外源性硫化氢对大鼠血管钙化的影响

目的观察外源性给予硫化氢(H2S)对血管钙化的影响。方法用肌注维生素D3和灌胃尼古丁诱导大鼠血管钙化,运用Von Kossa染色、原子吸收测定钙含量4、5Ca2 沉积及碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断血管钙化程度,半定量RT-PCR方法测定骨桥蛋白(OPN)mRNA水平。结果钙化组大鼠血管Von Kossa染色见平滑肌细胞内和细胞间基质有大量黑色颗粒聚集;主动脉钙含量、45Ca2 沉积及ALP活性分别较对照高6.8倍、1.4倍和1.9倍(P<0.01),OPN mRNA表达明显上调;低、高剂量NaHS组均明显缓解上述指标的变化(P<0.01)。结论补充H2S可减轻钙化血管的钙化程度。     

脂多糖性休克大鼠血浆和主要器官中硫化氢含量的变化和意义

目的：探讨内毒素休克（endotoxic shock，ES）大鼠血浆及肝、肾、心、肺、主动脉等主要器官组织中内源性硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）的含量变化及意义。方法：用静脉注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）法制备LPS攻击大鼠模型，将雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS+硫氢化钠（NaHS，H2S供体）组、LPS+炔丙基甘氨酸（PPG，H2S代谢酶抑制剂）组。观察给药后240 min内大鼠平均动脉压（mean arterial pressure，MAP）的变化及测定血浆和以上主要器官中H2S含量，并分析其相关性；光镜观察主要器官的形态学变化。结果：与正常对照组相比，LPS组大鼠血压迅速下降，血浆H2S含量于LPS注射后显著增高，肝、肾、心、肺和主动脉组织中H2S含量亦明显增高（均P<0.05），并出现组织结构损伤；给予PPG能显著抑制血浆以及各组织中H2S含量的增高，并可显著减轻LPS所致的血压下降（均P<0.05）和组织损伤；而给予H2S供体NaHS后，与LPS组相比，大鼠血浆以及各组织中H2S含量显著增高，血压明显下降（均P<0.05），组织损伤加重。LPS攻击大鼠血浆及组织中H2S含量与血压呈高度负相关（均P<0.05）。结论：H2S是一种新的内源性介质，可能参与了ES的一系列病理生理过程。     

CO上调大鼠胸主动脉中硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系

目的研究一氧化碳(CO)对正常大鼠主动脉中硫化氢(H2S)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)体系的影响。方法取W istar大鼠胸主动脉分为对照组、血红素组(终浓度10-4mol/L)和锌原卟啉组(终浓度10-5mol/L),每组各9例,用硫电极法测定孵育液中H2S含量和组织中H2S生成率。结果与对照组相比,血红素组孵育液中H2S含量明显升高(P<0.01),而锌原卟啉组H2S含量明显降低(P<0.05)。与对照组相比,血红素组胸主动脉组织中H2S生成率明显升高(P<0.01),锌原卟啉组H2S生成率明显降低(P<0.05)。结论在正常大鼠胸主动脉组织孵育中CO上调H2S/CSE体系。     

心血管组织钙化大鼠心肌肌浆网一氧化氮合酶的改变

目的:观察心血管组织钙化大鼠心肌肌浆网一氧化氮合酶/一氧化氮系统的改变,以探讨是否SR上NO的过量生成是钙化心肌SR功能抑制的重要机制。方法:维生素D3肌肉注射和nicotine灌胃复制大鼠心血管组织钙化的模型。差速离心制备心肌肌浆网,检测SR中NO生成及NOS的活性和蛋白表达。结果:心血管组织钙化处理6周大鼠心肌钙含量比对照组高4倍(P＜0.01),钙化组心肌SR的NO产生高于对照组,NOS活性增加,NOS蛋白表达比对照组高54%(P＜0.01)。钙化处理2周左右尽管心肌钙化尚不明显,但SR的NOS/NO系统已经发生改变。结论:心血管组织钙化大鼠心肌SR的NOS/NO系统的上调,是钙化心肌SR功能抑制的重要机制之一。     

