脂多糖诱导肝细胞HMGB1释放及其信号通路研究

目的研究脂多糖对肝细胞高迁移率族蛋白B1（HMGB1）释放的诱导作用及其胞内信号通路。方法采用正常大鼠肝细胞BRL-3A培养,观察100ug／L脂多糖诱导不同时间后细胞HMGB1 mRNA表达水平和细胞培养上清液中HMGB1含量的变化,及不同浓度的丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制剂SB202190、U0126对其诱导作用的影响。HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测。结果脂多糖诱导BRL-3A肝细胞6h后HMGB1 mRNA表达水平和培养上清液中HMGB1含量明显升高（P〈0．01）,后者随着诱导时间延长而进一步升高;20umol／LSB202190和20umol／LU0126对脂多糖诱导HMGB1胞外释放有不完全的抑制作用,但对HMGB1 mNNA表达无影响。结论内毒素脂多糖诱导肝细胞HMGB1的mRNA表达和胞外释放,丝裂原活化蛋白激酶信号通路参与其释放过程。     

HMGB1及其受体RAGE分子信号通路参与调节肝细胞肝癌增殖和侵袭迁移机制的研究

目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及其受体晚期糖基化终产物(RAGE)在人体肝细胞癌(HCC)组织中的表达情况,了解HMGB1及其受体RAGE对HCC细胞增殖和侵袭转移的影响,研究HMGB1及其受体分子信号通路参与调节HCC细胞增殖和侵袭转移的相关机制。方法选取10例人体HCC组织标本和HCC细胞培养标本,以正常的肝脏组织细胞作为对照。通过免疫荧光染色、Western blot、RT-PCR检查方法分析HMGB1对HCC细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、蛋白激酶B(AKT)、NT-κB等信号通路的调节,检测HCC细胞中HMGB1及其受体分子RAGE蛋白的表达量,对HMGB1及其受体RAGE的表达量与其临床症状作相关性分析。结果 1在HMGB1抑制剂甘草皂甙、重组HMGB1(r HMGB1)、r HMGB1+sRAGE的作用下,能够有效干扰HMGB1在HCC细胞中的表达。干扰HMGB1可以抑制HCC细胞的增殖、促使细胞凋亡、引起细胞周期阻滞,同时降低其体外迀移和侵袭能力。这些结果提示HMGB1在HCC中具有促增殖、促迁移、抗凋亡和侵袭的作用。2HMGB1能增强MAPKs和NF-κB信号通路活性。稳定干扰HMGB1的HCCLM3细胞内MAPKs的磷酸化水平降低,包括p38和JNK,同时它们的上游激酶(MEK1/2、SEK1)和下游底物(c-Jun、-Myc)的磷酸化也被抑制;NF-κB的表达量及Ser536位点的磷酸化水平也下调。结论 1HMGB1与RAGE结合通过激活MAPK信号通路最终导致核转录因子NF-κB激活并促进RAGE基因转录,增加RAGE的mRNA含量,使RAGE表达上调,正反馈的扩大HMGB1引起的反应;2HMGB1通过作用于RAGE激活下游RAC1分子,并最终引起VEGF表达上调,进而促进HCC的增殖和侵袭转移。     

高迁移率族蛋白B1在白细胞介素-2转录表达信号调控中的作用

目的 探讨高迁移率族蚩白B1(HMGB1)在白细胞介素-2(IL-2)转录表达信号调控机制中的可能作用.方法首先将HMGB1和NFAT2质粒共同转染Hela细胞,同时转染IL-2报告基因,逐步增加HMGB1的转染剂量,检测IL-2报告基因的表达活性.观察HMGB1质粒用量埘IL-2报告基凶活性的影响;然后应用sRNAi质粒对内源性及外源性HMGB1表达进行特异性抑制,观察对IL-2报告基因活性的影响,以期从反而论证HMGB1可促进IL-2转录表达.结果 在Hela细胞中,随着HMGB1质粒转染剂量增加,IL-2报告基因活性增加了2.12倍(P<0.01).应用sRNAi抑制293T细胞中外源性以及Hela细胞中内源性HMGB1表达水平后,IL-2报告基因活性分别下降1.7倍和4.76倍(P<0.05或P<0.01).结论 HMGB1在NFAT2介导IL-2报告基冈转录表达的信号调控过程中发挥重要作用.     

