miR-9-5 p和miR-125 b-5 p在膝关节骨性关节炎软骨中的表达及意义

目的 研究miR-9-5p、miR-125b-5p在膝关节骨性关节炎(KOA)软骨中的表达及意义.方法 选取骨科建卡就诊的KOA患者124例为研究对象(KOA组),将KOA组软骨标本(重度退变软骨、中度退变软骨、轻度退变软骨)分为重度组(32例)、中度组(44例)和轻度组(48例);选取同期因交叉韧带断裂、盘状软骨损伤...     

miR-125a-5p在胃癌组织中表达的生物信息学分析及实验验证研究

目的 通过生物信息学分析方法,系统评价miR-125a-5p在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的相关性;通过实验观察miR-125a-5p在胃癌组织中的表达,分析其临床意义,并采用生物信息学方法,进行靶基因和信号通路富集分析。方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测miR-125a-5p在胃癌组织和癌旁组织中的表达,并分析其临床意义;采用UALCAN数据库分析miR-125a-5p在胃癌组织中的表达及临床病理特征;采用miRecords数据库的预测软件预测其靶基因,选择至少3个以上软件支持的靶基因,运用DAVID 6.7在线富集分析靶基因参与的信号通路。结果 生物信息学分析和实验研究均发现,相对于癌旁组织,miR-125a-5p在胃癌组织中表达明显下调(P<0.05),其表达与肿瘤淋巴结转移、浸润深度、肿瘤组织增殖阶段、肿瘤组织类型相关(P<0.05);生物信息学分析提示,miR-125a-5p与临床病理特征关系密切,其靶基因富集在33个与肿瘤相关的信号通路中。结论 miR-125a-5p是胃癌中下调表达的分子标记物,是潜在的具有临床相关性的抑癌基因,是与临床...     

稳定过表达/下调表达miR-125b-5p Jurkat T细胞株的建立及验证

目的 构建稳定过表达/下调表达miR-125b-5p的Jurkat T细胞株,为miR-125b-5p在免疫性疾病中的发病机制研究奠定基础。 方法 扩增质粒,经293T细胞包装产生慢病毒颗粒,感染Jurkat T细胞,RT-qPCR检测miR-125b-5p表达情况,Western blotting检测下游靶基因UVRAG表达情况。采用单因素方差分析,2组之间比较应用LSD检验,P<0.05为差异具有统计学意义。 结果 hsa-miR-125b-5p慢病毒过表达载体及对照转染Jurkat T细胞后均有绿色荧光表达,hsa-miR-125b-5p慢病毒干扰载体及对照转染Jurkat T细胞后均有红色荧光表达;RT-qPCR显示和对照组比较慢病毒过表达载体组miR-125b-5p表达水平明显增高(P<0.01),慢病毒干扰载体组miR-125b-5p表达水平明显降低(P<0.01),差异均有统计学意义。Western blotting显示和对照组比较,慢病毒过表达载体组下游靶基因UVRAG表达明显降低(P<0.001),慢病毒干扰载体组下游靶基因UVRAG表达明显升高(P<0.001),差异均有统计学意义。 结论 成功建立了稳定过表达/下调表达hsa-miR-125b-5p的Jurkat T细胞株。      

miR-125b-5p调控HK2抑制胆囊癌细胞增殖和糖酵解

目的 研究miR-125b-5p通过HK2调控人胆囊癌细胞增殖和糖酵解的作用机制。方法 分别在人胆囊癌细胞GBC-SD中转染NC mimic、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic+pcDNA-NC、miR-125b-5p mimic+pcDNA-HK2。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR）检测miR-125b-5p和HK2 mRNA的表达,Western blot检测HK2和LDHA、PDK1的蛋白表达。细胞计数试剂盒-8(cell countingKit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力,糖酵解相关试剂盒检测乳酸生成、葡萄糖消耗以及ATP生成。双荧光素酶报告基因实验对miR-125b-5p和HK2的靶向关系进行验证。结果 miR-125b-5p在胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ(P <0.001)以及组织（P <0.01）中表达降低,且在GBC-SD细胞中低于NOZ细胞中。过表达miR-125b-5p可显著抑制GBC-SD细胞的增殖（...     

