囊胚玻璃化冷冻的研究进展

随着序贯培养液的出现,囊胚移植被认为是提高胚胎种植率、降低多胎妊娠率的有效方法,因此囊胚冷冻愈显重要.囊胚的玻璃化冷冻因其简化了冷冻过程;避免细胞内冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤;并且在冷冻过程中可迅速通过临界温度区,减轻了胚胎冷冻中常见的冻伤现象,使存活率提高等优点,近几年得到逐步发展.现对囊胚玻璃化冷冻(vitrification)的原理、要领、现状及应用前景进行综述.     

Hemi-straw玻璃化与程序化冷冻小鼠不同发育阶段胚胎的效果

目的:探讨半细管(Hem i-straw)玻璃化方法与程序化方法冷冻不同发育阶段小鼠胚胎的效果。方法:采用慢速程序化方法与玻璃化方法冷冻小鼠原核期胚胎、卵裂期及早期囊胚期胚胎。解冻后观察存活率、囊胚形成率。结果:采用玻璃化方法冷冻小鼠卵裂期与早期囊胚期胚胎的存活率为92.7%与95.5%,显著高于玻璃化冷冻原核期胚胎的存活率79.8%与程序化冷冻的各组(均P<0.01)。程序化冷冻早期囊胚的存活率仅为50.2%,显著低于其他组(均P<0.01)。经培养后囊胚的形成率比较,程序化冷冻组内无显著性差异(P>0.05),但均显著低于玻璃化冷冻组(均P<0.01)。玻璃化冷冻卵裂期与早期囊胚组的囊胚形成率高达90.1%与92.2%,显著高于原核期胚胎玻璃化冷冻组69.5%(均P<0.01)。结论:胚胎行冷冻保存时,玻璃化冷冻效果较程序化冷冻好,且选择早期囊胚可获最佳冷冻效果。     

人类囊胚玻璃化冷冻研究进展

1985年Rail和Fahy首次应用玻璃化法冷冻保存小鼠胚胎以来，玻璃化冷冻技术以其简单、有效、经济受到关注。在人类辅助生殖技术中，囊胚的培养和移植对于提高妊娠率、减少多胎妊娠的发生具有重要意义．因此需要将剩余囊胚有效冷冻保存，玻璃化法可望成为有效冷冻保存多余囊胚的新技术。在玻璃化冷冻技术中．不同的冷冻装置、冷冻保护剂的类型和浓度、解冻方法的不同、囊胚冷冻前的不同处理。都是影响囊胚冷冻后复苏的关键因素。     

人类囊胚玻璃化冷冻研究进展

1985年Rall和Fahy首次应用玻璃化法冷冻保存小鼠胚胎以来,玻璃化冷冻技术以其简单、有效、经济受到关注.在人类辅助生殖技术中,囊胚的培养和移植对于提高妊娠率、减少多胎妊娠的发生具有重要意义,因此需要将剩余囊胚有效冷冻保存,玻璃化法可望成为有效冷冻保存多余囊胚的新技术.在玻璃化冷冻技术中,不同的冷冻装置、冷冻保护剂的类型和浓度、解冻方法的不同、囊胚冷冻前的不同处理,都是影响囊胚冷冻后复苏的关键因素.     

超高速玻璃化冷冻人类囊胚获得妊娠成功

随着体外培养体系的不断优化，增加了人类胚胎的囊胚形成率。囊胚期移植不仅提高妊娠率，而且减少移植胚胎数，最大限度的降低多胎妊娠的风险。因此有效的冷冻保存多余囊胚具有很高的临床应用价值。但是常规慢速及常规玻璃化冷冻人囊胚结果并不理想，目前采用冷冻环加上-205℃液氮的超高速玻璃化冷冻牛囊胚，实验结果令人满意。此研究以小鼠及人类囊胚为研究对象，进一步应用于临床，旨在评估此种超高速玻璃化冻融人囊胚的发育潜能。     

中低强度激光人工皱缩在扩张期囊胚玻璃化冷冻复苏中的应用研究

目的通过中低强度激光人工皱缩囊胚腔联合快速玻璃化冷冻在囊胚冻融周期中的应用,为囊胚冷冻复苏周期提供稳定的技术基础。方法选取2015年9月-2017年3月在该院常规体外受精培养至第3天移植和或冷冻后剩余的可利用胚胎在三气培养系统中进行囊胚培养,参照Gardner囊胚评分标准,将发育至第5天或第6天的4CB以上的囊胚分成试验组和对照组。试验组采用中低强度激光打孔,使囊胚腔皱缩后行玻璃化冷冻,对照组直接行玻璃化冷冻。分析177例解冻囊胚周期,比较解冻囊胚周期两种方法冷冻复苏的复苏率、临床妊娠率、种植率、多胎妊娠率及流产率等。结果试验组解冻囊胚复苏率高于对照组,流产率、多胎率低于对照组,但差异无统计学意义(P0.05);试验组临床妊娠率、胚胎着床率显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.01);单囊胚移植多胎率显著低于双囊胚移植(P0.05)。结论应用中低强度激光人工皱缩囊胚腔联合玻璃化冷冻技术,能够提高囊胚冻融周期的胚胎复苏率、妊娠率、着床率,降低流产率、多胎率。     

