BMP-2基因给药修复实验性羊股骨头坏死

目的利用人BMP-2基因转染的自体骨髓间充质干细胞复合多孔β-磷酸三钙材料治疗股骨头坏死。方法对22只羊建立股骨头缺血性坏死模型。未治疗组4只;治疗组18只于3周后刮除坏死骨组织,右侧植入BMP-2基因转染的自体骨髓间充质干细胞和多孔磷酸三钙复合物(BMP-2组),左侧植入β-半乳糖苷酶(β-gal,作为对照基因)基因转染的自体骨髓间充质干细胞和多孔磷酸三钙复合物(β-gal组)。植入后第1、2、3周用ELISA方法测定植入局部的BMP-2蛋白表达水平。植入前、植入后6、10、16周取股骨头标本,观察骨长入情况,并对16周标本行骨形态计量学分析和影像学观察。未治疗组动物于造模后16周摄Χ线片行影像学观察。结果植入后1、2、3周BMP-2组在股骨头局部有BMP-2蛋白的高表达,明显高于β-gal组。植入前软骨下骨部位出现大量空骨陷窝,骨髓腔纤维化。植入后6、10、16周BMP-2组均有明显成骨,16周时坏死区被完全修复;β-gal组只有较少新骨形成,16周时坏死区仍多为纤维组织。BMP-2组新骨体积明显大于β-gal组。造模后16周未治疗组双侧股骨头塌陷;植入后16周β-gal组股骨头存在囊状密度减低区;BMP-2组股骨头形态规则,无塌陷。结论BMP-2基因转染的骨髓间充质干细胞与多孔β-磷酸三钙复合后可修复早期股骨头坏死。     

活血通络方加不同引经药对股骨头坏死兔成骨相关因子的影响

目的:观察活血通络方配伍不同引经药对股骨头坏死兔血清骨钙素(BGP)、骨形态发生蛋白-2(BPM-2)含量及股骨头BMP-2mRNA表达的影响,探讨其防治股骨头坏死的作用机制。方法:健康雄性日本大耳白兔98只,体重2.2～2.8kg。84只兔经液氮冷冻左侧股骨头法建立股骨头坏死模型后,随机分为6组,每组14只:模型组,活血通络方组,以及活血通络方分别加牛膝、独活、细辛、桔梗组(分别简称活骨、牛膝、独活、细辛、桔梗组)。另外14只设为伪手术组。造模后药物组分别给予相应的中药,模型和伪手术组给予生理盐水灌胃,所有动物皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(30μg·kg-1·d-1,连续7d)。实验2、4周时分别取材,放射免疫法和酶联免疫法分别检测血清BGP和BMP-2含量,左侧股骨头行苏木精-伊红染色观察组织病理学改变,原位杂交法检测BMP-2mRNA表达。结果:与伪手术组相比,模型组股骨头空骨陷窝率显著增多,2周时血清BGP升高,4周时血清中BMP-2含量及股骨头BMP-2mRNA降低。与模型组相比,活骨组空骨陷窝率降低,2、4周时血清BGP、BMP-2含量及股骨头BMP-2mRNA的表达均升高。与活骨组比较:牛膝组4周时空骨陷窝率显著减少,血清BGP、BMP-2及股骨头BMP-2mRNA升高;桔梗组空骨陷窝有降低趋势,且2、4时周血清BGP降低,2周时血清BMP-2降低,4周时股骨头BMP-2mRNA降低;独活组2周时血清BMP-2含量和股骨头BMP-2mRNA的表达升高;细辛组各项指标未见明显改变。结论:引经药牛膝可以进一步提高活血通络方上调血清BGP、BMP-2含量和股骨头内BMP-2mRNA表达的作用,这可能是其促进骨成有效防治股骨头坏死的机制之一。     