内毒素性急性肺损伤大鼠内源性H2S/CSE体系的变化

目的：观察内毒素性急性肺损伤（ALI）大鼠内源性硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶（H2S/CSE）体系、IL-1β和IL-10的动态变化。方法:健康雄性SD大鼠共80只，随机分为Ⅰ（对照）组；Ⅱ（LPS 1 h）组；Ⅲ（LPS 3 h）组；Ⅳ（LPS 6 h）组；Ⅴ（LPS 9 h）组；Ⅵ（LPS 12 h）组。给予LPS复制内毒素性ALI大鼠模型，分别于1、3、6、9、12 h处死，观察光镜和电镜下肺组织形态学改变，检测肺系数、肺湿/干重比、血浆中H2S含量、肺组织CSE活性、血清中IL-1β和IL-10的动态变化。结果:⑴LPS 1 h组，光镜和电镜下肺组织形态学无明显改变，肺系数、肺湿/干重比、血浆中H2S的含量和肺组织CSE活性与对照组比较无明显变化，血清中IL-1β和IL-10含量明显高于对照组(IL-1β，P<0.05；IL-10，P<0.01)。⑵LPS 3、6、9、12 h组，光镜和电镜下肺组织明显受损，超微结构明显改变，肺系数和肺湿/干重比明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)，血浆中H2S的含量和肺组织CSE活性明显低于对照组（P<0.05 或P<0.01) ，血清中IL- 1β和IL-10的含量明显高于对照组(P<0.01)。结论:内源性H2S/CSE体系、IL-β和IL-10参与内毒素性ALI的病理生理过程。     

硫化氢对自发性高血压大鼠血管重构中胶原代谢的调节作用研究

目的 以自发性高血压(SHR)大鼠为对象，研究硫化氢(H2S)对血管中胶原堆积的影响。方法 SHR大鼠17只，随机分为SHR组(n=6)，SHR+H2S(n=6)组和SHR+PPG组(n=5)。WKY大鼠5只为对照组(n=5)。SHR+H2S组每日腹腔注射0.25ml H2S供体NaHS (56mmol/kg)，SHR＋PPG组每日腹腔注射0.25ml PPG (37.5mg/Kg)，连续用药5周。WKY对照组及SHR组注射等量注射用水。连续混合喂养5周后测定动脉血压；以胸主动脉组织为对象，用酶促反应法测定CSE活性；用高温裂解法测定羟脯氨酸含量。用酶联免疫法(ELISA)测定Ⅰ型胶原含量。用免疫组化法检测转化生长因子b3（TGF-b3）表达。结果 与WKY对照组相比，SHR组大鼠血压升高52% (p<0.01)；CSE酶降低55％(p<0.01)；羟脯氨酸含量增加87% (p<0.01)；Ⅰ型胶原含量增加28%；TGF-β3表达增加10% (p<0.05)。给予硫化氢后显著缓解了上述指标的变化。结论 给SHR大鼠补充外源性硫化氢能够降低动脉血压，而且使主动脉组织中羟脯氨酸和Ⅰ型胶原含量减少，从而改善SHR大鼠血管中胶原的堆积。     

CCK-8对脂多糖性肺损伤大鼠肺组织中硫化氢生成的抑制作用

目的： 探讨硫化氢（H2S）在八肽胆囊收缩素(CCK-8)改善脂多糖性肺损伤中的作用。方法：用静脉注射脂多糖（LPS,5 mg/kg）法制备大鼠肺损伤模型,将雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS+CCK-8组及CCK-8组。给药后6 h测定大鼠动脉血氧分压（PaO2）;检测肺组织中H2S含量和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性;RT-PCR检测肺组织CSE mRNA的表达;光镜观察肺组织的形态学变化。结果：与正常对照组相比,LPS组大鼠PaO2显著下降并出现肺组织结构损伤,而肺组织中H2S含量、CSE活性和mRNA表达显著增高（均P<0.05）;与LPS组相比,LPS+CCK-8组大鼠PaO2显著升高,肺组织结构损伤明显减轻,肺组织中H2S含量和CSE活性及mRNA表达显著下降（均P<0.05）;CCK-8组大鼠上述各指标与正常对照组相比无明显差异。结论：CCK-8可通过抑制内源性H2S的生成减轻脂多糖性肺损伤。     

