ω-3多不饱和脂肪酸对脂多糖所致新生大鼠脑损伤Toll-NF-κB信号通路调节作用

目的 探讨ω-3 PUFAs在脂多糖(LPS)诱导的新生大鼠脑损伤中对TLR4、NF-κB信号通路的调节作用。方法 将96只SD新生大鼠按随机数字法分为对照组,ω-3组,ω-6组和LPS组。4组大鼠分别采用生理盐水或LPS腹腔注射后,立即注射生理盐水或不同的脂肪乳剂,使用时间分别为1天或5天,建立感染所致新生大鼠脑损伤模型;1天或5天后处死新生大鼠,检测TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和对应蛋白水平的变化。结果 LPS注射后的第1天、第5天,新生大鼠TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及其对应的蛋白水平均明显高于对照组(P均＜0.05)。1 d 时ω-3组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及其对应的蛋白水平均低于ω-6组和LPS组(P均＜0.05)。5 d时ω-3组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及其对应的蛋白水平均低于ω-6组和LPS组(P均＜0.05)。不论第1 d和第5 d,ω-3 PUFAs均可明显降低TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及其对应的蛋白水平(P均＜0.05);而ω-6 PUFAs能提高TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及对应的蛋白水平(P均＜0.05)。结论 ω-3 PUFAs 能下调 TLR4、NF-κB活性,在LPS所致的脑损伤中具有抗炎作用。     

miR-199b-5p在骨肉瘤中的预测和诊断作用

目的 探索miR-199b-5p在骨肉瘤中的预测和诊断作用。方法 运用RT-PCR方法检测骨肉瘤患者组织中miR-199b-5p和DRAM的表达水平;利用生物信息学预测工具预测miR-199b-5p的靶基因;分析DRAM与miR-199b-5p的表达关系。结果 miR-199b-5p在组织中有表达,和癌旁正常组织相比,肿瘤组织中的miR-199b-5p表达水平显著升高(P < 0.05);miR-199b-5p与患者的性别、发病年龄、病变部位、肿瘤分型和分期无明显关系(P > 0.05)。研究还发现DRAM在各种组织中均有表达,而DRAM mRNA表达在两者中无明显差异,DRAM与miR-199b-5p呈负相关的表达关系。结论 本研究表明miR-199b-5p可以作为骨肉瘤一个诊断标志物,而DRAM可能是miR-199b-5p的调控靶基因。     

登革病毒诱导人单核细胞miR-146a表达的机制研究

目的 探究登革病毒感染引起miR-146a高表达所依赖的天然免疫信号通路。方法 通过RNAi技术沉默登革病毒感染后激活的信号通路的上游蛋白,或采用信号分子抑制剂阻断登革病毒感染后激活的信号通路的下游因子,然后通过real-time PCR检测miR-146a的表达变化。 结果 DENV2感染引起的miR-146a的表达沉默IPS-1后减少了60%,而TLR3的沉默对miR-146a的表达无影响;采用特异性的抑制剂抑制NF-κB、IKK、p38和JNK后均可下调miR-146a的表达,而ERK的抑制对miR-146a的表达无明显影响。 结论 登革病毒感染诱导miR-146a的表达依赖于上游RIG-I/MDA5-IPS-1以及下游的p38、IKK/JNK和NF-κB,而不依赖于上游的TLR3和下游的ERK。miR-146a可能成为预防和治疗登革病毒感染的一个新靶标,最终为临床治疗和预防登革出血热提供一个新的视野。     

NF-κBp65对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子表达的影响

目的 探讨核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65, NF-κB p65)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子的表达影响。 方法 将肺泡上皮细胞分为4组,依次为对照组、感染组、干扰组、阴性对照组(NC组),其中感染组、干扰组和NC组用肺炎链球菌处理细胞,干扰组和NC组分别为转染NF-κB p65小干扰RNA(siRNA NF-κB p65)和阴性对照序列(siRNA control)后的细胞,对照组不做处理。ELISA法检测细胞培养液上清中的白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-6(IL-6)含量,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测细胞中NF-κB p65水平,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。 结果 感染组和NC组NF-κB p65水平、IL-6含量、细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显高于对照组,而IL-10水平明显低于对照组(P<0.01)。干扰组细胞中NF-κB p65水平、IL-6含量、细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显低于感染组(P<0.01),而IL-10水平明显高于感染组(P<0.01)。 结论 NF-κB p65能够抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子的表达,作用机制可能与Cleaved Caspase-3、Bax水平有关。     