肝癌组织miR-146b-5p和miR-134的表达下调及临床意义

目的 探讨微小RNA(miR)-146b-5p和miR-134在肝癌组织中的表达及其临床病理意义.方法 选取2017年6月～2018年12月我院收治的原发性肝癌患者73例,取患者的原发肿瘤组织为观察组,同时选取相对应的癌旁正常组织标本为对照组.采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测癌组织和癌旁正常组织中miR-...     

miR-30b-5p在乳腺癌中的表达及靶基因预测与生物信息学分析

目的 为深入研究miR-30b-5p在乳腺癌形成和发展中的作用提供理论依据.方法 原位杂交法(ISH)检测乳腺癌与癌旁组织中miR-30b-5p的表达.探针荧光定量PCR比较乳腺癌细胞系miR-30b-5p表达情况.软件预测miR-30b-5p的靶基因,进行KEGG及GO富集分析.结果 ISH显示乳腺癌组织中miR-30b-5p表达明显下调,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.01);miR-30b-5p的表达水平与 TNM 分期及远处转移等有关(P< 0.01),而与年龄和淋巴结转移无关(P>0.05).比较MCF-7,MDA-MB-231,MDA-MB-415,MDA-MB-453,和 MDA-MB-468这5株乳腺癌细胞系miR-30b-5p表达情况,发现较正常乳腺组织呈不同程度的低表达,并且以侵袭性最强的MDA-MB-231细胞的表达最低(P<0.01).在乳腺癌中,KEGG分析显示miR-30b-5p的靶基因参与了Pathways in cancer、P53 signaling pathway、Wnt signaling pathway、Cell cycle等通路,GO分析显示miR-30b-5p具有细胞代谢调控、基因表达调控、RNA代谢调控等生物功能.结论 miR-30b-5p在乳腺癌中表达明显下调,可能通过参与Pathways in cancer、P53 signaling pathway、Wnt signaling pathway、Cell cycle等通路,对乳腺癌细胞的代谢、基因表达等功能具有重要影响.     

基于生物信息学分析mi R-125b-5p在肺腺癌中的表达及预后价值

目的 应用生物信息学方法分析mi R-125b-5p在肺腺癌（LUAD）中的表达,预测其靶基因及预后价值。方法选取GEO数据库中LUAD顺铂耐药组织和细胞芯片,应用R软件筛选差异表达miRNA。应用miRBase数据库进行保守性分析,并采用db DEMC3.0数据库进行表达水平分析。利用Target Scan、mi RDB、mi RTar Base数据库预测靶基因,并运用DAVID在线网站对靶基因进行功能富集分析。联合TCGA数据库LUAD患者生存信息,进行预后分析。实时荧光定量PCR技术检测mi R-125b-5p在人正常支气管上皮细胞系16HBE、LUAD细胞系A549以及顺铂耐药细胞系A549/DDP中的表达水平。结果 分析芯片数据获得LUAD顺铂耐药相关miR-125b-5p,其具有高度保守性,并在LUAD中显著下调。预测到的54个靶基因主要富集在调节基因表达、细胞大分子生物合成等过程,以及Micro RNAs in cancer、Protein processing in endoplasmic reticulum、HIF-1 signaling pathway等通路。Kap...     

miR-15b-5p在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测miR-15b-5p在胃癌中的表达变化,探索其对胃癌细胞功能的影响。方法:采用实时定量PCR检测35例胃癌组织及其对应的癌旁正常胃组织中miR-15b-5p的表达;构建miR-15b-5p过表达载体及合成miR-15b-5p抑制剂,并转染胃癌细胞系AGS;应用MTT法检测胃癌细胞增殖能力变化;采用流式细胞术分析miR-15b-5p对细胞周期和凋亡的影响。结果:miR-15b-5p在胃癌组织中的表达显著下调(P<0.01);转染miR-15b-5p过表达载体抑制了胃癌细胞的增殖,将细胞周期阻滞在G_0/G_1期,并诱导了细胞凋亡;转染miR-15b-5p抑制剂促进了胃癌细胞的增殖,使细胞进入S和G_2/M期,并抑制细胞凋亡。结论:miR-15b-5p在胃癌中下调,抑制胃癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

miR-181b-5p在人卡波西肉瘤组织中的表达变化及临床意义

目的 检测miR-181b-5p在人卡波西肉瘤（KS）组织中的表达,明确miR-181b-5p是否与KS的发生发展相关。方法 收集2012年1月-2013年10月新疆维吾尔自治区人民医院18例行HE染色病理检查明确诊断KS患者的KS组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR检测KS组织和癌旁组织中miR-181b-5p表达水平并比较其差异;同时对miR-181b-5p表达的影响因素进行分析。结果 KS组织中miR-181b-5p表达水平为（0.73±0.40）,高于癌旁组织中的（0.24±0.16）（t=4.826,P＜0.01）。不同年龄、病程、全身皮损面积、全身皮损类型及人疱疹病毒8型（HHV-8）、人类免疫缺陷病毒（HIV）阴阳性患者KS组织miR-181b-5p表达水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;不同肿瘤组织病理分期患者miR-181b-5p表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。斑块期、结节期患者miR-181b-5p表达水平高于斑片期（P＜0.05）。HIV合并HHV-8双阳性患者miR-181b-5p表达水平为（0.32±0.19）,HIV合并HHV-8双阴性患者miR-181b-5p表达水平为（0.43±0.17）,差异无统计学意义（t=1.615,P=0.158）。结论 miR-181b-5p可能参与了KS的致瘤过程,miR-181b-5p有可能成为潜在的分子诊断指标之一。     

