野黄芪甙元对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的P：观察野黄芪甙元对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用。方法：大鼠随机分为正常对照组,糖尿病组,野黄芪甙元治疗组,腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病动物模型,分别于4,6周测定血糖,Scr,BUN,Ucr,尿蛋白,Ccr,肾重／体重,肾小球平均面积（MGPA）,平均体积（MGV）,对电镜片进行形态学观察,结果：野黄芪甙元治疗后肾脏肥大指数,尿蛋白较糖尿病组明显减少,肾功能,体视学指标明显改善,结论：中药野黄芪甙元可以改善糖尿病大鼠肾脏功能和结构的损伤,起到保护肾脏的作用。     

供体NK细胞对非清髓异基因造血干细胞移植受体异基因反应的抑制作用

<正>异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)可以彻底治愈恶性血液病,且复发危险小。但allo-HSCT存在发生移植物抗宿主病及移植排斥反应的风险,临床上主要采用清髓照射及非特异性免疫抑制剂来应对,但部分患     

露蜂房对淋巴细胞与胰岛混合培养系统中淋巴细胞转化的影响

目的初步探索露蜂房对淋巴细胞与胰岛混合培养系统中淋巴细胞转化的影响。方法露蜂房水提取液系利用其生药通过水提醇沉法制备获得。无菌制备大鼠淋巴细胞及猪胰岛组织悬液,并对二者进行混合培养,在37℃、5%CO2的培养箱中进行,培养过程中分别加入3种浓度(4.0、0.4及0.2g/ml)的露蜂房水提取液,即露蜂房Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ组,应用3H-TdR掺入法测定放射性核素每分钟脉冲数(cpm),观察大鼠淋巴细胞的转化情况,并设立空白组和环孢素A(CsA)组作为对照。结果3种浓度的露蜂房水提取液对大鼠淋巴细胞的转化均有明显抑制作用(P<0.001),3组抑制率分别为45.3%、29.6%和9.2%;但与CsA相比,免疫抑制作用较弱(CsA抑制率为80.7%)。结论露蜂房对淋巴细胞胰岛混合培养系统中的淋巴细胞转化有抑制作用,且随浓度增加抑制作用增强,提示露蜂房可以抑制T细胞介导的免疫功能。     

异种淋巴细胞混合培养时T淋巴细胞分泌细胞因子的格局

目的 研究异种淋巴细胞混合培养时T淋巴细胞亚群分泌细胞因子的格局。方法 用单向异种混合淋巴细胞反应体系研究人－猪间细胞反应的细胞因子分泌格局。结果 γ干扰素的mRNA与蛋白质均强表达,而白细胞介素4（IL－4）均无表达,初次混合淋巴细胞反应时,IL－10的mRNA弱表达,但是猪抗原特异性T淋巴细胞系中未检测到IL－10mRNA表达。结论 异种淋巴细胞混合培养时以Ⅰ型细胞因子分泌为主,参与反应的细胞因子格局和同种移植时呈现相似性。     

异基因造血干细胞移植治疗慢性淋巴细胞白血病的研究进展

大多数慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者发病时年龄较大,因CLL呈惰性病程,临床上通常不将高强度治疗方案作为治疗CLL的一线应用,但少数患者的CLL恶性程度高,病情进展较快,必要时需考虑行异基因造血干细胞移植(allo-HSCT).鉴于allo-HSCT的风险较高,故明确适应证和选择移植时机至关重要.本文就异基因造血干细胞移植治疗慢性淋巴细胞白血病的进展作如下综述.     

