5-脂氧合酶抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡

目的: 检测胰腺癌细胞中5-脂氧合酶(5-lipoxygenase, 5-LOX)及其代谢产物的表达情况, 分析高表达5-LOX及LTB4对胰腺癌细胞生长凋亡的影响. 方法: 体外培养人胰腺癌细胞株ASPC-1, PANC-1和SW1990, 并构建5-LOX基因稳定转染细胞株. 用RT-PCR和Western blot检测细胞5-LOX mRNA和蛋白的表达, ELISA检测细胞培养上清中LTB4的含量, 采用流式细胞仪、Annexin V/PI双染法检测TNF-alpha诱导细胞的细胞凋亡. 结果: 三种胰腺癌细胞株均表达5-LOX mRNA和蛋白, 细胞上清中也都检测到一定量LTB4分泌. 5-LOX基因稳定转染细胞株表达5-LOX和LTB4的水平上升. TNF-alpha(20 mug/L)处理野生型SW1990细胞, 12和24 h后凋亡率分别为25.4%±3.65%和43.5%±5.23%, 但该效应在高表达5-LOX的细胞株中明显减弱, 分别为13.2%±2.01%和21.7%±3.65%. 在野生型SW1990细胞培养中加入外源性LTB4(10 nmol/L)能抑制TNF-alpha诱导的细胞凋亡, 野生型与处理组细胞24 h后凋亡率有显著性差异(47.6%±5.32% vs 18.5%±5.69%, P<0.01). 用LTB4受体阻断剂处理5-LOX高表达细胞株, 能恢复其对凋亡诱导的敏感性. 结论: 胰腺癌细胞均能表达5-LOX并产生LTB4, 高表达5-LOX能抑制TNF-alpha诱导的胰腺癌细胞凋亡.     

雷公藤内酯醇诱导胰腺癌细胞凋亡及对5-脂氧合酶和凋亡基因表达的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇(TL)在胰腺癌化学预防和治疗中的应用价值.方法 采用人胰腺癌细胞株SW1990作为研究对象,MTT法和吖啶橙(AO)染色分别检测SW1990细胞的增殖和凋亡,采用半定量RT-PCR法检测5-脂氧合酶(5-LOX) mRNA、bcl-2 mRNA和bax mRNA的表达.结果 10 μg/ml的TL对SW1990细胞生长的抑制率达30%以上,0.1 μg/ml TL处理24 h后,SW1990细胞凋亡指数达38.5%,显著高于对照组的14.97%.5-LOX、bcl-2、bax mRNA表达从0.7160 ± 0.0251,0.2446 ± 0.0311和0.0260 ± 0.0065分别变化为0.2400 ± 0.0316,0.0700 ± 0.0158和0.0700 ± 0.0158.结论 TL能抑制胰腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,其凋亡机制可能与下调5-LOX mRNA和bcl-2 mRNA、上调bax mRNA基因表达有关.     

雷公藤内酯醇诱导胰腺癌细胞凋亡及对5-脂氧合酶和凋亡基因表达的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(TL)在胰腺癌化学预防和治疗中的应用价值。方法采用人胰腺癌细胞株SW1990作为研究对象,MTT法和吖啶橙(AO)染色分别检测SW1990细胞的增殖和凋亡,采用半定量RT-PCR法检测5-脂氧合酶(5-LOX)mRNA、bcl-2 mRNA和bax mRNA的表达。结果10μg/ml的TL对SW1990细胞生长的抑制率达30%以上,0.1μg/mlTL处理24h后,SW1990细胞凋亡指数达38.5%,显著高于对照组的14.97%。5-LOX、bcl-2、bax mRNA表达从0.7160±0.0251,0.2446±0.0311和0.0260±0.0065分别变化为0.2400±0.0316,0.0700±0.0158和0.0700±0.0158。结论TL能抑制胰腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,其凋亡机制可能与下调5-LOXmRNA和bcl-2mRNA、上调bax mRNA基因表达有关。     