富血小板血浆作为支架材料对脐带组织间充质干细胞移植治疗骨折效果的影响

目的探究脐带组织间充质干细胞(UB-MSCs)联合富血小板血浆(PRP)在骨折愈合过程中的影响效果及作用机制。方法制作股骨骨折大鼠动物模型, 分为模型组及实验组, 正常组为空白对照组, 每组各6只, 实验组于骨折端分别注射PRP、人脐带组织间充质干细胞(hUB-MSCs)及hUB-MSCs+PRP, 分别于治疗后3周和5周进行取材, 通过苏木精-伊红(HE)染色、免疫组织化学染色及蛋白免疫印迹实验, 观察股骨组织愈合情况, 测定骨相关标志物Runx2、血小板源性生长因子-B(PDGF-B)、骨桥蛋白(OPN)、类胰岛素生长因子(IGF)及骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、Smad的表达阳性率, 评估各组骨折愈合情况。结果 HE病理分析, 3周后, 模型组骨折处出现大量松软的纤维组织, hUB-MSCs组可见少量软骨细胞浸润生长, PRP组软骨细胞量较hUB-MSCs组更多, hUB-MSCs+PRP组可见大量软骨细胞浸润生长, 出现排列紊乱、稀疏的新生骨小梁。5周后, 模型组出现少量软骨细胞浸润, hUB-MSCs组软骨细胞明显增多, PRP组股骨骨折处出现新生骨小梁结构, hUB-M...     

hVEGF165基因转染后兔骨髓间充质干细胞蛋白分泌功能及成骨活性的检测

目的:血管内皮细胞生长因子在血管再生和骨组织再生过程中起着重要的调节作用.观察hVEGF-165基因转染的兔骨髓间充质干细胞分泌VEGF的功能及转染后细胞的成骨活性.方法:(1)体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞,纯化并鉴定兔骨髓间充质干细胞;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后以1μgPcDNA3.1-hVEGF165∶3μL阳离子脂质体Lipofectamine的比例转染,通过ELISA和Western-blot检测转染后细胞中外源性VEGF的表达.(2)测定在正常条件培养和成骨条件培养下,转染后细胞上清中碱性磷酸酶、骨钙素的水平.结果:(1)hVEGF165基因转染的骨髓间充质干细胞能成功分泌VEGF蛋白.(2)成骨条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的分泌量明显高于未转染组(P<0 05);而在正常条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的表达分泌量较低.结论:(1)采用基因转染技术可将hVEGF165基因转染到骨髓间充质干细胞中并可有效表达具有生物活性的VEGF.(2)在成骨条件培养下,转染hVEGF165基因后骨髓间充质干细胞的成骨能力增强.     

BMP-2/Smads信号通路促进骨代谢失衡大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化

目的 本研究旨在探讨BMP-2/Smads信号通路对骨代谢失衡大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)成骨分化的影响.方法 切除雌性SD大鼠双侧卵巢,建立大鼠骨代谢失衡模型,即骨质疏松(osteoporosis,OP)模型.通过成骨诱导鉴定rBMSCs的成骨分化.采用脂肪诱导和流式细胞术(FCM)检测脂肪分化和rBMSC表...     

兔骨髓间充质干细胞Runx2基因特异siRNA的设计和 沉默作用

目的探讨应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性抑制兔骨髓间充质干细胞内Runx2基因表达,筛选高效特异性siRNA。方法根据siRNA设计原则,针对Runx2基因序列特征设计Runx2特异siRNA(1-3),转染兔骨髓间充质干细胞,用QPCR和Western blot方法检测siRNA对Runx2基因的抑制效果。结果 Runx2 siRNA-2可有效抑制骨髓间充质干细胞中Runx2基因的表达。随siRNA-2终浓度由50 nmol/L增加到100 nmol/L及200 nmol/L,抑制效率逐渐增强(P0.05);siRNA-2以终浓度200 nmol/L转染后48 h抑制效果最强,72 h逐渐减弱,但仍明显抑制(P0.05)。结论应用RNA干扰技术可抑制骨髓间充质干细胞中Runx2基因的表达,其抑制作用具有明显的时间、浓度依赖性。     

