育培养液培养效果，探讨并建立起适合于昆明小鼠卵子体外受精与受精卵体外发育的实验体系。方法用T6或FM两种获能受精液对采自昆明雄鼠附睾尾的精子与成熟卵母细胞进行体外受精(IVF)，受精前对成熟卵母细胞选用透明质酸酶去除卵丘细胞和不去卵丘细胞(对照组)两种方法进行处理，受精卵分别用M16、改良的CZB液(mCZB)和改良的M16液(mM16)三种发育培养液对体外受精胚进行培养。结果选用FM获能受精液的受精率极显著高于T6液(92．3％对64．7％)，且体外受精前先用透明质酸酶处理的成熟卵母细胞比对照组成熟卵母细胞受精率要低(59．2％对64．7％)，但差异不显著；用mM16培养液进行培养时桑胚率及囊胚率(55．3％和35．6％)显著高于mCZB(13．3％和8．1％)和M16培养液(17．3％和14．7％)，后两者差异不显著。结论昆明小鼠卵子体外受精时宜选用FM受精获能液，不宜用透明质酸酶去除卵丘细胞，且宜选用mM16培养液对昆明小鼠体外受精卵进行早期培养，其中的亚硫磺酸钠可有效的克服2-细胞胚后的体外发育阻滞现象。     

雌二醇和孕酮对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 研究雌二醇(E2)、孕酮(R4)对昆明小鼠卵母细胞体外成熟的影响.方法 小鼠经注射孕马血清促性腺激素(PMSG)后48 h,摘取卵巢获得未成熟卵母细胞,分别在单独含不同浓度的E2或R4的成熟液中,或在同时含有不同浓度E2和P4的成熟液中,进行体外成熟,并对经过E2和P4处理成熟的卵母细胞进行体外受精.结果 经15～16 h的成熟培养,各E2处理组的卵母细胞第一极体排出率虽然均略高于对照组,但它们之间无显著差异;各组卵母细胞体外受精48 h后,1000 ng/mL E2处理组的卵裂率显著低于其他各处理组和对照组,但各组的囊胚率之间无显著差异.各P4处理组的极体率和卵裂率,与对照组相比无显著差异,但是各处理组的囊胚率均极显著低于与对照组;两种激素协同处理组中[1000 ng/mL E2 1000 ng/mL P4]组的极体率显著高于其他各处理组;而与对照组的极体率差异不显著.结论 P4对小鼠卵母细胞的后期发育能力有一定的抑制作用,而E2却对小鼠卵母细胞的成熟及其发育潜力无明显作用.     

人未成熟卵母细胞体外成熟的影响因素

人未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)技术已广泛应用于临床,为多囊卵巢综合征(PCOS)患者开辟了一条有效的治疗途径,成为生殖医学领域日益关注的研究热点.     

表皮生长因子促进小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的实验研究

目的 了解表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育的影响.方法 将生殖泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞分别在EGF浓度为0(对照)、0.5、1、2.5、5、10 ng/ml的培养液中进行体外培养,观察生殖泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)和第一极体(the first polar body,PB1)排出的情况.将达到MⅡ期的卵母细胞进行体外受精,观察原核和胚胎发育情况.结果 EGF浓度为1、2.5、5、10 ng/ml组GVBD发生率高于对照组;EGF浓度2.5、5、10 ng/ml组PB1排出率高于对照组,其中EGF浓度5 ng/ml组的GVBD、PB1发生率最高(P＜0.01).卵母细胞在1、2.5、5、10 ng/ml EGF培养浓度下的退化率低于对照组(P＜0.05,P＜0.01).卵母细胞的体外受精率、2-细胞和4-细胞胚胎的发生率在EGF浓度为5 ng/ml时明显高于对照组(P＜0.01).结论 EGF可促进GV期卵母细胞的成熟,对其受精能力和胚胎发展也有促进作用,也可能有抑制卵母细胞凋亡的作用,而EGF以上作用与剂量有关.     

小鼠生殖泡期卵母细胞体外培养成熟、受精和胚胎发育的研究

为研究性成熟小鼠生殖泡期(GV)卵母细胞的体外成熟,同时比较体外成熟(IVM)和体内成熟组卵子的受精、胚胎发育情况,机械法分离性成熟小鼠卵巢中的GV期卵母细胞及刺激后的成熟卵母细胞,直接培养于[α-MEM+1 mg/ml Fetuin+10％FCS+1.5 IU/ml rHCG±5 ng/mlrEGF]中,16 h后移入f-HTF+10％FCS体外受精4 h,再在M16+10％FCS中培养72 h。记录其成熟、受精和胚胎发育情况,并与体内成熟的卵子比较。结果:GV期卵母细胞在含HCG培养液中成熟率为89.68％,培养液中添加EGF后,卵子成熟率无显著上升,但受精率、卵裂率均有显著提高(P<0.05)。体内成熟卵子的受精率可达62.83％,卵裂率60.18％;IVM组受精率仅48.92％,卵裂率36.69％,明显低于前者(P<0.01)。结论:小鼠GV期卵母细胞可体外培养成熟、受精和胚胎发育。培养液中添加促性腺激素和EGF都促进卵母细胞体外成熟、受精和胚胎发育能力。但IVM组卵母细胞的受精率、卵裂率低于体内成熟组,培养系统仍需改进。     

