特发性血小板减少性紫癜患儿外周血T细胞凋亡信号蛋白表达的临床意义

目的检测凋亡信号蛋白死亡结构域(FADD)、Fas、FasL和核因子κB(NF-κB)在特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿外周血T细胞中的表达,探讨其对T细胞凋亡的影响及其临床意义。方法无菌采集35例ITP患儿及30例健康儿童外周血,T细胞分离富聚柱法分离纯化T细胞,流式细胞仪检测T细胞凋亡率及Fas、FasL蛋白的表达;免疫组化法检测FADD、NF-κB P65蛋白的表达。结果ITP患儿T细胞凋亡信号蛋白Fas、FADD表达与正常儿童比较明显下降,FasL、NF-κB P65表达显著上升,差异均有显著性意义(P均<0.05);患儿外周血T细胞凋亡率明显降低,并与血小板计数呈对数正相关(r=0.880 P<0.05)。结论ITP患儿可通过下调引起T细胞凋亡的信号蛋白Fas、FADD表达,同时上调活化增殖蛋白FasL、NF-κB P65表达,导致ITP患儿T细胞凋亡减少、活性增强,引起血小板大量损伤。     

阿糖胞苷与地塞米松联合诱导Jurkat细胞凋亡的协同效应

目的 探讨阿糖胞苷(Ara-C)协同地塞米松(DEX)诱导糖皮质激素(GC)抵抗人类T淋巴细胞ALL细胞凋亡的效应及其临床意义.方法 将不同水平的Ara-C(30 nmol·L-1、100 nmol·L-1、300 nmol·L-1)分别与不同浓度的DEX (100 μmol·L-1、500 μmol·L-1)联用对GC抵抗型Jurkat细胞进行不同浓度联合药物暴露.通过流式细胞计数检测各组细胞24 h、48 h暴露后凋亡率;ELISA法检测暴露24 h后核因子-κB(NF-κB)p65亚基活性;反转录-PCR(RT-PCR)和Western blot法检测暴露24 h后Survivin表达和蛋白水平.结果 Ara-C(100 nmol·L-1、300 nmol·L-1)与DEX(100 μmol·L-1、500 μmol·L-1)联合暴露组,其24 h和 48 h 暴露后细胞凋亡率均显著高于同浓度DEX单药暴露组(Pa<0.001),且呈显著浓度依耐性;联合暴露组NF-κB p65活性和Survivin转录水平及蛋白水平较同浓度DEX单药暴露组均有显著下降(Pa<0.05).结论 Ara-C与DEX具有显著的浓度依赖协同诱导GC抵抗型Jurkat细胞凋亡的作用,且这种协同效应可能是由于二者对NF-κB活性及其下游Survivin表达的协同抑制所产生的.     

死亡结构域沉默子和p65在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及与化疗的关系

目的 探讨凋亡调控基因死亡结构域沉默子(SODD)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达、临床意义及与磷酸化-NF-κB-p65表达的相关性,研究ALL 2种常用化疗药物对SODD表达的影响,试图寻找化疗新靶点.方法 免疫组织化学SABC法检测25例儿童ALL骨髓细胞SODD、p65蛋白表达水平;长春新碱(VCR)处理Jurkat细胞后,Annexin-V-Fluorescence/PI双标记的流式细胞术检测细胞凋亡发生率,免疫印迹法检测SODD及p65在化疗药物作用下的表达变化.结果 25例ALL中,SODD和065表达的阳性率较健康对照组高,其中高危病例组SODD阳性表达率较标危病例组阳性表达率高,有显著性差异(Pa＜0.05),且骨髓细胞中SODD与p65表达呈正相关(r=0.69 P＜0.01);VCR能有效诱导Jurkat细胞凋亡,在该凋亡过程中,SODD及p65表达下调,并呈时间依赖性,但柔红霉素(DNR)不能有效下调SODD的表达.结论 SODD和p65均参与了ALL的发生发展,且存在一定的协同关系,SODD与ALL临床分型及预后有密切关系;VCR特异下调白血病细胞中SODD的表达及抑制NF-κB的活化,恢复白血病细胞的凋亡敏感性.     

