FZS中药合剂对Aβ42寡聚体致PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨FZS中药合剂对Aβ42寡聚体致PC12细胞损伤的保护作用,及不同浓度Aβ42寡聚体的PC12细胞毒性作用比较研究。方法分别用不同浓度Aβ42寡聚体作用于PC12细胞,加FZS中药合剂进行干预并与正常细胞进行对照研究。应用噻唑蓝（MTT）、LDH检测细胞活性,同时采用光镜、原位末端标记（TUNEL）方法检测细胞凋亡。原子力显微镜（AFM）鉴定并观察Aβ42寡聚体、Aβ42及细胞表面的形态变化。结果MTT在Aβ42寡聚体组表达明显降低（P＜0．05）；LDH在Aβ42寡聚体组表达明显增高（P＜0．05）；光镜观察及TUNEL染色Aβ42寡聚体组均发现典型的凋亡PC12细胞,凋亡率较Aβ42组差异有显著意义（P＜0．05）。FZS中药合剂组细胞凋亡串均明显降低,差异有显著意义（P＜0．05）。结论Aβ42寡聚体在神经细胞凋亡过程中发挥了重要的作用,其聚集变化可通过AFM进行观察。FZS中药合剂有确切的神经细胞保护作用,其作用与药物浓度相关。     

Aβ寡聚体损伤PC12细胞毒性研究

目的研究Aβ寡聚体对PC12细胞的毒性损伤作用及机制。方法不同比例的Aβ42/Aβ40 Aβ寡聚体作用于PC12细胞构建AD模型,分别应用CCK-8检测细胞活力、ELISA法检测Aβ42蛋白含量,Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase 3表达、自噬相关蛋白Beclin 1及PS1蛋白表达。结果 Aβ42/Aβ40不同比例寡聚体作用于PC12细胞:Aβ42比例越大,Aβ的表达及凋亡越明显,且具有剂量依赖性; PC12细胞活力一定浓度范围呈现增强,超过一定范围后其活力下降; Aβ42/Aβ40对细胞自噬的激活在一定的浓度范围内有效,当浓度过大时,细胞自噬减弱,引起细胞损伤;不同比例Aβ寡聚体损伤PC12细胞,PS1的表达水平无差异。结论 (1) Aβ损伤PC12细胞AD早期细胞模型构建成功;(2) Aβ寡聚体损伤PC12细胞Beclin1蛋白在一定的浓度范围内表达增加,自噬受激活,当Aβ42的浓度达到某一浓度时,Beclin1蛋白的表达减低,自噬被抑制;(3) Aβ寡聚体不改变细胞内PS1的表达水平,其可能通过改变PS1的结构和功能引起Aβ沉积。     

Aβ寡聚体预处理的BV2细胞对PC12细胞凋亡的影响

目的 研究Aβ寡聚体(Aβ-derived diffusible ligands,ADDLs)干预的BV2细胞对PC12细胞凋亡的影响,进而探讨小胶质细胞对神经元损伤的作用.方法 分别用不同浓度Aβ1～42寡聚体作用于PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)作为对照组( Aβ+ PC12);用相应浓度的Aβ1 ～42寡聚体预处理BV2细胞,然后通过转移筛网与PC12细胞共育作为实验组(Aβ+ BV2+ PC12).应用MTT方法检测PC12细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot方法观察PC12细胞tau、tau( pS396)蛋白表达的变化.结果 所有浓度的ADDLs均可导致PC12细胞凋亡,且PC12细胞凋亡表现为ADDL浓度依赖性关系,即随着Aβ浓度增加PC12抑制率、细胞凋亡、tau( pS396)表达也明显增加,其中实验组PC12细胞上述指标增加更明显,与对照组相比,实验组中各相应浓度组的变化均有统计学意义(P＜0.05).结论 BV2细胞可进一步加重Aβ1-42寡聚体对PC12细胞的抑制,加速tau蛋白异常磷酸化,促进神经元凋亡.     

