纳豆激酶稳定性的研究

纳豆激酶是一种新型溶栓酶 ,具有溶栓效率高、药效时间长以及无毒副作用等优点。实验研究了pH、温度、金属离子以及某些有机物质对该酶稳定性的影响。实验表明 ,该酶在 4 5℃以下和 pH 7～ 9范围内酶活相对稳定 ;Mg2 +和Co2 +离子对酶活有激活作用 ,而Cu2 +、Zn2 +和Al3+等离子对该酶有明显的抑制作用 ;牛血清蛋白、蛋白胨、明胶、甘油、丙二醇和海藻酸钠等能显著提高酶的耐热性 ,其中以明胶的作用最为明显。这些发现对液体酶的生产有重要指导作用     

纳豆激酶的稳定性研究

初步研究了纳豆激酶对温度、pH值、金属离子的稳定性,研究发现,在37℃以下,温度对纳豆激酶活性的影响不大;在pH值为5￣11之间,酶活性是相对稳定的;Na 、K 、Ca2 对纳豆激酶的活性具有明显的激活作用,Zn2 、Cu2 、Ba2 对酶活性具有一定的抑制作用;Fe2 对纳豆缴活性具有强烈的抑制作用。     

纳豆激酶纤溶活性研究

通过制备纳豆提取液、纳豆激酶粗酶,对纳豆激酶纤溶活性进行研究。结果表明:纳豆激酶纤溶活性最适pH为8.0,pH6~10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。     

纳豆激酶液体发酵条件的研究

以纳豆杆菌（Bacillus natto）为出发菌株,对其在黄豆浆为母液培养基的发酵情况进行了研究。实验考察了碳源、氮源、无机盐、发酵温度和初始pH值对纳豆杆菌产酶的影响。在优化发酵条件基础上,接入2%（体积比）的菌种悬液,在通气量200rpm,发酵72h后用纤维平板测酶活力,其酶活力相当于798.2尿激酶IU/ml。     

纳豆激酶制剂的研究

以选取的纳豆菌-9号为出发菌株，在最佳摇瓶培养条件基础上通过5L发酵罐扩大培养，确定最优发酵培养条件，纳豆激酶活力较摇瓶培养提高2．05倍；发酵液经真空冷冻干燥得到纤溶活性较高的纳豆激酶干粉，并对纳豆激酶干粉的部分酶学性质进行了研究。     

基于纳豆激酶活性的纳豆加工条件的优化研究

为优化纳豆加工工艺条件,以纳豆激酶活性为指标,采用琼脂糖—纤维蛋白平板法,通过单因素实验,确定了纳豆的加工工艺参数为:大豆的浸泡时间15 h,121℃高温蒸煮时间45 min,接种量3%,发酵温度38℃,发酵时间28 h,后熟时间1 d;用响应面分析法对浸泡时间,蒸煮时间、发酵温度这三个影响较显著因素进行优化,最终确定纳豆发酵条件:浸泡时间15 h,蒸煮时间51 min,发酵温度37.5℃。优化后纳豆激酶活性达2493.33 U/g。      

纳豆激酶的提取研究

采用等电点法、盐析法、层析法对利用固定化技术生产纳豆激酶的发酵液中酶的提取进行了研究。研究发现,纳豆激酶的等电点为8.6,但是等电点法效果不好;在盐析法中发现,当先将发酵液调至45%的饱和度,离心取沉淀,然后再将上清液调至50%饱和度时,盐析效果最好;当控制洗脱流速在0.2mL/min进行层析时,纳豆激酶在洗脱时间为195～255min时达到分离。      

纳豆激酶的提取研究

采用等电点法、盐析法、层析法对利用固定化技术生产纳豆激酶的发酵液中酶的提取进行了研究。研究发现,纳豆激酶的等电点为8.6,但是等电点法效果不好;在盐析法中发现,当先将发酵液调至45%的饱和度,离心取沉淀,然后再将上清液调至50%饱和度时,盐析效果最好;当控制洗脱流速在0.2mL/min进行层析时,纳豆激酶在洗脱时间为195～255min时达到分离。     

纳豆激酶的研究进展

纳豆激酶是由纳豆芽孢杆菌 (Bacillusnatto)分泌的一种具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶。文章中对纳豆菌产生的纳豆激酶的分离纯化、基因结构、蛋白质结构、生物学功能及其在医疗上的溶纤特性进行了综述     