核因子-κB反义核酸对肾病大鼠肾小球硬化细胞凋亡的干预

目的 探讨核转录因子κB(NF-κB)反义核酸对阿霉素肾病大鼠肾小球细胞凋亡的干预作用.方法 SD雄性大鼠分成A组(假手术组)、B组(硬化组)、C组(正义核酸组)、D组(无义核酸组)及E组(反义核酸组)5组,每组6只.采用右肾切除加尾静脉注射阿霉素制成肾小球硬化动物模型.第8周各组大鼠给予不同的药物干预,在给药7 d后,应用免疫组化技术检测肾组织核转录因子κB p65(Nr-κB p65)、capase-3的表达,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肾小球细胞凋亡指数.结果 E组NF-κB p65、caspase-3的表达及肾小球细胞凋亡指数与B组相比均明显降低.结论 NF-κB反义核酸通过肾动脉给药可直接抑制肾组织NF-κB的表达,抑制肾小球系膜细胞凋亡,延缓肾小球硬化的进程.     

Livin蛋白在急性淋巴细胞白血病儿童中的表达

目的探讨Livin蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)骨髓组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学链霉素-抗生物素-过氧化物酶复合法(SP法)检测Livin蛋白在40例ALL和同期住院20例非白血病儿童的骨髓组织表达情况,分析其与儿童ALL发生发展的关系。结果ALL患儿40例骨髓组织中Livin蛋白阳性表达率为40%,较对照组(5%)明显增高,二者比较有统计学意义(P<0.05)。化疗16例患儿骨髓组织中7例完全缓解,其Livin蛋白阳性表达率明显低于未完全缓解者(P<0.05)。结论Livin蛋白在儿童ALL骨髓组织中高表达,Livin蛋白可能参与儿童ALL的发生发展和化疗耐受机制过程。     

核因子-κB/抑制蛋白-κB信号通路介导的激素敏感型单纯性肾病患儿病毒基因反式激活

目的研究核因子-κB(NF-κB)/抑制蛋白-κB(IκB)信号通路在激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)患儿病毒基因反式激活中的作用。方法采用电泳迁移率改变实验、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶标记免疫吸附分析法(ELISA)分别测定SRSNS、肾炎性肾病、继发性肾小球疾病、毛细支气管炎和正常儿童外周血单个核细胞(PBMCs)NF-κB活性、呼吸道病毒基因和血浆病毒抗体;同时采用Western blot和ELISA分别检测SRSNS和正常儿童IκBα蛋白质表达和血浆IL-8水平。结果与SRSNS缓解期和其他组比较,SRSNS活动期组NF-κB活性明显增加。NF-κB活性与呼吸道病毒检出阳性率呈正相关趋势。SRSNS活动期血浆IL-8水平增高,且与NF-κB活性呈正相关(r=0.88 P<0.001)。SRSNS活动期患儿IκBα蛋白质明显低于SRSNS缓解期和正常儿童,IκBα蛋白质水平与NF-κB活性呈负相关(r=-0.884 P<0.05)。结论NF-κB/IκB信号通路介导的病毒基因反式激活过程,可能是呼吸道病毒触发SRSNS的主要机制之一。     

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞核因子-κB活化及核因子-κB抑制蛋白α磷酸化的影响

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化及NF-κB抑制蛋白α(IκBα)磷酸化的影响。方法提取健康6~8周龄昆明种小鼠腹腔巨噬细胞,培养成活后调细胞水平为2×105mL-1,对照组加入等量9g/L盐水,LPS组加入LPS,使其终水平10μg/mL,LPS刺激细胞24h,SPC干预组加入不同水平SPC,干预细胞2h后加入终水平为10μg/mLLPS刺激24h。免疫细胞化学法观测NF-κB激活、IκBα磷酸化的表达。结果对照组小鼠巨噬细胞细胞核内NF-κBp65水平很低,LPS组细胞核NF-κBp65水平显著高于对照组(P<0.01),不同水平SPC干预组小鼠巨噬细胞NF-κBp65水平降低,即NF-κBp65表达减少,且呈水平依赖性降低(P<0.01)。细胞质内磷酸化的IκBα表达同胞核NF-κBp65水平变化基本一致。结论SPC抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞内NF-κB活化,可能是通过抑制IκBα磷酸化及降解途径完成。     