高迁移率蛋白B1介导Toll样受体信号通路的研究进展

高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)是核内一类非组蛋白DNA结合蛋白,属于损伤相关分子模式(damage-associated molecular patterns,DAMPs),参与DNA复制、重组、修复和基因转录调控等。HMGB1能通过Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)等激活固有免疫以及诱导T细胞分化成熟启动适应性免疫应答,与多种自身免疫性疾病、炎症性疾病和肿瘤等关系密切。目前关于HMGB1介导TLR信号通路在某些疾病中的作用的研究较多,HMGB1介导Toll样受体信号通路参与多种病理过程具有广阔的临床前景。     

高迁移率族蛋白B1通过TGF-β/Smad3信号通路降低缺氧/复氧诱导的心肌细胞纤维化的机制

摘要 目的：探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞纤维化过程中的作用及机制。 方法：构建转染HMGB1-shRNA H9C2稳定细胞系沉默HMGB1的表达,行缺氧/复氧损伤处理,Western Blot检测纤维化相关蛋白的表达,同时检测TGF-β1、ERK及Smad3纤维化信号通路相关因子,明确下调HMGB1表达对心肌纤维化蛋白及纤维化信号通路蛋白表达的影响。使用TGF-β1抑制剂SB431542与H9C2心肌细胞共培养,行缺氧/复氧损伤处理,Western Blot 检测纤维化相关蛋白的表达,明确TGF-β1对心肌纤维化蛋白表达的影响。 结果：转染HMGB1-shRNA的H9C2细胞,行缺氧/复氧处理,HMGB1蛋白及纤维化相关蛋白TIMP2、MMP2、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ表达水平下调,与对照组相比差异具有显著性意义（P<0.05）;TGF-β1、p-Smad3蛋白表达下调,与对照组相比差异具有显著性意义（P<0.05）。使用TGF-β1抑制剂SB431542,行缺氧/复氧处理,纤维化相关蛋白TIMP2、MMP2、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ表达水平下调,与对照组相比,差异具有显著性意义（P<0.01）。 结论：HMGB1影响缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞纤维化,其作用机制可以通过下调TGFβ1/Smad3信号通路蛋白的表达降低心肌纤维化。     

基于数据挖掘分析HMGB1在急性淋巴细胞白血病患者中的表达及意义

目的基于数据挖掘方法分析高迁移率族蛋白1(HMGB1)在健康人群及急性淋巴细胞白血病(ALL)患者体内的表达及意义。方法通过Oncomine v4.5数据库提取HMGB1在白血病和健康人群中转录水平的相关数据,对数据库中的基因表达信息进行荟萃分析,并通过KEGG PATHWAY分析HMGB1参与的重要信号通路。结果在443项关于HMGB1在各种恶性肿瘤患者与健康人群之间的对比研究中,有38项研究提示HMGB1在恶性肿瘤患者和健康人群中的表达水平差异有统计学意义(P0.05),其中在白血病患者中表达增高的有3项。在271项关于HMGB1在多种不同恶性肿瘤患者之间表达情况的对比研究中,有15项研究提示HMGB1在不同恶性肿瘤患者中的表达差异有统计学意义(P0.05),其中有4项提示HMGB1在白血病患者中的表达高于其他肿瘤患者。5项关于HMGB1在ALL与健康人群中表达情况的研究提示,HMGB1在ALL中的表达量显著高于健康人。KEGG PATHWAY通路分析提示,HMGB1主要参与了自噬、碱基切除修复、程序性坏死等通路。结论 HMGB1在ALL中呈现高表达,且参与ALL的发生、发展,通过诱导自噬、DNA损伤修复等促进化疗药物耐药。     

HMGB1在内毒素血症小鼠肝损伤中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在内毒素血症小鼠肝损伤中的作用。方法BALB/c小鼠随机分为正常对照组0、.2 mg/kg脂多糖组、1 mg/kg脂多糖组5、mg/kg脂多糖组、AG 490处理组和氟达拉宾处理组,AG 490和氟达拉宾的使用剂量分别为20 mg/kg和10 mg/kg。于腹腔注射后不同时间观察肝组织HMGB1 mRNA表达、血清HMGB1水平和丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活力的变化。HMGB1 mRNA表达和HMGB1含量分别采用RT-PCR方法和ELISA检测。结果小鼠注射脂多糖后,肝组织HMGB1 mRNA表达、血清HMGB1水平和丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活力均呈剂量相关性升高,而使用JAK/STAT通路抑制剂AG 490和氟达拉宾处理后,以上指标均明显下降（P〈0.05）。结论脂多糖诱导的HMGB1释放与胞内JAK/STAT信号通路有关,HMGB1在内毒素血症小鼠肝损伤中具有作用。     