纳豆激酶的研究进展

纳豆激酶是一种由纳豆芽孢杆菌产生的具有强溶纤作用的碱性丝氨酸蛋白酶,具有安全性好、半衰期长、口服有效等优点。本文就纳豆激酶的基因结构、生化特性、生物学功能及酶活性测定等方面进行了综述。     

补益中药对小鼠生理功能和兔离体肠段运动的影响

采用黄芪、党参、当归、女真子、神曲、苍术、补骨脂、益母草 8味中药 ,以灌胃法研究它们对小鼠肝脏、脾脏和睾丸质量及血液生理指标的影响和对兔离体肠段运动的影响 .结果表明 :这些中药能提高小鼠肝脏、脾脏和睾丸的相对质量 ,提高白细胞、淋巴细胞和血糖的水平 ,抑制兔离体肠段的运动 ;这些中药通过提高动物的抗病能力、繁殖能力和食物的消化力而提高动物的生产性能     

利用兔离体肠模型研究山莓叶的抗腹泻作用机理

以山莓叶醇提物(RE)和对羟基肉桂酸乙酯(EC,活性跟踪分离到的山莓叶中活性较强的物质)为材料,以兔离体肠运动为模型,研究了RE和EC抑制肠管运动的剂量效应,同时考察了RE和EC分别与抗腹泻相关的4个关键通道的4种致痉剂(乙酰胆碱、酚妥拉明、组胺和氯化钡)对肠管运动的影响。结果表明:RE浓度为1~10 mg/m L范围内,肠管的张力增量变化率(TVP)均为30%以上,且RE浓度为4 mg/m L时,TVP达到45.37%;浓度10~800μg/m L范围内,EC对肠管运动的抑制作用均极显著高于阿托品(P0.01),且EC浓度为400μg/m L时,TVP达到最大(70.45%);RE主要通过作用于乙酰胆碱通道胆碱能M受体和组胺通道来抑制肠管运动;EC主要通过作用于肾上腺素α受体、组胺通道和钙离子通道来抑制肠管运动。因此,RE和EC是抗腹泻的高效的多靶点药物,且RE中的EC的抗腹泻效果极显著优于阿托品。     

通过定点突变增强纳豆激酶的热稳定性

血栓导致的心脑血管疾病是当前危害人类健康、导致死亡率最高疾病之一,因此近年来溶栓药物及具有溶栓功能保健食品的研发进展得十分迅速。纳豆激酶因其特有的高效溶血栓作用,成为国内外科研热点之一。本研究针对目前纳豆激酶稳定性的问题,以纳豆激酶的晶体结构和序列比对为基础,通过定点突变构建组纳豆激酶突变体,对可能影响纳豆激酶热稳定性的氨基酸进行研究。在构建的5个突变体中,P14L、N76D两个突变体的热稳定性有明显提高,在65℃下的半衰期由20 min分别提高为30 min和50 min。同源建模和分子动力学研究结果表明,这两个氨基酸位点是通过不同机理对纳豆激酶催化活性以及热稳定性产生的重要作用。本研究可为纳豆激酶的基因工程改造以及其生产和应用提供理论基础和技术支持。     

可溶性大豆多糖改善左旋肉碱诱导的小鼠小肠首过代谢

目的：研究大豆可溶性多糖（soybean soluble polysaccharides,SSPS）对左旋肉碱喂养小鼠的小肠代谢、氧化应激和炎症相关蛋白表达的影响。方法：24 只雄性昆明小鼠随机分成正常组、左旋肉碱组、SSPS组3 个实验组。连续饲喂56 d后处死小鼠,测定小鼠小肠内P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）、多药耐药性蛋白（multidrug resistanceproteins,MRP）1、MRP3、白细胞介素（interleukin,IL）-1、IL-6、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）质量浓度和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶（uridine diphosphate glucuronosyltransferase,UGT）活力、硫酸基转移酶（sulfotransferase,SULT）活力、丙二醛（malondialdehyde,MDA）浓度等的变化。结果：与正常组相比,左旋肉碱组小鼠小肠具有更高的P-gp和MRP3质量浓度（P＜0.05）;而SSPS可使左旋肉碱喂养小鼠小肠内P-gp质量浓度显著降低（P＜0.05）,且使MRP3质量浓度轻微下降,表明SSPS可有效抑制左旋肉碱诱导的首过代谢。此外,SSPS与左旋肉碱联合处理可有效避免小鼠小肠组织MDA浓度的增加、超氧化物歧化酶活力的下降和·OH清除能力的减弱,预示SSPS可抑制长期摄入左旋肉碱诱导的氧化应激。然而,所有小鼠小肠组织的SULT和UGT活力以及IL-1、IL-6、TNF-α质量浓度没有显著变化（P＞0.05）,表明过量左旋肉碱和SSPS处理不会影响II相代谢,也不会导致炎症反应。此外,代谢组学分析表明,SSPS可抑制长期过量摄入左旋肉碱导致的能量代谢及脂质代谢紊乱。结论：SSPS可以通过调控氧化应激和代谢紊乱而有效预防左旋肉碱诱导的小鼠小肠首过代谢。     