胆红素对大鼠星形胶质细胞和神经元核因子-κB/IκBα表达的影响

目的探讨胆红素是否影响大鼠星形胶质细胞和神经元核因子(NF)-κB的活化.方法 100μmol/L胆红素分别作用于原代培养大鼠星形胶质细胞和神经元,于0、30、60及120min收集标本,免疫细胞化学染色检测NF-κB亚基P65核移位、Western Blot检测NF-κB抑制因子IκBα蛋白表达.结果胆红素干预星形胶质细胞30 min时,出现P65大量核移位(91.0±5.9)%,至60 min核移位率显著下降(50.03±9.69)%,120 min时核移位恢复至干预前水平.30 min时IκBα蛋白表达消失,至30 min、60 min均有蛋白明显表达;神经元各组间P65核移位和IκBα蛋白表达差异均无显著性.结论胆红素可诱导星形胶质细胞NF-κB活化.     

膜联蛋白A2对肺炎支原体诱导的人气道上皮细胞EGFR/NF-κB信号转导及黏蛋白表达的影响

目的探讨沉默膜联蛋白A2(Anx A2)对肺炎支原体(MP)处理后人气道上皮细胞H292表皮生长因子受体(EGFR)/核因子κB(NF-κB)信号转导及黏蛋白表达的影响。方法将H292细胞分为对照组、MP组、NC-si RNA+MP组和Anx A2 si RNA+MP组。MP组上皮细胞采用5μg/m L MP抗原孵育2 h。NC-si RNA+MP组和Anx A2 si RNA+MP组细胞分别转染NC-si RNA和Anx A2 si RNA 24 h后用MP抗原刺激2 h。MTT法检测各组细胞活性;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测各组细胞中Anx A2 m RNA的表达水平;Western blot法检测各组细胞Anx A2、磷酸化EGFR(p-EGFR)、磷酸化p65 NF-κB(p-p65 NF-κB)的表达水平;酶联免疫吸附试验检测黏蛋白5AC(MUC5AC)和黏蛋白5B(MUC5B)的分泌。结果 MP组和NC-si RNA+MP组细胞活性低于对照组(P0.05),Anx A2 si RNA+MP组细胞活性高于MP组和NC-si RNA+MP组,但仍低于对照组(P0.05)。MP组和NC-si RNA+MP组Anx A2 m RNA和蛋白表达水平均明显高于Anx A2 si RNA+MP组(P0.05)。相比于对照组,MP组和NC-si RNA+MP组中p-EGFR、p-p65 NF-κB、MUC5AC和MUC5B的蛋白表达水平均明显升高(P0.05),Anx A2 si RNA+MP组上述蛋白表达水平则低于MP组和NC-si RNA+MP组,但仍高于对照组(P0.05)。结论 Anx A2通过介导人气道上皮细胞EGFR/NF-κB信号活化和黏蛋白表达参与MP抗原诱导的气道病变。     

