亲环素A基因多态性与急性胰腺炎的相关性研究

目的 探讨亲环素A(cyclophilin A,CyPA)基因BamHⅠ多态性与急性胰腺炎的关系.方法 用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析101例急性胰腺炎患者和123名健康对照人群的CyPA基因型及等位基因频率分布状况,同时测定白细胞数、血糖、血清钙离子和尿素氮.结果 两组均存在3种基因型:AA型、AG型和GG型;急性胰腺炎组AA型频率高于对照组,GG型频率低于对照组,基因型构成比有明显差异(χ2=20.206,P<0.05);对照组G等位基因频率高于急性胰腺炎组,两组间等位基因频率有明显差异(χ2=22.364,P<0.05).结论 AA型可能是致急性胰腺炎的危险因素,G等位基因可能具有降低正常人群患急性胰腺炎的作用,CyPA基因多态性可能与急性胰腺炎有相关性.     

亲环素A在常见风湿性疾病中的研究进展

亲环素A是免疫抑制剂环孢素在细胞内的结合蛋白,具有肽酰脯氨酰顺反异构酶活性,参与蛋白质折叠,还可作为细胞因子分泌到胞外通过调节相应的信号通路而参与炎症细胞的趋化、炎症细胞因子的表达及血管内皮细胞的炎症调控等,产生促炎效应,可能在多种风湿性疾病（风湿病）的发病过程中发挥重要作用。该文主要针对亲环素A在常见风湿病中的作用研究进展情况作一综述。     

shRNA抑制CD147基因表达对HT29细胞增殖、侵袭和致瘤能力的影响

目的用RNA干扰(RNAi)技术抑制CD147基因的表达,检测其对人结直肠癌细胞系HT29细胞增殖、侵袭和致瘤能力的影响。方法设计合成CD147特异性的RNA干扰表达质粒pYr-mir30-shRNA,稳定转染HT29细胞,分别获得HT29/shRNA-control和HT29/shRNA细胞;RT-PCR和western blot分别检测CD147、MCT1、MCT4 mRNA和蛋白质的表达;明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性;CCK8法分析细胞的增殖能力;Transwell小室检测细胞的侵袭能力;观察结直肠癌裸鼠皮下移植瘤的致瘤能力。结果与空白组比较,RNA干扰后的细胞中CD147、MCT1 mRNA(F分别为99.645和84.985)及蛋白质(F分别为73.675和19.842)的表达水平均降低(P均0.01);MMP-2和MMP-9的活性均降低(P均0.01);细胞增殖(t分别为7.491、15.023、14.584、6.637和11.211,P均0.01)和侵袭(F=330.443,P0.01)能力均降低,使裸鼠荷瘤能力下降(F=365.679,P0.01)。结论 RNA干扰能有效抑制CD147基因的表达,抑制HT29细胞的增殖和侵袭能力。     

血清亲环素A与新疆维吾尔族原发性高血压的相关性

目的:探讨血清亲环素A(Cy PA)的水平与新疆维吾尔族原发性高血压患者(EH)的相关性及与血压之间的关系。方法:选取新疆维吾尔族原发性高血压患者60例及血压正常对照组50例,检测各组的血压、体质指数、血脂等指标,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清Cy PA的浓度,并分析各指标的相关性。结果:原发性高血压组血清Cy PA的水平显著高于血压正常对照组(P<0.01);原发性高血压患者血清Cy PA水平与收缩压、舒张压存在显著正相关(r=0.497,P<0.01;r=0.324,P<0.05)。结论 :血清Cy PA在新疆维吾尔族原发性高血压患者升高,并与收缩压、舒张压存在一定的相关性。     