淋巴细胞与肝癌细胞混合培养诱导特异性细胞毒T淋巴细胞的形成

目的 通过肝癌细胞和淋巴细胞混合培养，体外诱导产生高活性的肝癌特异性细胞T淋巴细胞（H－S－CTL）。方法 采用淋巴细胞和肝癌细胞混合培养技术，在IL－1，IL－2，IL－4和IL－6刺激下，诱导产生H－S－CTL，应用间接免疫荧光法和^51Cr释放法检测其对靶细胞的杀伤效应。结果 H－S－CTL与自身LAK相比，CD3＋，CD4＋和CD8＋细胞明显增多，抗肿瘤效应明显增强。结论 采用淋巴细胞和肝癌细胞混合培养同时应用白细胞介素可获得大量扩增的高活性的H－S－CTL。     

10-羟基喜树碱对异基因大鼠心脏移植物急性排斥反应的抑制作用

目的　探讨 10 羟基喜树碱 (HCPT)对移植物急性排斥反应的免疫抑制作用。方法　以SD大鼠为供者 ,Wistar大鼠为受者 ,行大鼠同种异体异位心脏移植。用中药制剂 10 羟基喜树碱(HCPT)预防和治疗移植物急性排斥反应。结果　HCPT 1.0mg·kg-1·d-1组与对照组比较 ,移植物存活时间明显延长 (6.0 5d/ 11.45d ,P <0 .0 0 1) ;HCPT 2 .0mg·kg-1·d-1组作用更为显著 (>2 41.6d) ,其中 3只大鼠于术后 60d停用HCPT ,移植心脏长期存活 ,超过 73 0d ,并经证实已形成免疫耐受。大鼠心脏移植物发生急性排斥反应时 ,HCPT 10 .0mg·kg-1·d-1能使排斥反应完全逆转 ,移植心脏功能完全恢复正常。较大剂量HCPT可导致轻微的胃肠道反应 ,但未观察到明显的肝、肾、心、脾、睾丸和造血系统损害。结论　HCPT对大鼠移植心脏急性排斥反应具有显著的抑制作用 ,且具有剂量相关性     

落新妇甙对小鼠心脏移植后移植物血管病的抑制作用

目的探讨落新妇甙对小鼠心脏移植后移植物血管病的抑制作用。方法建立小鼠颈部心脏移植模型,将受鼠随机分为环孢素A(CsA)组(术后每天用CsA5mg/kg灌胃)和落新妇甙组(术后每天用落新妇甙5mg/kg灌胃)。术后第60d切取移植心,观察移植心脏组织学变化,以HPIAS-1000图像分析仪测量冠状动脉管壁厚度与动脉直径的比值,根据平均内膜厚度和管腔狭窄程度对CAV病变进行评分。结果CsA组移植心脏可见明显的纤维化,大量单核细胞浸润,动脉硬化明显,冠状动脉管壁厚度与血管直径的比值为0.63±0.20,明显高于落新妇甙组的0.22±0.04(P<0.01);CsA组心脏移植物血管病变评分为(2.3±0.6)分,高于落新妇甙组的(1.1±0.3)分(P<0.05)。落新妇甙组心脏移植物的冠状动脉内膜病变轻微,内皮和内弹力层基本保持完整,平滑肌细胞增殖不明显。结论落新妇甙能减缓移植心冠状动脉硬化,对小鼠心脏移植后移植物血管病有明显的抑制作用。     

转染可溶性CD40基因的树突状细胞在体外对T淋巴细胞功能的抑制作用

目的探讨转染可溶性CD40(sCD40)基因的树突状细胞(DC)在体外对T淋巴细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的细胞毒活性的影响。方法采用脂质体转染法,将携带鼠CD40胞外区和绿色荧光蛋白的融合基因的质粒pEGFP-N1/sCD40转染小鼠DC细胞株(DC 2.4)。以Balb/c小鼠淋巴细胞为反应细胞,分别以转染组DC、空载体转染组(空载体组)DC和未行转染处理的DC(空白DC)作为刺激细胞,进行单向混合淋巴细胞培养,四唑氮化合物比色法检测细胞增殖情况。用乳酸脱氢酶释放试验和流式细胞术检测转染组DC及其培养上清液对CTL细胞毒活性及其凋亡的影响。结果转染组DC及其培养上清液对同种细胞刺激的淋巴细胞增殖反应有显著的抑制作用(P<0.05),并对特异性CTL的细胞毒活性具有明显的抑制作用(P<0.05);转染组DC可诱导CTL凋亡(P<0.05)。结论稳定表达sCD40-EGFP融合蛋白的DC,在体外对T淋巴细胞的增殖和CTL的细胞毒活性具有明显的抑制作用,并可诱导CTL凋亡。     