Daxx��NF-��B�ڶ�ͯ���԰�Ѫ���еı�Ｐ�������

目的探讨Daxx在儿童急性白血病(AL)骨髓细胞中的表达及其与NF-κB的相关性,同时观察其与AL临床分型和预后的关系。方法骨髓涂片取自华中科技大学同济医学院附属同济医院2005—2006年收治的AL患儿和骨髓正常的非恶性血液病患儿,应用免疫组织化学链霉素亲和素-生物素-过氧化酶复合物(SABC)方法检测50例儿童AL骨髓细胞Daxx和NF-κB的表达,对照组为20例非恶性血液病且骨髓正常患儿。结果在50例AL患儿中,Daxx和NF-κB蛋白阳性表达率分别为38.0%和56.0%,显著高于正常骨髓组织中的表达(P<0.05);Daxx与NF-κB表达呈强相关(P<0.05);急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿高危组Daxx和NF-κB的表达率分别为55.6%和77.8%,标危组分别为0和16.7%,两组之间差异均有显著性(P<0.05)。结论Daxx、NF-κB在儿童AL中过度表达,在白血病细胞凋亡和增殖的调控过程中可能起协同作用,且与AL的某些临床特征、疗效和预后密切相关。     

胸膜核因子-κB表达与胸膜纤维化相关性研究

目的 探讨胸膜核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的表达与胸膜纤维化形成的相关性.方法 对27例胸腔积液患儿进行胸腔镜手术治疗,术中取病理,通过HE染色分组,进行NF-κB免疫组织化学检测.结果 无胸膜纤维化组NF-κB免疫组织化学中只有少数类上皮细胞染色,阳性细胞数低于20%,而胸膜纤维化组NF-κB免疫组织化学染色细胞数大于40%,呈强阳性表达,明显高于无胸膜纤维化组(χ2=16.67,P<0.05).胸膜表达NF-κB同纤维化相关检测Gamma值为0.75,呈正相关.结论 胸膜纤维化与NF-κB存在相关性.     

PI3K、NF-κB和STAT1在支气管哮喘儿童外周血单个核细胞的表达和临床意义

目的检测PI3K、NF-κB和STAT1在支气管哮喘儿童外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,探讨其在哮喘发病机制的临床意义。方法选取30例急性发作期的支气管哮喘患儿作为哮喘组,随机选取同期健康儿童20例作为对照组。应用RT-PCR和Western blot方法检测PBMC中PI3K、NF-κB和STAT1的m RNA和蛋白表达,肺功能仪检测两组肺功能,并分析支气管哮喘儿童PI3K、NF-κB和STAT1的m RNA水平与其肺功能的相关性。结果哮喘组的PI3K、NF-κB和STAT1的m RNA和蛋白水平均高于对照组(P0.05)。与对照组相比,哮喘组FEV1%、FEV1/FVC、PEF%等肺功能指标均下降(P0.05)。哮喘儿童的PI3K、NF-κB和STAT1的m RNA表达水平与FEV1%、FEV1/FVC、PEF%均呈负相关(P0.05)。结论哮喘患儿的PI3K、NF-κB和STAT1表达上调并与肺功能呈负相关,三者可能共同参与儿童支气管哮喘的发生、发展。     

核因子κB与白血病

转录因子核因子κB(nuclear factor Kappa B,NF-κB)在急慢性炎症反应中的重要作用已经得到充分的肯定,近年发现NF-κB参与调控细胞的增殖、分化和凋亡过程,在血液肿瘤疾病尤其白血病中也有异常的表达和活化,成为这一领域的研究热点,现综述如下。1NF-κB、抑制物κB(IκB)家族的生物学特性1.1NF-κB家族的结构和功能NF-κB是多种NF-κB基因编码的一组复合物,属于Rel蛋白家族。在哺乳动物细胞里,有5种NF-κB亚单位:RelA(p65)、RelB、C-Rel、NF-κB1(p50)和NF-κB2(p52)。所有Rel蛋白N端均含有一个Rel同源结构域(Rel-homolo…     

胆红素对大鼠星形胶质细胞和神经元核因子-κB／IκBα表达的影响

目的探讨胆红素是否影响大鼠星形胶质细胞和神经元核因子(NF)-κB的活化。方法 100μmol／L胆红素分别作用于原代培养大鼠星形胶质细胞和神经元,于0、30、60及120min收集标本,免疫细胞化学染色检测NF-κB亚基P65核移位、western Blot检测NF-κB抑制因子IκBα蛋白表达。结果胆红素干预星形胶质细胞30 min时,出现P65大量核移位(91.0±5.9)％,至60 min核移位率显著下降(50.03±9.69)％,120 min时核移位恢复至干预前水平。30 min时IκBα蛋白表达消失,至30 min、60 min均有蛋白明显表达；神经元各组间P65核移位和IκBα蛋白表达差异均无显著性。结论胆红素可诱导星形胶质细胞NF-κB活化。     