亲环素A蛋白水平与脑胶质瘤预后相关性研究

目的探讨亲环素A（Cyclophilin A,CypA）蛋白表达与胶质瘤预后相关性。方法采用免疫组织化学方法分析不同病理级别人脑胶质细胞瘤标本45例和正常脑组织10例中CypA蛋白表达情况,并将结果与随访结果进行综合分析。结果正常脑组织CypA蛋白表达阴性,脑胶质瘤中CypA蛋白总阳性表达率为60％（27／45）,其强阳性表达11例（24．4％）,中度阳性表达7例（15．6％）,弱阳性表达9例（20．0％）,阴性表达18例（40．0％）,胶质瘤组与正常对照组比较有显著性差异（P〈0．01）。结合随访结果提示,患者生存时间与CypA蛋白表达强度呈负相关（r=-0．864,P〈0．01）;复发性脑胶质瘤中CypA蛋白阳性表达率（90．9％）明显高于初发性脑胶质瘤表达率（50．0％）（P〈0．05）。结论CypA蛋白表达与胶质瘤患者预后密切相关,可以作为判断脑胶质瘤预后的指标。     

CD147在肿瘤血管生成中的作用

Biswas首次发现CD147并命名为肿瘤细胞介导的胶原酶启动因子(TCSF),可表达于肿瘤细胞表面,启动邻近成纤维细胞产生基质金属蛋白酶(MMP)。由于CD147能够诱导细胞外MMP的产生,因此也被称为细胞外MMP诱导因子(EMMPRIN)。根据CD147来源和功能的不同,对其命名也     

siRNA沉默Annexin Ⅱ对淋巴瘤细胞系Jurkat细胞增殖和趋化能力的影响

目的 观察沉默Annexin Ⅱ(AnxA2)基因对淋巴瘤细胞系Jurkat细胞增殖、趋化能力的影响.方法 应用实时荧光定量RT-PCR和流式细胞术鉴定小干扰RNA(siRNA)对人淋巴瘤细胞系Jurkat细胞的转染效果,应用MTT法检测AnxA2 siRNA对Jurkat细胞增殖的作用,应用Transwell检测对细胞趋化能力的影响.结果 AnxA2 siRNA干扰组在24、48、72 h细胞生长抑制率分别为(17.4±2.3)%、(22.4±3.8)%和(37.6±1.5)%,与阴性对照组[分别为(-1.3±5.1)%、(-5.5±4.4)%和(-10.8±5.5)%]比较差异有统计学意义(P<0.05),AnxA2 siRNA干扰对Jurkat细胞增殖起抑制作用;AnxA2 siRNA干扰组细胞趋化能力(11.3±4.2)显著低于阴性对照组(54.3±8.7,P<0.01),AnxA2 siRNA干扰可显著降低细胞趋化能力.结论 siRNA沉默AnxA2基因可抑制Jurkat细胞增殖、趋化能力.     

膜联蛋白A5和CD147在喉癌组织中的表达

目的分别观察膜联蛋白A5（ANX A5）和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（CDl47）在癌旁正常组织和喉癌组织中的表达情况,分析喉癌组织中ANX A5和CD147表达的相关性。 方法收集2012年1月至2018年2月经川北医学院附属医院耳鼻咽喉-头颈外科手术切除,并经病理学确诊的喉癌组织标本51例和癌旁组织标本35例,运用免疫组化SP法分别检测喉癌组织标本与癌旁组织标本中ANX A5和CD147的表达情况。采用四格表χ²检验分析不同病理、临床特点喉癌患者中ANX A5、CD147的表达情况,采用Spearman等级相关分析分析喉癌组织中ANX A5和CD147表达的相关性。 结果ANX A5和CD147在喉癌组织中的表达水平均高于癌旁组织中的表达水平（χ²=6.939,P=0.008;χ²=14.722,P<0.001）。与TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者、喉癌组织病理学分级为低-未分化患者、无颈淋巴结转移患者相比,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者、喉癌组织病理学分级为高-中分化患者、存在颈淋巴结转移患者中ANX A5的表达水平更高,差异均有统计学意义（χ²=5.298,P=0.021;χ²=3.869,P=0.049;χ²=8.419,P=0.004）;≥60岁和<60岁患者以及不同性别患者中ANX A5的表达水平差异无统计学意义（χ²=0.003,P=0.957;χ²=0.082,P=0.775）。与TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无颈淋巴结转移患者相比,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、存在颈淋巴结转移的喉癌患者中CD147具有更高的表达水平,差异具有统计学意义（χ²=14.009,P<0.001;χ²=11.004,P=0.001）;≥60岁和<60岁患者、不同性别患者以及不同病理学分级患者中CD147的表达水平差异无统计学意义（χ²=1.546,P=0.214;χ²=1.373,P=0.241;χ²=0.002,P=0.964）。Spearman等级相关分析显示喉癌组织中ANX A5与CD147的表达呈正相关（r=0.918,P<0.001）。 结论ANX A5和CD147在喉癌组织中的表达水平均高于癌旁组织,且在具有不同病理、临床特点的喉癌患者中存在表达水平的差异,提示ANX A5与CD147可能参与喉癌的发生、发展。     

