人尿胰蛋白酶抑制剂中间品的纯化

人尿胰蛋白酶抑制剂是一种可药用的生物制品，人尿胰蛋白酶抑制剂的粗品经过超滤，离子交换层析和亲和层要三步纯化，获得人尿胰蛋白酶抑制剂的中间品，其效价由原来的１０ｉｕ／ｍｇ纯化到２２４０ｉｕ／ｍｇ，比活为２４５０ｉｕ／ｍｇ蛋白质，活性回收率为５８％。     

人尿胰蛋白酶抑制剂中间品的纯化

人尿胰蛋白酶抑制剂是一种可药用的生物制品，人尿胰蛋白酶抑制剂的粗品经过超滤，离子交换层析和亲和层析三步纯化，获得人尿胰蛋白酶抑制剂的中间品，其效价由原来的１０ｉｕ／ｍｇ纯化到２２４０ｉｕ／ｍｇ，比活为２４５０ｉｕ／ｍｇ蛋白质。活性回收率为５８％     

大豆胰蛋白酶抑制剂对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的 探讨大豆胰蛋白酶抑制剂(Soybean trypsin inhibitor,SBTI)对人宫颈癌细胞(hela)体外增殖的影响.方法 选用hela细胞进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测SBTI对细胞增殖的影响.结果 在药物浓度为0.50～10.00 g/L浓度时,随着药物浓度的增加,随着作用时间的增加,SBTI对细胞增殖的抑制率明显增强;在光镜下可以看到细胞凋亡的特征形态.结论 SBTI对hela细胞的增殖有明显的抑制作用,呈现量效,时效关系.     

人脑肌酸激酶BB同工酶的提纯、鉴定及其抗血清制备

采用比较简便的提纯方法,从300g人脑中得到凝胶电泳纯的肌酸激酶BB同工酶(Creatine kinase BB isoenzyme,CK-BB)24mg,比活力高达1104u/mg蛋白,酶活力回收66％。同时,制备兔抗人CK-BB抗血清。经~(125)I联结标记法标记CK-BB,比放射性8288kBq/μg,50％结合率的CK-BB抗血清稀释度1:25000,亲和常数(K值)3.0×10~9mol/L,并具有理想的抗体特异性,可适用于CK-BB的放射免疫分析(RIA)。此外,还测定了CK-BB的部分物化性质和免疫学性质。     

人血浆纤维连接素的提纯及其抗血清制备

本文报道了用明胶-cNBr-Sepharose4B亲和层析法与Sephadex G200滤过层析法相结合提取人血浆Fn,操作简便,抗原纯度高。采用微量多点注射免疫新西兰大白兔,制备了兔抗人血浆Fn抗血清,能与人Fn抗原呈特异性反应,也能与其它动物的Fn抗原呈交叉反应,可用于测定血浆中Fn含量和免疫组织化学研究。     

结蛋白提纯及抗血清制备

<正> 结蛋白是肌源性组织中起源较早的被称为中间丝的结构抗原。近来研究发现,实性肿瘤细胞中不产生新的中间丝,因此可用于低分化肌源性肿瘤的诊断。但是目前在临床上难以广泛推广,其主要原因是难以获得抗血清。我们通过提纯鸡沙囊平滑肌 Desmin,免疫新西兰大白兔获取较纯的 Desmin 多克隆抗血清,探索提纯、鉴     

胰蛋白酶在原代细胞制备中的灵活应用

目的：探讨胰蛋白酶消化组织块制备原代细胞的最佳浓度。方法：在37℃下，相同时间里不同浓度的胰蛋白酶消化等量的组织块，制备原代细胞，对获得的原代细胞细胞数、细胞成活率及细胞粘附性进行观察。结果：在同等条件下，0.125％胰蛋白酶为制备大多数种类原代细胞的较为理想的浓度。结论：在一定的温度及时间条件下，用0.25%的胰蛋白酶消化原代细胞得率较低，而0.125％胰蛋白酶消化的细胞得率较高。     