硫化氢供体对阿霉素心肌病大鼠氧化应激作用的影响

目的： 探讨外源性给予硫化氢供体硫氢化钠(NaHS)对阿霉素(adriamycin, ADR)心肌病大鼠氧化应激作用的影响。方法：雄性Wistar大鼠54只，随机分为5组：(1) ADR组(n=12)：腹腔注射ADR，每次2.5 mg/kg，每周1次，共用药10周；(2)ADR+小剂量NaHS组（n=12）：ADR用药方法同ADR组，同时经腹腔注射NaHS，2.8 μmol·kg-1·d-1，连续用药10周；(3)ADR+大剂量NaHS组（n=12）：ADR用药方法同ADR组，同时经腹腔注射NaHS，14 μmol·kg-1·d-1，连续用药10周；(4)对照组（n=9）：用相同容量的生理盐水代替ADR，给药方法同ADR组；(5)NaHS组（n=9）：经腹腔注射NaHS，14 μmol·kg-1·d-1，连续用药10周。于第10周检测大鼠心功能和血流动力学指标,并测定其血清及心肌组织中H2S、脂质过氧化物丙二醛(MDA) 的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性，比较其中的差异。结果：ADR组大鼠心功能较对照组明显降低(均P<0.01)，且血清及心肌组织H2S含量均明显低于对照组(P<0.01），MDA含量明显较对照组升高(均P<0.01)，SOD的活性明显降低(均P<0.01)，GSH-Px的活性亦明显降低(血清及心肌组织：P<0.05，P<0.01)；经外源性补充H2S供体NaHS后，大鼠心功能较前明显改善，ADR+大剂量NaHS组心肌组织中过氧化产物MDA含量明显降低(均P<0.01)，而血清MDA含量无明显差异(P>0.05)；ADR+大剂量NaHS组血清SOD活性明显升高(P<0.01)，而心肌组织SOD活性无明显差异(P>0.05)；ADR+大剂量NaHS组心肌组织GSH-Px活性明显增高(均P<0.05)，而血清GSH-Px活性无明显差异(P>0.05)。结论：硫化氢参与了大鼠阿霉素心肌病的发病过程,外源性补充硫化氢供体NaHS可以改善阿霉素心肌病大鼠心功能，降低心肌组织中脂质过氧化物的含量，显著提高抗氧化酶体系的活性，减轻氧化应激损伤，从而参与对大鼠心肌的保护机制。     

实验性血管钙化大鼠血液流变学的变化

目的探讨血管钙化大鼠血液流变性的变化。方法采用维生素D3肌注和尼古丁灌胃诱导大鼠血管钙化,Von Kossa染色、钙含量测定、45Ca2+沉积及碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断血管钙化程度,同时测定血液流变学指标的变化。结果钙化组大鼠血管Von Kossa染色见平滑肌细胞内和细胞间基质有大量黑色颗粒聚积;主动脉钙含量、45Ca2+沉积及ALP活性分别较对照组明显升高(P<0.01);出现高粘滞血症,表现为全血粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数、红细胞压积等较对照组明显升高(P<0.05)。结论维生素D3加尼古丁所致血管钙化大鼠存在血液流变性的恶化。     

内源性H2S在CCK-8减轻脂多糖所致急性肺损伤中的作用

目的：探讨内源性硫化氢(H₂S)在八肽胆囊收缩素(CCK-8)减轻脂多糖（LPS）所致急性肺损伤(ALI)中的作用。方法: 将84只SD大鼠随机分为正常对照组、LPS组（经气管内滴注LPS复制ALI）、NaHS(H₂S供体)+LPS组、炔丙基甘氨酸［胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）抑制剂，PPG］+LPS组、CCK-8+LPS组、PPG+CCK-8+LPS组和CCK- 8组。给药后分别于4 h和8 h处死动物，测定肺湿/干比值；光镜观察肺组织形态学改变；化学法检测血浆H₂S含量，肺组织MDA含量、MPO活性和CSE活性；放免法检测肺组织P-selectin含量；RT-PCR检测肺组织CSE mRNA的表达；并行支气管肺泡灌洗，检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量。结果: 气管内滴注LPS可引起肺组织明显的形态学改变；肺湿/干比值、BALF中蛋白含量及肺组织MDA、MPO活性和P-selectin水平增高；血浆H2S含量、肺组织CSE活性及CSE mRNA表达下降。预先给予NaHS或CCK-8可显著减轻LPS所致的上述改变，且血浆H₂S含量、肺组织CSE活性及CSE mRNA表达高于相应的LPS组；预先给予PPG可加重LPS所致的肺损伤，而血浆H₂S含量、肺组织CSE活性及CSE mRNA表达分别低于相应的LPS组和CCK-8+LPS组。结论: CCK-8可通过内源性H₂S介导的抗氧化、抑制PMN黏附聚集等效应发挥减轻LPS所致肺损伤的作用。     