抗抑郁药万拉法辛对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的研究抗抑郁药万拉法辛对β淀粉样蛋白片段(Aβ25-35)诱发PC12细胞损伤的保护作用。方法将培养的PC12细胞分为3组:正常对照组、Aβ损伤组和药物保护组。Aβ损伤组用Aβ25-35处理细胞,药物保护组在用Aβ25-35处理前2h加入抗抑郁药万拉法辛。采用细胞形态学方法、LDH法、MTT法、免疫组化法及western blot法观察抗抑郁药万拉法辛的保护作用。结果药物保护组与Aβ损伤组相比细胞数显著增多,受损变圆的细胞数较少;LDH释放量较少(P<0.01);OD490值显著升高(P<0.01)。Aβ损伤组中Bcl-2的表达比正常对照组低,药物保护组Bcl-2的表达比Aβ25-35损伤组升高;药物保护组、Aβ损伤组与对照组相比细胞内Bax蛋白表达均无明显变化。结论抗抑郁药万拉法辛对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤有保护作用,其机制可能和万拉法辛升高Bcl-2蛋白水平有关。     

Aβ1-40对PC12细胞突触素表达的影响

目的探讨β-淀粉样蛋白(Aβ1-40)诱导PC12细胞凋亡,对突触素的表达影响。方法星形胶质细胞诱导PC12细胞分化为神经元样细胞。PC12细胞随机分为7组:Aβ1-40(0h)组～Aβ1-40(24h)组和对照组。应用MTT法检测细胞生存率,吖啶橙染色、流式细胞仪观察PC12细胞凋亡情况,应用免疫荧光技术检测突触素的表达变化。结果 Aβ1-40作用PC12细胞6h时,细胞生存率明显下降,细胞出现凋亡特征改变,细胞凋亡率最高,与对照组、其他各时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05);Aβ1-40作用PC12细胞4h时,突触素明显减少,与对照组、其他各时间点相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在Aβ1-40诱导大量PC12细胞明显出现凋亡特征之前,Aβ已经引起PC12细胞突触素明显减低,β-淀粉样蛋白(Aβ)可能引起PC12细胞早期神经突触损伤。     

P38信号通路在Aβ介导的PC12细胞损伤中的作用

目的探讨P38信号通路在Aβ介导的PC12细胞损伤中的作用。方法体外培养PC12细胞,不同浓度的Aβ处理PC12细胞。用MTT法检测Aβ对PC12细胞活力的影响,免疫印迹法检测P38通路活化水平,并观察P38通路抑制剂SB203580对细胞活力的影响。结果 Aβ处理后,PC12细胞活力随Aβ浓度的增高而逐渐下降(P0.05);Aβ处理后P38表达水平从4h开始升高,12h达到高峰,并一直持续到24h;SB203580预处理能够明显抑制P38信号通路活化,并对PC12细胞起到保护作用。结论 P38信号通路活化参与Aβ介导的PC12细胞损伤。     

Bcl-2家族参与β-淀粉样蛋白对PC12细胞的致凋亡作用

目的：研究bcl一2家族(主要是bcl-xl和bax)基因及相关蛋白是否参与水溶性淀粉样蛋白对培养的大鼠嗜铬细胞瘤细胞的毒性作用。方法：应用电镜和DNA电泳判断细胞损伤途径，应用RT-PCR，免疫细胞化学和免疫印迹判断bcl-2家族及其相关蛋白是否参与淀粉样蛋白的损伤作用。结果：10μmol／LAβ25-35作用24h后，电镜和DNA电泳均显示Aβ25-35可以导致PCI2细胞凋亡；RT-PCR表明药物作用后6h，bcl-xl mRNA表达量减少而bax mRNA表达量增加；免疫印迹和免疫细胞化学结果显示药物作用后24h，Bax蛋白增加而Bcl-xl无明显改变。结论：水溶性淀粉样蛋白可以导致神经细胞凋亡，bcl-2家族参与了作用环节，对阿尔茨海默病的发病起着重要的作用。     

灵芝多糖对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护性研究

目的观察灵芝多糖(GLP)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法将Aβ25-35或(和)不同浓度的GLP加入体外培养的PC12细胞中,用MTT检测PC12细胞活力的变化;以DCFH-DA来检测细胞内活性氧(ROS)水平的改变;通过Western Blotting来检测Bcl-2和Bax的表达水平。结果 Aβ25-35处理36h后的PC12细胞存活率仅为对照的60.7%,细胞内ROS水平上升到原来的222.7%,同时Bcl-2/Bax比值下降,为对照组的60.0%。经不同浓度的GLP预处理后,细胞存活率均显著提高,分别能达到69.7%,80.7%和88.3%(P<0.01);10g/ml GLP预处理PC12细胞24h后,细胞内ROS水平下降至正常组的160.6%,Bcl-2/Bax比值升高到93.6%,P值均<0.01。结论 GLP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤有保护作用。     