Ly49A转基因淋巴细胞对异基因骨髓移植后GVHD和GVL的影响

目的　观察Ly49A基因转染淋巴细胞对异基因骨髓移植后移植物抗宿主病 (GVHD)和移植物抗白血病效应 (GVL)的影响。方法　经逆转录病毒介导将Ly49A基因转染至C57BL/ 6小鼠的淋巴细胞 ,以C57BL/ 6(H 2 b)小鼠为供者 ,以接种EL961 1红白血病细胞的BALB/c(H 2 d)小鼠为受者 ,进行脾淋巴细胞和骨髓细胞联合移植 ,建立异基因急性GVHD模型 ,观察Ly49A基因转染的淋巴细胞对GVHD和GVL的影响。结果　在未进行移植的单纯照射组 ,小鼠的存活时间为 (6 .50±2 .41 )d ;仅以环磷酰胺治疗的小鼠存活时间为 (2 0 .90± 2 .88)d ;非转染淋巴细胞和骨髓细胞联合移植组的存活时间为 (1 7.1 0± 4 .65)d ;空载体转染淋巴细胞和骨髓细胞联合移植组的存活时间为(1 7.40± 5 .32 )d ;Ly49A转染淋巴细胞与骨髓细胞联合移植组的存活时间为 (35 .2 0± 1 2 .52 )d ,较上述各组明显延长 (P =0 .0 0 0 )。结论　Ly49A基因转染的淋巴细胞在异基因骨髓移植模型上具有一定程度的降低GVHD并保留GVL的作用     

猪—人混合淋巴细胞培养中细胞因子的检测

为了探讨异种移植排斥反应与细胞因子的关系，检测猪－人混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）中人类淋巴细胞的增殖反应及细胞因子含量，并与人类同种异体ＭＬＣ进行比较，结果显示，前者，增殖反应相当地或超过后者。两种ＭＬＣ上清液中白细胞介素２和γ和－干扰系的动态变化接近，目前者白细胞介素４的高峰值超过后者（Ｐ〈０．０５）。提示细胞因子在猪－２ＭＬＣ中可能起着一定的作用。     

长期混合淋巴细胞培养-细胞毒实验模型的建立

目的：建立一种能较逼真地模拟移植排斥反应的体外实验模型。方法：利用EB病毒转化的BI林巴母样细胞系作为刺激细胞,诱导同种异体或异种外周血单个核细胞增殖,并分化为效应细胞,然后检测效应细胞对刺激细胞源靶细胞的杀伤活性,建立长期混合淋巴细胞培养,细胞毒实验模型。结果：用不同刺激细胞诱导产生的效应细胞能有效杀伤刺激细胞来源的靶细胞,进一步克隆实验证实这种杀伤效应是由CD8^ 细胞毒性T淋巴细胞（CTL）所致,结论：长期混合淋巴细胞培养－细胞毒实验模型能较逼真地模拟器官移植受者体内发生的由CTL介导的急性排斥反应。     

