细胞因子诱导的杀伤细胞免疫治疗的研究进展

过继免疫细胞治疗作为一种新的方法已用于常规治疗无效的实体肿瘤,在肿瘤的治疗中有着巨大的应用潜力。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)是人外周血单个核细胞经多种细胞因子体外扩增所得的一群异质细胞。CIK兼有T淋巴细胞的强大抗瘤活性和自然杀伤细胞(natural killer cells,NK)非主要组织相容性复合体(major histochompatibility complex,MHC)限制杀瘤特点,对多种实体肿瘤有较好的疗效。本文就CIK细胞的生物学特点、杀瘤机制及其临床疗效的最新进展进行综述。     

特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤效应

目的检测特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效应。方法采用肿瘤抗原致敏的DC与CIK细胞共培养,分析其免疫表型,并用MTT染色法检测其对肿瘤细胞的杀伤力。结果所获得DC-CIK细胞的CD3异质性T细胞群,对肾透明细胞癌786-0和前列腺癌PC-3细胞的杀伤率分别为70.64%和65.65%。结论DC-CIK细胞对肾透明细胞癌786-0细胞和前列腺癌PC-3细胞具有较强的杀伤效应。     

两种脉冲喷吹袋除尘器在窑头应用的比较

随着环保要求越来越高,袋除尘器在窑头得到了广泛应用,本文通过我院在金隅集团（河北）的两条4 000t/d生产线窑头分别采用的气箱脉冲袋除尘器（以下简称气箱除尘器）和低压长袋脉冲喷吹袋除尘器（以下简称脉喷除尘器）的应用效果进行比较,说明气箱脉冲袋除尘器在窑头应用具有优势。     

黄莲提取液对人神经胶质瘤细胞体外增殖的影响及其作用机制

目的探讨黄莲提取液对人神经胶质瘤细胞(C6)体外增殖的影响及其可能的作用机制。方法用10、20、40、60μl/ml的黄连提取液分别作用C6细胞48 h后,倒置显微镜下观察C6细胞形态;作用24、48、72 h后,MTT法检测黄莲提取液对C6细胞体外增殖的影响。用40μl/ml的黄连提取液分别作用C6细胞0、20、40及60 min后,Western blot法分析C6细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果倒置显微镜下观察可见,随着黄莲提取液浓度的升高,坏死细胞的数量逐渐增多;40μl/ml黄莲提取液作用48 h时的抑制率显著高于10及20μl/ml浓度组(P0.05),与60μl/ml浓度组差异无统计学意义(P0.05);C6细胞中Bax蛋白表达水平随黄莲提取液作用时间的延长而上升(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平随黄莲提取液作用时间的延长而下降(P0.05)。结论黄莲提取液对C6细胞的增殖具有显著的抑制作用,且可能是通过Bcl-2途径实现的。     

CD1d融合蛋白的表达及其在自然杀伤T细胞原代培养中的作用

目的 构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)-CD1d-hIgG1-BriAtag,建立稳定表达CD1d融合蛋白的细胞系,并检测该蛋白对体外培养人原代自然杀伤T(natural killing T,NKT)细胞的活化刺激功能,为肿瘤过继性免疫治疗提供新方法.方法 从健康人外周血提取CD1d全长基因作为目的DNA片段...     

干扰素诱导跨膜蛋白2对脑心肌炎病毒体外增殖的影响

目的 探讨干扰素诱导跨膜蛋白2(interferon induced transmembrane proteins 2,IFITM2)对脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)体外增殖的影响.方法 将重组表达质粒pcDNA3.1-IFITM2及靶向IFITM2的siRNA序列分别转...     