亲环素A与慢性心力衰竭相关性的研究

目的：探讨亲环素 A（CyP A）在慢性心力衰竭中的诊断意义。方法选择经临床确诊的慢性心力衰竭患者80例,分为心衰 A期30例、心衰C期29例、心衰D期21例。同时选择健康体检者30例作为对照组。采用ELISA方法测定CyP A的含量,采用罗氏电化学发光法检测 NT-proBNP的含量。结果健康对照组及慢性心衰各组 CyP A浓度（x珚±s, ng／ml）分别为110.10±49.73,327.85±82.67,331.70±69.34和342.46±92.55。采用单因素方差分析,慢性心衰患者CyP A浓度显著高于健康对照组（F＝58.45,P＜0.01）。进一步采用 LSD检验进行组间两两比较,慢性心衰各组均显著高于健康对照组（均值差217.75～232.36,P值均＜0.01）,但慢性心衰各组间的差异无统计学意义（均值差3.37～14.61, P值均＞0.05）。ROC曲线显示,CyP AAUC＝0.97,最佳临界值为198.39（ng／ml）,其灵敏度为91.30％,特异度93.30％。相关性分析显示CyP A与 NT-proBNP存在显著相关性（r＝0.30,P＜0.01）。CyP A与 proBNP联合检测诊断心衰灵敏度为93.80％,特异度为100％。结论 CyP A在慢性心力衰竭患者中高表达,提示Cyp A可能是 CHF的一个显现因子,其与 NT-proBNP联合检测可能有助于心衰的诊断。     

溃疡性结肠炎患者血浆和淋巴细胞内亲环素A测定的临床意义

目的 探讨血浆和淋巴细胞内亲环素A（CyP A）水平与溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）的关系.方法 用酶联免疫吸附试验（ELISA）同时检测116例UC患者（其中活动期67例,缓解期49例）和50例正常人血浆和淋巴细胞内的CyP A水平.结果 活动期UC患者血浆和淋巴细胞内CyP A含量分别为（380&#177;145）μg/L和（2 780&#177;500）μg/g蛋白,均显著高于正常对照组的（160&#177;78）μg/L （u值为10.54,P〈0.01）和（2 280&#177;375）μg/g蛋白（u值为6.18,P〈0.01）,也显著高于缓解期UC患者（u值分别为8.19和5.37,P均〈0.01）.结论 血浆和淋巴细胞内CyP A升高可作为UC活动期诊断的辅助参考指标.     

CD147 stimulates hepatoma cells escaping from immune surveillance of T cells by interaction with Cyclophilin A

T cells play an important role in tumor immune surveillance. CD147 is a member of immunoglobulin superfamily present on the surface of many tumor cells and mediates malignant cell behaviors. Cyclophilin A (CypA) is an intracellular protein promoting inflammation when released from cells. CypA is a natural ligand for CD147. In this study, CD147 specific short hairpin RNAs (shRNA) were transfected into murine hepatocellular carcinoma Hepa1-6 cells to assess the effects of CD147 on hepatoma cells escaping from immune surveillance of T cells. We found extracellular CypA stimulated cell proliferation through CD147 by activating ERK1/2 signaling pathway. Downregulation of CD147 expression on Hepa1-6 cells significantly suppressed tumor progression in vivo, and decreased cell viability when co-cultured with T cells in vitro. Importantly, knockdown of CD147 on Hepa1-6 cells resulted in significantly increased T cells chemotaxis induced by CypA both in vivo and in vitro. These findings provide novel mechanisms how tumor cells escaping from immune surveillance of T cells. We provide a potential therapy for hepatocellular carcinoma by targeting CD147 or CD147-CypA interactions.     