Aβ对大鼠血管平滑肌细胞的影响及依达拉奉干预作用的研究

目的观察Aβ对大鼠血管平滑肌细胞APP基因表达的改变,探讨Aβ对血管平滑肌细胞(VSMC)的损伤作用;研究依达拉奉对上述过程的干预作用。方法体外培养VSMC,对照组用培养基培养,A组用Aβ和VSMC共同培养,B组用依达拉奉和Aβ与VSMC共同培养。光镜下观察各组细胞形态学变化。用MTT测各组细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡率,RT-PCR测细胞APP基因的表达水平。结果1.光镜下可见,对照组细胞形态典型,数量均匀;A组细胞数量明显减少;B组细胞数量较A组增加。2.细胞存活率:A组细胞存活率较对照组降低(P<0.05),B组较A组增加(P<0.05)。3.细胞凋亡率:A组细胞凋亡率较对照组增加(P<0.05),B组较A组降低(P<0.05)。4.APP基因表达:A组细胞APP基因表达较对照组增加(P<0.05),B组细胞APP基因表达与A组没有明显统计学差异(P>0.05)。结论Aβ损伤VSMC,导致细胞存活率下降,凋亡增加,上调APP基因的表达,依达拉奉可以减轻Aβ对细胞的损伤,但对APP基因的表达上调没有影响。     

Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的蛋白质组学研究

目的 识别AD细胞模型中蛋白质组改变,在蛋白质水平上揭示Aβ的作用机制.方法 利用双向差异凝胶电泳技术(2D-DIGE)和质谱(MS)技术.探索20μmol/L浓度Aβ_(25-35)肽段作用48h后PC12细胞蛋白质组的改变.结果 2D-DIGE图像上出现约2000个蛋白点.与对照组比较,Aβ_(25-35)作用下共有29个蛋白的表达有显著差异,其中25个蛋白表达量上调及4个蛋白表达量下调超过30%.质谱鉴定出7个蛋白点,分为3类:(1)具有分子伴侣活性的蛋白:葡萄糖调节蛋白75(glucose-regulated protein75,GRP75)、热休克同源蛋白71(heat shock cognate 71 kDa protein,HSC71)、calreticulin表达量均上调.(2)细胞骨架蛋白:β-微管蛋白(tubulin beta chain 15,TBETA-15)和低分子量神经细丝蛋白(neurofilament light polypeptide,NF-L)表达量亦上调.(3)与能量代谢有关的酶:肌酸激酶B(creatine kinase-B,CKB)和醛缩酶A(aldolaseA)蛋白表达量均下调.结论 本实验首次将DIGE和MS方法应用于Aβ_(25-35)神经毒性作用机制研究,在蛋白质组水平上揭示了Aβ_(25-35)毒性作用的早期机制.     

丹参川芎嗪注射液对Aβ损伤的PC12细胞保护作用及机制研究

目的 探讨丹参川芎嗪注射液对Aβ损伤的PC12细胞可能的保护作用及机制。方法 将PC12细胞分为5组:空白对照组(未加任何处理药物)、Aβ诱导组(20 μmol/L Aβ处理组)和预处理组(分别加入浓度为5 ml/L、10 ml/L、20 ml/L的丹参川芎嗪注射液孵育24 h后加20 μmol/L Aβ),通过CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,Hoechst 33258染色观察PC12细胞核的改变,荧光分光光度计测定LDH、SOD、GSH及caspase-3活性水平,免疫组织化学方法观察细胞色素C(Cyt-C)蛋白释放水平,Western Blot检测Bcl-2的表达水平。结果 丹参川芎嗪注射液(5、10、20 ml/L)预处理对Aβ诱导的PC12细胞损伤有较好的保护作用,其保护作用随着药物浓度的增加而增强。它能增加Aβ损伤的PC12细胞增殖活力,减少Aβ诱导的PC12细胞凋亡,降低细胞核凝聚现象,抑制Aβ损伤的PC12细胞LDH释放,增强SOD和GSH活性,促进Cyt-C在细胞内表达,降低caspase-3活性,促进Bcl-2的表达。结论 丹参川芎嗪注射液对Aβ诱导的PC12细胞损伤具有与线粒体通路相关的保护作用,其保护作用与它抑制细胞凋亡、抗氧化应激、维持线粒体正常功能、抑制caspase-3的激活、促进抗凋亡因子Bcl-2的表达有关。     