磁刺激诱导下高迁移率族蛋白B1对星形胶质细胞迁移能力的影响

目的 探讨磁刺激诱导星形胶质细胞迁移的机制及高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对星形胶质细胞迁移的影响。 方法 取新生2～3d SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞,用细胞免疫荧光法检测细胞纯度;将细胞分为磁刺激组和对照组,磁刺激组给予磁刺激,对照组在相同环境下,不给予磁刺激。将细胞分为实验组和控制组,实验组用10μmol/ml U0126抑制剂预刺激30min,控制组不加入U0126抑制剂,以探讨细胞外信号调节激酶（ERK1/2）与HMGB1的关系;将细胞分为siRNA转染组和HMGB1-siRNA转染组,SiRNA组给予HMGB1 siRNA处理,以探讨HMGB1对细胞迁移能力的影响。用Western blot检测磁刺激对HMGB1和ERK1/2的影响,用划痕实验检测磁刺激对星形胶质细胞迁移能力的影响。 结果 10Hz磁刺激可促进ERK磷酸化,增强星形胶质细胞的迁移能力,并可增加HMGB1的表达水平;用U0126试剂处理后,HMGB1的表达量明显下降;HMGB1 siRNA转染后HMGB1表达量明显下降,且星形胶质细胞的迁移能力显著下降。 结论 星形胶质细胞在磁刺激作用下,通过激活ERK通道,促进ERK磷酸化,增加下游HMGB1的表达水平,且HMGB1以自分泌的形式促进自身迁移。     

HMGB1、TNFAIP3蛋白对狼疮性肾炎系膜细胞增殖的影响及其NF-κB信号通路机制

目的 基于核因子-κB(NF-κB)信号通路研究高迁移率族蛋白1(HMGB1)、肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)对狼疮性肾炎(LN)肾小球系膜细胞(MC)增殖的影响。方法 分离、培养10只MRL-Faslpr/JNju小鼠(LN小鼠)的MC,将其分为空白对照组、溶剂对照组、HMGB1干预组。空白对照组不作任何处理,溶剂对照组加入200μg/L甲醇溶剂,HMGB1干预组加入200μg/L人重组HMGB1蛋白。采用CCK8法检测12、24、36、48 h时3组肾小球系膜细胞增殖率。采用免疫印迹法(Western Blotting)检测3组MC中HMGB1、TNFAIP3、NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达量。结果 12、24、36、48 h时,HMGB1干预组MC增殖率显著高于空白对照组、溶剂对照组(P 0. 05);HMGB1干预组MC增殖率随时间延长而显著升高(P 0. 05); HMGB1干预组MC中HMGB1、TNFAIP3、NF-κB蛋白表达量显著高于空白对照组、溶剂对照组(P 0. 05);干预组MC中IκB-α蛋白表达量显著低于空白对照组、溶剂对照组(P 0. 05);溶剂对照组MC增殖率及HMGB1、TNFAIP3、NF-κB、IκB-α蛋白表达量较空白对照组差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 HMGB1可能通过上调TNFAIP3表达,诱发NF-κB信号通路活化,介导LNMC过度增殖,这可为LN的发病机制研究和靶向治疗提供理论基础。     

高迁移率族蛋白B1基因在结肠癌组织中的表达

高迁移率族蛋白盒（HMG）超家族可分为HMGB、HMGN、HMGA3个家族，其中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）参与各种重要的生物过程，包括转录、DNA修复、V（D）J重组、分化、生长发育和细胞外信号。国内外研究发现，在乳腺癌、黑色素瘤心、胃肠间质细胞瘤、胰腺癌、前列腺癌和急性成髓细胞白血病等肿瘤组织中HMGB1呈高表达。[第一段]     