下调Toll样受体4 mRNA 对手足口病模型乳鼠树突状细胞的影响及作用机制研究

目的 分析下调Toll样受体4(TLR4)mRNA对手足口病(HFMD)模型乳鼠树突状细胞的影响及作用机制,为手足口病防治提供依据。方法 选取45只SPF级12日龄BALB/c乳鼠,分离并培养树突状细胞,设计合成TLR4 siRNA序列并做细胞感染。建立手足口病模型,分为模型组、下调组、上调组各15只,下调组乳鼠腹腔注射下调TLR4基因的树突状细胞,上调组腹腔注射上调TLR4基因的树突状细胞,模型组腹腔注射等量灭菌用水。检测三组乳鼠树突状细胞增殖、凋亡,血清白介素-6(IL-6)、白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白表达量,并进行比较。结果 下调组不同时间点树突状细胞增殖率低于上调组(t=20.160、19.050、55.380,P＜0.001);下调组不同时间点树突状细胞凋亡率高于上调组(t=34.740、84.570、48.020,P＜0.001)。下调组血清IL-6、IL-12、TNF-α水平低于上调组(t=39.330、12.660、33.690,P＜0.001)。下调组树突状细胞p-p38MAPK、p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达量低于上调组(t=33.690、17.470、27.800,P＜0.001)。结论 下调TLR4 mRNA经抑制MAPK通路活化,调控通路蛋白,下调IL-6、IL-12、TNF-α表达,促进手足口病乳鼠树突状细胞凋亡,可以为手足口病防治提供新思路。     

生长抑素对内毒素诱导感染性休克大鼠肺损伤的保护作用

目的基于Toll-样受体4/核因子кB(TLR4/NF-κB p65)信号通路探讨生长抑素(SST)对内毒素诱导感染性休克大鼠肺损伤的保护作用。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组[10 mg/kg脂多糖(LPS)]、BAY11-7082组(LPS+10 mg/kg BAY11-7082)、SST组(LPS+22μg/kg SST)和SST+BAY11-7082(LPS+SST)组各12只。注射LPS后12 h,检测各组大鼠肺组织病理变化和细胞凋亡、肺组织湿/干质量(W/D)比值、LPS、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TLR4、髓样分化蛋白抗原(MyD88)、p65、磷酸化的NF-кB抑制蛋白(p-IκB)和裂解天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cleaved Caspase)-3表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织W/D比值和细胞凋亡率升高,LPS、IL-6、IL-10和TNF-α水平升高,TLR4、MyD88、p65、p-IκB和cleaved Caspase-3表达升高(P0.05);与模型组比较,BAY11-7082组和SST组肺组织病理学评分、W/D比值和细胞凋亡率降低,LPS、IL-6和TNF-α水平下降,IL-10水平升高(P0.05),TLR4、MyD88、p65、p-IκB和cleaved Caspase-3蛋白表达下降(P0.05);与SST组比较,SST+BAY11-7082组肺组织病理学评分、W/D比值和细胞凋亡率降低,LPS、IL-6和TNF-α水平下降,IL-10水平升高,TLR4、MyD88、p65、p-IκB和cleaved Caspase-3蛋白表达下降(P0.05)。结论 SST可以抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低肺组织炎症反应,减轻内毒素诱导感染性休克大鼠肺损伤。     

常压高氧对孤独症模型鼠学习记忆及海马CA1区NF-κB阳性神经元表达的影响

目的 探讨常压高氧对丙戊酸钠(valproic acid, VPA)孤独症模型鼠学习记忆能力及海马CA1区NF-κB阳性神经元表达水平的影响。方法 按Schneider方法制作VPA孤独症动物模型, 随机选取24只分为常压高氧模型组、模型对照组;随机选取同期Wistar孕鼠腹腔注射等量生理盐水后所产下的子代雄鼠作为正常对照组(每组12只)。采用Y型电迷宫测试大鼠学习记忆能力;采用免疫组化和图像分析技术检测模型鼠海马CA1区NF-κB阳性神经元表达水平。结果 常压高氧模型组治疗后大鼠学习记忆能力提高, 表现为Y型电迷宫检测尝试次数减少(31.08±0.99 vs 31.67±0.89, t=2.887, P=0.015), 再现次数增加(3.02±0.67 vs 2.62±0.52, t=-2.379, P=0.036);模型对照组与正常对照组比较, 海马CA1区NF-κB阳性细胞数增加(4.67±1.58 vs 3.00±1.54, t=2.639, P=0.015);常压高氧模型组与模型对照组比较, 海马CA1区NF-κB阳性细胞数减少(3.17±1.27 vs 4.67±1.58, t=2.588, P=0.017)。结论 孤独症的发病可能与海马CA1区NF-κB阳性神经元的表达水平有关, 常压高氧干预可降低模型鼠海马CA1区NF-κB阳性神经元的表达水平, 并改善模型鼠的学习记忆能力。     