大豆异黄酮植物雌激素在大鼠离体小肠中吸收的研究

目的：研究大豆黄酮和染料木素在雄性大鼠离体小肠中的吸收情况。方法：利用翻转的离体小肠囊，通过RP-HPLC检测囊腔内液、囊腔外液、粘膜中大豆黄酮和染料木素的含量，粘膜中总ATP酶活性对异黄酮的吸收进行研究。结果：在外翻的小肠囊腔内大豆黄酮(Da)和染料木素(Gen)吸收达到峰值所需的时间分别为2～3h、3～4h，且最大吸收率随着浓度的增加而呈逐渐降低的趋势；小肠粘膜中Da、Gen的含量呈现出明显的剂量依赖性，在同一浓度下小肠粘膜中Da、Gen的含量也呈现出明显的时间依赖性；Da和Gen对小肠粘膜中总ATP酶活性均有显著的促进作用。结论：上述结果提示，大豆异黄酮在离体小肠中的吸收主要是主动吸收。     

Mass Transfer and Nutrient Absorption in a Simulated Model of Small Intestine

Abstract: There is an increasing need to understand how food formulations behave in vivo from both food and pharma industries. A number of models have been proposed for the stomach, but few are available for the other parts of the gastrointestinal tract. An experimental rig that simulates the segmentation motion occurring in the small intestine has been developed. The objective of developing such an experimental apparatus was to study mass transport phenomena occurring in the lumen and their potential effect on the concentration of species available for absorption. When segmentation motion was applied the mass transfer coefficient in the lumen side was increased up to a factor of 7. The viscosity of the lumen, as influenced by guar gum concentration, had a profound effect on the mass transfer coefficient. The experimental model was also used to demonstrate that glucose available for absorption, resulting from starch hydrolysis, can be significantly reduced by altering the lumen viscosity. Results suggest that absorption of nutrients could be controlled by mass transfer. Practical Application: To address health-related diseases such as obesity, novel foods that provide advanced functions are required. To achieve the full potential offered by the latest developments in the field of food material science, a fundamental understanding of the behavior of food structures in vivo is required. Using the developed gut model we have demonstrated that absorption of nutrients can be controlled by mass transfer limitations.     

通过串联启动子实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达

本研究通过串联启动子方式实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌WB800中的高效分泌表达。通过对几种现有报道的强启动子的比较并对其进行串联操作,确定生产纳豆激酶的最优启动子及纳豆激酶的最高产量。本研究首先在枯草芽孢杆菌WB800中成功构建五种含不同强启动子的重组质粒p SG101(P_(HpaII)),p SG102(PBcapr E),p SG103(Plux S),p SG104(Pgsi B)和p SG105(Pyxi E),实现纳豆激酶分泌表达,并对其纤溶活性进行测定。结果表明,启动子P_(HpaII)介导的纳豆激酶纤溶活性(110.80 FU/m L)明显优于其他四种启动子。通过对启动子P_(HpaII)进行多次串联,成功构建质粒p SG106(P_(HpaII)-P_(HpaII)),p SG107(P_(HpaII)-P_(HpaII)-P_(HpaII))和p SG108(P_(HpaII)-P_(HpaII)-P_(HpaII)-P_(HpaII))。数据显示,菌株Bacillus subtilis WB800/p SG107(P_(HpaII)-P_(HpaII)-P_(HpaII))纳豆激酶产量最高为213.30 FU/m L,相比单个启动子P_(HpaII),提高了92.51%。通过对五种强启动子的比较以及对其进行串联操作,成功实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌WB800的高效表达,纤溶活性最高为213.30 FU/m L,与现有相关报道相比有明显优势。     

纳豆激酶研究进展及其应用

本文概括了纳豆激酶的基本性质,论述了溶血栓的作用机制包括直接溶栓作用;刺激血管内皮细胞产生t-PA;激活体内尿激酶原转变为尿激酶;通过降解和失活纤溶酶原激活剂的抑制剂来调控纤溶作用.此外还介绍了该酶的降血压作用,使用的安全性和有效性以及国内外纳豆激酶相关产品的开发状况和市场情况.