新型衍生肽对淋巴细胞免疫功能及大鼠异基因移植肾存活的影响

目的 探讨新型组织相容性白细胞抗原（HLA）衍生肽RDPI258对淋巴细胞免疫功能及大鼠移植肾脏存活时间的影响。方法 采用人工标准固相合成法合成HLA衍生肽RDP1258，^3H—TdR掺入法观察其在体外对人外周单核细胞增殖反应的影响。建立原位大鼠异基因肾移植模型32只，设RDP1258＋CsA治疗组、RDP1258治疗组、CsA治疗组及对照组4组，每组8只，观察大鼠移植肾脏存活时间及移植肾功能。结果RDP1258可显著抑制淋巴细胞转化及单向混合淋巴细胞增殖反应（MLR）；RDP1258＋CsA治疗组受体大鼠平均存活63．4d，对照组平均存活9．4d，CsA治疗组平均存活16．9d，RDP1258治疗组平均18．3d，各组与联合治疗组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。对照组在术后5d切除对侧肾脏后血清肌酐浓度（450．0±84．2）μmol／L，CsA及RDP1258组血清肌酐浓度呈现缓慢上升趋势，分别为（360．0±78．4）及（350．0±65．8）μmol／L，与联合治疗组（47．4±11．2）μmol／L相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 RDP258能显著抑制人外周单核细胞丝裂原或同种抗原刺激引起的增殖反应，围手术期应用HLAⅠ类分子衍生肽结合小剂量CsA，能显著延长异基因移植物存活时间及功能，RDP1258可能成为一种新型的器官移植免疫调节药物。     

小干扰RNA对小鼠淋巴细胞cbl-b基因表达的抑制作用

目的 设计合成及筛选自身免疫关键基因--cbl-b (Casitas B-cell lineage lymphoma-b,cbl-b)基因小分子干扰RNA(siRNA).方法 应用RNA设计软件,模拟cbl-b小鼠cbl-b mRNA二级结构,设计并合成针对cbl-b mRNA的4对21核苷酸(nt)siRNA,96孔板转染小鼠淋巴细胞,以空白及转染非特异siRNA(与cbl-b mRNA无同源性的21nt siRNA)作为对照,应用蛋白免疫印迹(Western blot)方法 检测小鼠淋巴细胞cbl-b蛋白表达.结果 cbl-b基因siRNA工作浓度为100nmol/L时转染小鼠淋巴细胞转染率最高,可达(87.48±1.94)%,平均荧光强度最强,可达33.09±1.77.与对照相比,转染cbl-b siRNA的小鼠淋巴细胞蛋白表达明显下调,以siRNA-4最显著,抑制率达85%,转染非特异性siRNA的小鼠淋巴细胞cbl-b蛋白表达水平无明显变化.结论 得到cbl-b siRNA转染小鼠淋巴细胞最佳转染条件,成功筛选能高效抑制cbl-b蛋白表达的siRNA-4,其有效抑制时间约为48h,有望通过沉默cbl-b基因直接活化淋巴细胞,增强机体主动免疫杀伤肿瘤细胞.

Abstract：

Objective To design, synthesize screen small interfering RNA (siRNA) targeting to Casitas B-cell lineage lymphoma-b (cbl-b).Methods Four pairs of 21 nucleotide siRNAs directed to Cbl-b mRNA were designed and synthesized by utilizing RNA design software to simulate secondary structure of cbl-b mRNA in mice. These siRNAs were respectively transfected into lymphocytes in 96 shadows mask by oligofectamine package, and untreated and unspecific siRNA-transfected lymphocytes served as controls. The expression of cbl-b protein was detected by Western blotting.Results When the work concentration of siRNA was 100 nmol/L, transfection efficiency of lymphocytes was highest, up to (87.48±1.94)% and the mean fluorescence intensity was strongest, up to 33.09±1.77. Compared with bland controls, the expression of cbl-b protein level was markedly down-regulated in siRNA-transfected lymphocytes. The inhibitory rate of the siRNA of the target-4 was highest, up to 85%. The expression of cbl-b protein in unspecific siRNA-transfected lymphocytes had no significant changes.Conclusion siRNA-4, which can highly effectively inhibit protein expression of cbl-b gene, was screened successfully, and its inhibition effect can maintain near 48 h. It is hopeful that the cbl-b siRNA will activate lymphocytes directly by cbl-b gene silencing, and kill tumor by activate immunization.     

