巢式PCR检测转基因小麦的研究

利用巢式PCR方法对转RSSP1-TiERF1基因的T0代小麦进行了DNA检测。结果表明,该方法对于检测基因组庞大、外源基因序列GC含量高且与内源基因同源性高的转基因小麦十分有效。     

百合炭疽病病原菌PCR检测技术

百合炭疽病是百合（Liliumlongifzorum）种球上重要病害之一,其病原为百合炭疽病菌（ColletotrichumliliiPlakidas）。通过百合炭疽病菌与常见胶孢炭疽病菌（C．gloeosporioides ）等4种不同炭疽病菌种类的核糖体DNAITS序列比对设计特异性引物,通过特异性检验,确定BT73／BT-RSl0和BT-F98／BT-R510。2对引物均可以分别扩增出438bp和413bp的百合炭疽病菌目标片段,而对常见4种炭疽病菌及百合球茎上2种常见的病原菌百合枯萎病菌及灰霉病菌均不能扩增出相同的目标片段。用引物对F73／BT-R510和BT-F98／BT-R510特异性PCR扩增百合炭疽病菌的灵敏度分别都在50pg以上。用外圈引物对F73／BT-R510和内圈引物对BT-F98／BT-R510进行巢式PCR扩增,对百合炭疽病检测的灵敏度提高不明显。     

百合炭疽病症状及病原菌研究

百合炭疽病是一种发生普遍而严重的病害。根据病原菌的形态、培养性状、致病性及寄主范围鉴定为Ｃｏｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｌｉｌｉａｃｅａｒｕｍ（ｗｅｓｔ．）Ｄｕｋｅ。病菌在ＰＤＡ培养基上生长最快,ＯＭＡ培养基上产孢最多。室内散光和黑暗间歇以及连续萤光有利孢子形成,紫光灯则有抑制作用。接种１０科２６种植物,有７科１６种植物发病。     

梨轮纹病原菌及生防菌对梨果实抗氧化酶体系的影响

[目的]了解梨果实接种梨轮纹病原菌后的防御机制和生防菌的酶活作用机理.[方法]采用不同处理在梨果实上接种梨轮纹病原菌和喷施生防菌,测定其对梨果实抗氧化酶体系的影响.[结果]丙二醛(MDA):生防菌处理对MDA含量变化影响不大,轮纹菌处理MDA含量48h达到高峰值,为10.22 nmol/g,是对照的1.86倍,轮纹菌+生防菌处理MDA含量24h达到高峰值,为8.92 nmol/g,是对照的1.62倍;超氧物歧化酶(SOD):生防菌处理的SOD酶活值48 h达到高峰,为126.69 U/[g(FW)·min],是对照的1.54倍,轮纹菌与轮纹菌+生防菌处理均在24h出现活性高峰,酶活值分别为122.10和135.32 U/[g(FW)·min],是对照的1.48和1.65倍;过氧化物酶(POD):生防菌、轮纹菌、轮纹菌+生防菌处理的POD酶活均在24h达到高峰值,分别为385.34、342.50、290.00 U/[g(FW)·min],为对照的1.83、1.62、1.38倍;过氧化氢酶(CAT):生防菌、轮纹菌、轮纹菌+生防菌处理的CAT酶活在6h时均达到高峰值,分别为133.33、114.17和113.35 U/[g(FW)·min],为对照的1.33、1.14和1.13倍;多酚氧化酶(PPO):生防菌处理和对照差异不明显,轮纹菌处理酶活高峰出现在12 h,为81.86 U/[g(FW)·min],为对照的1.76倍,轮纹菌+生防菌处理酶活高峰出现在24h,为70.00U/[g(FW)·min],为对照的1.50倍.[结论]轮纹菌和轮纹菌+生防菌对MDA含量影响较大;轮纹菌及生防菌都能激发SOD酶活性的升高;接种轮纹菌及喷施生防菌都能激发POD酶活性的升高;轮纹菌及生防菌都能激发CAT酶活的升高;单独施用生防菌效果不明显,轮纹菌更能激发PPO酶活性的升高.     