人皮肤角质形成细胞的胰蛋白酶消化分离及无血清培养

目的 探索用DMEM—SF培养基对经胰蛋白酶两步消化分离的人角质形成细胞进行培养的方法和条件。方法 取临床整形外科手术后剩余皮肤，用0．25％的胰蛋白酶经冷和温两步消化分离后，用DMEM—SF、完全培养基于5％CO2、37℃培养，绘制生长曲线，并用单克隆抗角蛋白抗体和鼠—IgG免疫组化试剂盒进行细胞鉴定。结果 用胰蛋白酶两步消化分离的角质形成细胞在：DMEM—SF、培养基中可正常生长2周以上，生长曲线显示细胞在第4天进入对数生长期，第10天进入停滞期。鉴定显示角质形成细胞占95％以上。来源于3个不同个体的皮肤角质形成细胞经等量混合后培养与单独培养相比，细胞生长无统计学差异。结论 用胰蛋白酶对人皮肤进行冷和温两步消化分离的角质形成细胞，在DMEM—SF完全培养基中生长状况良好，其他细胞污染少，实验成本低廉，操作简单。     

类胰蛋白酶及其抑制剂研究进展

研究人员在利用胰蛋白酶对肥大细胞进行酶组织化学染色时发现,肥大细胞能够被染色,说明其中存在着具有胰蛋白酶活性的物质.人们对该物质纯化后发现,它是由肥大细胞释放的,并且其胰蛋白酶样活性90%以上来自一种酶,因此命名该酶为类胰蛋白酶(tryptase).由于该酶是肥大细胞含量最丰富的一种分泌性介质,且在多种疾病的进程中起到诱导作用[1],因此类胰蛋白酶及其抑制剂已经成为近年来炎症及其相关疾病研究领域的热点.     

人骨胳肌磷酸肌酸激酶MM型同功酶的提纯和抗血清制备

近年来国内外相当重视血清磷酸肌酸激酶MB同功酶测定,认为是一项对急性心肌梗塞既敏感而又特异的试验。免疫抑制法测定磷酸肌酸激酶同功酶,是一种简单、快速、精确,可以定量且能大批量进行自动分析的方法。本文着重介绍此项试验的抗原提纯和抗血清制备。     

胰蛋白酶预处理在人角质形成细胞传代培养中的应用

1　材料和方法1.1　材料　 1KC的培养 :无菌条件下手术取人包皮 ,尽量剪除皮下组织 ,置于 1.5 g· L- 1 Dispase液中 4℃ 18～ 2 4h.将真表皮分离 ,取表皮分别置于 2 .5 g· L- 1胰蛋白酶 0 .1g·L- 1二乙胺四乙酸二钠 (EDTA)及含 10 0 m L· L- 1血清的DMEM中吹打成单细胞悬液 ,离心 30 0 g· m in- 1 ,10 min,弃悬液 ,KC无血清培养基 (Gibco BRL )重悬细胞 ,调整细胞数至1× 10 3· L- 1 ,接种至 6孔培养板 ,2 4h后换液 .当细胞生长至 80 %～ 90 %汇合时 1∶ 2传代 .1.2　方法　 1分组 :KC传代时分为两组 ,预处理组 :细胞约80 %…     

人胎盘运铁蛋白受体的提纯、鉴定及其抗血清的制备

以人胎盘绒毛膜为原料提纯运铁蛋白受体,是用1％Triton X-100增溶所得可溶性绒毛膜蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离,再经蛋白质硝酸纤维纸转移电泳后,以免疫酶标染色法及同位素碘标放射自显影法检测出运铁蛋白受体蛋白的区带。切取此区带,用生理盐水浸出,超滤浓缩后得到电泳纯的运铁蛋白受体。每个新鲜人胎盘可提取运铁蛋白受体蛋白约200μg,用SDS-PAGE测定其分子量(MW)为90,000。用卵清蛋白、人血清a_1-酸性蛋白、人IgG竞争抑制试验证明此受体与运铁蛋白特异性结合。用提纯的运铁蛋白受体免疫家兔,得到抗人运铁蛋白受体抗血清。采用间接免疫酶标法检测人宫颈癌培养细胞株(HeLa)及人肝癌培养细胞株(SMMC-7721),证明其细胞膜上运铁蛋白受体含量均增高。     