抑制5-脂氧合酶表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术阻断5-脂氧合酶(5-LOX)的表达,观察其对人胰腺癌细胞SW1990增殖及凋亡的作用.方法 构建4个靶向5-LOX的小干扰RNA(small interference,siRNA)和1个阴性对照siRNA质粒表达载体,采用Lipofectamine TM2000法转染SWl990细胞,RT-PCR和Western blot检测RNAi后SWl990细胞的5-LOX mRNA和蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 阴性对照和4个序列特异性的siRNA对SWl990细胞5-LOXmRNA表达的抑制率分别为(3.0±1.4)%、(18.8±1.5)%、(53.5±2.3)%、(56.1±2.0)%、(52.4±2.5)%;5-LOX蛋白表达抑制率分别为(4.5±2.0)%、(18.1±2.5)%、(50.4±4.3)%、(48.9±4.4)%、(45.9±4.0)%.转染24 h后癌细胞增殖抑制率分别为(2.1±1.0)%、(5.5±1.3)%、(11.9±1.2)%、(13.4±1.1)%、(13.8±1.3)%.;48 h的增殖抑制率分别为(3.0±1.3)%、(16.0±2.2)%、(25.7±2.5)%、(25.3±3.1)%、(27.2±3.2)%.转染24 h细胞凋亡率分别为(2.0±0.8)%、(5.3±1.0)%、(10.6±1.2)%、(12.4±1.0)%、(10.6±0.9)%;转染48 h的凋亡率分别为(3.0±1.0)%、(7.1±1.1)%、(17.5±0.9)%、(21.5±1.1)%、(15.7±1.0)%.结论 通过RNAi可以有效、特异地阻断SWl990细胞5-LOX的表达,并可以有效抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡.     

胃癌组织中5-脂氧合酶的表达及其与磷酸化Akt相的关性

目的:检测5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)在胃癌组织中的表达,并探讨5-LOX对磷酸化Akt(phosphorylatedAkt,p-Akt)表达的影响.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例新鲜胃癌及癌旁正常组织标本中5-LOXmRNA表达水平;免疫印迹法(Westernblot)检测5-LOX和p-Akt蛋白的表达水平.结果:5-LOX在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(76.7%vs40%,P<0.05,mRNA水平;56.7%vs30%,P<0.05,蛋白水平).p-Akt蛋白在胃癌组织中的表达也显著高于癌旁正常组织(56.7%vs26.7%,P<0.05).相关性分析表明,胃癌组织中5-LOX蛋白表达和p-Akt水平间无明显相关性(r=0.186,P>0.05).结论:5-LOX蛋白对胃癌的发生、发展有一定促进作用,但与PI3-K/Akt信号通路无关.     

胃癌组织中5-脂氧合酶的表达及其与磷酸化Akt相的关性

目的: 检测5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)在胃癌组织中的表达,并探讨5-LOX对磷酸化Akt(phosphorylatedAkt,p-Akt)表达的影响.方法: 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例新鲜胃癌及癌旁正常组织标本中5-LOX mRNA表达水平;免疫印迹法(Westernblot)检测5-LOX和p-Akt蛋白的表达水平.结果: 5-LOX在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(76.7% vs 40%,P＜0.05,mRNA水平;56.7%vs30%,P＜0.05,蛋白水平).p-Akt蛋白在胃癌组织中的表达也显著高于癌旁正常组织(56.7%vs26.7%,P＜0.05).相关性分析表明,胃癌组织中5-LOX蛋白表达和p-Akt水平间无明显相关性(r=0.186,P＞0.05).结论: 5-LOX蛋白对胃癌的发生、发展有一定促进作用,但与PI3-K/Akt信号通路无关.     

脂氧合酶对胰腺癌细胞增殖和凋亡的调节作用

目的观察5-脂氧合酶（LOX）及12-LOX在人胰腺癌中的表达，并初步探讨LOX的作用底物——多不饱和脂肪酸（PUFA）及LOX抑制剂对胰腺癌细胞增殖及凋亡的调节作用。方法用免疫组织（细胞）化学、逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法研究5-LOX及12-LOX在胰腺癌组织和细胞株SW1990中的表达，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法及溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记法研究不饱和脂肪酸包括花生四烯酸（AA）、二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）以及5-LOX抑制剂MK-886和12-LOX抑制剂Baicalein对SW1990细胞增殖的影响；并用末端脱氧核苷酰转移酶介导的d-UTP-生物素缺口末端标记法（TUNEL）及流式细胞术方法研究上述物质对SW1990细胞凋亡的影响。结果5-LOX及12-LOX在胰腺癌组织和SW1990人胰腺癌细胞呈高表达，显著高于人正常胰腺组织对照。AA促进胰腺癌细胞株SW1990的增殖，且呈剂量依赖性；而DHA及EPA抑制SW1990细胞增殖，均呈剂量依赖性，DHA及EPA尚可促进SW1990细胞凋亡。MK-886及Baicalein均能抑制胰腺癌细胞株SW1990的体外增殖，并呈剂量依赖性，两者均可促进SW1990细胞凋亡，作用24h后凋亡细胞比例增高。结论5-LOX及12-LOX在胰腺癌中表达上调，PUFA对胰腺癌细胞增殖与凋亡存在调节作用，并且不同脂肪酸作用存在差异。从促进胰腺癌细胞增殖，而DHA及EPA抑制其增殖，促进其凋亡。LOX抑制剂体外可抑制胰腺癌细胞增殖，并诱导细胞凋亡。LOX可能是胰腺癌生物化学治疗的新靶点。     