股骨头缺血性坏死骨质含量与VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达的相关性研究

目的坏死骨的血管再生及骨修复能力与VEGF、bFGF与BMP-2多种生长因子关系密切,通过观察股骨颈骨折、创伤性及非创伤性股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of femoral head,ANFH)的股骨头局部上述因子的表达变化,并与其组织病理学的骨质含量指标进行相关性分析,为进一步探讨ANFH的发病机制及临床针对不同病因进行个性化治疗提供实验依据。方法取59例人工全髋关节置换术患者自愿捐赠的股骨头标本进行观察。创伤性ANFH 22例(A组),Ficat分期:Ⅲ期13例,Ⅳ期9例。非创伤性ANFH 19例(B组),Ficat分期:Ⅲ期11例,Ⅳ期8例;其中激素性10例,酒精性7例,原因不明2例。新鲜股骨颈骨折18例(C组)。3组患者性别、年龄等一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。采用双能X线骨密度仪测量股骨头负重区骨密度;大体观察组织病理学改变,HE染色光镜及扫描电镜下观察其病理变化,计算空骨陷窝百分比及骨小梁面积百分比,并采用原位杂交技术分别对其VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达进行检测。结果 A、B组骨密度均低于C组,B组低于A组,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。A、B组股骨头形态不规则,光镜下见坏死区骨小梁稀疏、不完整,有大量空骨陷窝;健存区A组有较多纤维组织增生,B组髓腔内脂肪细胞增生、肥大。扫描电镜示A、B组大多骨细胞脂肪变性、坏死,骨基质内见脂肪细胞增生。C组均呈正常股骨头结构。A、B组空骨陷窝百分比均高于C组,骨小梁面积百分比均低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);A、B组间仅空骨陷窝百分比差异有统计学意义(P<0.05)。A组与B组VEGF、BMP-2、bFGF mRNA阳性染色面积百分比及吸光度(A)值均明显低于C组(P<0.05);A组BMP-2、bFGF mRNA两指标均较B组高(P<0.05),但VEGF mRNA A、B组间差异无统计学意义(P>0.05)。上述各因子表达强度与骨密度、骨小梁面积百分比成正相关,而与空骨陷窝百分比成负相关。结论创伤性ANFH的股骨头修复能力强于非创伤性ANFH,创伤性与非创伤性ANFH股骨头局部VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达均降低。     

干细胞移植和BMP2基因治疗修复骨损伤和坏死的实验研究

目的:根据老年骨缺损和股骨头坏死实验模型的研究结果来评价干细胞移植和BMP2基因治疗的方法是否可用于一些特殊损伤和疾病的治疗.方法:从不同年龄段大鼠、羊骨髓中分离培养骨髓间充质干细胞,利用含BMP-2基因或βal基因的腺病毒载体感染干细胞,通过酶联免疫测定方法检测基因转染细胞培养上清中BMP-2蛋白的含量.利用基因转染细胞和多孔三磷酸钙复合,回植后修复24月龄老年大鼠股骨干6毫米节段性缺损和实验性羊股骨头坏死.通过组织学观察和生物力学测定来评价比较BMP-2治疗组和βgal对照组的新骨形成情况和修复组织的强度.结果:基因转染细胞培养上清中BMP-2蛋白的含量随时间延长而逐渐上升,不同年龄大鼠干细胞BMP-2转染后蛋白质的分泌水平没有明显差异.组织学观察表明BMP-2基因转染细胞和多孔三磷酸钙复合物已成功修复24月龄老年大鼠股骨干6毫米节段性缺损和实验性羊股骨头坏死,BMP-2治疗组的新骨形成明显多于βgal对照组(P＜0.05).治疗后第16周,BMP-2治疗组股骨头修复组织的最大压缩强度和弹性模量也明显高于Bgal对照组(P＜0.05).结论:BMP-2基因转染的自体骨髓间充质干细胞和多孔三磷酸钙复合后回植可有效修复老年大鼠骨缺损并重建羊坏死股骨头的功能.     