梨轮纹病原菌及生防菌对梨果实抗氧化酶体系的影响（英文）

[目的]了解梨果实接种梨轮纹病原菌后的防御机制和生防菌的酶活作用机理。[方法]采用不同处理在梨果实上接种梨轮纹病原菌和喷施生防菌,测定其对梨果实抗氧化酶体系的影响。[结果]丙二醛(MDA):生防菌处理对MDA含量变化影响不大,轮纹菌处理MDA含量48 h达到高峰值,为10.22 nmol/g,是对照的1.86倍,轮纹菌+生防菌处理MDA含量24 h达到高峰值,为8.92 nmol/g,是对照的1.62倍;超氧物歧化酶(SOD):生防菌处理的SOD酶活值48 h达到高峰,为126.69 U/[g(FW)·min],是对照的1.54倍,轮纹菌与轮纹菌+生防菌处理均在24 h出现活性高峰,酶活值分别为122.10和135.32 U/[g(FW)·min],是对照的1.48和1.65倍;过氧化物酶(POD):生防菌、轮纹菌、轮纹菌+生防菌处理的POD酶活均在24 h达到高峰值,分别为385.34、342.50、290.00 U/[g(FW)·min],为对照的1.83、1.62、1.38倍;过氧化氢酶(CAT):生防菌、轮纹菌、轮纹菌+生防菌处理的CAT酶活在6h时均达到高峰值,分别为133.33、114.17和113.35 U/[g(FW)·min],为对照的1.33、1.14和1.13倍;多酚氧化酶(PPO):生防菌处理和对照差异不明显,轮纹菌处理酶活高峰出现在12h,为81.86 U/[g(FW)·min],为对照的1.76倍,轮纹菌+生防菌处理酶活高峰出现在24 h,为70.00 U/[g(FW)·min],为对照的1.50倍。[结论]轮纹菌和轮纹菌+生防菌对MDA含量影响较大;轮纹菌及生防菌都能激发SOD酶活性的升高;接种轮纹菌及喷施生防菌都能激发POD酶活性的升高;轮纹菌及生防菌都能激发CAT酶活的升高;单独施用生防菌效果不明显,轮纹菌更能激发PPO酶活性的升高。     

尖刀镰刀孢病原菌ITS和5.8SrDNA的PCR鉴定

通过对ITS/5.8SrDNA区域的PCR和巢式PCR扩增检测真菌DNA,同时评估了PCR和巢式PCR技术的敏感性和特异性。证实了通过PCR和巢式PCR扩增不同种真菌菌株ITS/5.8SrDNA的可行性,通过PCR产物的测序及GenBank比对,能成功检测出该真菌菌株。说明通过对真菌ITS/5.8SrDNA区域的扩增是一种快速检测真菌的方法。     

奶牛乳腺炎主要病原菌PCR检测方法

针对引起奶牛乳腺炎的3种主要病原菌无乳链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌设计了3对特异性引物,通过对单一细菌PCR扩增条件的优化、特异性和敏感性研究,确立了对这3种病原菌特异、敏感、快速的PCR鉴定和检测方法,为进一步建立奶牛乳腺炎主要病原菌多重PCR诊断方法奠定了基础。     

凤仙花坏死斑病毒的RT-PCR和巢式PCR检测

根据凤仙花坏死斑病毒(Impatiens necrotic spot tospovirus,INSV)S RNA上的核衣壳蛋白(N)基因序列(登录号为AB109100)保守区设计了3对特异性引物.应用常规RT-PCR和巢式PCR方法从表现同心圆症状的文心兰植株上检测得到了预期DNA片段,且巢式PCR检测灵敏度比常规PCR高.序列分析结果表明,该病毒的N基因序列和已经发表的凤仙花坏死斑病毒(登录号为AB109100、AB207803、DQ425096)核苷酸序列同源性为99%,确定表现同心圆症状的文心兰上携带了凤仙花坏死斑病毒.     

基于PCR和巢式PCR技术的玉米南方锈病早期检测

【目的】建立巢式PCR方法,快速检测处于病害潜育期的玉米叶片内的多堆柄锈菌(Puccinia polysora),为玉米南方锈病(southern corn rust)的预测和防治提供技术支持。【方法】根据多堆柄锈菌ITS区序列,在其变异区设计3条多堆柄锈菌特异性检测引物NX471-F、NX255-F和NX255-R,建立以NX471-F与真菌ITS区通用引物ITS4为外侧引物,NX255-F/NX255-R为内侧引物的巢式PCR。采用20μL扩增体系：Ex Taq DNA聚合酶(5 U·μL^-1)0.15μL、10×Ex Taq Buffer(Mg²⁺plus)2μL,d NTP Mixture(各2.5 mmol·L^-1)1.6μL,上下游引物(10μmol·L^-1)各0.3μL,DNA 1μL,14.65μL ddH₂O。扩增程序：利用外侧引物NX471-F/ITS4进行第一步PCR扩增,95℃预变性7 min;95℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸45 s,...     

