甘草酸表面修饰阿霉素壳聚糖纳米粒的制备及特性研究

目的:制备具有肝细胞靶向的甘草酸表面修饰阿霉素壳聚糖纳米粒,并考察其理化特性。方法:采用离子凝胶法制备阿霉素壳聚糖纳米粒,再以高碘酸盐氧化法制备甘草酸表面修饰阿霉素壳聚糖纳米粒。激光透射电子显微镜观察纳米粒的形态,马尔文激光粒度仪测定其粒径。RP-HPLC法间接测定纳米粒中甘草酸结合率和阿霉素包封率,并初步研究体外甘草酸的结合稳定性和阿霉素释药特性。结果:电镜显示纳米粒呈类球形,平均粒径为179.5 nm,甘草酸结合率达到80%以上,在释放介质中,12 h的甘草酸结合率仍保持(65.2±3.4)%;纳米粒中阿霉素包封率达90%以上,体外释药缓慢,无明显的\     

壳聚糖纳米粒的研究进展

壳聚糖是一类带正电的直链多糖,具有良好的生物相容性和生物可降解性,且具有多种生物活性,能有效增加药物通过眼部、鼻腔及胃肠道粘膜上皮的吸收,降低药物的吸收前代谢,提高药物的生物利用度,因此壳聚糖在缓控释给药系统中具有广阔的应用前景,但其溶解性能有待于进一步提高.本文就壳聚糖纳米粒的制备方法、作用特点及应用作一概述.     

壳聚糖纳米粒作为基因治疗载体的研究进展

20 0 3年底 ,首个基因治疗药物—重组人P5 3腺病毒注射液[1～ 3 ] 在我国批准临床应用 ,标志着基因治疗进入了新时代。在基因治疗三要素 :目的基因、表达载体、递送载体中 ,递送载体的构建和改进 ,一直是基因治疗研究的重点。基因递送载体有病毒载体和非病毒载体。前者作为一种     

壳聚糖纳米粒作为基因治疗载体的研究进展

壳聚糖是自然界存在的唯一的碱性多糖, 具有许多独特的理化特性和生物学功能如良好的生物相容性、可生物降解、表面带有阳离子、低毒等。因此，用壳聚糖制备的纳米粒作为非病毒基因递送载体，具有良好的发展前景。     

载基因壳聚糖纳米粒的制备和特征鉴定

目的制备载基因壳聚糖纳米粒（CS—pHEV23）,研究其特征及对DNA的保护作用。方法复凝聚沉淀法制备CS-pHEV23,对其粒径、Zeta电位、包封率进行考察;凝胶阻滞法分析CS和pHEV23聚合方式,DNaseⅠ保护性试验考察CS—pHEV23抵抗核酸酶的能力。结果制备的CS—pHEV23粒径在170—470nm范围内（分别为CS（L）-pHEV23 171．6nm,CS（M）-pHEV23 387．0nm,CS（H）-pHEV23 467．3nm）;Zeta电位（CS（L）-pHEV23）为＋22．9mV;包封率〉95％（分别为CS（L）-pHEV23 95．8％,CS（M）-pHEV23 96．7％,CS（H）-pHEV23 97．1％）。凝胶阻滞分析表明,CS和pHEV23之间通过静电作用完全结合,纳米粒带正电荷。DNaseⅠ保护试验表明,CS—pHEV23能有效抵抗DNaseⅠ酶降解,对pHEV23有保护作用。稳定性试验表明,4℃保存60天,纳米粒仍能较稳定地包裹pHEV23结论CS—pHEV23能高效装载外源DNA,稳定性良好,并保护其免受核酸酶的降解,作为基因载体具有较大的应用潜力。     

壳聚糖纳米粒在药物输送中的应用研究进展

纳米粒给药系统因具有组织靶向性、控释性等特点,已经成为药物输送系统研究的热点和重点。壳聚糖作为一种天然高分子阳离子聚合物,具有良好的生物可降解性、生物相容性及低毒性,因此被越来越多地用作纳米给药载体。本文简要介绍了壳聚糖及其衍生物的结构和性质、壳聚糖纳米粒的制备方法,重点综述了近年来壳聚糖纳米粒在口服控释制剂、递送抗癌药物、非病毒基因传递和眼部给药等药物输送系统中的研究应用进展。     