胃癌组织miR-125a-5p和miR-125a-3p表达及其与临床病理特征的关系

目的：探讨miR-125a-5p和miR-125a-3p在胃癌中的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法：采用茎环Real-time RT-PCR检测30例胃癌组织及其正常胃黏膜组织中miR-125a-5p和miR-125a-3p的表达并分析其表达与不同临床病理特征分组关系。结果：miR-125a-5p和miR-125a-3p在胃癌组织较癌旁正常组织表达均明显升高（P=0.012和P=0.025）,其中miR-125a-5p表达量约为miR-125a-3p表达量的30倍,但二者表达比值在胃癌组织及正常胃黏膜组织中差异未见显著性;扩大样本量后结果显示miR-125a-3p的表达在有无淋巴结转移组间差异存在显著性（P=0.001）;而miR-125a-5p的表达在不同分化程度组间差异存在显著性（P=0.003）。结论：正常胃黏膜及胃癌组织中均可以检测到miR-125a-5p和miR-125a-p的表达;miR-125a-5p和miR-125a-3p在胃癌组织和癌旁正常黏膜组织中的表达差异存在显著性,miR-125a-3p的表达在胃癌的不同淋巴结转移组间差异存在显著性;miR-125a-5p的表达在胃癌不同分化组间差异存在显著性。     

miR-30b-5p抑制胆固醇合成和结直肠癌细胞增殖

目的 探索 miR-30b-5p 在结直肠癌中的作用及机制.方法 收集结直肠癌患者的癌及癌旁组织、患者及正常人血清,提取RNA,实时荧光定量 PCR检测 miR-30b-5p表达.将miR-30b-5p的inhibitors转入HT-29 细胞中;将miR-30b-5p的mimics转入 HCT-116 细胞中;CCK-8 试剂盒检测细胞活力;胆固醇试剂盒检测细胞中胆固醇含量;实时荧光定量PCR检测低密度脂蛋白受体( LDLR)的表达,Western blot检测 LDLR 蛋白表达;在转入 miR-30b-5p inhibitors 的HT-29细胞中应用siRNA敲低LDLR,检测LDLR蛋白表达、细胞胆固醇含量及细胞增殖.结果 与正常人相比,miR-30b-5p在结直肠癌患者组织及血清中表达降低,且其在结直肠癌细胞系HT-29、Caco-2及HCT-116中的表达量低于正常结直肠细胞系NCM460;在HT-29细胞中转入miR-30b-5p的inhibitors,细胞增殖加快,胆固醇含量增加,LDLR表达上调;在HCT-116细胞中转入miR-30b-5p的mimics,细胞增殖减慢,胆固醇降低,LDLR表达被抑制;此外,在miR-30b-5p沉默的HT-29细胞中敲低LDLR,胆固醇含量减少,细胞增殖减慢.结论 miR-30b-5p在结直肠癌中是一种抑癌microRNA,它通过抑制LDLR和胆固醇合成抑制结直肠癌细胞增殖.     

微小RNA125b-5p在氧化应激损伤中的作用实验研究

目的:利用体外神经元模型,探讨miR125b-5p对氧化应激的影响。方法:建立过氧化氢(H_2O_2)诱导神经元细胞氧化应激模型,将miR125b-5p的类似物(mimics)转染至HT22细胞实现其过表达。造体外氧化应激模型,采用MTT(噻唑蓝)法检测细胞活力,实时定量PCR(qPCR)检测miR125b-5p表达水平及抗氧化酶HO-1、Mn SOD的基因表达水平。分析微小RNA125b-5p对氧化应激损伤的影响。结果:在体外氧化应激模型中miR125b-5p表达量明显下降;转染miR125b-5p的类似物(miR125b-5p mimics)后,和阴性对照(NC)相比,miR125b-5p在HT22细胞中过表达显著增加;MTT结果显示,miR125b-5p mimics组与对照组相比细胞存活率明显增加;qPCR结果显示,与NC组相比,miR125b-5p过表达可上调抗氧化酶HO-1和Mn SOD mRNA表达水平,发挥抗氧化作用。结论:miR125b-5p在H_2O_2刺激的神经元细胞中明显下调,miR125b-5p过表达可显著提高神经元细胞存活率。miR125b-5p抗过氧化氢诱导的神经元氧化损伤的作用机制可能与提高抗氧化酶HO-1、Mn SOD mRNA的表达相关。     