冷冻膜及冷冻环在人早期胚胎玻璃化冷冻中的应用比较北大核心CSCD

目的探讨冷冻膜和冷冻环2种载体行玻璃化冷冻对人卵裂期胚胎和囊胚的效果。方法采用回顾性队列研究分析912个解冻复苏周期,比较2种载体行玻璃化冷冻后胚胎复苏结局和临床结局的差异及其相关危险因素。结果 (1) 385枚卵裂期胚胎中,冷冻环组(n=251)和冷冻膜组(n=134)的胚胎复苏率、完整胚胎存活率、临床妊娠率、种植率、流产率、移植周期出生率、双胎出生率、早产率及出生男女比率差异均无统计学意义(P>0.05);冷冻环组新鲜周期优质胚胎率(24.78%)、平均移植周期数(1.3±0.6)、复苏后优质胚胎率(40.76%)、复苏后平均移植胚胎数[(2.1±0.4)个]及低体质量儿出生率(19.01%)均明显高于冷冻膜组[18.59%,P=0.002;1.2±0.4,P=0.001;28.13%,P=0.001;(1.9±0.4)个,P=0.000;4.08%,P=0.015]。(2) 527枚囊胚中,冷冻环组(n=287)和冷冻膜组(n=240)的平均移植周期数、胚胎复苏率、完整胚胎存活率、复苏后囊胚扩张率、流产率、双胎出生率、早产率、低体质量儿出生率及出生男女比率差异均无统计学意义(P>0.05);冷冻环组的临床妊娠率(67.94%)、种植率(49.72%)、移植周期出生率(52.96%)、新鲜周期优质胚胎率(27.0%)、平均移植胚胎数[(1.9±0.4)个]显著高于冷冻膜组[54.17%, P=0.001;39.58%,P=0.002;41.25%,P=0.047; 23.0%, P=0.002;(1.8±0.5)个,P=0.004]。Logistic回归显示,新鲜周期优质胚胎数、内膜厚度及冷冻胚胎所用载体类型与冷冻囊胚复苏移植后临床妊娠密切相关(P=0.017、P=0.049、P=0.044),而年龄、复苏后平均移植胚胎个数、复苏后囊胚扩张数、平均移植周期数及内膜分型等差异均无统计学意义(P>0.05)。结论对于卵裂期胚胎,冷冻膜和冷冻环冷冻胚胎的复苏结局和临床结局均是相当的。对于囊胚,冷冻环组的临床结局优于冷冻膜组。     

细胞松弛素B在人类体外成熟卵子冷冻中的作用

目的:探讨细胞松弛素B在人类体外成熟卵子玻璃化冷冻中的作用。方法:收集常规胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSI-ET)周期中未成熟卵母细胞234枚(包括生发泡期即GV期和第1次减数分裂中期即MⅠ期),在体外培养24～48 h,181枚卵母细胞成熟(排出第2极体),随机分成3组并行玻璃化冷冻。A组(43枚)用细胞松弛素B(CB)预处理30 min后行玻璃化冷冻;B组(66枚)用CB预处理20 min后行玻璃化冷冻,C组(72枚)未用CB预处理直接行玻璃化冷冻。D组为对照组30枚体内成熟卵子未用CB处理直接玻璃化冷冻。各组卵子冷冻3周后解冻,复苏的卵子行ICSI辅助授精,观察各组成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:冻融后的体外成熟卵子,其成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率均显著低于体内成熟卵子(P<0.05)。A组的成活率显著低于B、C两组(P<0.05),A、B、C 3组间的受精率、卵裂率差异无统计学意义(P>0.05),A、B两组未获囊胚,C组仅有1枚囊胚。结论:冻融体外成熟卵子,成活率、受精率、卵裂率均下降,囊胚形成率低,胚胎后期发育潜能显著降低。CB预处理未能提高卵子冷冻的成活率、受精率、卵裂率及胚胎的发育潜能。     