短发夹RNA诱导survivin基因缄默对Jurkat细胞凋亡和增殖的影响

目的研究应用载体表达短发夹 RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术抑制人 T 淋巴细胞白血病细胞株 Jurkat 细胞 survivin 基因的表达,探讨 survivin 基因表达缄默对 Jurkat 细胞凋亡和增殖的影响。方法构建针对 survivin 基因的 shRNA 重组质粒并转染至 Jurkat 细胞,分别用多重 PCR和 Western blot 法检测瞬时转染和稳定转染细胞 survivin 基因 mRNA 和蛋白表达水平的变化;流式细胞术检测瞬时转染和稳定转染细胞凋亡指数的变化,绘制细胞生长曲线,探讨 survivin shRNA 转染对细胞生长和增殖的影响。结果多重 PCR 结果示与无功能(对照组)shRNA 处理组和磷酸盐缓冲液处理组比较,survivin shRNA 瞬时转染和稳定转染细胞 surivivin 基因 mRNA 表达均显著下降,抑制率分别为66.675% 和60.69%(P<0.05);Western blot 结果显示 survivin shRNA 瞬时转染和稳定转染细胞survivin 蛋白表达水平亦显著降低,抑制率分别为63.41% 和60.18%(P<0.05)。流式细胞术检测瞬时转染和稳定转染细胞的凋亡率显著增加,分别为(22.41±2.83)% 和(20.73±2.56)%(与对照组比较,P均<0.05),细胞倍增时间显著延长。生长曲线显示稳定转染细胞的生长显著减慢。结论shRNA 重组质粒介导的 RNA 干扰能明显抑制 Jurkat 细胞 survivin 基因 mRNA 和蛋白产物的表达,诱导细胞凋亡和生长抑制。     

肝癌细胞株SMMC-7721中CD147和MMP-9的表达及意义

目的研究肝癌细胞系SMMC-7721中CD147与基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达及意义。方法用流式细胞仪检测正常肝细胞L-02与肝癌细胞SMMC-7221中CD147的表达；用免疫组化法检测两种细胞产生的MMP-9的表达。结果正常肝细胞L-02中CD147表达阴性，SMMC-7721中CD147表达呈强阳性（阳性率为98．1％）；MMP-9在正常肝细胞及肝癌细胞中均有表达，但在肝癌细胞中表达明显增高。结论肝癌细胞系SMMC-7721中CD147与MMP-9表达明显增高，与肝癌的侵袭转移潜能有关。     

姜黄素诱导Jurkat细胞凋亡机制的实验研究

目的 探讨姜黄素对Jurkat（人T淋巴细胞白血病细胞株）细胞增殖抑制率及细胞周期各时相的变化和亚细胞结构改变。方法 应用MTT（噻唑蓝）比色法流式细胞术、电子显微镜技术检测姜黄素对Jurkat细胞的增殖抑制率，细胞周期进程及凋亡率。结果 姜黄素对Jurkat细胞有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性，流式细胞仪分析，G1期细胞增高，S期细胞减少，G2／M期细胞相对增多，凋亡率增加。亚细胞结构，细胞空化，染色质趋边凝集。结论 姜黄素能显著抑制Jurkat细胞增殖，阻止G1期细胞向S期转化进程。促进Jurkat细胞凋亡。     

eEF1A1基因敲除对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨

本研究旨在探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)表达沉默对人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株Jurkat增殖、凋亡的影响及其作用机制。应用实时PCR法和Western blot法分别检测Jurkat细胞和3例健康成人外周血单个核细胞(PBMNC)中eEF1A1 mRNA和蛋白的表达。构建eEF1A1-shRNA慢病毒并感染Jurkat细胞,另设空白和阴性对照组,应用实时PCR法和Western blot法分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、AnnexinⅤ-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,Jurkat细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于健康成人PBMNC中的表达(P<0.01,P<0.05);构建的eEF1A1-shRNA慢病毒高效沉默Jurkat细胞eEF1A1的表达。与阴性对照组相比,eEF1A1-shRNA组Jurkat细胞增殖能力明显下降,凋亡明显增多,细胞周期被阻滞于G0/G1期,p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显下调。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,其表达沉默可有效抑制Jurkat细胞的增殖并诱导凋亡,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