12-脂氧合酶在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 检测胰腺癌组织和胰腺癌细胞株SW1990和PANC1的12-脂氧合酶(12-lipooxygenase,12-LOX)表达,探讨其与胰腺癌临床病理参数的关系.方法 分别应用免疫组化染色、RT-PCR和蛋白质印迹法检测胰腺癌组织、癌旁正常胰腺组织及胰腺癌细胞株SW1990和PANC1中12-LOX mRNA和蛋白的表达.分析胰腺癌组织12-LOX表达与临床病理参数的相关性.结果 30例胰腺癌组织12-LOX表达阴性8例,弱阳性7例,强阳性15例,总阳性率为73.3％.SW1990和PANC1细胞均表达12-LOX.阳性表达的胰腺癌组织及两株胰腺癌细胞株均表达12-LOX mRNA,而癌旁正常胰腺组织不表达12-LOX mRNA及蛋白.胰腺癌组织12-LOX强阳性表达与肿瘤TNM分期、肿瘤病理分级和淋巴结转移相关(P＜0.05),而与患者年龄、性别无关.结论 12-LOX在胰腺癌中表达上调,与胰腺癌的恶性生物学行为有关.     

5-脂氧合酶在溃疡性结肠炎黏膜中的表达

目的 检测溃疡性结肠炎（UC）患者结肠黏膜5-脂氧合酶（5-LOX）蛋白及5-LOXmRNA的表达及其与UC内镜分级、组织学分级的关系.方法 取32例UC患者结肠黏膜标本根据内镜及组织学进行分级,同时收集正常对照者结肠黏膜标本26例.采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应和免疫组化法检测UC患者结肠黏膜5-LOX mRNA及蛋白的表达.结果 32例UC患者内镜分级Ⅰ级10例,Ⅱ级19例,Ⅲ级3例 组织学分级1级19例,2级9例,3级4例.UC患者结肠黏膜5-LOX mRNA和蛋白表达显著高于正常对照组（P＜0.05）,5-LOX蛋白的阳性表达率随内镜分级、组织学分级增加而增加 5-LOX蛋白表达与内镜分级之间存在相关（P＜0.05）,但与组织学分级之间不相关（P＞0.05）.结论 UC患者结肠黏膜中5-LOX mRNA和蛋白的表达增加,5-LOX蛋白的阳性表达率在一定程度上可以反映疾病的活动度,可作为UC治疗的靶位,在UC治疗中具有重要意义.     

5-脂氧合酶促癌机制研究进展

5-脂氧合酶蛋白是花生四烯酸代谢途径中的一种关键酶,在恶性肿瘤的发生、发展过程中起了重要作用．抑制5-脂氧合酶及其产物的表达有可能预防和逆转恶性肿瘤的发生,本文结合国内外文献,就5-脂氧合酶分子生物学特征及促癌机制的研究进展作一综述．     

联合抑制环氧合酶-2与5-脂氧合酶对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的:通过单独及联合应用选择性COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861处理胃癌细胞系AGS,比较各实验组的增殖凋亡率,探讨联合抑制COX-2和5-LOX两条通路对胃癌细胞系AGS增殖凋亡的影响.方法:AGS细胞在含100 mL/L小牛血清 100kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中培养,取对数生长期细胞做为实验组.以相差显微镜观察药物处理前后的细胞形态改变;设立AA861(25,50,100 μmol/L)组,尼美舒利(50,100,200 μmol/L)组,及AA861联合尼美舒利处理组(50 μmol/L AA861 100 μmol/L尼美舒利),用四氮唑蓝(MTT)法在24,48,72 h测量细胞吸光度,以此检测单用及联用AA861与尼美舒利对细胞生长增殖的影响;实验通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡率,以DNA-LADDER法观察凋亡.结果:相差显微镜观察,药物处理组细胞与对照组相比,形态发生明显改变.MTT显示,除尼美舒利200μmol/L的24,48 h处理组及AA861 25 μmol/L的24 h处理组外,尼美舒利和AA861基本呈时间、剂量依赖性抑制AGS细胞增殖.TUNEL染色法表明,尼美舒利或AA861处理组的细胞凋亡率随着剂量的增加而升高.药物处理48 h后,MTT法表明,细胞增殖在AA861组和尼美舒利组与两药联用组间相比差异显著(0.240±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.01;0.211±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.05);TUNEL染色法表明,单药组与两药联用组细胞凋亡率相比差异明显(AA861组:1 8.67%±0.03%,尼美舒利组:20.94%±0.48%vs两药联用组:23.76%±0.92%,P＜0.01);AO/EB染色法也同时表明,细胞凋亡单药组与两药联用组相比差异明显(AA861组:18.17%±0.28%、尼美舒利组:19.35%±0.74% vs两药联用组:23.78%±0.04%,P＜0.01).DNA琼脂糖凝胶电泳法显示,两药联合处理AGS细胞组与单药处理组比较,癌细胞增殖被抑制,凋亡明显增加.结论:COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861对胃癌AGS细胞的增殖抑制以及促凋亡作用基本呈时间浓度依赖性.联用尼美舒利和AA861抑制COX-2与5-LOX两条通路,与单独抑制其中一条通路比较,能更有效抑制胃癌细胞增殖,促进凋亡.     