骨髓基质干细胞与受损PC12细胞的共育体系减少PC12的凋亡

目的 建立体外骨髓基质干细胞(MSCs)与Aβ1-40损伤PC12的共育体系,探讨共育体系抑制Aβ1-40致PC12凋亡的效应与可能机制.方法 分别培养MSCs与PC12,以Aβ1-40刺激PC12后,用转移筛网转移PC12.实验分A组正常培养的PC12+MSCs共育;B组Aβ1-40刺激的PC12+MSCs共育;C组正常PC12的培养上清+MSCs;D组受损PC12上清+MSCs;E组普通1640培养的MSCs.用PI和Annexin-V进行细胞的双染凋亡检测及电镜检测PC12凋亡,以ELISA方法检测各组中上清液的TGF-β、NGF、BDNF、bFGF含量.结果 骨髓基质干细胞与Aβ1-40损伤PC12共育组即B组凋亡细胞数最少(B组46.17%±8.28%,对照组86.39%±9.34%,F=61.637,P＜0.01),ELISA结果显示各组均能检测到bFGF,B组上清中bFGF分泌最高[B组(598.76±41.32)pg/ml,对照组(296.43±47.86)pg/ml,F=24.15,P＜0.01)],各组均检测到TGF-β、NGF和BDNF分泌,但差异无统计学意义.结论 MSCs与Aβ1-40刺激的PC12的共育体系能减少受损PC12的凋亡.     

α7烟碱受体拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤的PC12细胞保护作用的研究

目的 观察α7烟碱受体拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤的PC12细胞远期影响,探讨其细胞保护的作用.方法 采用高分化的PC12细胞为研究对象,以Aβ25-35制作细胞损伤模型,以烟碱受体激动剂(尼古丁)和α7烟碱受体拮抗剂(甲基牛扁亭碱)进行预处理.试验分为4组,分别是:对照组(蒸馏水)、模型组(Aβ25-35)、尼古丁组(尼古丁和Aβ25-35)、甲基牛扁亭碱组(甲基牛扁亭碱和Aβ25-35).通过MTT比色法在多个时间点观察药物对细胞活力影响的动态变化,在此基础上采用流式细胞仪检测药物对细胞凋亡和坏死的影响.结果 在所有时间点,模型组的细胞活力均显著低于对照组,凋亡和坏死率均高于对照组(P ＜ 0.01).药物作用36 ～ 60 h,尼古丁组的细胞活力显著高于模型组和甲基牛扁亭碱组(P ＜ 0.05),凋亡和坏死率较低(P ＜ 0.01);甲基牛扁亭碱组细胞活力及凋亡和坏死率与模型组差异无统计学意义.在药物作用84 h后,与模型组和尼古丁组相比,甲基牛扁亭碱组细胞活力显著升高,凋亡和坏死率显著降低(P ＜ 0.01).结论 随着作用时间的延长(84 h),烟碱受体激动剂(尼古丁)对PC12细胞的保护作用逐渐消失,而α7烟碱拮抗剂(甲基牛扁亭碱)逐渐显现出细胞保护作用.     

亲环素A对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探讨亲环素A(CyPA)对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡影响及可能的作用机制.方法 将PC12细胞分为正常对照组(0 μmol/L Aβ25-35)、Aβ25-35诱导组(10 μmol/L Aβ25-35)和药物保护组(0.1、1、10、100 nmol/L CyPA+10 μmoi/Lβ25-35),药物保护组采用相应浓度CyPA预处理PC12细胞30 min,再加入Aβ25-35继续培养.MTT法分析细胞存活率,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bcl-2和Bax mRNA表达,Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 1、10和100 nmol/L CyPA可提高细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的细胞凋亡,增加Bcl-2mRNA表达以及Bcl-2蛋白表达,降低Bax mRNA表达以及Bax蛋白表达,与Aβ25-35诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05),且CyPA剂量越高效果越明显.结论 CyPA可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,减少细胞凋亡,其机制与上调抗凋亡基因Bcl-2表达和下调凋亡基因Bax表达有关.