MAPK信号通路参与哇巴因诱导Jurkat细胞的增殖

本研究目的是探讨哇巴因 (ouabain)对急性淋巴细胞白血病细胞株Jurkat的作用及机制。采用MTT、RT PCR、Westernblot等方法观察低浓度哇巴因对Jurkat细胞的作用 ,同时检测丝裂原活化蛋白激酶MAPK(ERK1 2 )的磷酸化程度及c myc基因的表达水平。结果表明 ,低浓度哇巴因 (<1× 10 - 7mol L)可以诱导Jurkat细胞增殖 ,其作用呈剂量及浓度依赖性 ;同时细胞内MAPK(ERK1 2 )磷酸化程度增强 ,并检测到c myc基因表达水平增高。结论 :哇巴因作用于细胞膜钠泵 ,激活了细胞内MAPK信号通路 ,从而促进Jurkat细胞增殖 ,其作用与c myc基因表达的调控有关。     

SiRNA抑制肝癌细胞株HepG2中CD147基因表达对survivin表达的影响

目的:探讨CD147与survivin(SVV)的关系.方法:设计、合成两对CD147编码基因的反向重复序列,运用瞬时转染方法抑制HepG2中CD147表达,运用RT-PCR、Western blot方法检测干扰后CD147、SVV及caspase-3表达的改变,流式细胞术检测干扰后肿瘤细胞的凋亡情况.结果:SiRNA sequence 1、2均可有效地抑制CD147基因的表达(P＜0.05),伴随着SVV mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.05);干扰后caspase-3 mRNA水平升高(P＜0.05),活性caspase-3蛋白水平增高(P＜0.05),肿瘤细胞凋亡增加,以细胞早期凋亡改变最为明显(P＜0.05).结论:沉默HepG2中CD147基因能下调SVV基因表达,致使肿瘤细胞凋亡增加.CD147与SVV在细胞内可能存在着相互调节机制,然而其确切机制还有待进一步研究.     

黏附分子CD44表达对白血病细胞黏附、迁移及浸润的影响

目的 探讨黏附分子CD44表达对白血病细胞黏附、迁移、浸润的影响.方法 选择对数生长期的白血病细胞株SHI-1、THP-1、NB4、K562细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各种白血病细胞株CD44 mRNA和蛋白的相对表达水平,并将各株白血病细胞分为对照组(加入同种同型IgG)和实验组(加入CD44单抗),然后观察白血病细胞与人静脉内皮细胞系ECV304细胞的黏附率;用包被ECV304细胞的Transwell小室培养法观察细胞迁移率;用包被人工基质膜Matrigel的Transwell小室培养法观察白血病细胞穿过人工基质膜的浸润能力.结果 SHI-1、THP-1、NB4细胞均表达CD44 mRNA和蛋白,而K562细胞CD44 mRNA和蛋白表达量少甚至不表达;SHI-1、THP-1 、NB4细胞CD44 mRNA的相对表达水平分别为0.0731±0.0072、0.0827±0.0151、0.1473±0.0365,与K562细胞(0.0002±0.0000)相比,差异均有统计学意义(P值均<0.01).黏附实验结果显示:实验组SHI-1、THP-1、NB4细胞黏附率均较对照组下降(分别为72.78%、64.09%、57.42%),而实验组K562细胞黏附率为106.16%.迁移实验结果显示:对照组SHI-1、THP-1、NB4细胞迁移率分别为55%、29%、25%,实验组细胞迁移率下降(分别为32%、18%、12%),而两组中K562细胞无明显变化(均为2%).浸润实验显示:对照组SHI-1、THP-1、NB4细胞穿过Matrigel的细胞率分别为24%、15%、13%,实验组均有所下降(分别为12%、8%、4%),而两组中K562细胞不能穿过.结论 CD44抗原可能通过改变细胞的黏附、迁移及浸润能力,参与白血病细胞的髓外浸润过程.