早期流产患者绒毛中抑制素A、激活素A的表达及其意义

目的:了解抑制素A、激活素A在早孕、先兆流产绒毛中的定位及表达水平;探讨抑制素A、正常妊娠活素A在维持正常早期妊娠中的作用。方法:选取60例(停经天数<60 d)早期妊娠妇女作为研究对象,其中行负压吸宫术者30例为对照组;行吸宫术的先兆流产妇女30例为先兆流产组,留取绒毛组织,应用免疫组织化学技术和计算机图像分析系统检测抑制素A、激活素A在不同早孕流产绒毛组织中的表达。结果:抑制素A、激活素A在对照组、先兆流产组绒毛的合体滋养细胞、细胞滋养细胞、毛细血管内皮细胞的胞浆呈不同程度的阳性染色。通过定量分析,抑制素A、激活素A在先兆流产组绒毛的表达低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论:胎盘组织分泌的抑制素A、激活素A对于正常妊娠的维持起重要作用;抑制素A、激活素A表达水平的降低在流产发生过程中具有重要作用。     

抑制素B对卵巢储备功能的预测作用

目的研究行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的患者血清及卵泡液中抑制素B（INHB）与获卵数及卵巢储备功能之间的关系。方法用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测72例因输卵管因素行IVF-ET患者（72个周期）卵泡早期（月经第3天）、卵泡中期、人绒毛膜促性腺激素（hCG）日、取卵日（OPU日）、胚胎移植日（ET日）和胚胎移植后3 d（ET＋3日）血清中及OPU日卵泡液内INHB水平,了解INHB在IVF-ET中的动态变化以及它们与获卵数和卵巢储备功能之间的关系。结果 IVF-ET过程中,血清INHB水平自卵泡早期迅速升高,在卵泡中期达峰值,随后逐渐下降,不同时期血清INHB水平差异均具有高度统计学意义（均P〈0.01）;在超促排卵（COH）过程中,取卵前各个时期的血清INHB水平均随着获卵数的增加而明显升高（均P〈0.05）,卵泡液INHB水平与获卵数无相关性（P〉0.05）。结论在IVF-ET助孕过程中,INHB主要通过内分泌方式在卵泡期参与生殖调节,COH各个时期的血清INHB水平都能反映卵巢的储备功能,COH前的基础血清INHB水平和卵泡中期血清INHB水平对获卵数及卵巢储备功能具有相似的预测价值,尤其是基础血清INHB可以作为独立的、最早的卵巢储备功能预测因子。     

抑制素A和抑制素B对卵巢早衰的诊断价值研究

目的:研究抑制素A和抑制素B对卵巢早衰的诊断价值。方法:选取我院2010年1月～2011年1月妇产科门诊及病房卵巢早衰患者22例及卵巢功能正常的女性志愿者20例进行研究。检测42例研究对象的抑制素A、抑制素B、FSH及E2的水平。结果:在卵巢早衰组和正常组之间具有可比性的前提下发现:两组间INHAI、NHB、FSH以及E2的差异均具有统计学意义(P<0.05)。其中:对照组INHAI、NHB及FSH的水平比卵巢早衰组低,对照组E2的水平比卵巢早衰组高。抑制素单独及联合指标对于卵巢早衰均具有良好的诊断价值。结论:INHA和INHB对卵巢早衰具有一定的诊断价值,INHA/INHB的诊断价值最高。     

激活素A、抑制素A与子痫前期发病的研究进展

激活素A(activin A)和抑制素A(inhibin A)均为二聚体糖蛋白,属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族。妊娠期间,主要来源于胎儿-胎盘单位,对胎盘滋养细胞的分化和浸润功能有明显的调节作用。近来发现,激活素A和抑制素A可能在子痫前期发病中起重要作用,本文就其研究进展简要综述。     

促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养中的应用

目的 评价卵泡刺激素和人绒毛膜促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养过程中的应用价值。方法 收集控制性超促排卵周期行单精子显微注射(ICSI)过程中得到的未成熟卵母细胞(MⅠ期和GV期), 随机分为加促性腺激素培养组和不加促性腺激素培养组, 培养24~28 h后成熟卵母细胞进行ICSI授精, 并观察胚胎发育情况, 记录成熟率、受精率、卵裂率和优胚率。结果 对于MⅠ期卵母细胞, 是否使用促性腺激素不影响其24 h成熟率、受精率、分裂率和优胚率(P>0.05)。对于GV期卵母细胞, 培养液中加入促性腺激素能提高优质胚胎率(31.3% vs 4.2%, P<0.05), 但两组的成熟率、受精率和卵裂率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 控制性超促排卵中获得的未成熟卵母细胞进一步体外培养, 无论是否添加促性腺激素都可自然成熟, 在GV期卵母细胞的体外培养过程加入促性腺激素可获得更高的优胚率。     