骨形态发生蛋白2和富血小板血浆凝胶对兔骨髓间充质干细胞体外成软骨分化的影响

目的观察富血小板血浆(PRP)凝胶及腺病毒介导的骨形态发生蛋白2(BMP-2)基因转染对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外成软骨分化的影响。方法取新西兰大白兔骨髓培养BMSCs,抽取静脉血制备PRP,以Ad-GFP-hBMP-2(BMP-2-BMSCs组)及Ad-GFP(对照组)转染的BMSCs分别与PRP凝胶复合,继续培养。用扫描电镜、MTT检测PRP凝胶的生物相容性,RT-PCR检测各组的Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、蛋白聚糖、SOX-9表达。结果扫描电镜及MTT检测证实PRP凝胶具有良好的生物相容性。RT-PCR分析表明,单层培养的BMP-2-BMSCs组的Ⅱ型胶原、蛋白聚糖和SOX-9的表达水平均高于对照组(P0.05),但Ⅰ型胶原表达水平较对照组明显下降(P0.05),同时Ⅹ型胶原表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P0.05);与PRP复合后,BMP-2-BMSCs组的Ⅱ型胶原、蛋白聚糖和SOX-9表达水平较对照组升高(P0.05),而Ⅰ型胶原和Ⅹ型胶原表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论转染BMP-2的BMSCs在PRP凝胶中生长良好,BMP-2基因转染能促进BMSCs的体外成软骨分化。     

骨髓间充质干细胞和伞状支撑骨移植术治疗股骨头坏死的实验研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞和伞状支撑骨移植术治疗股骨头坏死的疗效.方法 42只山羊用液氮冷冻法建立单侧股骨头坏死模型,8周后分为3组,A组行骨髓间充质干细胞和伞状支撑骨移植术;B组行单纯股方肌骨柱移植术;C组行骨髓间充质干细胞和松质骨移植术.三组的健侧均作为自身正常对照.分别于术后3、6个月行放射学、组织学观察.结果 治疗术后3个月:①X线检查:A组、B组手术侧股骨头外形恢复,囊性低密度区消失,原塌陷已修复,股骨头无再塌陷.A组植骨愈合良好,骨柱影已模糊;B组植骨愈合欠佳,骨柱影仍较清晰.C组手术侧骨修复效果明显较A组、B组差,股骨头轮廓不规则,扁平塌陷,密度不均.②组织学观察:A组骨小梁成熟,排列规则;B组骨小梁幼稚,排列不规则;C组骨小梁变细、稀疏、断裂.A组空骨陷窝计数百分比降低、骨小梁面积分数百分比增高,与B组、C组相比差异有统计学意义(P＜0.05),与正常侧相比差异无统计学意义(P＞0.05).治疗术后6个月:X线检查A组、B组手术侧股骨头已为正常股骨头X线表现,而C组手术侧股骨头完全塌陷.组织学检查A组、B组手术侧股骨头空骨陷窝计数百分比、骨小梁面积分数百分比与正常侧相比差异无统计学意义(P＞0.05),且A、B组差异亦无统计学意义(P＞0.05).结论 骨髓间充质干细胞和伞状支撑骨移植术治疗股骨头坏死效果良好,优于松质骨移植术和单纯股方肌骨柱移植术.     