玻璃化冷冻人类早期胚胎的研究进展

人类胚胎已经成功冷冻保存并在辅助生殖技术（ART）中起重要作用，目前多采用慢速冷冻-快速复温方法冷冻保存人早期胚胎，并取得较高的胚胎存活率，但此法需要昂贵的仪器、耗时，并且对于囊胚冷冻效果差。近年发展的玻璃化冷冻因其简单、快速、不需要昂贵仪器等优点越来越受到重视。就玻璃化冷冻在人类早期胚胎冷冻保存中的应用及其影响因素作一综述。     

不同载体和冷冻保护剂用于人胚胎玻璃化冷冻的初步研究

目的：比较分析冷冻环、自制叶片、冰珠3种载体,以及5．5mol／LEG、15％PROH＋15％EG2种冷冻保护剂用于人胚胎玻璃化冷冻的效果。方法：①选择131个6-10细胞,Ⅰ-Ⅱ级胚胎,按载体不同随机分为3组,将胚胎解冻后用于移植,比较3组的复苏率、植入率、临床妊娠率;②部分患者成功妊娠分娩后,自愿放弃剩余冻存胚胎,选择6-10细胞,Ⅰ-Ⅱ级,以叶片为载体冷冻的胚胎52个,按照冷冻溶液的不同分为2组,解冻后将胚胎继续培养3天,比较2组的复苏率和囊胚形成率。结果：①冰珠组的复苏率显著低于冷冻环和自制叶片组,3个组的植入率、临床妊娠率无明显差异;②15％PROH＋15％EG冻存的胚胎解冻后复苏率和囊胚形成率显著高于5．5mol/L EG。结论：冷冻环和自制叶片是较为理想的冷冻载体,二者用于玻璃化冷冻效果相近,自制叶片具有成本低的优点;联用15％PROH＋15％EG能降低冷冻保护剂对胚胎的毒性,玻璃化冷冻效果好于5．5mol／LEG。     

人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究

目的:研究人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液,探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值.方法:运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射一胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞受精及发育能力.根据冷冻方法分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,比较各组存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果:程序化冷冻组和玻璃化冷冻组间存活率、卵裂率、囊胚形成率均无显著性差异(P＞0.05),但是受精率存在显著性差异(P＜0.05);程序化组与自配液组、成品液组间存活率、卵裂率均无显著性差异(P＞0.05),但受精率存在显著性差异(P＜0.05).成品液组与自配液组、程序化组间囊胚形成率存在显著性差异(P＜0.05).程序化组移植4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植7例.获得1例生化妊娠.结论:程序化冷冻与玻璃化冷冻法均可应用于人类成熟卵母细胞,冻融后卵母细胞具备正常受精能力及卵裂能力.玻璃化冻存人类卵母细胞具有更大发展趋势.     

人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究

目的:研究人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液,探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值。方法:运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射-胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞受精及发育能力。根据冷冻方法分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,比较各组存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:程序化冷冻组和玻璃化冷冻组间存活率、卵裂率、囊胚形成率均无显著性差异(P>0.05),但是受精率存在显著性差异(P<0.05);程序化组与自配液组、成品液组间存活率、卵裂率均无显著性差异(P>0.05),但受精率存在显著性差异(P<0.05)。成品液组与自配液组、程序化组间囊胚形成率存在显著性差异(P<0.05)。程序化组移植4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植7例,获得1例生化妊娠。结论:程序化冷冻与玻璃化冷冻法均可应用于人类成熟卵母细胞,冻融后卵母细胞具备正常受精能力及卵裂能力。玻璃化冻存人类卵母细胞具有更大发展趋势。     

胚胎玻璃化冷冻研究进展

玻璃化冷冻胚胎具有简便、迅速、经济、避免冰晶形成等优点，受到越来越广泛的关注。大量实验研究及初步临床应用结果表明，应用玻璃化冷冻技术能够保存多个种属不同发育阶段的胚胎。但是，目前玻璃化冷冻胚胎尚不成熟，应用合理的玻璃化冷冻溶液以及提高玻璃化冷冻速率等均是影响玻璃化冷冻胚胎的重要因素。     

玻璃化冷冻人类早期胚胎的研究进展

人类胚胎已经成功冷冻保存并在辅助生殖技术(ART)中起重要作用,目前多采用慢速冷冻-快速复温方法冷冻保存人早期胚胎,并取得较高的胚胎存活率,但此法需要昂贵的仪器、耗时,并且对于囊胚冷冻效果差。近年发展的玻璃化冷冻因其简单、快速、不需要昂贵仪器等优点越来越受到重视。就玻璃化冷冻在人类早期胚胎冷冻保存中的应用及其影响因素作一综述。     

玻璃化冷冻人类早期胚胎的研究进展

人类胚胎已经成功冷冻保存并在辅助生殖技术(ART)中起重要作用,目前多采用慢速冷冻-快速复温方法冷冻保存人早期胚胎,并取得较高的胚胎存活率,但此法需要昂贵的仪器、耗时,并且对于囊胚冷冻效果差.近年发展的玻璃化冷冻因其简单、快速、不需要昂贵仪器等优点越来越受到重视.就玻璃化冷冻在人类早期胚胎冷冻保存中的应用及其影响因素作一综述.     