5-脂氧合酶抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990的生长抑制作用

目的 观察5-脂氧合酶（5-LOX）在胰腺癌细胞SW1990中蛋白、mRNA水平的表达，探讨5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及可能机制。方法2003—05—10-2004—05—25，南通大学附属医院消化实验室采用半定量反转录-聚和酶链反应（RT—PCR）法和免疫细胞化学方法检测5-LOX在胰腺癌细胞SW1990中的表达，采用四甲基偶氮唑盐（M1Tr）法和流式细胞仪检测齐留通对细胞的生长抑制作用。结果胰腺癌细胞SW1990中5-LOXmRNA及蛋白表达阳性，齐留通明显抑制胰腺癌细胞生长，并呈时间、浓度依赖性。结论 5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞有显著的生长抑制作用，为胰腺癌的防治提供了一个新的实验依据。     

TFPI-2基因体外诱导胰腺癌Panc-1细胞的凋亡

目的: 将TFPI-2基因转染胰腺癌细胞系Panc-1细胞, 研究其对胰腺癌细胞凋亡的影响.方法:将重组质粒pEGFP-C1-TFPI-2通过脂质体介导转染胰腺癌细胞系Panc-1细胞, G418筛选获得阳性细胞克隆后, 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)技术分别检测转染细胞中TFPI-2 mRNA及相应蛋白的表达, 同时测定转染细胞的生长曲线和凋亡情况. 结果: 同转染空载体及未转染细胞相比, 转染成功的Panc-1细胞可以检测到TFPI-2 mRNA和相应蛋白的表达, 细胞生长受到抑制(n = 9, P = 0.02), DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的"梯状"条带.结论:外源性TFPI-2基因能够抑制胰腺癌细胞生长增殖、诱导胰腺癌细胞凋亡.     

5-脂氧合酶抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990的生长抑制作用

目的观察5-脂氧合酶(5-LOX)在胰腺癌细胞SW1990中蛋白、mRNA水平的表达,探讨5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及可能机制。方法2003-05-10—2004-05-25,南通大学附属医院消化实验室采用半定量反转录-聚和酶链反应(RT-PCR)法和免疫细胞化学方法检测5-LOX在胰腺癌细胞SW1990中的表达,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测齐留通对细胞的生长抑制作用。结果胰腺癌细胞SW1990中5-LOXmRNA及蛋白表达阳性,齐留通明显抑制胰腺癌细胞生长,并呈时间、浓度依赖性。结论5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞有显著的生长抑制作用,为胰腺癌的防治提供了一个新的实验依据。     

5-脂氧合酶与食管癌

食管癌是严重威胁我国人们生命健康的恶性肿瘤,深入了解食管浸润、转移的机制,寻求更新、更好的治疗靶点具有重要意义.越来越多的研究显示,以不饱和脂肪酸氧化代谢为标靶探求抗癌的干预措施在临床前期的研究中具有广阔的前景.肿瘤发生学的研究表明,不饱和脂肪酸必须经历氧化代谢来促进肿瘤生成.5-脂氧合酶（5-LOX）和环氧合酶-2（COX-2）分别是花生四烯酸脂氧合酶、环氧合酶两条代谢途径中重要的限速酶.COX-2参与调节肿瘤细胞的增生与凋亡、肿瘤微血管的生成、癌细胞的侵袭与转移以及宿主免疫系统的抑制等多个病理生理过程.食管癌组织中有COX-2的高表达,并与预后密切相关[1,2].人们已经在探索COX-2的抑制剂在肿瘤防治中的作用.随着研究的深入,参与花生四烯酸代谢的另一关键酶类-脂氧合酶受到了越来越多的关注,有学者发现NSAIDs可通过花生四烯酸代谢的另一主要途径-脂氧合酶途径而触发凋亡[3].不断增多的数据表明,脂氧合酶代谢途径有望成为一个新的抗肿瘤靶点.     