miR-214通过对BMP-2和Smad4的靶向调控作用对骨质疏松的影响

目的探究miR-214能否靶向调控BMP-2和Smad4对骨质疏松症产生影响。方法将大鼠分为2组(假手术组、手术组),对手术组进行手术构建去卵巢骨质疏松模型,对两组大鼠血清中相关因子、骨密度、股骨进行病理学染色观察,同时将各组大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行体外培养,使用q PCR检测其miR-214表达水平,Western blot检测其BMP-2和Smad4相关蛋白表达水平。体外培养大鼠成骨细胞,将细胞分为3组(对照组、过表达组和抑制组),向过表达组和抑制组分别转染miR-214 mimics及anti-miR-214,对各组大鼠成骨细胞的增殖能力、细胞凋亡情况和BMP-2和Smad4相关蛋白表达水平进行检测。结果与假手术组相比,手术组大鼠血钙、碱性磷酸酶(ALP)水平及骨密度(BMD)明显下降,血磷水平明显上升,差异具有统计学意义(P0.05)。两组大鼠的BMSCs增长速率相比差异无统计学意义(P0.05),同时假手术组大鼠BMSCs ALP水平显著高于手术组,差异具有统计学意义(P0.05)。手术组与假手术组的BMSCs相比较,细胞中miR-214表达明显上升,BMP-2及Smad4表达水平明显下降,差异具有统计学意义(P0.05)。对转染后各组大鼠成骨细胞检测,与对照组相比,过表达组细胞增殖能力明显下降,细胞凋亡情况显著增高,BMP-2及Smad4水平下降,抑制组细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡数量明显下调,BMP-2及Smad4表达水平升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miR-214可能通过靶向调控BMP-2与Smad4抑制成骨细胞的增殖,从而发生或发展成骨质疏松症。     

白茅苷对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞功能和骨量的影响

目的观察白茅苷治疗去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞功能和骨量的影响并初步探索可能机制。方法通过双侧去卵巢建立骨质疏松大鼠模型;随后随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)以及白茅苷组(BMG),每组10只;其中BMG组去卵巢大鼠每天给予白茅苷(20 mg/kg)灌胃治疗;待12周治疗结束后分离培养各组大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),使用碱性磷酸酶(ALP)和茜素红(ARS)染色并使用蛋白质印迹检测BMP-2、Runx2、OPN、OCN、ALP和Col1蛋白表达;进一步使用Micro-CT和骨生物力学检测观察治疗效果。结果 OVX组大鼠BMSCs向成骨细胞分化后ALP和ARS染色阳性面积以及BMP-2、Runx2、OPN、OCN、ALP和Col1表达较Sham组明显降低(P0.05);而经过BMG治疗,BMG组大鼠BMSCs向成骨细胞分化后ALP和ARS染色阳性面积以及BMP-2、Runx2、OPN、OCN、ALP和Col1表达较OVX组明显增加(P0.05)。OVX组股骨最大载荷和弹性模量、BMD、BV/TV、Tb.N和Tb.Th较Sham组明显降低,而Tb.Sp则明显升高(P0.05)。BMG组左侧股骨最大载荷和弹性模量、BMD、BV/TV、Tb.N和Tb.Th均明显高于OVX组(P0.05),而Tb.Sp明显低于OVX组(P0.05)。结论白茅苷通过促进BMSCs诱导成骨分化来减少去卵巢大鼠骨骨密度、骨量和骨强度下降。     

激素性股骨头坏死病程中股骨头局部VEGF mRNA表达的变化及意义

目的：探讨激素性股骨头坏死病程中股骨头局部血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA）表达的变化及意义，方法：新西兰大白兔36只，随机均分成正常对照组和模型组，每组18只。模型组用内毒素加激素注射造成股骨头坏死。两组动物分别于造模后6、10、14周各处后6只行股骨头组织学检查和VEGFmRNA原位杂交观察。结果：光镜观察示模型组股骨头骨小梁变细、空骨陷窝增加，成骨细胞数量减少，这些表现随着时间的推移逐渐加重，软骨下血窦计数减少，各时段均低于正常组，差异有显著性意义（P＜0．05或P＜0．01）。原位杂交显示，模型组兔的股骨头6周时血管周围有VEGFmRNA阳性表达，10例时血管、成骨细胞的表达逐渐减少，14周时稍有所增加，结论：股骨头坏死后血管修复能力下降，血管内皮细胞的功能受到破坏影响，增加股骨头局部VEGF可能有助于股骨头坏死的修复。     