脑源性神经营养因子对皮质酮诱导新生大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的 探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)对皮质酮诱导新生大鼠海马神经元凋亡的保护作用。 方法 原代培养新生大鼠海马神经元,并分成对照组、皮质酮组、皮质酮+BDNF组,皮质酮造模浓度为100 μM,分别采用浓度为0.1、1、10、25、50、100 ng/ml的BDNF干预,造模及干预时间均为24 h。CCK8法测定细胞活力,分析BDNF的最佳作用浓度,流式细胞术和 Hoechst荧光染色检测细胞的凋亡情况,免疫印迹(Western-blotting)法检测细胞Caspase-3、Caspase-9的表达水平。 结果 与对照组比较,皮质酮组神经元凋亡率由(10.7±1.2)%上升为(33.9±3.5)%(t=18.707,P<0.01),胞体透亮,部分细胞核碎裂,凋亡特征明显,Caspase-3、Caspase-9表达显著上调(t₁=27.098,P₁＜0.01;t₂=24.311,P₂＜0.01);BDNF作用后,细胞活力显著上升,在浓度为1 ng/ml时与皮质酮组比较差异有统计学意义(t=3.562,P＜0.05),分析得出BDNF最佳浓度为48 ng/ml;BDNF(48 ng/ml)干预完成后,细胞凋亡率较皮质酮组下降至(18.7±2.1)%,差异有统计学意义(t=11.478,P＜0.01),细胞形态基本恢复正常,Caspase-3、Caspase-9表达明显下调(t₁=17.341,P₁=0.002;t₂=14.993,P₂=0.005)。 结论 BDNF能有效拮抗皮质酮诱导的海马神经元凋亡,保护神经元细胞。     

氟对原代培养大鼠海马细胞周期及细胞凋亡和核因子-κB表达的影响

目的 探讨氟对原代大鼠海马细胞存活、细胞周期、凋亡和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 原代培养大鼠海马细胞分别暴露于20、40和80μg/ml氟化钠24 h后,采用噻唑蓝(MTT)、流式细胞术(FCM)、逆转录PCR(RT-PCR)分别检测大鼠海马细胞存活情况、细胞周期分布、凋亡率、NF-κB表达水平.结果 与对照组比较,80 μg/ml剂量组海马细胞存活率下降(P＜0.05);40、80 μg/ml剂量组凋亡率和S期细胞百分率皆显著高于对照组(P＜0.05),各剂量组NF-κB mRNA显著高于对照组(P＜0.05).结论 一定剂量氟可抑制海马细胞存活,诱导NF-κB mRNA表达和凋亡发生.氟对发育中海马细胞NF-κB表达水平的影响可能是氟神经毒性的机制之一.     

番茄红素对β-淀粉样蛋白诱导的脉络丛上皮细胞炎症损伤及TLR4信号通路的作用

目的探讨番茄红素对β-淀粉样蛋白诱导脉络丛上皮细胞炎症损伤的保护作用及可能机制。方法成年健康清洁级雄性SD大鼠40只,体质量(250±18.7g),随机分为空白对照、阿尔茨海默病(AD)模型、阿尔茨渊默病(AD)+番茄红素Ⅰ[ig.5 mg/(kg·d)]、AD+番茄红素Ⅱ[ig.10mg/(kg·d)]、番茄红素[ig.10mg/(kg·d)]共5组,每组8只。适应性饲养1w后,采用脑立体定位仪将8μg凝聚态Aβ1-42注入双侧大鼠海马区,建立AD动物模型。三个干预组连续灌胃番茄红素40 d,1/d。在造模后的第2、3、4、5w末进行水迷宫实验,评估大鼠学习记忆力。实验结束后,处死动物取血离心,ELISA法测定血清中TNF-α、IL-1β及IL-6β含量。RT-q PCR、Western blot法检测脉络丛上皮TLR4、NF-κB p65 mRNA、蛋白表达及海马神经元PS-1、β-APP mRNA、蛋白表达。结果神经行为结果显示,AD组大鼠平均逃逸时间及靶象限活动时间显著高于空白对照组(P0.05),而番茄红素干预后,显著低于AD组(P0.05)。血清中TNF-α、IL-1β及IL-6β含量结果显示,AD组大鼠TNF-α、IL-1β及IL-6β含量显著高于空白对照组(P0.05),而番茄红素干预后,TNF-α、IL-1β及IL-6β含量显著降低(P0.05)。脉络丛上皮TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达结果显示,AD组大鼠TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达显著高于空白对照组(P0.05),而番茄红素干预后TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达显著低于AD组(P0.05)。海马神经元PS-1、β-APP mRNA及蛋白表达结果显示,AD组海马神经元PS-1、β-APP mRNA及蛋白表达显著高于空白对照组(P0.05),而番茄红素干预后海马PS-1、β-APP mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:番茄红素对β-淀粉样蛋白诱导脉络丛上皮炎症损伤有一定的保护作用,其作用机制可能通过脉络丛上皮TLR4信号通路,抑制炎症介质的产生,缓解AD的病理进程。     