不同胚胎冷冻方法对冻融胚胎移植患者临床结局的影响

目的:比较人卵裂期胚胎玻璃化冷冻和慢速冷冻解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率,评价两种方法的有效性。方法:选择2009年7月～2010年3月在辅助生殖中心行F-ET的89例患者,将其分为玻璃化冷冻组(46例)和慢速冷冻组(43例),比较解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率。结果:玻璃化冷冻组与慢速冷冻组比较具有较高的胚胎复苏率(92.7%vs.66.1%)、卵裂球完整率(89.2%vs.61.4%)、种植率(21.1%vs.4.7%)以及临床妊娠率(47.8%vs.23.3%)。结论:玻璃化冷冻法解冻后胚胎复苏率高,卵裂球完整性好,胚胎具有更好地发育潜能,是人卵裂期胚胎冷冻的有效方法。     

激光人工皱缩在玻璃化冷冻法保存人类囊胚中的效果分析

目的:评估囊胚玻璃化冷冻前用激光对囊胚腔进行皱缩的临床效果。方法:激光打孔使囊胚腔皱缩后将囊胚玻璃化冷冻(皱缩组)或直接将囊胚玻璃化冷冻(对照组),比较两组的临床效果。结果:317个囊胚解冻周期均进行了移植。其中对照组178例和皱缩组139例,两组年龄、不孕年限、内膜厚度、平均移植胚胎数、优质囊胚率、流产率、多胎妊娠率和异位妊娠率比较未见差异(P0.05);对照组的临床妊娠率(44.9%)、种植率(34.4%)均低于皱缩组(66.9%、48.5%)(P=0.001)。结论:囊胚玻璃化冷冻前使用激光打孔人工皱缩可显著提高临床妊娠和着床率,值得临床探索应用。     

不同冷冻方案对人早期胚胎发育潜能的影响

目的:比较开放式、封闭式玻璃化冷冻技术及程序化慢速冷冻法对辅助生殖技术人早期胚胎冷冻复苏的效果.方法:回顾性分析622例胚胎冷冻复苏资料,将体外受精-胚胎移植(ⅣF-ET)患者第3天需要冷冻的胚胎,分别采用开放式、封闭式麦管玻璃化法及程序化慢速冷冻法冷冻,比较3组胚胎复苏率、空泡出现率、胚胎完整率、植入率、临床妊娠率、周期取消率、胚胎丢失率及流产率.结果:开放式冻存组共复苏280个周期、627个胚胎,胚胎复苏率、胚胎完整率、植入率和临床妊娠率分别为97.13％、94.89％、28.90％、52.61％,与程序化冷冻组(复苏165个周期、477个胚胎)胚胎复苏率(73.79％)、胚胎完整率(70.02％)、植入率(16.75％)和临床妊娠率(35.44％)相比差异有统计学意义(P＜0.05),与封闭式冻存组(复苏177个周期、400个胚胎)相比差异均无统计学意义(P＞0.05),3种冷冻组空泡出现率、周期取消率、胚胎丢失率及流产率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:两种玻璃化冷冻法能获得同样的冷冻效率,且均优于程序化冷冻法;封闭式麦管玻璃化法能更好地保存胚胎复苏后的发育潜能,是冻存人早期胚胎较为理想的方法.     

胚胎玻璃化冷冻研究进展

玻璃化冷冻胚胎具有简便、迅速、经济、避免冰晶形成等优点,受到越来越广泛的关注。大量实验研究及初步临床应用结果表明,应用玻璃化冷冻技术能够保存多个种属不同发育阶段的胚胎。但是,目前玻璃化冷冻胚胎尚不成熟,应用合理的玻璃化冷冻溶液以及提高玻璃化冷冻速率等均是影响玻璃化冷冻胚胎的重要因素。     

玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织安全性研究进展

近年来玻璃化冷冻技术逐渐应用于生殖医学,多数学者认为,玻璃化冷冻胚胎的存活率、发育率、种植率和妊娠率高于程序化冷冻,且经济、便捷、快速,有取代传统慢速冷冻技术的趋势。但玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织历史短,其安全性一直受到关注,并认为其造成的细胞膜、透明带、遗传物质和代谢功能损伤是不可避免的。但选择不同的冷冻保护剂和冷冻载体对不同时期的胚胎、配子、卵巢组织进行玻璃化冷冻所造成的冷冻损伤不同。因此,寻求一种安全可靠的冷冻方法是生殖医学工作者追求的目标。