异基因造血干细胞移植后动态监测调节性T淋巴细胞的临床意义

目的探讨监测调节性T淋巴细胞（Treg）的动态变化在异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）中的临床意义。方法选择45例allo-HSCT患者，其中31例采用短程甲氨蝶呤（MTX）联合环孢素A（CsA）预防移植物抗宿主病（GVHD），另14例加用霉酚酸酯（MMF）和达利珠单抗（抗CD25单克隆抗体）强化GVHD的预防。采用流式细胞术动态监测allo-HScT患者移植预处理前、移植后2、4、8、12周时及发生急性移植物抗宿主病（aGVHD）时外周血Treg的水平；分析Treg水平的变化与aGVHD发生的相互关系。结果45例患者中，发生Ⅱ～Ⅳ度aGVHD10例。移植后8和12周时，未使用达利珠单抗组中发生Ⅱ～Ⅳ度aGVHD较发生0～I度aGVHD的患者外周血Treg水平显著降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；患者发生Ⅱ～Ⅳ度aGVHD后，外周血Treg水平较发生前显著降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。使用达利珠单抗组的患者外周血Treg水平在各时间点均明显降低，各时点间比较，差异均无统计学意义。结论Treg的动态变化与aGVHD的关系密切，可作为临床监测aGVHD发生的重要指标之一；达利珠单抗的应用显著降低了外周血Treg的水平，其对aGVHD的预防作用有待今后深入研究。     

羟喜树碱和环孢素A对异基因大鼠心脏移植物急性排斥反应的协同抑制作用

目的 探讨羟喜树碱（OPT）和环孢素A（CsA）对异基因心脏移植物急性排斥反应的协同抑制作用。方法 以纯系SD大鼠为供者,纯系Wistar大鼠为受者,行异体颈部异位心脏移植。40只受者大鼠心脏移植后随机分成4组。A组接受安慰剂。B组接受 OPT1.0mg·kg-1·d-1,腹腔注射。E组接受CsA　10mg·kg-1·d-1,导管灌胃。F组联合应用OPT和CsA,方法剂量同B、E组。结果A组平均存活期为（6.05±0.76）d,B组为（11.45±1.99）d,E组为（14.45±4.85）d,F组有5只大鼠平均存活期为（45.00±19.43）d,另5只大鼠在移植60d后停用OPT和 CsA,存活期超过730 d,并经试验证明形成特异性免疫耐受。结论OPT和CsA的联合应用显著降低异基因大鼠心脏移植物急性排斥反应,明显延长心脏移植存活期。     

自体异体表皮细胞与自体淋巴细胞混合培养的免疫反应

目的　探讨嵌入式混合植皮后排异反应受抑的免疫学机制。　方法　按不同比例 ,将烧伤患者表皮细胞、淋巴细胞与异体表皮细胞混合培养 ,模拟混合植皮时自体皮岛的局部免疫微环境 ,另将正常人相应细胞混合培养 (对照 )。采用3 H TdR法检测淋巴细胞cpm值 ,采用免疫组化技术检测HLA分子和T细胞亚群。　结果　 (1)烧伤患者表皮细胞能有效抑制淋巴细胞增殖反应 ,而正常人无此现象 ;(2 )烧伤患者表皮细胞中HLA DQ分子不介导自体淋巴细胞增殖受抑 ;(3)烧伤患者表皮细胞中HLA DR表达阳性率明显高于正常人 (P <0 .0 5 ) ,两者淋巴细胞中HLA DR分子表达相比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;(4)烧伤患者淋巴细胞中CD8表达明显高于正常人 (P <0 0 1) ,CD4表达明显低于正常人 (P <0 .0 1) ,CD3表达与正常人相比差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。　结论　大面积烧伤患者混合植皮时 ,自体表皮细胞可明显抑制淋巴细胞的增殖反应 ,其机制与烧伤患者自身淋巴细胞及表皮细胞的特殊免疫状况有关     