MiR-223-3p通过靶向NLRP3对坏死性小肠结肠炎新生大鼠肠组织的炎症反应和细胞损伤的影响

目的 探究microRNA-223-3p(MiR-223-3p)对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠肠组织的炎症反应和细胞损伤的影响及可能的机制。方法 构建新生大鼠NEC模型,随机分为NEC组、阴性对照组、MiR-223-3p过表达组,每组20只。另取相同数量正常大鼠作为正常组。苏木精-伊红(HE)染色、TUNEL染色检测肠组织病理学变化和细胞凋亡情况;ELISA法检测血清和肠组织中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;SYBR Green I实时荧光定量PCR法检测肠组织中MiR-223-3p表达;Western Blot检测肠组织中NLRP3和caspase-1蛋白表达情况。双荧光素酶报告基因实验验证MiR-223-3p与NLRP3是否存在靶向关系。结果 与正常组比较,NEC组和阴性对照组大鼠血清及肠组织中IL-6、IL-1β、IL-18含量明显升高(F=215.525、276.499、354.826、204.410、261.474、280.667,P<0.05),肠组织中NLRP3和caspase-1蛋白表达及细胞凋...     

核因子-κB、p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B),p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法应用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western Blot的方法分析NFκ-B、p53、Bcl-2基因的表达情况,研究醋酸铅诱导PC12细胞凋亡及其分子机理。结果PC12细胞经不同浓度醋酸铅(100、200和400μmol/L)处理24h后,用流式细胞仪检测其凋亡率(n=3),铅组凋亡率明显高于对照组,改变呈剂量依赖性。差异有显著性(P<0.05)。RT-PCR结果显示NFκ-B p65 mRNA、p53 mRNA转录水平随铅剂量升高而升高(P<0.05),两基因表达的改变呈剂量依赖性。Western Blot结果显示,表明随着铅浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低。结论铅诱导PC12细胞凋亡的这种效应可能与增强NFκ-B及p53基因的活性、降低Bcl-2基因的活性有关。     

丰富环境对孕期慢性应激所致子鼠学习能力影响的干预机制研究

目的 从子鼠海马中核转录因子NF-κB的变化,来探讨丰富环境对孕期慢性应激子鼠学习能力的干预机制。方法 建立孕期慢性应激大鼠模型,并采用丰富环境干预子鼠,利用水迷宫和Y-迷宫测定子鼠学习记忆能力、RT-PCR和Western Blotting测定海马中 NF-κB表达情况。结果 模型组母鼠皮质酮增高,提示模型组大鼠处于应激状态。丰富环境后,子鼠血浆皮质酮降低 (P<0.05);水迷宫中逃避潜伏期和跨平台次数、Y-迷宫中所需的训练次数和正确反应率情况均转好(P均<0.05);模型子鼠组海马 NF-κB表达增高(P均<0.05)。结论 丰富环境可以提高孕期受到应激因素影响的学习能力,与血浆皮质酮降低及海马NF-κB升高有关。     

CTRP9抑制幼年哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖和炎性反应的研究

目的 研究C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)对哮喘幼鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖和气道炎症的作用。方法 ELISA检测正常、哮喘儿童和小鼠血清中CTRP9含量;原代培养哮喘小鼠ASMCs,经pcDNA3.1-CTRP9转染后,MTT检测ASMCs增殖,ELISA测定TNF-α和IL-6含量,Western 印记检测TLR4和NF-κB p65蛋白表达以及NF-κB p65磷酸化水平;pcDNA3.1-CTRP9转染哮喘小鼠,HE染色观察肺组织炎性细胞的浸润程度;收集小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),光镜下检测嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和中性粒细胞数目;检测小鼠肺部TNF-α、IL-6、TLR4和NF-κB的表达。结果 哮喘儿童和小鼠血清中CTRP9含量低于正常组;CTRP9能抑制ASMCs增殖、炎症因子分泌和TLR4/NF-κB通路活化;CTRP9也能抑制哮喘小鼠肺部炎性细胞浸润、各炎性反应细胞数目、炎症因子分泌和TLR4/NF-κB通路活化。结论 CTRP9能抑制幼年哮喘小鼠ASMCs增殖和炎性反应。     