超顺磁性Fe3O4壳聚糖纳米粒制备影响因素的初步研究

目的：制备超顺磁性Fe3O4壳聚糖纳米粒,探究不同表面活性剂及交联剂等因素对纳米粒形成及其理化性质的影响。方法：化学共沉淀法制备纳米粒,激光粒度仪检测其粒径大小、聚合物分散指数（polydispersity index,PDI）、zeta电位,振动样品磁强计检测其磁化强度。结果：制备的纳米粒粒径大小在15～60 nm之间,平均粒径29.39 nm, PDI为0.185,zeta电位绝对值约20,磁感应性良好。结论：亲水亲油平衡值（hydrophile lipophilic balance,HLB）较小的表面活性剂能减小纳米粒粒径,交联剂戊二醛用量需控制在1.5～2.0 ml,NaOH溶液浓度需控制在3.0～4.0 mol/L。     

载绿色荧光蛋白基因壳聚糖纳米粒载体的制备和转染的研究

目的 优化试验条件，制备合适的壳聚糖纳米粒，并连接上质粒，研究壳聚糖纳米粒对DNA的结合能力。方法 以离子交联法制备壳聚糖纳米粒，并送激光微粒度仪及扫描电子显微镜检测，了解粒径的分布与形态；通过静电吸附作用连接上增强型绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1(报告基因)；经琼脂糖凝胶电泳分析载体与：DNA结合能力，并通过紫外分光光度计检测其载药量和包埋率。结果 微粒度分析仪及电镜检测证实壳聚糖纳米粒呈均匀分散的球形颗粒，最小粒径为50nm，平均直径为95nm，琼脂糖凝胶电泳的结果显示壳聚糖纳米粒能有效地结合增强型绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,紫外分光光度计检测不同比例结合(纳米粒：质粒)pEGFP-C1,质粒的壳聚糖纳米粒的包埋率分别为：100％(50：10)，100％(50：20)，92％(50．75)和65％(50．100)。结论 制备出粒径较小、均匀的壳聚糖纳米粒，并且壳聚糖纳米粒能有效地连接上质粒。     

壳聚糖纳米粒基因载体的制备和体外转染实验研究

目的制备基因载体壳聚糖纳米粒,研究其结构特征及其体外对细胞的转染活性。方法以复凝聚法制备壳聚糖-pDNA纳米粒;电镜测定其形态、粒径;凝胶电泳阻滞实验观察壳聚糖和pDNA的结合力;紫外可见分光光度计测定其负载力、负载率;体外转染人人胚肾细胞293T,荧光显微镜观察转染效率,CCK8法评价细胞毒性。结果壳聚糖-pGFP纳米粒多呈球形,直径为（132±48）nm;凝胶电泳阻滞实验示pGFP被完全包裹在纳米粒内;其负载力（LC）为（48．2±2．0）％,负载率（LE）为100％;体外转染实验证明壳聚糖-pGFP纳米粒能介导pGFP转染293T细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白;壳聚糖-pDNA抑制率（26．08±4．28）％。结论采用复凝聚法制备的壳聚糖-pDNA纳米粒可有效转染至细胞内,但有一定的细胞毒性。     

负载As2O3壳聚糖纳米粒对大鼠免疫功能的影响

目的：观察负载三氧化二砷（arsenic trioxide, As2O3）壳聚糖纳米粒（NPCS-As2O3）对大鼠免疫功能的影响,为临床用药提供实验和理论依据。方法将40只SD大鼠随机分为4组：壳聚糖纳米粒组（ NPCS组）,负载As2 O3壳聚糖纳米粒组（ NPCS-As2 O3组）,As2 O3组和生理盐水（ NS）组。尾静脉注射给药,连用7天后处死大鼠,取脾称重计算脾脏指数并分离脾细胞进行特异性细胞毒T淋巴细胞（ CTL）功能检测。结果 As2 O3组CTL活性降低,与NS组相比,差异有统计学意义（P＜0．05）;NPCS组和NPCS-As2O3组均显示出较高的CTL活性,并且脾脏指数增加,与As2O3组和NS组比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 As2O3可以降低大鼠脾免疫功能;NPCS可以明显提高大鼠脾免疫功能;NPCS-As2 O3可以减轻As2 O3造成的脾免疫功能损伤,保护大鼠脾的免疫功能。     

表面等离子共振技术在产前诊断中的研究进展

表面等离子共振（ surface plasmon resonance ,SPR）技术作为一种新技术成功应用于产前诊断中,该文就该新技术的原理和在产前诊断中的研究进展进行了简单综述。     