左归丸含药血清调节Runx2激活ALP、OPN蛋白促进BMSCs增殖和分化的研究

目的 探讨左归丸（Zuoguiwan,ZGW）的补肾填精、益髓壮骨的作用,促进骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的增殖和向成骨细胞方向分化。方法 制备ZGW含药血清,设置10% FBS DMEM组、成骨诱导液组、2.5%空白大鼠血清-成骨诱导液组、2.5% ZGW含药血清-成骨诱导液组。采用MTT法观察各组对BMSCs的增殖,使用碱性磷酸酶钙钴染色法检测BMSCs向成骨细胞方向的分化能力,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）法检测细胞培养液中AKP的含量,Western blot检测BMSCs中Runt相关转录因子2（Runx2）、骨钙蛋白（osteocalcin,OPN）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）蛋白的表达。结果 2.5% ZGW含药血清-成骨诱导液组能够促进BMSCs的快速增殖,较早地进入平台期,促进BMSCs中AKP的分泌,提高ALP含量,上调BMSCs细胞中Runx2、ALP和 OPN的蛋白表达水平。结论 ZGW抗骨质疏松的分子机制,可能与调节Runx2激活ALP、OPN蛋白表达,促进BMSCs增殖和向成骨细胞方向分化有关。     

关节镜下髓芯减压基因转染骨髓间质干细胞修复兔股骨头缺血性坏死

目的 研究髓芯减压关节镜监视下基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)治疗兔股骨头缺血性坏死的效果.方法 在无菌条件、戊巴比妥钠麻醉下,获取成年新西兰兔骨髓,体外培养.倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况,以腺相关病毒介导的hBMP-2转染兔BMSCs,感染倍率(MOI)为100,继续培养.应用Western blot检测转染后的BMSCs的hBMP-2基因表达.建立兔右侧股骨头缺血性坏死模型,并分为A组单纯髓芯减压组,B组髓芯减压并植入BMSCs组,C组髓芯减压并植入hBMP-2转染的BMSCs组.关节镜监视并对坏死骨清除后植入BMSCs或hBMP-2转染的BMSCs,术后4周和8周对股骨头行组织学检查.结果 hBMP-2基冈转染的兔BMSCs可有效表达hBMP-2.组织学观察显示B组周边有一定量骨形成,骨小梁表面新骨形成;C组周边坏死骨小梁表面新骨带明显增宽,新生骨小梁局部毛细血管丰富,表面有较多成骨细胞.术后4、8周C组血管计数及修复区新骨面积比分别与A、B组比较,差异有统计学意义.结论 关节镜监视下髓芯减压并植入hBMP-2转染的BMSCs可促进股骨头缺血性坏死的修复.     

Treatment of osteonecrosis of the femoral head with hBMP-2-gene-modified tissue-engineered bone in goats

The efficacy of beta-tricalcium phosphate (beta-TCP) loaded with bone morphogenetic protein-2 (BMP-2)-gene-modified bone-marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) was evaluated for the repair of experimentally-induced osteonecrosis of the femoral head in goats. Bilateral early-stage osteonecrosis was induced in adult goats three weeks after ligation of the lateral and medial circumflex arteries and delivery of liquid nitrogen into the femoral head. After core decompression, porous beta-TCP loaded with BMP-2 gene- or beta-galactosidase (gal)-gene-transduced BMSCs was implanted into the left and right femoral heads, respectively. At 16 weeks after implantation, there was collapse of the femoral head in the untreated group but not in the BMP-2 or beta-gal groups. The femoral heads in the BMP-2 group had a normal density and surface, while those in the beta-gal group presented with a low density and an irregular surface. Histologically, new bone and fibrous tissue were formed in the macropores of the beta-TCP. Sixteen weeks after implantation, lamellar bone had formed in the BMP-2 group, but there were some empty cavities and residual fibrous tissue in the beta-gal group. The new bone volume in the BMP-2 group was significantly higher than that in the beta-gal group. The maximum compressive strength and Young's modulus of the repaired tissue in the BMP-2 group were similar to those of normal bone and significantly higher than those in the beta-gal group. Our findings indicate that porous beta-TCP loaded with BMP-2-gene-transduced BMSCs are capable of repairing early-stage, experimentally-induced osteonecrosis of the femoral head and of restoring its mechanical function.     