黄芩甙对大鼠感染性脑水肿NF-κB活性的影响

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)及其抑制蛋白(IκB)在百日咳菌液所致的大鼠感染性脑水肿模型中的变化及黄芩甙对感染性脑水肿的保护作用是否与抑制NF-κB活化和IκB降解有关。方法健康SD大鼠45只随机分成三组：生理盐水对照组(NS组);百日咳菌感染性脑水肿模型组(PB组);黄芩甙治疗组(BC组)。BC组动物从注菌后1 h起每4 h腹腔注射黄芩甙一次。用电泳迁移率改变法(EMSA)检测各组动物脑组织的NF-κB与靶基因DNA的结合活性,用Western印迹分析法检测各组动物脑组织的IκBα表达。结果在NS组、BP 1 h组NF-κB活性较弱,BP 2 h组NF-κB活性增加,以后持续升高,并以PB 24 h组活性最强;PB 2 h组IκBα表达开始减少,24 h降到最低。BC 2 h,4 h,8 h,24 h组NF-κB活性低于相应PB组。黄芩甙组IκBα表达比相应PB组增多。结论百日咳菌所致的大鼠感染性脑水肿模型中NF-κB的活性明显增强,NF-κB活化可能参与了感染性脑水肿发病机制。黄芩甙对感染性脑水肿的保护作用可能是通过抑制NF-κB异常活化和IκBα降解起作用的。     

蛋白激酶C对急性特发性血小板减少性紫癜患儿T细胞核因子-κB活化的调控作用

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）对急性特发性血小板减少性紫癜（ITP）患儿T淋巴细胞核因子-κK（NF-κB）的活化调控作用。方法 分别从急性ITP患儿及正常健康儿童各30例外周血中分离出T淋巴细胞，并分成3组培养，即空白对照组，加入PKC激活剂佛波酯（PMA）的PMA组，同时加入PKC激活剂PMA与抑制剂H-7的PMA＋H-7组。分别用免疫组织化学法和Western blot法检测NF-κB P65和抑制蛋白-κB（Ⅰ-κB）表达。结果 急性ITP患儿的PMA组NF-κB活化的细胞百分比显著高于空白对照组和正常儿童的PMA组（P〈0．05），且Ⅰ-κB水平显著低于上述两组（P〈0．05），而ITP的PMA＋H-7组NF-κB活化的细胞百分比显著低于ITP的PMA组，且I-κB水平显著高于该组（P〈0．05）。结论 ITP患儿T淋巴细胞NF-κB活化可能受PKC信号传导调控。T淋巴细胞PKC-NF-κB信号传导途径激活可能是急性ITP的发病机制之一。     

多器官功能障碍综合征患儿外周血单个核细胞核因子-κB的活性及相关炎性因子的变化

目的探讨外周血单个核细胞核因子-κB(NF-κB)活性及相关炎性因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4和IL-10在小儿多器官功能障碍综合征(MODS)中的作用及临床意义。方法2004-10—2005-06,于广州市儿童医院采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测28例MODS患儿第1、3、7天3个时点外周血单个核细胞NF-κB活性,同时采用Luminex TM-100液相分析平台测定血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-4和IL-10质量浓度,并设立对照组20例。结果MODS患儿各时点单个核细胞NF-κB活性、血清IL-6、IL-10明显高于对照组(P<0.05),在存活组呈降低趋势而死亡组维持在高水平(P<0.05),TNF-α显著下降;NF-κB活性与TNF-α负相关(r=0.333,P=0.002),与IL-6正相关(r=0.292,P=0.007)。结论MODS患儿外周血单个核细胞NF-κB活性、血清IL-6、IL-10水平的持续升高预示预后不良。     