TNF-α对肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的作用

目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肠上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1定位和表达的影响,探讨TNF-α增加肠上皮细胞屏障通透性的作用机制.方法Caco-2细胞(20-30代)应用含有2 mmol/L谷氨酰胺、20%胎牛血清的DMEM培养液培养7d,细胞生长达到融合后加入不同浓度的TNF-α(0,10,100 μg/L)继续培养24h,提取细胞蛋白制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架,Western blot检测磷酸化和非磷酸化的claudin-1蛋白含量,并应用间接免疫荧光法检测claudin-1的定位.实时定量PCR技术检测claudin-1 mRNA的表达.结果免疫荧光染色可见对照组claudin-l沿细胞膜分布,呈蜂巢状线性荧光,10μg/L TNF-α引起claudin-1荧光信号减弱,并呈锯齿状异常分布;Western blot分析显示claudin-1蛋白有两种表达形式,一种为20 kDa(非磷酸化claudin-1),主要存在于NP-40可溶性蛋白样品中;另一种为25 kDa(磷酸化claudin-1),只存在于NP-40不溶性蛋白样品中.TNF-α不影响20kDa claudin-1蛋白的表达,但可使25 kDaclaudin-1蛋白表达下降且具有浓度依赖性(10,100 μg/L0.31±0.02,0.24±0.05 vs 0.43±0.09P＞0.05,P＜0.05);实时定量PCR结果显示不同浓度的TNF-α(10,100μg/L)作用24 h或100 μg/LTNF-μ作用不同时间(4,8和24 h)与正常对照组相比均不能引起claudin-1 mRNA的改变.结论TNF-α对Caco-2细胞紧密连接蛋白claudin-1 mRNA的表达没有影响,但可以引起有功能的磷酸化claudin-1蛋白表达减少.     

5-脂氧合酶与消化系肿瘤的关系

5-脂氧合酶是催化花生四烯酸代谢产生5-OH-6,8,11,14-廿碳四烯酸和白三烯等类花生酸产物的重要酶类。近年来研究发现5-脂氧合酶与人类多种肿瘤的发生发展有关。本文主要综述5-脂氧合酶及其抑制剂与消化系肿瘤的关系。     

环氧合酶-2及5-脂氧合酶与肝脏疾病

体内花生四烯酸 (arachidonic acid,AA) 主要经环氧合酶 (cyclooxygenase,COX)及5-脂氧合酶 (5-lipoxy-genase,LOX) 两条途径代谢,代谢产物为主要包括前列腺素 (prostaglandins,PGs)、血栓素 (thromboxanes,TXs) 和白三烯 (leukotrienes,LTs) 在内的二十碳不饱和脂肪酸.     

TNF-α对肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的作用

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肠上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1定位和表达的影响,探讨TNF-α增加肠上皮细胞屏障通透性的作用机制.方法:Caco-2细胞(20-30代)应用含有2 mmol/ L谷氨酰胺、20%胎牛血清的DMEM培养液培养7d,细胞生长达到融合后加入不同浓度的TNF-α(0,10,100μg/L)继续培养24h,提取细胞蛋白制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架,Western blot检测磷酸化和非磷酸化的claudin-1蛋白含量,并应用间接免疫荧光法检测claudin-1的定位,实时定量PCR技术检测claudin-1 mRNA的表达.结果:免疫荧光染色可见对照组claudin-1沿细胞膜分布,呈蜂巢状线性荧光,10μg/L TNF-α引起claudin-1荧光信号减弱,并呈锯齿状异常分布;Western blot分析显示claudin-1蛋白有两种表达形式,一种为20 kDa(非磷酸化claudin-1),主要存在于NP-40可溶性蛋白样品中;另一种为25 kDa(磷酸化claudin-1),只存在于NP-40不溶性蛋白样品中.TNF-α不影响20 kDa claudin-1蛋白的表达,但可使25 kDa claudin-1蛋白表达下降且具有浓度依赖性(10,100μg/L:0.31±0.02.0.24±0.05 vs 0.43±0.09 P>0.05,P<0.05);实时定量PCR结果显示不同浓度的TNF-α(10,100μg/L)作用24h或100μg/L TNF-α作用不同时间(4,8和24h)与正常对照组相比均不能引起claudin-1 mRNA的改变.结论:TNF-α对Caco-2细胞紧密连接蛋白claudin-1 mRNA的表达没有影响,但可以引起有功能的磷酸化claudin-1蛋白表达减少.