Abstract：

Objective To explore the effect of cyclophilin A (CyPA) on apoptosis of PC 12 cells induced by Aβ25-35 and its potential mechanism. Methods PC 12 cells were divided into normal control group (0 μmol/L Aβ25-35), Aβ25-35 inducement group (10 μmol/L Aβ25-35) and drug protection groups (0.1, 1,10 and 100 nmol/L CyPA+10 μmol/L Aβ25-35). Cells in the drug protection groups were pretreated by CyPA of different concentrations for 30 min, and then co-cultured with Aβ25-35 We evaluated the survival rate of PC12 cells with MTT assay, analyzed the apoptosis of PC12 cells with Hoechst33258 staining, and detected the mRNA expressions of Bcl-2 and Bax with PT-PCR and the protein levels of Bcl-2 and Bax with Western blotting. Results Cells pretreated wth CyPA of 1, 10 and 100 nmol/L enjoyed an obvious elevation of survival rate of PC 12 cells, a significant reduction of apoptosis induced by Aβ25-35,an obvious increase of mRNA expression of Bcl-2 and protein level of Bcl-2, and a statistical decrease of mRNA expression of Bax and protein level of Bax as compared with those cells of the Aβ25-35 inducement group (P<0.05);and these effects were dose-dependent. Conclusion CyPA could resist the toxic role of Aβ25-35 on PC 12 cells and reduce the apoptosis in a dose-dependent manner by up-regulation of anti-apoptosis gene Bcl-2 and down-regulation of apoptosis gene Bax.     

PGN对Aβ1-42寡聚体促进BV2细胞分泌IL-1β的影响

目的探讨前炎介质肽聚糖(peptidoglycan,PGN)激活BV2细胞内吞β淀粉样蛋白(amyloid pro-teinβ,Aβ)1-42寡聚体后,对白细胞介素-1β(IL-1β)分泌的影响及其机制。方法采用细胞株传代法培养BV2细胞替代小胶质细胞,按Klein方法制备Aβ1-42寡聚体。将BV2细胞分为PGN(20μg/mL)组、Aβ1-42寡聚体(0.5μmol/L)组、PGN(20μg/mL)+Aβ1-42寡聚体(0.5μmol/L)组,比较BV2细胞分泌IL-1β水平;将BV2细胞予PGN(20μg/mL)及PGN+SB202190,比较两组IL-1β分泌水平;将不同浓度的PGN(0、5、10、20、40μg/mL)加入BV2细胞中培养,分别检测培养液中IL-1β的水平。采用ELISA方法测定BV2细胞培养液中IL-1β的水平。结果 PGN、Aβ1-42寡聚体、PGN+Aβ1-42寡聚体均可激活BV2细胞分泌IL-1β,分泌IL-1β高峰分别为孵育后24h、12h、24h;孵育后6、12、24h同时间相比,PGN+Aβ1-42寡聚体组BV2细胞分泌IL-1β水平均较PGN组和Aβ1-42寡聚体组明显增多(均P<0.05);PGN激活BV2细胞分泌IL-1β的水平与PGN浓度有剂量依赖关系(P<0.05);丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB202190使BV2细胞分泌IL-1β量明显减少(P<0.01)。结论 PGN可激活BV2细胞分泌IL-1β,且促进Aβ刺激BV2细胞分泌IL-1β增多,p38MAPK抑制剂可抑制IL-1β分泌,推测p38MAPK可能参与BV2细胞分泌IL-1β的过程。     

Aβ寡聚体与阿尔茨海默病研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种以记忆损害为主要表现渐进性发展的神经退行性疾病,随着老龄化社会发展发病率呈上升趋势,带来巨大的社会经济负担。近年来的研究使AD经典发病机制淀粉样蛋白级联假说受到了挑战,Aβ寡聚体(Aβ oligomers, AβOs)的毒性作用得到了一致性的认可,可能是AD发病的触发因素。关于Aβ寡聚体具体来源、结构和致病机制的认识还不充分,可能不同类型寡聚体致病毒性不一致,作用机制有差别。本文综述了对Aβ寡聚体的新近认知,以及它们的结构特点和致病作用,以求更好的理解Aβ寡聚体和AD的关系,为之后的研究提供可能的方向。     