人血清类胰蛋白酶含量测定方法的建立

目的：检测正常人血清类胰蛋白酶含量，为肥大细胞相关疾病的诊断提供依据。方法：随机抽取正常人血清标本和1例过敏性休克死亡患者血清，用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测类胰蛋白酶的水平。结果：206份正常血清类胰蛋白酶含量的平均值为2.24ng/mL。过敏性休克死者血清胰蛋白酶含量为正常人的50倍。结论：本实验建立了较灵敏的检测类胰蛋白酶的ELISA法，为临床肥大细胞相关疾病的诊断提供依据。     

重组人甲状旁腺素1-34胰蛋白酶切肽图谱分析

目的 :对重组人甲状旁腺素 1- 34进行肽图谱测定 ,以确证一级结构和比较不同批产品间一级结构的一致性。方法 :运用梯度洗脱 /反相高效液相色谱法对样品进行纯度检查和肽图谱测定。结果 :建立了重组人甲状旁腺素 1 -34的胰蛋白酶水解肽图谱HPLC测定方法 ,3批样品的肽图谱均与对照品一致。结论 :建立的肽图测定方法简便、准确、重现性好 ,适用于产品的质量控制。     

肥大细胞类胰蛋白酶对人肾成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原表达的影响

目的探讨肥大细胞类胰蛋白酶在慢性肾组织纤维化中的作用.方法应用MTT比色法检测类胰蛋白酶对成纤维细胞的增生,RT-PCR检测Ⅰ型胶原mRNA的表达.结果肥大细胞类胰蛋白酶可促进肾间质成纤维细胞增生和Ⅰ型胶原mRNA的表达,且依赖于肝素的存在.蛋白水解酶抑制剂苯甲脒能抑制类胰蛋白酶的上述效应.结论肥大细胞类胰蛋白酶可直接作用于肾间质成纤维细胞,参与肾间质纤维化过程.     

肥大细胞类胰蛋白酶对人肾成纤维细胞增殖和I型胶原表达的影响

目的　探讨肥大细胞类胰蛋白酶在慢性肾组织纤维化中的作用。方法　应用MTT比色法检测类胰蛋白酶对成纤维细胞的增生,RT PCR检测I型胶原mRNA的表达。结果　肥大细胞类胰蛋白酶可促进肾间质成纤维细胞增生和I型胶原mRNA的表达,且依赖于肝素的存在。蛋白水解酶抑制剂苯甲脒能抑制类胰蛋白酶的上述效应。结论　肥大细胞类胰蛋白酶可直接作用于肾间质成纤维细胞,参与肾间质纤维化过程。     

壳聚糖固定胰蛋白酶的研究

目的：从蟹壳中提取壳聚糖，将胰蛋白酶固定在从蟹壳中提取的壳聚糖上。方法：以自制壳聚糖为载体，戊二醛为双官能团交联剂，将胰蛋白酶固定化。结果：０．２ｇ壳聚糖（干）与４％戊二醛交联后再与５．０ｍｇ胰蛋白酶固定结合，效果较好。固定化酶的表现米氏常数Ｋ′ｍ＝１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，而天然酶Ｋｍ＝７．６ｍｍｏｌ／Ｌ；固定化酶最适温度为８０℃，比天然酶提高了２０℃；固定化酶最适ｐＨ为７．０．而天然酶为８．０。该载体来源广，易提取，固定化酶的贮存稳定性很好，２个多月重复使用，酶活力未见明显下降