12000IU／μI B.t.超低容量喷雾水悬浮剂的研制

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringicnsis简称B.f.)是目前开发最成功的微生物杀虫剂。到目前为止，全国的B．f．杀虫剂年产量达3万吨，防治面积达86．7％万hm^2。专家估计B.f.及其系列产品在今后仍将以10％～20％的速度增加。由于它对人畜无毒，不影响生态环境，不伤天敌，所以B.f.生物杀虫剂不但在粮棉等大田作物广泛使用，而且在森林、蔬菜、果茶害虫的防治上应用也越来越广泛。     

人血浆蛋白C的纯化与鉴定

目的　建立人血浆蛋白C的纯化与鉴定方法。方法　利用DEAE SephadexA 5 0代替氯化钡 ,对血浆进行预处理 ,再经DEAE SepharoseFF离子交换和肝素 SepharoseCL 6B亲和层析进行分离纯化 ,用活化的部分凝血活酶时间 (APTT)测定组分活性 ,非还原型SDS PAGE测定其相对分子质量 ,Westernblot鉴定其特异性。结果获得相对分子质量为 6 2 0 0 0的蛋白条带 ,此条带可与人蛋白C单克隆抗体发生特异性反应。结论　已成功地从血浆中分离到蛋白C ,为其规模化生产奠定了基础。     

重组日本血吸虫14-3-3蛋白的纯化和鉴定

目的观察两次切胶、两次电洗脱的方法纯化重组日本血吸虫14-3-3(Sj14-3-3)蛋白的效果。方法采用两次切胶、两次电洗脱的方法(与经典的切胶、电洗脱有所不同),纯化Sj14-3-3蛋白,并与柱层析纯化方法进行比较。结果采用两次切胶、两次电洗脱方法纯化的目的蛋白条带单一,浓度达3mg/ml,而柱层析法纯化的蛋白浓度仅为1mg/ml。Western blot证实纯化目的蛋白的特异性。结论两次切胶、两次电洗脱法可获得高纯度、高特异性的目的蛋白,不失为一种经济有效的蛋白纯化方法。     

人体胎盘神经生长因子的纯化和鉴定

采用人胎盘为原料，利用离心、超滤和SephadexG-100、DEAE－SephadexA－50、SephadexG－150层析等技术，在中性条件下，分离出7S神经生长因子（7SNGF）；再在酸性条件下，利用柱状等电聚焦电泳法分离出活性亚单位-β-NGF，利用鸡胚背根神经节培养法直接测定神经生长因子的生物活性，其比活性为8000u／mg；用十二烷基磺酸钠不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）测得β-NGF分子量为13KD；高效液相PEK－125柱层析法得单一洗脱峰证明为单一成分。     

GST-AEP融合蛋白的表达、纯化和鉴定

目的利用GST融合基因表达系统表达GST-AEP融合蛋白,并进行纯化及鉴定。方法IPTG诱导重组质粒pGEX-4T-1/AEP在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,溶菌酶裂解后,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,所得产物进行12%SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果大肠杆菌经诱导,高效表达出相对分子质量约34000的蛋白,与GST-AEP融合蛋白相符。Western blot结果显示该蛋白能够被兔抗GST多克隆抗体识别。结论已成功表达并纯化了融合蛋白,为更深入研究AEP的结构和功能奠定了基础。     

PTD-SARA融合蛋白的表达、纯化及鉴定

目的在大肠杆菌中表达PTD-SARA融合蛋白,并对其进行纯化和鉴定。方法使用大肠杆菌偏爱密码子合成PTD-SARA全长基因,将其克隆入载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA,转化感受态大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定及N-端测序。结果重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA经双酶切及测序鉴定证明构建正确。1.0mmol/LIPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的25%,主要以包涵体形式存在。纯化的融合蛋白纯度为94%,浓度为0.2mg/ml,且具有良好的反应原性,N-端有14个氨基酸。结论已成功表达并纯化了PTD-SARA融合蛋白,为其功能的研究奠定了基础,也为临床防治肾脏纤维化提供了一个新的策略。     