表面等离子体免疫传感器同步定量尿液中多种微量蛋白的研究

目的探讨并建立表面等离子体免疫传感器芯片同步定量尿液中多种微量蛋白的方法。方法采用EDC/NHS方法将微量白蛋白(MA)、α-1微球蛋白(A1M)、β-2微球蛋白(B2M)、尿IgG的单克隆抗体固定于免疫传感器芯片之上,并用表面等离子体共振传感器(surface plasmon resonance,SPR)检测样本中微量蛋白的含量。利用4种微量蛋白的标准血清建立标准曲线,然后对其进行灵敏度、特异性等指标的方法学评价。以免疫散射比浊方法为参考方法,检测125例临床患者24 h尿液样本的微量蛋白浓度,比较2种方法检测相同样本时的结果差异。结果该表面等离子体共振免疫传感器芯片具有良好的操作性能和检测特异性。其标准曲线的R2均在0.98以上。其检测灵敏度分别是A1M为5μg/L,B2M为7.3μg/L,MA为11.5μg/L,IgG为22μg/L。所有4项指标可在20 min之内同步完成。与微量蛋白检测的经典方法免疫散射比浊法相比,两者的相关性和一致性较高。结论表面等离子体免疫传感器芯片可实现尿液中多种微量蛋白的快速、准确、同步定量。     

表面等离子共振技术结合滚环扩增法检测丙型肝炎病毒

目的研究滚环扩增(RCA)技术结合特异性表面等离子共振(SPR)金膜芯片检测丙型肝炎病毒(HCV)的方法。方法根据丙型肝炎x-tail区域的特异检测序列,设计并合成针对RCA法检测HCV的探针和引物,分成3组(实验组、阴性样品组和阳性样品组)进行RCA实验,验证RCA法检测HCV的特异性。将模板浓度按10倍梯度稀释,评价SPR技术结合RCA法检测的检测限。在普通金膜芯片的基础上进行表面化学处理,形成高特异性核酸芯片,用抗蛋白实验验证芯片抗蛋白能力。采用双通道SPR仪对RCA反应及信号放大反应进行实时观测。运用SPR技术结合RCA法检测63例临床血液样品,并与Real-Time PCR法比较,评价其灵敏度和特异度。结果 SPR技术结合RCA法对HCV阳性标准品的最低检测浓度为1 pmol/L,低于Real-TimePCR法的检测限(0.1 nmol/L)。SPR芯片具备良好的抗蛋白质非特异性吸附能力。双通道SPR仪对RCA芯片系统的检测信噪比为100,实现了对HCV的检测。对临床样品的检测灵敏度为90.0%(27/30),特异度为84.8%(28/33)(χ2=8.10,P=0.004)。结论 SPR技术结合RCA法将生物传感技术及原位扩增技术相结合,实现了快速、非标记和实时检测HCV。     

基于SPR免疫传感器技术的登革热血清学检测方法研究

目的建立一种非标记、多指标的登革热快速检测方法,应用于登革热疑似病例的血清样本的快速检测。方法采用表面引发聚合反应技术构建基于寡聚乙二醇高分子的抗蛋白质非特异性吸附表面,以抗登革热IgM、IgG和抗登革热NS1抗体分别作为捕获探针,建立登革热的多指标微阵列芯片。采用表面等离子共振检测技术的技术手段,在血清中检测登革热特异性抗体。结果该技术方法对262份登革热疑似病例血清进行检测,阳性检出率为6.9%(18/262),高于PCR 2.3%(6/262)和ELISA 5.3%(14/262),其中PCR阳性的6份血清样本均检测到NS1标记物,而14份ELISA阳性样本中,检测出其中12份,两者的检测符合率为85.7%。结论初步构建一种登革热综合性蛋白质芯片,结合SPR技术可并行检测多个项目,可为登革热的快速检测提供一个有力的技术平台。     

表面等离子体共振生物传感器在卵巢肿瘤标志物CA125检测中的应用

目的:运用表面等离子体共振生物传感器(SPR)无标记检测CA125血清抗原,探索卵巢癌无创诊断方法。方法:采用分子自组装技术,在SPR生物传感片表面固定抗CA125单克隆抗体OC125,利用其检测人体血清中CA125抗原的表达。结果:SPR对血清中CA125的测量结果与放射免疫测量结果的变化趋势基本一致,SPR共振峰移动的大小(δλ)相对地反映了血清中CA125抗原表达程度。结论:卵巢癌患者血清的SPR共振峰波长移动值显著大于对照组血清的SPR共振峰波长移动值。与现有检测技术相比,SPR方法具有无需标记,操作简单等优点,便于基层医疗单位使用。     

Development of a surface plasmon resonance biosensor for accurate and sensitive quantitation of small molecules in blood samples