猕猴桃细菌性溃疡病病原菌的荧光定量PCR检测方法优化

该实验从引物浓度和退火温度2个方面对荧光定量PCR方法检测猕猴桃溃疡病病原菌方法进行了优化,并应用于染病样品的检测。结果显示,10μM引物浓度、58℃退火温度为最适条件;优化后的方法能检测出猕猴桃溃疡病染病枝条,特异性较高,稳定性较好。优化后的荧光定量PCR方法可用于猕猴桃栽培中溃疡病菌的快速准确检验。     

胶胞炭疽菌DNA的PCR特异性扩增

利用1对胶灰疽菌特异寡聚核苷酸引物，对31个来自于橡胶树，芒果树的胶胞炭疽菌菌株的全基因组DNA进行扩增，均扩增到约500bp的DNA片段，而芭蕉炭疽功，辣椒疽菌，菜豆炭疽菌，腐霉菌，镰刀菌则不能被扩增。这表明，通过种间DNA特异片段的PCR扩增，能将胶胞炭疽菌与其他炭疽菌种类区别开来。采用该方法鉴别胶胞炭疽菌，其结果与形态鉴别的相吻合。     

江西南方板栗炭疽病菌侵染动态的研究

江西板栗炭疽病菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ（Ｐｅｎｚ）Ｓａｃｃ．）于初花末期开始侵染雌花柱头，侵染高峰在盛花初期。病菌经柱头侵入后，首先定植于花柱，然后在花柱中潜伏或进一步蔓延至子房。病菌具有潜伏侵染现象，已展开叶片、托叶、枝梢皮层、花器（雄花序、雄蕊、花柱）、幼果、幼嫩总苞的针刺及坚果（果皮和涩皮）普遍潜伏带菌，以上结果系首次报道。     

橡胶胶孢炭疽菌和尖孢炭疽菌对杀菌剂的敏感性测定

 云南省橡胶炭疽病危害日趋严重,为了解病原菌耐药性差异,采用生长速率法室内测定了云南省橡胶炭疽病菌——胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）和尖孢炭疽菌（Colletorichum acutatum）对咪鲜胺、多菌灵、甲基托布津、溴菌腈、百菌清和代森锰锌的敏感性。结果表明：胶孢炭疽菌对咪鲜胺、多菌灵和甲基托布津的敏感性高,EC50分别为0.020 9 μg/mL,0.050 5 μg/mL和0.404 3 μg/mL;尖孢炭疽菌同样对咪鲜胺、多菌灵和甲基托布津的敏感性高,EC50分别为0.0290 μg/mL,0.194 6 μg/mL and 3.8347 μg/mL,但要显著低于胶孢炭疽菌的敏感性;两种炭疽菌均对代森锰锌不敏感。     

苹果炭疽病菌对苹果果实致病机制初探

对活体内外苹果炭疽菌产生的细胞壁降解酶进行活性分析,初步明确了聚甲基半乳糖醛酸酶(PMG)和羧甲基纤维素酶(Cx)在该菌侵染苹果过程中的作用.结果表明,活体外PMG活性随培养时间增加呈上升趋势,Cx活性则先升后降.活体内,无论抗感品种接种后,均先出现PMG活性高峰,后出现Cx活性高峰;抗病品种的细胞壁降解酶活性要低于中感和感病品种,但酶活高峰出现较早.此外,未接种的健康苹果果实中也检测到细胞壁降解酶,但活性较低.     

三重PCR检测草莓灰霉病菌、炭疽病菌和黄萎病菌

【目的】探索和优化检测条件,建立同时检测草莓灰霉病菌Botrytiscinerea,炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides和黄萎病菌Verticillium dahliae的三重PCR检测体系,为3种病害的早期快速诊断和鉴定提供技术和方法。【方法】选择可以组合的3种病原菌特异引物,研究多重PCR的影响因素,优化PCR退火温度,采用正交试验方法,以3个引物组、TaqDNA聚合酶、dNTP和Mg2+六因素三水平优化多重PCR体系。【结果】建立并验证适合上述草莓主要病原菌的三重PCR最佳检测体系,可分别扩增出729、539和450bp的特异条带,最适退火温度为50℃,25μL的反应体系中含有0.32μmol·L-1C729+/-、0.032μmol·L-1DB19/DB22、0.32μmol·L-1CgInt/ITS4、1.5UTaq聚合酶、0.15mmol·L-1dNTP、1.6mmol·L-1MgCl2。【结论】利用上述引物组合和反应体系进行三重PCR检测,能够快速从田间发病植株和土壤中将草莓灰霉病菌、草莓炭疽病菌和草莓黄萎病菌检测出来,灵敏度可以达到10pg菌丝DNA。     