CYTOR通过调控miR-125b-5p/HK2通路促进宫颈癌细胞有氧糖酵解、增殖和侵袭

探讨细胞骨架RNA(CYTOR)及其下游分子轴对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。选取宫颈癌组织及细胞,检测CYTOR的表达水平;采用CCK-8、Transwell、有氧糖酵解方法检测探讨CYTOR对宫颈癌细胞增殖、侵袭和有氧糖酵解的影响;同时利用双荧光素酶报告基因验证CYTOR、小分子RNA miR-125b-5p、己糖激酶2(HK2)之间的相互作用关系。结果显示,CYTOR在宫颈癌组织及细胞中明显上调(P<0.05);抑制CYTOR可明显降低宫颈癌细胞增殖、侵袭和有氧糖酵解(P<0.05);荧光素酶报告基因证实CYTOR可竞争性吸附miR-125b-5p,而miR-125b-5p可负调控HK2的表达。研究表明,CYTOR/miR-125b-5p/HK2分子轴促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和有氧糖酵解,是一个潜在的宫颈癌治疗分子靶点。     

CYTOR通过调控miR-125b-5p/HK2通路促进宫颈癌细胞有氧糖酵解、增殖和侵袭

探讨细胞骨架RNA(CYTOR)及其下游分子轴对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。选取宫颈癌组织及细胞,检测CYTOR的表达水平;采用CCK-8、Transwell、有氧糖酵解方法检测探讨CYTOR对宫颈癌细胞增殖、侵袭和有氧糖酵解的影响;同时利用双荧光素酶报告基因验证CYTOR、小分子RNA miR-125b-5p、己糖激酶2(HK2)之间的相互作用关系。结果显示,CYTOR在宫颈癌组织及细胞中明显上调(P<0.05);抑制CYTOR可明显降低宫颈癌细胞增殖、侵袭和有氧糖酵解(P<0.05);荧光素酶报告基因证实CYTOR可竞争性吸附miR-125b-5p,而miR-125b-5p可负调控HK2的表达。研究表明,CYTOR/miR-125b-5p/HK2分子轴促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和有氧糖酵解,是一个潜在的宫颈癌治疗分子靶点。     

冠心病患者血浆miR-125b-5p表达变化及其与疾病严重程度关系研究

目的：探讨冠心病患者血浆miR-125b-5p表达变化及其与疾病严重程度关系。方法：选取我院2014年12月至2017年12月收治的冠心病患者112例为观察组。据临床分型将观察组患者分为急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）组,共37例,稳定型心绞痛（stable angina pectoris,SAP）组,共38例,不稳定型心绞痛（unstable angina pectoris,UAP）组,共37例;选取同期正常体检者41例为对照组。检测所有患者血浆miR-125b-5p与高敏C反应蛋白（hs-CRP）表达水平,并分析血浆miR-125b-5p与hs-CRP表达水平与冠心病发病之间的相关性。结果：观察组患者血浆miR-125b-5p水平低于对照组,血浆hs-CRP水平高于对照组（P<0.05）。AMI组患者miR-125b-5p水平低于SAP、UAP、对照组,hs-CRP水平高于SAP、UAP、对照组（P<0.05）。UAP组患者miR-125b-5p水平低于SAP、对照组,hs-CRP水平高于SAP、对照组（P<0.05）,SAP患者miR-125b-5p水平低于对照组,hs-CRP水平高于对照组（P<0.05）。经多元回归Logistic分析表示,血浆miR-125b-5p水平低、hs-CRP水平高是冠心病发生的独立危险因素（P<0.05）; Pearson相关性分析结果显示：冠心病与hs-CRP呈正相关（P<0.01）,与miR-125b-5p呈负相关（P<0.01）,miR-125b-5p与hs-CRP呈负相关（P<0.01）;miR-125b-5p、hs-CRP对冠心病的诊断价值均较高（P<0.05）。结论：冠心病患者随着疾病越来越严重,其血浆miR-125b-5p水平降低,hs-CRP水平则上升,且两者呈负相关,miR-125b-5p水平低、hs-CRP水平高是影响冠心病的独立危险因素,且两者可作为冠心病的诊断指标。