姜黄素对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

目的探讨姜黄素(Curcumin)对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法将Hep-2细胞用含不同浓度姜黄素(3、6、12.5、25μmol/L)的培养基分别培养24和48h,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响;台盼蓝染色法检测其对细胞活力的影响;流式细胞术检测其对细胞周期分布及细胞凋亡的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳检测其对细胞DNA的影响。结果姜黄素可明显抑制Hep-2细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性;可明显降低细胞活力,且呈剂量依赖性;可使细胞阻滞在G2/M期,并诱导细胞出现典型的凋亡峰,凋亡率呈时间-剂量依赖性;能使细胞DNA形成典型的DNA-Ladder。结论姜黄素对人喉癌Hep-2细胞增殖及细胞活力具有显著的抑制作用,并能诱导Hep-2细胞发生凋亡。     

白藜芦醇对人髓母细胞瘤细胞Daoy增殖的影响及其作用机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)Daoy细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法体外培养Daoy细胞,用不同浓度的Res(10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48和72 h),CCK-8法检测Res对Daoy细胞的增殖抑制率;电镜观察Res对细胞内自噬溶酶体的形成情况;Cathepsin D活性检测试剂盒检测Cathepsin D活性;Western blot法检测Daoy细胞中Beclin 1、LC3、p62和溶酶体相关膜蛋白2(lysosomeassociated membrane proteins 2,LAMP2)的表达及3-甲基腺嘌呤(3-MA)和巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1)对Res作用的影响。结果 Res作用后,Daoy细胞的增殖抑制率随Res浓度的升高及作用时间的延长呈升高趋势;随着Res浓度的升高,Daoy细胞内自噬溶酶体形成数量、Cathepsin D酶活性、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值、Beclin 1、LAMP2蛋白的表达均呈上升趋势,p62蛋白表达下降。3-MA作用后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值、Beclin 1、LAMP2的蛋白表达水平明显下降(P <0. 05),p62的表达水平明显上调(P <0. 05);Bafilomycin A1处理后,Beclin 1、p62及LAMP2表达明显降低(P <0. 05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值明显增高(P <0. 05)。结论 Res可抑制髓母细胞瘤细胞Daoy的增殖,其机制可能与Res促进自噬形成与成熟过程有关。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响:Ⅱ.氨的作用

目的 在无血清培养基中，研究氨对杂交瘤细胞生长代谢的影响。方法 在培养基中添加不同浓度的氨，考察细胞生长和代谢及单抗生成的变化。结果 添加0．8mmol/L）的氨时就对细胞生长和代谢有影响，当氨浓度达4mmol/L时，对细胞的生长代谢有明显的抑制，当培养基中氨浓度高于6mmol/L时，细胞生长停止，代谢受到严重影响。氨的添加降低了培养上清中的单抗浓度，但提高了单抗的比生产速率。结论 氨对细胞生长和代谢有较大的影响，对单抗浓度的影响主要由细胞密度降低造成，单抗的比生产速率增加。     

人参皂苷单体Rb1对人慢性粒白血病细胞K562增殖和分化的影响及其信号转导机制

目的探讨人参皂苷单体Rb1对人慢性粒白血病细胞K562增殖和分化的影响及其细胞内信号转导机制。方法取对数生长期的K562细胞,分别加入不同浓度(20、40、80、160、320μmol/L)的Rb1,MTT法检测其对K562细胞增殖的影响;加入浓度为160μmol/L Rb1,收集培养24、48和72 h的细胞,经Wright染色后,镜下观察Rb1诱导K562细胞成熟分化情况;Western blot法检测培养12、24、48和72 h的细胞中JAK2、STAT5、p-JAK2及p-STAT5的表达水平。结果浓度为20¹60μmol/L的Rb1对K562细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性,作用48 h时抑制率达最高;经Rb1诱导后,K562细胞体积缩小,核直径减小,核和浆的比例降低,细胞向成熟方向分化;JAK2的表达水平随Rb1作用时间的延长而提高,p-JAK2的表达随着作用时间的延长而降低;各组间STAT5蛋白的表达水平无明显变化(P>0.05),但p-STAT5表达于作用48 h时开始降低,并持续至72 h。结论人参皂苷单体Rb1可抑制人慢性粒白血病细胞K562增殖并诱导其向成熟方向分化,JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化在细胞增殖及诱导分化的信号转导过程中发挥重要作用。本实验为治疗白血病天然中药的研发提供了实验依据。     

