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黄瓜花发育的早期均有雌蕊和雄蕊原基的分化,但在发育过程中,由于雌蕊或雄蕊的发育受到阻滞,导致雄花和雌花的形成。近年来在拟南芥和金鱼草等植物中遗传学的研究表明,花器官的特征是由同源异形基因决定的。在拟南芥中,由于AG在决定雄蕊和雌蕊特征方面起重要作用,本研究利用 RT-PCR技术,从黄瓜的雌、雄蕊中分离出 AG的同源基因,并对其在花发育过程中的表达和可能作用进行了分析。首先,根据AG同源基因的保守区域设计5’简并引物5’-GA(A/G)AT(T/C/A)AA(T/C/A)AA(G/A)(A/C)G(G/T/C)ATCGA(C/A)AAC-3’,然后进行3’,RA CE PCR,扩增出约1kb大小的片段,序列分析表明该片段含有非常保守的MADS box。进而,利用5’ RACE PCR得到全长度的cDNA。该cDNA的核苷酸序列与CUM1(黄瓜 MADS box gene1)同源性高达97%。 CUM1在接牵牛中过量表达可引起花萼变为心皮状和花瓣变为雄蕊,说明CUM1为AG的同源基因。基于该基因与CUM1序列上的高度同源,我们认为其为黄瓜的AG同源基因。该基因命名为CMB1,基因银行登记号为AF286649。Souther 相似文献
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猪生长激素 (GH)为单一的多肽 ,无亚基 ,不要糖基化修饰 ,只含 2个硫键 ,有重复的特性 ,并能在大肠杆菌体内进行表达 ,其表达量为 2 0 .5 %。但在构建鲑鱼GH、鲤鱼GH的表达载体分别为 pBVsGHI8和pB VcGH8时 ,其表达量分别是 10 %和 2 9.2 %。当猪GH基因同用大肠杆菌、鲑、鲤进行表达 ,其表达载体均为pBV2 0 0时 ,各个表达量仍有很大差异。这主要是外源基因在同一表达载体中所表达的水平不同有关 ,亦即外源基因 5′端AUG附近的RNA二级能量的大小、AUG与SD序列之间的距离大小 ,外源基因 3′测翼稳定性的强… 相似文献
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金鱼草基因转化和转基因植株再生 总被引:5,自引:0,他引:5
本实验采用根癌农杆菌LBA4404(p35SGUSINT与金鱼草下胚轴切段共培养,将GUS基因导入金鱼草细胞,通过不定芽发生途径获得抗G418再生植株.经DNA/DNA斑点杂交及GUS活性原位组织检测初步证实外源基因GUS已整合进金鱼草基因组并得到表达. 相似文献
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小麦中外源基因瞬间表达调控研究及兔防御素(NP—1)基因的转化 总被引:12,自引:0,他引:12
将不同5上游调控序列驱动下的GUS基因用基因枪法导入小麦幼胚和胚性愈伤组织,通过组织化学分析法和荧光分析法对GUS基因的表达进行定量检测,比较了几种烟草花叶病毒(TMV)Ω增强子序列对小麦中外源基因瞬间表达的调控作用;然后将其中效率最高的玉米Ubil启动子与兔防御素(NP-1)连接起来,并加上Nos终止子,构民NP-1基因小麦表达载体,并转化小麦幼胚,经PCR-Suthern blot分析,初步确 相似文献
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利用枯草杆菌的分泌系统构建分泌型表达载体表达和分泌外源基因产物具有重要的商业价值。我们用鸟枪法克枯草杆菌染色体的启动子和信号肽序列。将克隆的序列连接到能在枯草杆菌中复制的质粒pUB18上,获得分泌型表达载体pUS186。为了测试构建的载体pUS186的功能,将地衣杆菌α-淀粉酶基因的缺失了启动子和信号肽序列的片段重组进该质粒,经过Bal 31酶切,T4 DNA聚合酶补齐等处理,获得pUSA186I 相似文献
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紫云英细胞转化条件的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了紫云英(AstragalussinicusL.)细胞遗传转化的条件。根癌农杆菌(Agrobacteriumtum efaciens)经含乙酰丁香酮的低pH/PO3-4 诱导培养后,用来感染紫云英下胚轴原生质体,随后的细胞GUS瞬间表达活性显著提高,间接证明了上述预培养诱导活化了细菌vir基因,促进了T-DNA 向植物细胞转移。在PEG介导的DNA 转移中,较高的pH 和Ca2+ 浓度能够提高细胞GUS活性。质粒DNA 浓度及启动子类型对外源基因在植物细胞内表达也有一定影响。采用外植体-农杆菌共培养法,获得GUS和NPT Ⅱ基因稳定表达的紫云英转化植株 相似文献
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mRNA的翻译起始区(TIR)的二级结构对翻译起始率有很大的影响。本文建立了一种改进外源基因在大肠杆菌中翻译起始率的系统。以人分裂细胞核抗原(PCNA)基因为模型,将PCNA基因5'端编码区的114bp的顺序插入质粒pTZ19R中LacZ'的5'端构成融合基因。用定点突变法在PCNA的AUG的-8位插入一个Shine/Dalgarno(SD)顺序GAGGT,再以合成的带部分随机序列寡核苷酸作引物, 相似文献