草莓抗炭疽病的新种质资源筛选

草莓炭疽病是草莓生长的主要病害之一。其病原在上海有2种,分别为胶孢炭疽病菌（ColletotrichumgZ0eosporioidPs）和尖孢炭疽病（C．acutatum）。本文通过叶柄接种法测定了50个不同的草莓种质材料分别对2种病原菌的抗性。结果表明,在测试的不同草莓种质资源中,对2种不同的炭疽病菌均存在明显的抗性差异,103、117对C．acutatum有较强的抗性,104对C．gzoeospor如i如5有较强的抗性,而76对C．acutaturn和C．gloeosporioides均表现出较强的感病性。草莓组合／品种对2种炭疽病菌的抗性水平又可分成2种不同类型：第1种类型是对2种不同的炭疽病菌的抗性表现一致,如103、99、组合89×103P14、117等对2种病原菌的抗性都很高,76对2种病原菌抗性都很低;第2种类型是对2种炭疽病菌抗性表现不一致,104对C．acutatuln抗性较低而对C．gloeoesporioides 抗性较高,组合1x103P39对Cacutalum抗性较高而对（C．gloeosporioides抗性较低。     

胶孢炭疽菌的血清学研究

以4种胶孢炭疽菌的分生孢子为免疫原免疫家兔制备抗血清,采用琼脂双扩散和对流免疫电泳的方法对不同来源的20株炭疽菌进行了免疫学对比研究。结果表明:4种抗血清可分别与15个同种胶孢炭疽菌抗原中的大多数发生阳性反应,而只能与少部分不同种炭疽菌的抗原发生阳性反应。这说明同种的胶孢炭疽菌不同菌株间的亲缘关系较近,而不同种的炭疽菌间的亲缘关系较远。     

柑桔炭疽病菌Colletotrich gloeosporioides潜伏侵染带菌部位研究

对柑桔外表无症各部位研究表明,柑桔炭疽病普遍存在潜伏侵染现象。除树干皮层以内及果实白皮层以内组织,包括中柱、种子不带菌外,其它各部位器官和组织均普遍带菌,带菌率较高。病害在自然条件下一般不显症发病或发病很少很轻。     

进境棉籽中胶孢炭疽病菌的分离与鉴定

对一批澳大利亚进境的棉籽进行了病原菌分离,在棉籽上分离到1株疑似胶孢炭疽病菌的菌株CG-92963。通过对该菌株进行病原菌形态学观察、致病性测定并结合分子生物学方法检测。结果表明,菌株CG-92963在PDA上产生大量分生孢子,分生孢子呈长椭圆形或圆筒形;分别用真菌通用引物、特异引物对CG-92963进行扩增和测序,Blast分析结果表明其与GenBank中胶孢炭疽病菌ColletotrichumgZOP0sp0以0idPs序列同源性为100％;该菌不仅侵染棉花,还侵染芒果和梨。根据上述实验结果,将分离获得的菌株CG-92963鉴定为胶孢炭疽病菌ColletotrichumgtoeoSportoiaes（Penz）Sacc,     

Isolation and Identification of Colletotrichum gloeosporioides in Pears and Its Biological Characteristics

[目的]旨在探究梨胶胞炭疽病菌的生物学特性。[方法]从采集的病样分离并鉴定出梨胶胞炭疽病菌25株。采用梨果表面刺伤后接种菌块的方法,观察炭疽病菌对砀山酥梨的致病性。平板接种炭疽病菌菌块,测试不同培养温度、pH 值、碳源、氮源对炭疽病菌菌丝生长的影响。[结果]参试的25株炭疽病菌中3株致病性较强,18株致病性中等,4株致病性较弱。致病性强的菌株其菌落颜色较深,菌丝浓密;致病性弱的菌株其菌落颜色均为白色,菌丝稀疏。菌落生长快,菌株的致病性较强;菌落生长慢,菌株的致病性较弱。菌株的产孢能力和致病性之间无相关性。梨胶胞炭疽病菌最适生长温度为25～30℃,最适生长pH 值为5．0～7.0;菌丝对多种单糖和双糖等碳源及有机氮、无机氮均可利用,最适碳源为蔗糖,最适氮源为牛肉浸膏。[结论]该研究有利于加深对梨胶胞炭疽病的认识,有助于更有效地控制该病。