HMGB1 - TLR9 - MyD88 - TRAF6 - NF - κB信号通路在急性胰腺炎肠粘膜屏障损伤中的作用

目的 探讨雨蛙素和脂多糖诱导的小鼠重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis, SAP）模型中肠道粘膜屏障损伤的机制。方法 采用雨蛙素和脂多糖诱导小鼠SAP模型。将雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组和SAP组,每组12只。每组分为6 h和12 h两个时间点。HE染色观察胰腺及回肠病理学,ELISA法检测TNF - α、IL - 1β、IL - 6、DAO和EndoCAb的表达水平,Western blot检测HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6、NF - κB p65、p - NF - κB p65和occludin表达水平,TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡情况。采用单因素方差分析比较不同处理组之间的结果,组间差异进一步采用LSD - t多重比较。结果 与对照组相比,SAP组血清中 IL - 1β、IL - 6、TNF - α、DAO 和EndoCAb水平升高（F = 104.50,P＜0.05;F = 140.36,P＜0.05;F = 328.21,P＜0.05;F = 372.23,P＜0.05;F = 80.67,P＜0.05）;HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6和p - NF - κB p65蛋白表达升高（F = 65.95,P＜0.05;F = 84.16,P＜0.05;F = 58.27,P＜0.05;F = 122.26,P＜0.05;F = 178.38,P＜0.05）,occludin的表达降低（F = 456.91,P＜0.05）、小鼠肠上皮细胞凋亡增加(F = 400.47,P＜0.05)。与12 h SAP组相比,6 h SAP组血清IL - 1β、IL - 6和TNF - α水平及p - NF - κB p65蛋白表达升高更明显(ｔ = 4.95,P＜0.05;ｔ = 4.57,P＜0.05;ｔ = 3.32,P＜0.05;ｔ =2.93,P＜0.05)。与6 h SAP组相比,12 h SAP组回肠组织中occludin水平降低更明显（ｔ = - 3.52,P＜0.05）,血清DAO、EndoCAb水平、HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6蛋白表达水平更高（ｔ=6.55,P＜0.05;ｔ = 4.96,P＜0.05;ｔ = 6.88,P＜0.05;ｔ = 8.52,P＜0.05;ｔ = 7.37,P＜0.05;ｔ = 7.78,P＜0.05）,肠上皮细胞出现细胞凋亡更明显 (ｔ = 3.10,P＜0.05)。结论 HMGB1 - TLR9 - MyD88 - TRAF6 - NF - κB信号通路可能参与了SAP肠粘膜屏障损伤。     

脯氨酸二硫代氨基甲酸酯减轻新生大鼠缺氧缺血脑细胞凋亡的作用及机制

目的:细胞凋亡在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的发病机制中起重要作用,通过观察缺氧缺血后凋亡通路上关键成分核因子-κappaB(NF-κB)表达的变化,探讨脯氨酸二硫代氨基甲酸酯减轻新生大鼠脑细胞凋亡的作用及机制。方法:72只7日龄SD大鼠随机分为假手术组、HIBD组、PDTC预处理组(n=24)。各组再随机分为HI 6 h、24 h组(n=12)。结扎大鼠左颈总动脉后行8%低氧暴露制备新生大鼠HIBD模型。PDTC组HI前腹腔注射PDTC(50μg.g-1.wt-1)。采用免疫组化检测NF-κB p65的表达;TUNEL法检测脑细胞凋亡。结果:假手术组左侧海马神经元NF-κB活化和凋亡阳性细胞数极少;缺氧缺血性脑损伤后海马神经元NF-κB活化和凋亡阳性细胞持续增加至HI 24 h(P<0.01或P<0.001);PDTC干预组NF-κB活化和凋亡细胞数均较HIBD组下降(P<0.05或P<0.01)。结论:PDTC预处理可能通过抑制NF-κB过度活化来减少脑细胞凋亡,对新生大鼠缺氧缺血性脑细胞产生保护作用。