Therapeutic drug monitoring (TDM) has played an important role in clinical medicine for precise dosing. Currently, chromatographic technology and immunoassay detection are widely used in TDM and have met most of the needs of clinical drug therapy. However, some problems still exist in practical applications, such as complicated operation and the influence of endogenous substances. Surface plasmon resonance (SPR) has been applied to detect the concentrations of small molecules, including pesticide residues in crops and antibiotics in milk, which indicates its potential for in vivo drug detection. In this study, a new SPR-based biosensor for detecting chloramphenicol (CAP) in blood samples was developed and validated using methodological verification, including precision, accuracy, matrix effect, and extraction recovery rate, and compared with the classic ultra-performance liquid chromatography-ultraviolet (UPLC-UV) method. The detection range of SPR was 0.1–50 ng/mL and the limit of detection was 0.099 ± 0.023 ng/mL, which was lower than that of UPLC-UV. The intra-day and inter-day accuracies of SPR were 98%–114% and 110%–122%, which met the analysis requirement. The results show that the SPR biosensor is identical to UPLC-UV in the detection of CAP in rat blood samples; moreover, the SPR biosensor has better sensitivity. Therefore, the present study shows that SPR technology can be used for the detection of small molecules in the blood samples and has the potential to become a method for therapeutic drug monitoring.     

A strategy of screening and binding analysis of bioactive components from traditional Chinese medicine based on surface plasmon resonance biosensor

Elucidating the active components of traditional Chinese medicine (TCM) is essential for understanding the mechanisms of TCM and promote its rational use as well as TCM-derived drug development. Recent studies have shown that surface plasmon resonance (SPR) technology is promising in this field. In the present study, we propose an SPR-based integrated strategy to screen and analyze the major active components of TCM. We used Radix Paeoniae Alba (RPA) as an example to identify the compounds that can account for its anti-inflammatory mechanism via tumor necrosis factor receptor type 1 (TNF-R1). First, RPA extraction was analyzed using an SPR-based screening system, and the potential active ingredients were collected, enriched, and identified as paeoniflorin and paeonol. Next, the affinity constants of paeoniflorin and paeonol were determined as 4.9 and 11.8 μM, respectively. Then, SPR-based competition assays and molecular docking were performed to show that the two compounds could compete with tumor necrosis factor-α (TNF-α) while binding to the subdomain 1 site of TNF-R1. Finally, in biological assays, the two compounds suppressed cytotoxicity and apoptosis induced by TNF-α in the L929 cell line. These findings prove that SPR technology is a useful tool for determining the active ingredients of TCM at the molecular level and can be used in various aspects of drug development. The SPR-based integrated strategy is reliable and feasible in TCM studies and will shed light on the elucidation of the pharmacological mechanism of TCM and facilitate its modernization.     

聚乙二醇化壳聚糖纳米粒的制备及局部滴眼给药性能评价

目的 制备一种聚乙二醇修饰的壳聚糖纳米粒,评价其局部滴眼给药性能.方法 以伏立康唑为模型药物,采用离子交联法制备载药的聚乙二醇化壳聚糖纳米粒,对其进行表征后,分别考察纳米粒的药物缓释能力、对眼表药物代谢动力学的影响及其角膜渗透性.结果 聚乙二醇化壳聚糖纳米粒粒径为(235±23)nm,Zeta电位为(+23.1±0.6) mV,载药量为11.16％,包封率为61.35％.纳米粒体外释放药物非常缓慢,可持续释药48 h;相比于伏立康唑水溶液,纳米粒的药物浓度-时间曲线下面积明显增加,药物半衰期延长,清除率减少,眼表药物平均滞留时间延长(P＜0.05).荧光标记的聚乙二醇化壳聚糖纳米粒可穿透角膜上皮逐渐向角膜基质渗透.结论 与药物水溶液相比,聚乙二醇化壳聚糖纳米粒能够有效减少眼表药物的流失,改善药物的生物利用度.     

正交设计与响应面法优化壳聚糖对莲子心提取液除杂工艺对比研究

目的 确定壳聚糖用于莲子心提取液除杂的最佳工艺条件。方法 以固形物去除率、甲基莲心碱保留率为考察指标,分别考察壳聚糖用量、药液质量浓度、药液pH值、作用温度、搅拌时间对除杂效果的影响;在单因素分析的基础上采用正交试验设计及响应面法对比优化除杂工艺条件。结果 莲子心提取液除杂的优化工艺条件：药液质量浓度为生药0.2 g/mL（1∶5）或0.18 g/mL（1∶5.5）,壳聚糖溶液（1%）用量为1.2 mL/g（壳聚糖溶液体积与生药量之比）,作用温度为60 ℃,pH值为6.2,搅拌时间20 min。结论 正交设计与响应面法均可用于壳聚糖对莲子心提取液除杂的工艺条件优化,且除杂效果良好;但正交设计的试验次数相对较少,且方法简便,更加适合壳聚糖除杂工艺的优化。