HMGB1在扁平苔藓皮损中的异常分布

正高迁移率族蛋白1(HMGB1)是体内细胞处于稳态时,普遍存在于哺乳动物细胞核内的非组蛋白染色体结合蛋白,主要参与基因调节和转录[3]。当外界有适当的信号刺激细胞时,HMGB1赖氨酸残基被乙酰化,然后释放到细胞外,参与炎症反应。已有研究表明HMGB1在各种炎症性和自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮(SLE)[2-5]、类风湿关节炎(RA)[6-8]、寻常型银屑病(Psoriasis Vulgaris)、特应     

缺氧对巨噬细胞HMGB1释放的影响及其机制

目的观察缺氧对巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用,并初步探讨其可能的机制。方法采用巨噬细胞株RAW264.7,观察缺氧培养不同时间对培养上清液中HMGB1含量、细胞HMGB1mRNA表达和HMGB1胞内分布的影响,及不同浓度N-乙酰半胱氨酸对HMGB1释放的抑制作用。HMGB1含量和HMGB1mRNA表达水平分别采用酶联免疫吸附试验、实时荧光定量PCR法检测。结果缺氧培养6h后HMGB1mRNA表达水平已显示增强(P0.05),缺氧培养12h后培养上清液中HMGB1含量明显升高(P0.01),且显示HMGB1核浆转移;N-乙酰半胱氨酸对缺氧培养HMGB1释放有剂量依赖性抑制作用。结论缺氧能诱导巨噬细胞释放HMGB1,其机制可能与胞内氧自由基产生有关。     

缺氧诱导人肺成纤维细胞释放高迁移率族蛋白B1

目的:观察缺氧对人肺成纤维细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用。方法:采用HFL1人肺成纤维细胞株,观察缺氧培养不同时间对细胞HMGB1mRNA表达和培养上清液中HMGB1含量的影响,及不同浓度N-乙酰半胱氨酸对HMGB1释放的抑制作用。HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测。结果:缺氧培养6h后HMGB1mRNA表达水平和培养上清液中HMGB1含量明显升高(P<0.01),后者随着培养时间延长而进一步升高;10mmol/L和100mmol/LN-乙酰半胱氨酸对缺氧培养HMGB1释放有不完全的抑制作用。结论:缺氧能诱导人肺成纤维细胞释放HMGB1,其机制可能与胞内氧自由基产生有关。     

脓毒症大鼠血清高迁移率族蛋白B1、Toll样受体4时间-浓度变化关系研究

目的检测不同时间点脓毒症大鼠血清高迁移率族蛋白B1（HMGB1）及Toll样受体4（TLR4）浓度,探讨脓毒症炎症反应的可能机制,寻找脓毒症早期诊断的潜在生物标志物。 方法以盲肠结扎穿孔（CLP）法构建脓毒症大鼠模型,随机分为CLP组,HMGB1干预组,TLR4干预组,以假手术组（麻醉后开腹翻动盲肠后关腹）及空白组（不做任何处理的正常大鼠）为对照。于CLP术后2、4、8、12、24、48 h以酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测试验动物血清HMGB1及TLR4蛋白浓度,分析其时间-浓度关系。 结果CLP组各检测时间点血清HMGB1浓度较空白组及假手术组明显升高（P<0.05）,于24 h达峰;予以HMGB1干预后,相比CLP组,其在术后4 h开始发挥作用,明显降低血清HMGB1浓度（P<0.05）;予以TLR4干预,相比CLP组,其在术后2~24 h内明显降低血清HMGB1浓度（P<0.05）,相比HMGB1干预组,TLR4抑制发挥作用开始时间更早（2 h,P<0.05）,作用更强（12、24 h,P<0.05）。血清TLR4蛋白浓度在CLP组呈双峰表达（8、24 h,P<0.05）;予以HMGB1干预,相比CLP组,其血清TLR4表达呈单峰（8 h,P<0.05）;予以TLR4干预,其血清TLR4变化较为复杂,再次呈现双峰状,峰值提前且增加（4、12 h,P<0.05）。 结论HMGB1可能通过TLR4信号通路发挥作用,脓毒症炎症级联反应、炎性细胞因子释放等信号转导通路是复杂的、相互交织的"cross-link"系统,单一改变某个/某些个信号转录调节因子作用有限。     