卵母细胞体外成熟评价标准的改良研究

目的探讨改良式人未成熟卵母细胞评分标准的可行性和颗粒细胞指标的合理性及其对卵子发育潜能的影响。方法体外培养卵丘-卵母细胞复合体,按改良式人未成熟卵母细胞评分标准,将未成熟卵母细胞分为优质卵和非优质卵,对成熟卵母细胞进行受精,并对胚胎进行评价;用琼脂糖凝胶电泳检测两类卵的颗粒细胞凋亡。结果优质卵的成熟率、卵裂率和优质胚胎率都优于非优质卵,优质卵成熟数和优质胚胎数与非优质卵比较差异有统计学意义（P<0.01）;非优质卵其卵丘细胞DNA凝胶电泳后形成明显DNA 梯带,凋亡程度高于优质卵的卵丘细胞。 结论改良式人未成熟卵母细胞评分标准在临床上具有可行性。     

PCR技术在鼠肺支原体检测中应用的初步研究

目的　研究不同培养条件对小鼠卵母细胞体外成熟及体外受精率的影响。方法　小鼠卵母细胞分别在含有FSH、BSA和胰岛素的培养液中体外成熟,在Whitten 氏液中体外受精,比较体外成熟率、体外受精率。结果　1- 裸卵(DO) 的体外成熟率、体外受精率(81-4% ,31-0 % ) 均高于卵丘卵母细胞复合体(COC)(48-6 % ,27-1% ) 。2- 在培养液中添加FSH、胰岛素和BSA,卵母细胞的体外成熟率为77-9 % ,82-3% 、60-7% ;体外受精率为77-2 % 、72-6 % 、26-7% ;2 - 细胞率为49-2 % 、34-2 % 、10-0% 。胰岛素组的卵母细胞IVM 率最高,但IVF率、2 - 细胞率低于FSH 组。3- 添加BSA的两组的体外受精率只有26-7 % 、25-8 % ,显著低于其他组,其体外成熟率也较添加FSH 和胰岛素的组成。4- 排出第一极体(PbI) 的卵母细胞的体外受精率和2 - 细胞率(85-9 % ,22-4% ) 均高于GV期卵母细胞(71-1 % ,12-9 % ) 。结论　1- 卵丘卵母细胞(COC) 较裸卵(DO) 的体外成熟率、体外受精率都低,差异显著(P成熟< 0-01;P受精< 0-05) 。2-FSH 和胰岛素均能提高小鼠卵母细胞的体外成熟率、体外受精率。3-BSA可以降低小鼠卵母细胞体外受精率,差异极显著。4-GV 期卵母细胞的体外受精率显著低于体外培养的排出第一极体的卵母细胞(P2 - cell < 0-05,P受精<0-05)     

激活素A与肝纤维化的相关性探讨

目的:进一步探讨激活素A(activinA,ACTA)与肝纤维化的关系。方法:采用ELISA法测定112例各种病毒性肝炎患者及20例健康对照者血清ACTA、透明质酸(HA)及Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平,通过比较各组病毒性肝炎之间及健康对照组血清ACTA、HA、PCⅢ水平差异进行统计分析。结果:血清ACTA、HA、PCⅢ水平,从慢性肝炎轻、中度患者开始明显升高,以慢性重度、肝硬化组为最高,与其他两组比较有统计学意义(P<0.01),其升高程度与肝纤维化及肝病严重程度呈正相关。结论:动态检测血清ACTA、HA、PCⅢ水平可以做为反映慢性肝病肝纤维化程度和预后的指标。     

高尔基体对小鼠卵母细胞体外发育进程的影响

目的初步探讨高尔基体在小鼠卵母细胞体外发育进程中的作用。方法布雷菲德菌素A（Brefeldin A，BFA）处理小鼠未成熟，成熟卵母细胞，利用特异性标记物阻COP标记高尔基体。激光扫描共聚焦显微镜观察BFA处理对高尔基体产生的影响；同时。观察并比较不同处理组小鼠未成熟／成熟卵母细胞的体外成熟率、孤雌激活率、体外受精率及2-细胞率。结果GV期卵母细胞经BFA处理后，高尔基体的形态和分布发生明显改变。其体外成熟率（2．5％）与对照组（70．4％）比较统计学差异显著（P〈0．001）；洗掉BFA后，其体外成熟率（67．2％）与对照组无统计学差异（P〉0．05）。另外，成熟卵母细胞经BFA处理后。其体外受精率及2．细胞率均与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论小鼠卵母细胞体外成熟的正常进行需要高尔基体主导的膜运输。而体外受精和受精卵卵裂过程中不需要功能性的高尔基体。