磷酸三钙结合富血小板血浆修复股骨头坏死的研究

目的　研究磷酸三钙 (tricalcium phosphate,TCP)和富血小板血浆 (platelet- rich plasma,PRP)混合物(TCP/PRP)修复兔股骨头无菌性坏死的作用机制。　方法　成年新西兰大白兔 4 8只 ,采用液氮冷冻兔股骨头制成股骨头坏死模型 ,再随机分成 2组 ,每组 2 4只 ,实验组植入 TCP/PRP,对照组植入 TCP。分别于术后 2、4、8和 12周取材 ,行X线片、组织学检查、电镜观察和计算机图像处理。　结果　 X线片示术后 2周 ,两组股骨头密度无明显差异 ;4周 ,两组骨密度均降低 ,对照组下降更明显 ;8和 12周时骨密度均升高 ,实验组升高更明显。组织学检查 :术后 2周光镜显示 ,实验组肉芽增生多于对照组 ;4周时股骨头变平 ,凹陷缺损 ,实验组少于对照组 ;8和 12周股骨头纤维增生 ,骨小梁增粗 ,实验组修复较对照组多。电镜 :术后 2周实验组成骨细胞内线粒体和粗面内质网较多 ;4周实验组成骨细胞和胶原纤维明显比对照组多 ,细胞器比对照组成熟 ;8周时实验组的成骨细胞向骨细胞转化较多 ,雏形板层骨较多。计算机图像处理 :术后 4、8和 12周实验组骨小梁体积分别为 36 .6 5 %± 7.2 2 %、38.2 9%± 4 .2 8%和 39.2 4 %± 3.4 2 % ,明显多于对照组(P<0 .0 5 )。　结论　 TCP/PRP不仅为成骨细胞爬行提供支架 ,并能促进新骨形成和股     

血管内皮细胞生长因子促进激素性股骨头坏死修复

[目的]探讨应用血管内皮细胞生长因子治疗激素性股骨头坏死的方法。[方法]新西兰兔30只，22只兔耳缘静脉注射马血清，臀肌注射醋酸泼尼松龙，制造激素性股骨头坏死动物模型。动物随机分为3组：A组：VEGF治疗组，B组：对照组，C组：正常对照组。治疗组骨穿刺针行经皮注射血管内皮细胞生长因子脂质体至股骨头。于治疗后5周，采用影像学方法观察股骨头结构变化，病理组织学观察股骨头骨组织、骨髓造血组织及血管的变化。[结果]VEGF治疗组，X线及CT检查显示：模型股骨头结构变清晰，骨质破坏明显修复；HE染色结果：VEGF治疗组可见软骨细胞修复性增生，骨髓腔造血组织出现增生，栓塞的血管旁边出现新生的血管。[结论]VEGF治疗股骨头坏死能促进新血管生成及骨修复。     

复方丹参缓释系统植入治疗股骨头缺血性坏死的实验研究

[目的]探讨磷酸钙骨水泥(calcium phosphate cement,CPC)复方丹参缓释系统局部植入治疗股骨头缺血性坏死的机理。[方法]健康新西兰大白兔30只,制作股骨头坏死模型后,分为CPC组、CPC/丹参缓释系统组及对照组。于治疗后1、2、3和4周取标本,行HE染色和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)免疫组化染色,记录空骨陷窝率、VEGF阳性血管率、VEGF阳性成骨细胞率、VEGF阳性软骨细胞率。[结果]CPC/丹参缓释组空骨陷窝率较对照组及单纯CPC组明显降低,VEGF阳性血管率、VEGF阳性成骨细胞率、VEGF阳性软骨细胞率较其他2组明显增加(P<0.01,P<0.05)。[结论]CPC丹参缓释系统通过中药的局部缓释,可促进VEGF等细胞因子的分泌刺激血管内皮的增殖、分化,促进血管的生长和修复,从而改善、重建股骨头局部微循环,促进骨坏死修复。