有机试剂的纯化及其结构的鉴定

就新合成的有机试剂的提纯和确证方法作了评述。内容包括藉助这类试剂的化学和物理特性进行的分离、提纯和验证方法。这些方法可广泛用于分析化学中。     

金黄葡萄球菌野生株肠毒素B重组蛋白的表达及纯化

目的在大肠埃希菌中表达金黄葡萄球菌野生株肠毒素B(SEB)重组蛋白,并进行纯化。方法采用PCR方法从金黄葡萄球菌基因组中扩增出SEB基因片段,与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pMD18-T/SEB,测序分析后,亚克隆入表达载体pGEX-4T-2,转化感受态E.coliJM109,IPTG诱导表达。表达产物采用B-PER GST Fusion Protein Purification Kit纯化后进行Western blot鉴定。结果SEB基因扩增片段大小为705bp,测序结果显示与金黄葡萄球菌S6株序列相比无碱基的插入或缺失,同源性为98.4%,存在11个碱基变异,其中7个为无义突变,4个为有义突变(突变位点位于第364、699、899和988位,编码氨基酸变化分别为:Ser→Ala、Gln→His、Asn→Ser和Met→Leu);表达的含GST的融合蛋白相对分子质量约53000,纯化后经SDS-PAGE分析,可见单一条带。Western blot显示表达产物可被兔抗SEB抗体所识别。结论已成功表达并纯化了金黄葡萄球菌野生株SEB重组蛋白,为开发SEB免疫诊断试剂提供了材料。     

仙人掌超氧化物歧化酶的分离纯化及鉴定

介绍了分离纯化仙人掌SOD的工艺方法。鉴定用该法提取的SOD为Cu ,Zn -SOD。     

苏·阿防治花椰菜小菜蛾的效果

比较了苏·阿、Ｂ．ｔ．和虫螨克防治花椰菜小菜蛾的效果。药后１天,２％苏·阿可湿性粉 剂１００ｇ／６６７ｍ２的防效为９８．３％,高于Ｂ．ｔ．可湿性粉剂（１６０００ＩＵ／ｍｇ）５０ｇ／６６７ｍ２９５．９％的防效, 也高于０．９ ％虫螨克乳油 ５０ｍｌ／６６７ｍ２９５．４ ％的防效。药后１周,苏·阿的防效仍达 ９４．７７％,明显 高于Ｂ．ｔ．可湿性粉剂（１６０００ＩＵ／ｍｇ）５０ｇ／６６７ｍ２和０．９％虫螨克乳油５０ｍｌ／６６７ｍ２的防效。     

32000IU/mg B.t.可湿性粉剂防治烟青虫的田间药效试验

田间试验结果表明 ,32 0 0 0IU/mgB .t.可湿性粉剂的使用剂量为 1 5 0～ 2 0 0 g/ 6 6 7m2 ,对烟青虫具有较好的防治效果 ,药后第 3～ 5d的防效为 72 .1 %～ 85 .1 % ,持效期达 1 0d ;其防治效果与对照药剂 2 .5 %g功夫乳油 2 4ml/ 6 6 7m2 的防效相当 ,而且对环境安全 ,对烟蚜和斜纹夜蛾还有一定的兼治作用。     

布鲁菌BP26基因的克隆、表达及纯化

目的克隆布鲁氏菌BP26基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化BP26蛋白。方法提取布鲁氏菌基因组DNA,用PCR扩增出BP26基因,并克隆到pMD18-T载体上,测序正确后,再亚克隆至pET-28a(+)载体上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经组氨酸结合树脂柱纯化,并对纯化后的表达产物进行Western blot鉴定。结果重组质粒pETBP26经Nde I与Sal I酶切后,可见大小分别为5400和700bp的片段,与理论值相符。转化大肠杆菌BL21(DE3)后,37℃诱导4h,经SDS-PAGE分析,高效表达出带有His-tag标签的融合蛋白BP26,纯化后的蛋白纯度达96%,经Western blot分析,目的蛋白具有抗原特异性。结论已成功克隆了BP26基因,且表达并纯化了布鲁氏菌BP26蛋白。     