白藜芦醇对维生素D_3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化的抑制作用

目的:观察白藜芦醇(RES)对维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化的抑制作用和可能机制。方法:32只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为4组,每组各8只:对照组(CON组);血管钙化组(VDN组);RES低剂量处理组[VDN+RES(L)组];RES高剂量处理组[VDN+RES(H)组]。实验第6周末进行各组大鼠主动脉Von Kossa染色,比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活性及钙含量,Western Blot检测成骨细胞标志性蛋白骨桥蛋白(OPN)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达,并比较各组间差异。结果:与CON组比较,VDN组大鼠主动脉Von Kossa染色显示主动脉中膜弹力纤维排列紊乱,其间广泛分布黑色银染颗粒,主动脉ALP活性、钙含量、OPN和BMP-2水平均显著升高(P0.01);与VDN组比较,两种剂量RES干预组大鼠主动脉中膜弹力纤维紊乱程度下降、黑色银染颗粒减少,主动脉ALP活性、钙含量、OPN和BMP-2水平均明显降低(P0.05或P0.01),高剂量RES干预组较低剂量RES干预组降低更明显(均P0.05)。结论:RES能够有效抑制维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化,其机制可能与其能降低主动脉ALP活性及抑制OPN和BMP-2表达有关。     

L-精氨酸和一氧化氮抑制剂对大鼠血管钙化的影响

观察给予一氧化氮合酶(NOS)的抑制剂左旋硝基精氨酸(L-NNA)或底物L-精氨酸(L-Arg)对血管钙化的影响。利用维生素D3和尼古丁制备大鼠血管钙化模型，测定大鼠尾动脉压，血管钙含量、碱性磷酸酶活性及^45Ca沉积；并检测血管组织的L-Arg转运，NOS活性及NO2^-和cGMP含量。发现钙化大鼠血压略升高；动脉钙含量、ALP活性及^45Ca沉积明显增加，von Kossa染色可以看到明显的钙化颗粒；钙化血管组织NOS活性升高；NO和cGMP含量均减少。给予L-NNA或L-Arg后，与单纯钙化组相比，L-NNA干预组的L-Arg转运、NOS活性及NO和cGMP的含量均降低；而L-Arg干预组上述指标的变化正相反。同时，L-NNA干预组的钙化程度比钙化组加重，而L-Arg干预组的钙化程度比钙化组减轻；提示血管钙化时NO—NOS—cGMP途径发生紊乱，干预NO—NOS—cGMP途径可以影响钙化的进程。     

血管钙化时血管血红素加氧酶/一氧化碳系统的变化

目的:观察血管钙化时血管血红素加氧酶(HO)-一氧化碳(CO)-环磷酸鸟苷(cGMP)系统的改变, 以探讨血管钙化发病的细胞分子机理。方法:利用维生素D₃(VitD₃)和尼古丁(nicotine)复制大鼠血管钙化模型, 检测HO-1mRNA的相对含量, HO-1免疫组织化学染色, 测定主动脉HO-1活性、碳氧血红蛋白(HbCO)的生成及血管cGMP含量。结果:用竞争性定量RT-PCR的方法发现, 钙化动物血管组织的HO-1mRNA水平较对照组低34.9%(P＜0.05);免疫组织化学方法观察发现钙化血管的HO-1蛋白表达减少, 仅在内膜略有表达, 中膜无明显表达;HO-1活性低60.6%(P＜0.01);CO生成少53.9%(P＜0.01), cGMP的含量低77.1%(P＜0.01)。结论:钙化血管血红素-HO-CO-cGMP途径功能下调。     

内源性血管紧张素Ⅱ对大鼠血管钙化的作用

目的:在大鼠血管钙化模型上观察内源性血管紧张素II(AngⅡ)对大鼠血管钙化的影响。方法:用VitD₃皮下注射和尼古丁灌胃诱导大鼠血管钙化模型。测定血管组织中钙含量、[⁴⁵Ca²⁺]聚集及碱性磷酸酶活性作为观察钙化的指标。结果:钙化血管组织中钙含量,[⁴⁵Ca²⁺]摄入及碱性磷酸酶活性分别高于对照组。血管组织中的血管紧张素原mRNA、血浆和血管AngⅡ含量均高于对照组水平。血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利和AngⅡ受体AT₁阻断剂洛沙坦处理的大鼠血管内钙含量、[⁴⁵Ca²⁺]聚集及碱性磷酸酶活性显著低于单纯钙化组。卡托普利处理的钙化大鼠血浆和动脉中AngⅡ含量、动脉中血管紧张素原mRNA的含量也显著低于钙化组水平。结论:钙化大鼠血浆和血管组织中AngⅡ水平上调,卡托普利和洛沙坦可减轻大鼠血管钙化程度。     