坏死性小肠结肠炎新生大鼠核因子-κB活性变化及肠三叶因子的干预作用

目的 研究肠三叶因子(ITF)对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠肠黏膜组织核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨ITF是否对NEC具有保护作用及其在NEC发病机制中的作用.方法 新生鼠50只随机分为5组,每组10只,A组(正常对照组)不做处理;B组(ITF组)皮下注射ITF 0.2 mg;C组为NEC模型组;D组[NEC加9g/L盐水(NS)组]制备NEC模型后皮下注射NS;E组(NEC加ITF组)制备NEC模型后皮下注射ITF 0.2 mg,连续3 d.大鼠均于实验第4天处死.分别于其十二指肠、小肠近中远端及结肠近端和远端处取1～2 cm肠道组织固定、包埋、切片、HE染色行病理学检查及免疫组织化学染色观察NF-κB表达.结果 C、D组组织中NF-κB(p65)阳性表达较A、B及E组显著升高(Pa ＜0.01),E组与A、B组比较也有升高(Pa ＜0.01),且随NF-κB(p165)的激活有明显的核转移;病理切片示C、D组HE染色见肠肇损伤轻重不一,可见全肠黏膜绒毛坏死,病理评分2～4分;E组轻度肠上皮细胞脱落,顶端绒毛坏死,肠组织病理评分0～2分.结论 通过皮下注射ITF可减轻NEC新生大鼠肠道炎性反应,NF-κB通路参与了NEC的发病过程,ITF可能通过抑制NF-κB的活化保护NEC模型新生大鼠的肠黏膜.     

核转录因子-κB在辛伐他汀抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)在辛伐他汀抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖中的作用。方法随机将体外培养的大鼠PASMC分为对照组、血小板源性生长因子(PDGF)刺激组、辛伐他汀干预组和辛伐他汀联合小白菊内酯(NF-κB抑制剂)干预组,每组6个样本。通过MTT比色法和流式细胞术检测PASMC的增殖及细胞周期;通过免疫组织化学检测NF-κB蛋白的表达并进行图像分析;通过RealTime PCR检测NF-κB m RNA的表达水平。结果 PDGF刺激组的各时间点MTT值,S期和G2+M期细胞比例,NF-κB蛋白及mRNA表达水平均较对照组显著升高(均P0.05);给予辛伐他汀干预后,上述各指标水平均较PDGF刺激组降低(均P0.05);辛伐他丁联合小白菊内酯干预后上述各指标下降更加明显,但与辛伐他汀干预组比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论辛伐他汀能抑制PASMC的增殖和细胞周期进程;NF-κB可能在辛伐他汀对PASMC增殖的抑制中起重要作用。     

核因子κB反义寡核苷酸对肾小球硬化Caspase-3表达的影响

目的探讨核转录因子κB（NF-κB）反义寡核苷酸（ODN）对局灶性节段性肾小球硬化大鼠肾组织半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase-3）、NF-κB表达影响。方法SD雄性大鼠分成3大组：假手术组（A组）、硬化组（B组）各6只,干预组（C组）9只;C组再分成3小组：正义ODN组（C1组）、无义ODN组（C2组）、反义ODN组（C3组）各3只。采用右肾切除加尾静脉注射多柔比星制成肾小球硬化模型。8周后各组分别予不同的药物干预,应用免疫组织化学检测肾组织Caspase-3、NF-κBp65表达。结果反义ODN干预d7,C3组大鼠尿蛋白、肾小球硬化指数、肾组织Caspase-3、NF-κBp65蛋白表达较B、C1、C2组明显减少,差异有统计学意义（Pa〈0.05）;C3组与A组比较,NF-κBp65蛋白表达无显著差异（P〉0.05）。结论NF-κBODN能抑制肾小球NF-κB活性及Caspase-3表达,从而延缓肾小球硬化及细胞凋亡进程。