淋巴因子在混合淋巴细胞培养中的表达与肝移植免疫反应

肝移植已成为治疗终末期肝病惟一的有效手段，但术后排斥反应的诊断和治疗仍是目前面临的主要问题之一，也是术后血管及胆道并发症高发（如术后血管闭塞、胆管消失综合征-VBDS）、移植费用据高不下及影响病人术后生存质量的最主要原因。淋巴细胞（特别是T淋巴细胞）的激活仍是同种肝移植排斥反应的首要因素，但其机制尚未完全明了。近年来，动物试验和临床研究均证实，通过检测器官移植受体术后血浆淋巴细胞因子（lymphokine，LK）水平，作为诊断排斥反应及免疫耐受具有可行性。但体内监测到的LK水平易受感染、缺血损伤、药物等各种因素的影响，缺乏特异性，从而限制了LK的临床应用。而供受体淋巴细胞混合培养（mixed lymphocyte culture，MLC）则可排除各种体内因素的影响，因此检测MLC中LK的表达水平在研究肝移植免疫中具有重要意义，有广阔的临床应用前景。本文就淋巴因子在混合淋巴细胞培养中的表达与移植免疫排斥反应的关系及研究现状作一综述。     

青藤碱对同种异体胰岛刺激淋巴细胞的免疫抑制作用

目的研究青藤碱(SIN)对同种异体胰岛刺激淋巴细胞的免疫抑制作用以及对胰岛活性和功能的影响。 方法以Wistar大鼠胰岛作为刺激原,Lewis大鼠脾淋巴细胞作为反应细胞体外共同培养,分为4组：SIN组为SIN＋胰岛＋淋巴细胞共培养;他克莫司(Tac)组为Tac＋胰岛＋淋巴细胞共培养;阴性对照组为胰岛＋淋巴细胞共培养;空白对照组为单纯淋巴细胞培养。四甲基噻唑蓝法检测各组淋巴细胞增殖情况,ELISA法检测上清液细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-10)浓度以及胰岛素分泌量,吖啶橙－碘化丙啶染色检测胰岛细胞活性。采用单因素方差分析比较4组混合淋巴细胞培养后OD值、细胞增殖率、上清液细胞因子浓度、胰岛素分泌量及胰岛素刺激指数等指标,采用LSD法进行组间两两比较。 结果混合淋巴细胞培养第3天,阴性对照组、SIN组、Tac组和空白对照组OD值分别为0.524±0.048、0.438±0.032、0.429±0.037、0.327±0.026;SIN组OD值低于阴性对照组、高于空白对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05),但与Tac组相比差异无统计学意义(P>0.05)。计算淋巴细胞增殖率SIN组和Tac组分别为(33.9±2.8)%、(33.2±3.0)%,均低于阴性对照组(P均<0.05),但SIN组和Tac组差异无统计学意义(P>0.05)。SIN组上清液IFN-γ、IL-2浓度分别为(67±6)、(322±21) pg/mL,均低于阴性对照组,高于空白对照组(P均<0.05),但与Tac组差异无统计学意义(P>0.05);IL-10浓度为(76±4) pg/mL,高于其他3组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。SIN组高糖及低糖刺激下胰岛素分泌量分别为(14.7±2.1)、(8.3±1.2) mU/L,计算胰岛素刺激指数为1.73±0.24,胰岛细胞存活率为(82.5±4.7)%,均优于Tac组和阴性对照组(P均<0.05)。 结论SIN对同种异体胰岛刺激的淋巴细胞具有免疫抑制作用,同时可减轻胰岛免疫损伤;与他克莫司相比,能更好地保持胰岛细胞活性及分泌功能。