不同牌号溴化丁基橡胶的结构与性能对比

分析了5种牌号溴化丁基橡胶(BIIR)(2255、2222、2211、2030、BIIR-C)的溴含量,并研究了5种BIIR生胶的门尼黏度和热稳定性及硫化胶的物理机械性能和热稳定性。结果表明,BIIR生胶溴含量从大到小的顺序依次为2255,2222,2211,BIIR-C,2030,门尼黏度从大到小的顺序依次为2255,2222,2211,2030,BIIR-C;生胶热稳定性以及热分解活化能从大到小的顺序依次为2255,2211,BIIR-C,2222,2030;在5种BIIR生胶中,2255具有最大的硫化速率,且其硫化胶具有最优的拉伸强度、扯断伸长率及撕裂强度,2030和BIIR-C硫化胶的撕裂强度较低,且2030的热稳定性最差。     

三七总皂苷对体外培养人牙周膜细胞增殖和分化的影响

目的探讨三七总皂苷对体外培养的人牙周膜细胞(Human periodontal ligament cell,hPDLC)增殖、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性及表达的影响。方法采用组织块法原代培养hPDLC,并经免疫组化鉴定;分别用10、1.0、0.1和0.01 mg/L浓度的三七总皂苷处理体外培养的hPDLC,设只加含10%FBS的DMEM培养基为空白对照,分别于1、3、5、7 d后,MTT法检测其对hPDLC增殖活性的影响,酶标仪上检测细胞中ALP活性,Western blot法检测细胞中ALP蛋白的表达。结果免疫组化结果显示,细胞来源于外胚间充质;MTT结果显示,0.1 mg/L浓度组在第5天和1.0、10 mg/L浓度组在第3、5天hPDLC增殖活性明显高于空白对照组(P<0.01);0.1、1.0、10 mg/L浓度组在第3、5天ALP活性明显高于空白对照组(P<0.01),1.0 mg/L浓度组APL活性明显高于其他各组(P<0.01);0.01、0.1、1.0、10 mg/L浓度组ALP蛋白表达量均明显高于空白对照组(P<0.01),以1.0 mg/L浓度组ALP表达量最高。结论三七总皂苷有促进hPDLC增殖的作用,并能增加ALP活性及其表达水平。     

灭能与未灭能新生牛血清培养细胞效果的比较

目的比较灭能与未灭能新生牛血清培养Vero细胞和MRC-5细胞的效果,为细胞培养的相关研究和生产提供参考。方法分别采用照射剂量为8和16 k Gy的60Coγ-射线及56℃30 min加热灭能新生牛血清,用两种方式灭能的血清及未灭能的新生牛血清培养Vero细胞和MRC-5细胞,显微镜观察细胞的生长情况,计数并计算细胞倍增时间及存活时间。结果未灭能新生牛血清培养的两种细胞增殖更多更快速;热灭能的新生牛血清培养的两种细胞的增殖速度和数量明显低于γ-射线照射灭能及未灭能血清培养的细胞。结论未灭能的新生牛血清比灭能后的血清培养Vero细胞和MRC-5细胞的效果好,其促细胞生长增殖效果最佳。     

不同牌号丁苯橡胶的结构与性能对比

对不同牌号丁苯橡胶的微观结构、分子量及其分布、硫化胶的物理机械性能、混炼胶的硫化特性、压缩永久变形及动态力学性能进行了对比.结果表明,溶聚丁苯橡胶(SSBR)与乳聚丁苯橡胶(ESBR)的乙烯基、反式-1,4-结构及顺式-1,4-结构含量差别较大.SSBR的相对分子质量更高,分子量分布更窄,硫化速率更快,耐磨性能、抗湿滑...     