HMGB1与肝缺血再灌注损伤相关性的研究进展

高迁移率族蛋白B1(High mobility group box 1,HMGB1)是存在于真核生物细胞内一类典型的非组蛋白染色体结合蛋白,参与基因转录、DNA修复、细胞分化及细胞外信号传导,当其释放到细胞外时,可导致一系列的炎症级联反应。缺血再灌注是肝切除术和肝移植过程中无法避免的环节,是导致术后炎症反应、肝细胞坏死、移植肝无功能和急、慢性排斥反应的重要原因。已有研究表明HMGB1在肝缺血再灌注损伤中起到十分重要的作用,对损伤过程中与HMGB1相关的环节研究,将成为预防和治疗肝缺血再灌注损伤的重要途径,充分的了解HMGB1在肝缺血再灌注损伤中的作用及其机制,已经成为目前研究的焦点之一。因此本文就此作一简要综述。     

重组高迁移率族蛋白B1致小鼠肝损伤实验研究

目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对小鼠肝脏的病理作用。方法 BALB/c小鼠分为正常对照组、重组HMGB1组和重组HMGB1加抗HMGB1抗体组,每组5只,腹腔注射重组HMGB1和抗HMGB1抗体的剂量分别为100μg/只和500μg/只,注射后24 h,观察血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活力、肿瘤坏死因子-α水平以及肝组织形态病理学的变化。另外,采用腹腔注射高剂量的重组HMGB1(500μg),观察小鼠存活情况。结果注射重组HMGB1后,血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活力和肿瘤坏死因子-α水平均明显升高(P0.01),肝组织显示凝固性局部坏死、血管充血并伴大量炎性细胞浸润;同时使用抗HMGB1抗体处理后,血清上述指标明显下降(P0.05),组织坏死和炎性细胞浸润明显减轻。5只小鼠注射高剂量重组HMGB1后24、48 h各死亡1只。结论 HMGB1对小鼠肝脏组织细胞具有损伤作用。     

胞外高迁移率族蛋白B1的研究进展

胞外高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是近年发现的一种重要的炎症细胞因子,与脓毒症、关节炎、急性肺炎等的发病关系密切。胞内HMGB1可通过活化细胞的主动分泌和坏死或受损细胞的被动释放进入胞外,与细胞表面晚期糖基化终末产物受体等结合后引发信号转导,诱导其他炎症介质的产生。HMGB1靶向治疗受到重视,目前HMGB1拮抗剂主要有抗HMGB1抗体、HMGB1A盒蛋白和丙酮酸乙酯。     

外科手术后患者血清高迁移率族蛋白B1水平的变化及其意义

目的调查外科手术后患者血清高迁移率族蛋白B1（HMGB1）水平的变化及其临床意义。方法采用ELISA法检测28例健康者和51例外科手术患者手术前后的血清HMGB1水平,分析血清HMGB1水平与血清C-反应蛋白、白细胞计数间的相关性。结果外科手术后患者血清HMGB1水平明显升高,并与血清C-反应蛋白、白细胞计数存在正相关性（P〈0．01）;预后良好者血清HMGB1水平降低,而术后并发脓毒症、急性肺炎等患者血清HMGB1水平保持高值。结论外科手术后患者血清HMGB1水平升高,血清HMGB1测定对术后的预后判断有一定意义。     

热休克反应对HMGB1表达及LPS诱导的HMGB1释放的影响

【目的】观察热休克反应对高迁移率族蛋白 1(HMGB1)表达及内毒素(LPS)诱导的 HMGB1 释放和移位的影响。【方法】用500 ng/ml LPS处理小鼠RA)264.7巨噬细胞20 h,)estern blot分析HMGB1在胞核及其培养上清中的改变;热休克模型通过RA)264.7 细胞置 42.5℃水浴锅中孵育 1 h,然后在 37℃恢复12 h后制备;通过)estern blot分析,观察热休克反应对HMGB1表达及LPS诱导的HMGB1释放及其移位的影响。【结果】HMGB1蛋白表达水平在热休克反应 4 h后减少,8 h后明显减少,12 h后逐步恢复至正常水平;RA)264.7细胞受LPS处理20 h后,细胞培养基中HMGB1的水平明显增加,胞核HMGB1含量减少,而热休克预处理抑制了LPS诱导的HMGB1释放及胞核HMGB1减少。【结论】热休克能影响HMGB1的基因表达;热休克反应抑制LPS诱导的HMGB1释放及其移位。