高纯度阿扎霉素B的分离纯化工艺研究

研究了大孔树脂层析分离阿扎霉素B的工艺过程,对树脂类型、洗脱条件和上样量进行了优化。结果表明,HZSl6树脂为最佳层析介质,上样量为0．01g·（mL树脂）^-1,洗脱剂为体积分数70％的乙醇,洗脱速度为1BV·h^-1树脂床体积。按此工艺所得产品纯度大于95％,过程总收率大于60％。该方法简单易行、成本低、收率高,适宜工业化生产。     

聚合物纳米微球分离纯化棘白霉素B母核方法研究

以聚合物纳米微球为层析介质,采用HPLC检测方法,开发高纯度棘白霉素B母核的分离纯化工艺,并对层析条件进行优化。结果表明,当选择Uni PS 30型聚合物纳米微球为层析介质、上样量为1.2g·(100g介质)-1、以体积分数为3%的乙醇进行洗脱、流速为12mL·min-1时,得到的棘白霉素B母核纯度大于98%。建立了高纯度棘白霉素B母核的分离纯化工艺,流程简单、可行,为该产品产业化开发提供了一定的理论基础。     

牛布鲁菌L7/L12蛋白的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化牛布鲁菌L7/L12蛋白。方法提取牛布鲁菌S19基因组DNA,PCR法扩增L7/L12基因,经测序正确后,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-L7/L12,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达量,经亲和层析纯化后,Western blot鉴定纯化产物。结果所构建的重组原核表达质粒pET-L7/L12经酶切鉴定表明构建正确。重组蛋白以包涵体形式表达,表达量占全菌总蛋白的33%;纯化的重组蛋白纯度可达94%,可与布鲁菌小鼠免疫血清发生特异反应。结论已成功表达并纯化了牛布鲁菌L7/L12蛋白,为建立高特异性的新型布鲁菌检测方法奠定了基础。     

白藜芦醇的提取和纯化及分析方法研究进展

白藜芦醇是抑制和治疗组织癌变和肿瘤发生最有前途的药物之一。综述了天然产物白藜芦醇的提取、纯化及分析方法的研究近况 ,为开发利用白藜芦醇提供素材。     

银杏内酯A和B的分离纯化研究

In this paper a simple preparative method for isolation and purification of ginkgolides A and B was developed,As starting material,a commercially available standardized ginkgo extract (EGb761,containing 24% flavonoid and 6% terpene trilactones) was used,After a pretreatment step,optimized by the uniform design method ,the concentrated intermediate extract with high content of GA and gb( 90%) was separated into the individual terpenes by preparative liquid chromatography eluted with petroleum ether-ethylacetate,Analysis of products was carried out by means of HPLC-ELSD(evaporative light -scattering detector),The results show that ginkgolides A and B are obtained in higher yield and better purity.     

Purification and characterization of antioxidative peptides from protein hydrolysate of lecithin-free egg yolk

The protein extracted from lecithin-free egg yolk, normally discarded by lecithin processing plants, was hydrolyzed with the aid of Alcalase, a commercial enzyme. The hydrolysate was separated through a series of ultrafiltration membranes with molecular weight cutoffs of 10, 5, and 1 kDa; and three types of permeates including 10 K (permeate from 10 kDa), 5 K (permeate from 5 kDa), and 1 K (permeate from 1 kDa) were obtained. The antioxidative efficacy of hydrolysates so obtained was investigated and compared with α-tocopherol. Furthermore, two different peptides showing strong antioxidative activity were isolated from the hydrolysates by using consecutive chromatographic methods including ion exchange chromatography on a SP-Sephadex C-25 column, gel filtration on a Sephadex G-25 column, and high-performance liquid chromatography on an octadecylsilane column. The purity of the peptides was identified using capillary electrophoresis. The isolated peptides were composed of 10 and 15 amino acid residues, and both contained a leucine residue at their N-terminal positions.     

抗菌肽Cecropin B-人溶菌酶重组蛋白的表达及纯化

对抗菌肽Cecropin B-人溶菌酶(CB-hLy)的重组大肠杆菌进行了诱导表达,并对影响该重组蛋白表达的培养条件进行了优化,最后对表达出的重组蛋白进行了分离纯化.由上述方法得到的重组CB-hLy蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)分析表明,其纯度可达90%,且具有良好的抑制真菌生长的生物活性.