β淀粉样蛋白致PC12细胞毒性的自由基机制

本实验采用体外培养的大鼠嗜铬细胞瘤 (ＰＣ12 )细胞 ,观察 β淀粉样蛋白Ａβ2 5～ 3 5作用后细胞中自由基含量的变化 ,以及抗自由基药物的作用 ,并探讨自由基机制在培养的ＰＣ12细胞死亡中的意义以及抗自由基药物过氧化氢酶(ｃａｔａｌａｓｅ ,ＣＡＴ)的保护作用。方法和结果 :将Ａβ2 5～ 3 5或ＣＡＴ加入培养的ＰＣ12细胞 ,2 4ｈ后通过ＭＴＴ法 [溴化 3 ( 4 ,5 二甲基噻唑基 2 ) 2 ,5 二苯基四唑 ]检测细胞活性 ,判断Ａβ的毒性作用和ＣＡＴ的保护作用 ;用激光共聚焦显微镜、ＫＳ4 0 0图像分析系统及荧光分光光度计直接检测以Ｈ2 …     

雷沙吉兰(Rasagiline)对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的防护作用

目的探讨雷沙吉兰(Rasagiline)对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导PC12细胞损伤阿尔茨海默病(AD)模型的保护作用及其机制。方法不同浓度的Aβ25-35(1μmol/L,10μmol/L,20μmol/L)作用于PC12细胞48h,MTT法检测细胞存活率,选用使细胞存活率降低到64%的Aβ浓度20μmol/L。用不同浓度的雷沙吉兰(0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L)预孵育PC12细胞1h,再加入20μmol/L的Aβ共孵育48h,再测MTT活性,并用荧光染料丫啶橙和溴化乙啶染色,在荧光显微镜下计数凋亡细胞检测凋亡细胞百分率。结果Aβ在20μmol/L时使PC12细胞存活率降低至64%,与对照组差异显著,1μmol/L的雷沙吉兰可显著提高细胞存活率至85%。对照组细胞凋亡率为2%,20μmol/L Aβ作用48h后,PC12细胞凋亡率达13%,1μmol/L的雷沙吉兰使20μmol/L Aβ诱导的PC12细胞凋亡率下降到5%。结论雷沙吉兰对Aβ引起的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制Aβ诱导的凋亡有关。     

雷沙吉兰（Rasagiline）对Aβ25-35诱导PC12凋亡的防护作用细胞

目的探讨雷沙吉兰（Rasagiline）对β-淀粉样蛋白（Ap）诱导PCI2细胞损伤阿尔茨海默病（AD）模型的保护作用及其机制。方法不同浓度的Aβ25-35（1μmol／L，10μmol／L，20μmol／L）作用于PCI2细胞48h，MTT法检测细胞存活率．选用使细胞存活率降低到64％的Aβ浓度20μmol／L。用不同浓度的雷沙吉兰（0．1μmol／L，1μmol／L，10μmol／L）预孵育PC12细胞1h，再加入20μmol／l，的Aβ共孵育48h，再测MTT活性，并用荧光染料丫啶橙和溴化乙啶染色，在荧光显微镜下计数凋亡细胞检测凋亡细胞百分率。结果 Aβ在20μmol／L时使PC12细胞存活率降低至64％，与对照组差异显著，1μmol／L的雷沙吉兰可显著提高细胞存活率至85％。对照组细胞凋亡率为2％．20μmol／L，Aβ作用48h后，PC12细胞凋亡率达13％，1μmol／L的雷沙吉兰使20μmol／L。Aβ诱导的PC12细胞凋亡率下降到5％。结论 雷沙吉兰对Aβ引起的PC12细胞损伤具有明显的保护作用．其机制可能与抑制Aβ诱导的凋亡有关。     

Bcl-2家族参与β-淀粉样蛋白对PC12细胞的致凋亡作用

目的:研究bcl-2家族(主要是bcl-xl和bax)基因及相关蛋白是否参与水溶性淀粉样蛋白对培养的大鼠嗜铬细胞瘤细胞的毒性作用.方法:应用电镜和DNA电泳判断细胞损伤途径,应用RT-PCR,免疫细胞化学和免疫印迹判断bcl-2家族及其相关蛋白是否参与淀粉样蛋白的损伤作用.结果:10 μmol/L Aβ25-35作用24 h后,电镜和DNA电泳均显示Aβ25-35可以导致PC12细胞凋亡;RT-PCR表明药物作用后6 h,bcl-xl mRNA表达量减少而bax mRNA表达量增加;免疫印迹和免疫细胞化学结果显示药物作用后24h,Bax蛋白增加而Bcl-xl无明显改变.结论:水溶性淀粉样蛋白可以导致神经细胞凋亡,bcl-2家族参与了作用环节,对阿尔茨海默病的发病起着重要的作用.