Sf9细胞的高效扩增及类病毒颗粒高效自组装的培养工艺

目的优化SFX-Insect培养基及类病毒颗粒(virus like particles,VLPs)的自组装培养工艺,提高Sf9细胞的扩增效率及VLPs的自组装效率。方法以SFX-Insect培养基作为基础培养基,添加不同营养物(HyPep~(TM) 1510及葡萄糖),优化培养基。分别在摇瓶及WAVE生物反应器中培养Sf9细胞,同时补加不同倍数(1、2、5、8倍)的补料浓缩液,观察细胞培养效果;将重组戊型肝炎杆状病毒分别加入SFX-Insect及优化培养基培养的Sf9细胞中,分析目的蛋白表达量;根据细胞的不同生长阶段、接毒时是否补料及不同接毒MOI值,将优化培养基培养的Sf9细胞进行分组,分析各组细胞中目的蛋白的表达量并观察VLPs的形成。结果 SFX-Insect基础培养基中同时添加10 g/L葡萄糖和10 g/L HyPep~(TM)1510为Sf9细胞最佳培养基。优化培养基摇瓶培养Sf9细胞,活细胞密度高达2×10~7个/ml以上;在细胞对数生长中后期进行1及2倍补料可延长细胞平台生长期至20 d以上;将摇瓶培养的细胞放大至WAVE生物反应器中培养,密度高达107个/ml以上,且传代培养后,可维持10 d以上的平台生长期。优化培养基培养的Sf9细胞目的蛋白的表达量比SFX-Insect培养基提高了6倍;优化培养基培养Sf9细胞至对数生长中前期,进行补料接毒(MOI=2),VLPs的组装效率大幅提高,镜下可见形态均一的VLPs。结论成功优化了SFX-Insect培养基及VLPs的自组装培养工艺,提高了Sf9细胞的扩增效率及VLPs产量。     

不同牌号三元乙丙橡胶的结构与性能对比

对8个牌号三元乙丙橡胶(EPDM)的微观结构、硫化特性、物理机械性能、耐磨性能及耐老化性能进行了对比.结果表明,EPDM中第3单体亚乙烯基降冰片烯(ENB)质量分数影响了EPDM的硫化速率.8个牌号中EPDM 9950 C的硫化速率最快,EPDM 3722的硫化速率最慢;充油胶EPDM 3666的硫化速率与结构类似的E...     

The effect of two synthetic phospholipids on cell proliferation and phosphatidylcholine biosynthesis in Madin-Darby canine kidney cells

The concentration-dependent effects of two different synthetic phospholipids on cell proliferation and phosphatidylcholine biosynthesis were compared in Madin-Darby canine kidney (MDCK) cells. The alkyllysophospholipid 1-O-octadecyl-2-O-methyl-sn-glycero-3-phosphocholine and the alkylphosphocholine, hexadecylphosphocholine, inhibited cell proliferation with half-inhibitory concentrations (IC₅₀) of 75 and 135 μmol/L, respectively. The agents also inhibited phosphatidylcholine biosynthesis in confluent and proliferating MDCK cells. The IC₅₀ of 1-O-octadecyl-2-O-methyl-sn-glycero-3-phosphocholine was 40 μmol/L in confluent cells and 20 μmol/L in proliferating cells, whereas the IC₅₀ of hexadecylphosphocholine was higher in both experimental systems (67 μmol/L in confluent cells and 40 μmol/L in proliferating cells). Further experiments revealed that the effect of both agents on phosphatidylcholine biosynthesis was reversible and that the inhibition was mediated by translocation of the rate-limiting enzyme of this pathway, CTP: phosphocholine cytidylyltransferase (EC 2.7.7.15), from membranes to the cytosol, where it is inactive. The present findings suggest that the inhibition of phosphatidylcholine biosynthesis by both synthetic phospholipids might be related, in part, to their antiproliferative effects.