淫羊藿苷对大鼠血管平滑肌细胞钙化的抑制作用

目的:研究淫羊藿苷(Icariin)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的抑制作用。方法:组织贴壁法培养大鼠胸主动脉VSMCs,取5-8代细胞分为对照组、钙化模型组和淫羊藿苷干预A、B、C组。对照组用DMEM培养基培养;钙化模型组用含10mmol/Lβ-甘油磷酸盐(β-GP)的DMEM培养基培养;干预A、B、C组均以钙化模型组为基础分别与10-6 mol/L、10-5 mol/L和10-4 mol/L Icariin的DMEM培养基共培养,茜素红-S染色法鉴定各组细胞钙化情况,硝基苯酚法测定各组细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,RT-PCR检测各组细胞内骨保护素(OPG)和核因子κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)的mRNA水平,用Western blotting检测各组细胞OPG和RANKL的蛋白表达。结果:与对照组比较,钙化模型组VSMCs发生细胞钙化,并形成红色结节,ALP活性显著升高(P0.01),OPG、RANKL mRNA和蛋白表达均增加(P0.01);与钙化模型组比较,干预A、B、C组细胞钙化减少,ALP活性减低(P0.01),OPG、RANKL mRNA和蛋白表达均下调(P0.01),尤以干预B组效果最显著。结论:淫羊藿苷可能通过降低ALP活性及OPG、RANKL表达来抑制动脉钙化。     

内皮素受体阻断剂抑制磷酸甘油诱导血管平滑肌细胞钙化

目的：在离体钙化的血管平滑肌细胞上，观察内皮素受体阻断剂对血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响，探讨内皮素(ET)促进细胞钙化的信号转导和分子机制。方法：β-磷酸甘油制备钙化VSMCs；通过细胞钙含量,［45Ca2+］摄取，碱性磷酸酶活性测定，判断钙化程度，［3H］-胸腺嘧啶（［3H］-TdR）和［3H］-亮氨酸（［3H］-Leu）掺入测定细胞DNA合成，竞争性定量RT-PCR测定VSMCs骨桥蛋白 （OPN） mRNA水平，放射免疫法测定培养上清ET含量。结果: 与正常对照VSMCs相比，钙化VSMCs内钙含量，［45Ca2+］摄入及碱性磷酸酶活性分别增加 119%、174%和7倍（P<0.01），OPN表达增加86%；细胞生长活跃，［3H］-TdR和［3H］-Leu分别增加71%和35%；钙化细胞培养基中内皮素含量较对照组增加35%(P<0. 05)。而钙化加内皮素受体阻断剂BQ123组明显减轻VSMCs钙化程度，钙含量，［45Ca2+］摄入及碱性磷酸酶活性分别较钙化组降低33%、37%、40%（均P<0.01），OPN表达明显下调25%；细胞增殖活性明显降低。结论: BQ123可减轻VSMCs钙化程度，表明ET促进VSMCs钙化主要是通过内皮素A型受体（ET-A）途经。     

钙化大鼠主动脉钙调神经磷酸酶的表达及活性

目的探讨钙调神经磷酸酶是否参与血管钙化的调节过程。方法4周龄SD雄性大鼠36只,随机分为对照组、钙化组和环孢霉素A组,每组12只。采用华法林和维生素D,建立大鼠主动脉钙化模型,免疫组织化学方法测定主动脉组织钙调神经磷酸酶蛋白,比色法测定组织钙调神经磷酸酶活性,比较各组间钙调神经磷酸酶蛋白表达及活性是否有差别。结果钙化组大鼠主动脉钙调神经磷酸酶蛋白表达较对照组明显增加（P〈0．01）,钙化组大鼠主动脉钙调神经磷酸酶活性较对照组明显增强（P〈0．01）;环孢霉素A组大鼠主动脉钙调神经磷酸酶蛋白表达较对照组明显增加（P〈0．01）,较钙化组表达减少（P〈0．05）,环孢霉素A组大鼠主动脉钙调神经磷酸酶活性较对照组明显增加（P〈0．01）,与钙化组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论钙调神经磷酸酶很可能参与血管钙化的调节过程。